消癌解毒方加入LPS及CD284对人肝癌细胞SMMC-7721的TLRs/NF-κB信号转导通路影响

目的:深入研究中医药抗恶性肿瘤单一信号通路及多靶点联合治疗的机制。方法:经细胞培养、倒置显微镜观察细胞凋亡形态法、MTT法及流式细胞仪检测消癌解毒方及在此基础上加入激动剂脂多糖(LPS)及TLR4阻断剂(CD284)对人肝癌细胞SMMC-7721的TLRs/NF-κB信号转导通路的影响。结果:消癌解毒方具有良好的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,空白、低、中、高各浓度含药血清组加入LPS后,人肝癌细胞抑制率与凋亡率均较相应浓度含药血清组下降,其中高浓度含药血清剂量组及加入CD284后对人肝癌细胞增殖的抑制作用最明显。结论:消癌解毒方的抗肿瘤机制可能是含药血清与CD284能协同作用于人肝癌细胞SMMC-7721的TLRs/NF-κB信号转导通路,抑制核转录因子NF-κB的异常持续活化,促进肿瘤细胞凋亡。     

消癌解毒方诱导人肝癌SMMC-7721细胞miRNA表达变化

目的:探讨消癌解毒方对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及微小核糖核酸(microRNA,miR)-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p,miR-182-5p表达谱的影响。方法:将12只雄性大耳白兔随机分为4组,分别为消癌解毒方高、中、低剂量(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)组和空白组,各组分别给予消癌解毒方及生理盐水灌胃4 d。4 d后于颈动脉中取血清并配制培养基。用消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清及空白血清的培养基处理人肝癌细胞株SMMC-7721,噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤细胞增殖活性、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)法验证人肝癌细胞SMMC-7721中miR-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p和miR-182-5p的表达水平。结果:经过12,24,48 h后,消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖均存在抑制作用。随着消癌解毒方含药血清浓度的增加,其对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制率也相应增加。其中高剂量组含药血清的抑制效果最好,其干预12,48 h的吸光度A较同期空白组明显降低(P0.05)。高剂量组干预24 h A比同期空白组显著降低(P0.01),该组抑制率为42.86%。Real-time PCR证实消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清的培养基能诱导miR-25-3p,miR-182-5p表达下调,诱导miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p表达上调。且高剂量组的调控作用较空白组更显著(P0.01)。结论:消癌解毒方可能通过诱导miRNA表达谱的改变而参与抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用,但其具体机制仍有待进一步研究。     

消癌解毒方含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 探讨消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞后,采用电镜技术观察细胞的形态改变,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况.结果 消癌解毒方能明显促进肝癌细胞的凋亡.电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变;凋亡作用以高剂量组效果最佳,凋亡率与顺铂组相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方通过诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长.     

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的 观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组[抑制率为35.8％,凋亡率为(23.0±1.6)％]的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂[抑制率为35.3％,凋亡率为(22.8±4.4)％]相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究.     

益气凉血生肌方基于TLR4/NF-κB通路减轻内皮细胞炎症损伤的研究

目的 探究益气凉血生肌方对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐动脉内皮细胞(HUAECs)炎症损伤的作用及机制.方法 实验分为4组:对照组HUAECs加入空白兔血清培养;模型组、抑制剂组、抑制剂+益气凉血生肌方组采用TNF-α诱导HUAECs炎症损伤,之后模型组加入空白兔血清培养,抑制剂组加入TAK-242阻断剂培养...     

电针对肥胖胰岛素抵抗大鼠下丘脑TLR4/IκBα/NF-κB信号通路的影响

目的:观察电针对肥胖胰岛素抵抗(OIR)大鼠下丘脑Toll样受体4(TLR4)/核因子κB抑制剂α(IκBα)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨电针治疗OIR的机制.方法:从42只Wistar雄性大鼠中随机挑选8只作为正常组,剩余大鼠给予高脂饲料喂养8周,建立OIR大鼠模型.将造模成功的16只大鼠随机分为...     

平喘方对哮喘小鼠NF-κB信号通路的调控及对TLR4 mRNA和蛋白表达的影响

目的研究平喘方通过调节核因子-K B(NF-K B)信号通路对哮喘小鼠的作用及其对Toll样受体4(TLR4)mRNA和蛋白表达的影响。方法将60只SPF级雄性Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组、平喘方组,每组15只。除空白组外,其余组均采用先卵清蛋白(OVA)+氢氧化铝凝胶[AI(OH)3]腹腔注射致敏,采用OVA雾化激发的方法来建立哮喘模型。地塞米松组、平喘方组分别予0.075 mg/mL地塞米松溶液、5.33 g/mL平喘方灌胃治疗1周,空白组、模型组给予等量生理盐水灌胃。末次给药24 h后,采用HE、Masson染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,Western Blot观察肺组织中NF-κB亚单位(p65)、NF-κB的抑制蛋白(IκBα)、TLR4、髓样分化因子(MyD88)蛋白表达,RT-PCR法观察p65、IκBα、TLR4、MyD88 mRNA水平。结果HE及Masson染色可见模型组小鼠肺组织明显炎症细胞浸润,上皮基底膜增厚,胶原纤维增多,平喘方组小鼠肺部炎性细胞浸润明显减轻,胶原纤维面积减小;与空白组比较,模型组小鼠BALF中IL-6、TNF-α浓度,肺组织中p65、MyD88蛋白表达及mRNA水平,气管中TLR4mRNA及蛋白表达水平均升高(均P<0.01),IκBα蛋白表达及mRNA水平降低(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组和平喘方组BALF中IL-6、TNF-α浓度均降低,MyD88、p65、TLR4蛋白表达及mRNA水平下调(P<0.01,P<0.05),地塞米松组IκBα蛋白表达及mRNA水平升高(均P<0.01),平喘方组IκBαmRNA水平升高(P<0.01),IκBα蛋白表达上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。与地塞米松组比较,平喘方组BALF中IL-6、TNF-α因子水平、p65 mRNA水平、TLR4 mRNA水平、MyD88蛋白表达及mRNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),p65及TLR4蛋白表达升高(P<0.05)。结论平喘方对OVA诱导哮喘小鼠的气道炎症有较好的改善作用,其机制可能与降低TLR4及MyD88活性,调控NF-κB信号通路有关。     

天香丹对动脉粥样硬化模型小鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 通过研究天香丹对动脉粥样硬化（AS）模型小鼠Toll样受体-4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路及相关炎症因子的影响,探讨天香丹防治AS的可能机制。方法 选取8周龄ApoE-/-小鼠30只予以高脂饲料喂养12周,造模成功后随机分为模型组、他汀组、天香丹组,每组10只;另取10只C57BL/6J小鼠予以普通饲料喂养作为空白对照组。他汀组、天香丹组分别以相应药液3 mg/kg、2.7 g/kg灌胃干预,空白组、模型组以0.5 mL蒸馏水灌胃,每日1次,连续12周。取小鼠血清用于检测血脂水平及TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,取主动脉用于观察主动脉病理变化情况。结果 1)HE染色结果显示：他汀组、天香丹组病理改变较模型组轻,斑块稳定性提高,模型组主动脉斑块面积（PA）与管腔面积（LA）比值显著大于空白组（P <0.01）,他汀组、天香丹组PA/LA比值则小于模型组（P <0.01）。2）血脂检测结果显示：较空白组,模型组三酰甘油（TAG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）明显升高,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）明显降...     

中药芷辛方对骨癌痛大鼠胶质细胞蛋白表达以及TLRs和NF-κB的影响

目的通过建立癌痛动物模型,探讨芷辛方的镇痛作用及对骨癌痛大鼠模型中脊髓胶质细胞蛋白[胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、CD11b]表达以及Toll受体(Toll-like receptors,TLRs)和核因子κB(NF-κB)的影响。方法将20只SD雄性大鼠随机分为空白组(10只)、骨癌痛模型组(10只),通过左胫骨内接种含有3×10~3个Walker256嫁接的腹水瘤细胞液造模,并对这两组的大鼠进行行为学检测、X光片检测及HE染色的检测证实造模成功。依照此法将70只雄性SD大鼠随机分为7组,每组10只。空白组(10只)、骨癌痛模型组(简称模型组,10只)、西药盐酸曲马多对照组(简称西药对照组,10只)、芷辛方高、中、低剂量组(每组各10只)、中药五灵止痛胶囊对照组(简称中药对照组,10只)。造模14天后开始灌胃,芷辛方高、中、低剂量组分别给予芷辛方水煎浓缩制剂(9、4.5、2.25 g/kg生药)。每天灌胃1次,连续7天。第21天取脊髓L4~L5段背角,分别应用免疫组化、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)的方法,分别检验星形胶质细胞的标志性蛋白GFAP的变化,小胶质细胞的标志性蛋白CD11b表达变化以及髓内TLRs(TLR2、TLR4)和NF-κB的影响。结果与空白组比较,模型组大鼠体重增加迟缓甚至呈下降趋势(P0.01);自发性运动疼痛评分(SAPS)明显上升(P0.01);触诱发痛阈值(PWT)明显下降(P0.05,P0.01);手术侧胫骨X线影像以及HE染色示:骨结构发生明显改变和破坏。免疫组化检测髓内星形胶质细胞的标记蛋白GFAP明显升高;NF-κB蛋白水平升高(P0.01)。与模型组比较,CD11b、TLR2、TLR4及NF-κB水平芷辛方中、高剂量组均明显下降(P0.05,P0.01)。结论芷辛方可抑制脊髓水平胶质细胞的增殖活化和TLRs(TLR2、TLR4)、NF-κB蛋白的激活,这可能是其镇痛机制之一。     

灵芝多糖对脓毒症急性肺损伤大鼠肺功能及TLR4/NF-κB通路的影响

目的探究灵芝多糖对盲肠结扎穿孔导致的脓毒症急性肺损伤大鼠肺功能及肺组织炎症的影响。方法 SD大鼠随机分成对照组、模型组及灵芝多糖低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组和乌司他丁组,除对照组外,其余各组大鼠均采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。给予灵芝多糖和乌司他丁进行干预,采用全自动血气分析仪检测大鼠O₂分压[p(O₂)]和CO₂分压[p(CO₂)];取大鼠右肺中叶计算肺组织湿/干质量;采用ELISA法检测大鼠肺泡灌洗液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法检测大鼠肺组织病理变化;采用Western blotting法检测大鼠肺脏组织中Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)、p65、磷酸化p65(p-p65)蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠...     

泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠Toll样受体4/核因子-κB信号通路的影响

目的:观察泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠Toll样受体4/核因子-κB信号通路的影响并探讨其作用机制。方法:实验设正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、泄浊解毒方小剂量组、泄浊解毒方大剂量组,除正常组外采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇混合溶液灌肠复制溃疡性结肠炎大鼠模型,灌服相应药物后后观察各组大鼠结肠组织Toll样受体4及核因子-κB表达。结果:泄浊解毒方各剂量组大鼠Toll样受体4及核因子-κB表达均明显低于模型组;泄浊解毒方大剂量组Toll样受体4及核因子-κB表达明显低于柳氮磺胺吡啶组。结论:泄浊解毒方对大鼠溃疡性结肠炎有良好的治疗作用,其作用机制可能与调节Toll样受体4/核因子-κB信号通路有关。     

降糖三黄片对糖尿病肾病大鼠TLR4/NF-κB通路的影响

目的观察降糖三黄片对糖尿病肾病大鼠肾组织Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路及单核细胞趋化蛋白~(-1)(MCP~(-1))表达的影响,探讨降糖三黄片对糖尿病肾病的保护作用及其机制。方法将80只SD大鼠随机分为正常组10只,模型组70只。模型组大鼠予腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)复制模型,成模大鼠随机分为模型组,降糖三黄片低、中、高剂量组(675,1350,2700 mg·kg~(-1)·d~(-1)),厄贝沙坦组(13.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)),正常组和模型组灌服等剂量蒸馏水。给药8周后腹主动脉采血测空腹血糖,收集24 h尿液测定尿蛋白,免疫组化法检测各组肾组织中MCP~(-1)蛋白的分布,Western blot法检测各组肾组织中TLR4、NF-κB(P-p65)蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组的空腹血糖、24 h尿蛋白及肾组织TLR4、NF-κB(P-p65)、MCP~(-1)蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,降糖三黄片低、中、高剂量组空腹血糖均显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,降糖三黄片低、中、高剂量组及厄贝沙坦组肾组织TLR4、NF-κB(P-p65)、MCP~(-1)蛋白表达显著降低、尿蛋白排出显著减少,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论降糖三黄片通过抑制TLR4/NF-κB通路,下调MCP~(-1)的表达,起到减少尿蛋白排出,延缓DN进展的作用。     

补肺健脾益肾方对COPD模型大鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路相关因子的影响

目的:研究补肺健脾益肾方对大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)通路的影响.方法:采用随机数字表法将40只大鼠随机分为模型组、常规组、实验组、正常组,每组10只.取其干预12周后肺组织和支气管肺泡灌洗液,比较各组大鼠干预期间一般情况...     

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨益气通脉方对ApoE-/-小鼠主动脉粥样硬化的作用机制

目的 探讨益气通脉方调节Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路对载脂蛋白E-/-（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化（AS）炎症反应的作用机制。方法 将8只C57BL/6J小鼠作为空白组,40只同周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组、益气通脉方低、中、高剂量组[0.39、0.78、1.56 g/（kg·d）]和阿托伐他汀组[2.6 mg/（kg·d）],每组8只。除空白组外采用高脂饲料诱导AS模型,各给药组分别给予相应药物灌胃,空白组与模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,连续12周。采用酶标仪检测小鼠血脂水平;ELISA检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）水平;油红O染色观察小鼠主动脉斑块面积;HE、Masson染色观察小鼠主动脉窦内膜斑块病理变化;免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）法检测主动脉窦中TLR4、髓细胞分化初级反应蛋白88（MyD88）的表达;Western Blot检测小鼠主动脉中TLR4 / NF-κB信号通路相关因子蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平升高（P<0.01）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平下降（P<0.01）;血清TNF-α、MCP-1含量升高（P<0.01）;主动脉窦内膜斑块以及胶原面积增加（P<0.01）,MyD88表达升高（P<0.01）;主动脉TLR4、NF-κB、核因子κB抑制蛋白α（IκBα）、MyD88蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较,益气通脉方中、高剂量组和阿托伐他汀组血清TC、TG、LDL-C水平下降（P<0.01）,血清中TNF-α、MCP-1含量下降（P<0.01）,主动脉窦斑块以及胶原面积均下降（P<0.01,P<0.05）,主动脉窦MyD88水平表达下降（P<0.01）,主动脉TLR4、NF-κB、MyD88、IκB蛋白表达下降（P<0.01,P<0.05）。结论 益气通脉方可改善血脂和炎症因子的水平,减少主动脉窦中斑块脂质堆积,其作用机制可能与下调TLR4/NF-κB信号通路有关。     

复方银花解毒颗粒对脂多糖致幼龄大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的影响

目的 研究复方银花解毒颗粒(Compound Yinhua Jiedu Granule)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致幼龄大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及Toll 样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/核转录因子-kB(nuclear factor-kB,NF-κB)/...     

温经汤对子宫内膜异位症小鼠TLR4/NF-κB通路的影响研究

目的 观察温经汤对子宫内膜异位症小鼠Toll样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路表达的影响,探讨温经汤抑制异位内膜生长的可能作用机制。方法 取54只雌性BALB/c小鼠,采用腹腔内注射子宫内膜碎片法建立子宫内膜异位症模型。将建模成功的50只小鼠随机分为5组,每组10只。温经汤低、中、高剂量组分别给予7.97 g/kg、15.93 g/kg、31.85 g/kg温经汤灌胃,西药组给予孕三烯酮0.5 mg/kg灌胃,模型组给予10 mL/kg生理盐水灌胃。另取5只健康雌性BALB/c小鼠作为空白组,给予10 mL/kg生理盐水灌胃。各组小鼠均连续灌胃21 d后处死,收集异位内膜病灶并称重,ELISA法检测血清和腹腔上清液中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)含量,RT-PCR法和Western blot法测定异位内膜病灶中TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB、转录激活蛋白1(AP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的mRNA和蛋白表达情况。结果 与模型组比较...     

解毒化浊方对输卵管炎性阻塞大鼠ICAM-1和NF-κB表达的影响

目的 观察解毒化浊方对输卵管炎性阻塞大鼠细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、核因子-κB (NF-κB)的影响,探讨解毒化浊方治疗输卵管炎的作用机制.方法 用混合菌接种法制作输卵管炎性阻塞大鼠模型,按随机数字表法将80只Wistar雌性大鼠分为正常对照组、模型对照组、解毒化浊方低剂量组(低剂量组)、解毒化浊方高剂量组(高剂量组),每组20只.低剂量组、高剂量组于造模的第1天开始,分别按17.83,35.66g/(kg.d)给予灌胃,1次/d,连用30 d.其余两组给予同体积的蒸馏水.观察用药后大鼠输卵管形态及通畅率,采用免疫组织化学SP法检测输卵管组织ICAM-1、NF-κB蛋白表达.结果 高剂量组、低剂量组大鼠ICAM-1、NF-κB蛋白表达降低(P＜O.05或P＜0.01).结论 解毒化浊方对大鼠ICAM-1、NF-κB蛋白表达有调节作用,从而对大鼠输卵管炎具有很好的治疗作用.     

银杏叶提取物调控TLR4/NF-κB通路减轻急性脑缺血小鼠脑皮质缺血研究

目的观察银杏叶提取物对急性脑缺血小鼠脑皮质缺血的影响,并探讨其对Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法选取60只成年健康雄性CD1小鼠,随机分为假手术组、模型组、阳性对照(3×104 IU/kg乌司他丁)组及银杏叶提取物低、中、高剂量(10、20、40 mg/kg)组,除假手术组外其余5组均建立急性脑缺血小鼠模型。建模成功后,各组小鼠分别尾iv给予相应药物,假手术组和模型组均给予等量生理盐水。观察小鼠脑皮质病理变化和组织学分级;对比各组存活神经元密度;比色法检测脑皮质组织丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测小鼠脑皮质组织超氧化物歧化酶(SOD)水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测小鼠脑皮质组织Toll样受体4(TLR4)、核转录因子NF-κB p65(NF-κB p65)m RNA表达;Western blotting法检测脑皮质组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达。结果假手术组小鼠脑皮质组织结构正常,细胞饱满且排列紧密、有序;模型组小鼠脑皮质组织结构严重受损,细胞严重皱缩,排列紊乱;乌司他丁组和银杏叶提取物各剂量组小鼠病理变化均减轻,且呈剂量依赖;与假手术组比较,其余5组小鼠组织学分级、脑皮质组织MDA水平均升高(P0.05);与模型组比较,乌司他丁组和银杏叶提取物各剂量组小鼠组织学分级、脑皮质组织MDA水平均下降(P0.05);与乌司他丁组比较,银杏叶提取物高剂量组小鼠组织学分级、脑皮质组织MDA水平均下降(P0.05)。与假手术组比较,其余5组小鼠脑皮质存活神经元密度、脑皮质组织SOD水平均下降(P0.05);与模型组比较,乌司他丁组和银杏叶提取物各剂量组小鼠存活神经元密度、脑皮质组织SOD水平均升高(P0.05);与乌司他丁组比较,银杏叶提取物高剂量组小鼠存活神经元密度、脑皮质组织SOD水平升高(P0.05)。与假手术组比较,其余5组小鼠脑皮质组织TLR4、NF-κBp65m RNA及蛋白表达均升高(P0.05);与模型组比较,乌司他丁组和银杏叶提取物各剂量组小鼠脑皮质组织TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达均下降(P0.05);与乌司他丁组对比,银杏叶提取物高剂量组小鼠脑皮质组织TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平均降低(P0.05)。结论银杏叶提取物可减轻急性脑缺血小鼠脑皮质缺血所致的病理改变,减轻神经功能受损,改善脑皮质组织氧化应激指标,推测其可能是通过调控TLR4/NF-κBp65信号通路,抑制TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达实现的。     

基于TLR4/NF-κB信号通路研究清开灵口服液防治肺炎的作用机制

目的 基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路研究清开灵口服液防治肺部炎症的作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组及清开灵口服液低、中、高剂量(4、8、16 mL/kg)组和头孢氨苄(175 mg/kg)组,各给药组ig相应药物,1次/d,连续6 d。给药同时进行造模,肺部注射肺炎克雷伯菌菌液造模3 d,对照组肺部注射生理盐水。给药结束后采集大鼠血液、肺泡组织灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),进行菌落培养和计数;采用全自动血液细胞分析仪检测白细胞数量及中性粒细胞、单核细胞比例;采用ELISA法检测血清中白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、IL-2、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、缓激肽(bradykinin,BK)、单核细胞趋化因子(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)水平及环氧化酶-1(cyclooxygenase-1,COX-1)、COX-2活性;采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理变化;采用免疫组化法检测肺组织TLR4蛋白表达;采用Western blotting法检测肺组织磷酸化p65(phosphorylated p65,p-p65)、p65、磷酸化NF-κB抑制因子(phosphorylated inhibitor of NF-κB,p-IκB)和IκB表达。结果 与模型组比较,清开灵口服液组大鼠全血及BALF中经培养后的菌落数显著降低(P<0.05);全血中白细胞数目及中性粒细胞、单核细胞比例均显著降低(P<0.05、0.01);血清中IL-1、IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、BK、MCP-1水平及COX-1、COX-2活性均显著降低(P<0.05、0.01);肺实质中炎性细胞浸润、红细胞渗出及肺泡上皮细胞脱落等现象明显减少;肺组织中TLR4蛋白阳性表达明显减少,p-p65/p65和p-IκB/IκB蛋白表达水平显著下降(P<0.05、0.01)。结论 清开灵口服液具有抑制肺炎克雷伯菌所致肺炎的作用,其机制可能与调控TLR4/NF-κB信号通路有关。