NMBzA对猴食管上皮癌基因和多种抑癌基因的作用

应用ＰＣＲ扩增和直接测序方法，分析致癌物甲基苄基亚硝胺（ＮＭＢｚＡ）对猴食管上皮细胞中癌基因Ｈａ－ｒａｓ和多种抑癌基因ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ的作用。结果未发现Ｈａ－ｒａｓ第１２密码子突变；给猴灌喂食管上皮ＮＭＢｚＡ２４和４８ｈ，食管上皮有ｐ５３基因突变指纹；灌喂ＮＭＢｚＡ４８ｈ，存在Ｒｂ与ＡＰＣ基因突变指纹；灌喂ＮＭＢｚＡ第５天的猴食管上皮细胞中，ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ基因突变指纹消失。实验证实：化学致癌物ＮＭＢｚＡ能引起多种抑癌基因改变，ＮＭＢｚＡ对细胞中抑癌基因的遗传性突变影响可能需要多次作用。这些基因突变指纹与过去报道的部分原发性食管癌中的ｐ５３、Ｒｂ和ＡＰＣＮＭＢｚＡ突变相同。     

神经系统肿瘤恶性程度与其基因产物表达的不稳定性相关

用免疫组化法检测了１０例中枢神经系统肿瘤和１０例末梢神经系统肿瘤细胞中ＰＣＮ，Ａｂｃｌ－２，Ｆａｓ，ＢＭ－１，Ｒｂ和ｐ５３基因产物的表达。ＰＣＮＡ，ｂｃｌ－２，Ｆａａ，ＢＭ－１，Ｒｂ和ｐ５３在中枢神经系统肿瘤中分别有７，１，４，０，２，３，例阳性；而在末梢神经系统肿瘤中则各有４，５，１０，０，５，０例阳性。在两者之间存在基因产物表达上的差异。     

胃癌组织中多种癌基因变异的观察

目的 探索胃癌癌变过程中多种癌基因和抑癌基因变异的规律。方法用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ和ＤＮＡ测序技术，检测３３例胃癌手术标本中原癌基因ｃ－ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ｃ－Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＡＫＴ-２的扩增和重排，以及抑癌基因ｐ５３、ｐ１６、ｎｍ２３－Ｈ１的突变和缺失。结果大多数胃癌组织（７０％）存在１个或１个以上的基因改变。不同个体基因异常的种类和方式不同。其中ｃ－ｍｅｔ基因重排２／３３例（６％），扩增８／３３例（２４％）。ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增１／３３（３％），ＡＫＴ－２扩增２／１８例（１１％）。抑癌基因ｐ１６的纯合性缺失６／３３例（１８％），ｎｍ２３－Ｈ１和ｐ５３的杂合性缺失分别是５／１７例（２９％）和２／１３例（１６％）。ｐ５３第５～８外显子点突变的检出率为２０／３３例（６１％）。癌基因的扩增和重排多发生于胃癌进展期，而ｐ５３基因的点突变可发生于癌变各期。结论胃癌癌变是多基因异常累积所引起的渐进性过程，基因改变的数目、种类及方式与肿瘤的恶性表型密切相关。     

肝细胞癌多种抑癌基因失活机理的研究

目的；分析肝细胞癌多种抑癌基因失活的机理。方法：应用ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 技术对ＰＹＮＺ２２、Ｐ５３和Ｒｂ抑癌基因失活及其机理进行了研究。结果：４１．７％的肝癌存在ＰＹＮＺ２２．１位点基因的高甲基化，３５％存在杂合缺失，过度高甲基化病例都伴有杂合失，５０％的肝癌存在Ｐ５３基因突变，突变病例多伴另一等位基因缺失；约２５％的肝癌存在Ｒｂ基因缺失，一例肝透明细胞癌存在Ｒｂ基因ＣｐＧ岛的高甲基化，未发     

子宫肌瘤中抑癌基因p53和Rb的表达

探讨抑癌基因ｐ５３和Ｒｂ在子宫肌瘤发生发展中的作用。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ方法检测１４例子宫肌瘤和３例子宫平滑肌肉瘤中ｐ５３和Ｒｂ基因的ｍＲＮＡ表达。结果：Ｐ５３和Ｒｂ基因在分泌期子宫肌肉中的表达水平明显高于增殖期，在子宫肌瘤中的表达水平明显低于分泌期子宫肌肉组织，在子宫肉瘤中的表达水平低于子宫肌瘤。     

肺肿瘤癌基因与抑癌基因表达的研究

目的：探讨癌基因与抑癌基因的表达与肺癌发生、发展的关系。方法：对６１例肺肿瘤标本。用免疫组化方法同时检测癌基因Ｂｃｌ－２、抑癌基因视网膜母细胞（Ｒｂ）、ｐ５３、ｐ１６。结果：Ｒｂ与ｐ１６表达、ｐ５３与Ｂｃｌ－２表达呈负相关（Ｐ〈０．０５）,Ｒｂ与Ｐ５３表达、Ｐ１６与Ｂｃｌ－２表达呈正相关（Ｐ〈０．０５）。结论：肺癌的发生与发展是癌基因激活、抑癌基因失活及细胞凋亡调控基因异常等多基因损害的积累过程和     

人成骨肉瘤及骨纤维结构不良组织p53,p16及Rb表达的意义

目的：探讨人成骨肉瘤组织、成骨肉瘤细胞系（ＯＳ－９９０１）及骨纤维结构不良组织中突变型ｐ５３,ｐ１６及Ｒb基因的表达及意义。方法：采用免疫组织化学ＡＢＣ方法对６ ０例成骨肉瘤标本、一株成骨肉瘤细胞系及１４例骨纤维结构不良组织中ｐ５３,ｐ１６及Ｒb基因的表达进行检测。结果：ｐ５３,ｐ１６及Ｒｂ基因的表达进行检测。结果：ｐ５ ３,ｐ１６及Ｐb基因在上述两各组织中均一阳性率各异。在６０例骨肉瘤标本中的阳性表     

喉鳞癌中p53抑癌基因产物表达及其与喉癌颈淋巴结转移相关性的研究

ｐ５３基因是与人类恶性肿瘤关系最密切的基因之一，与多种癌的发生发展密切相关［１～６］。本研究用免疫组织化学方法对１０２例喉鳞癌组织标本和１０例喉正常组织标本进行了ｐ５３抑癌基因产物检测，探讨ｐ５３异常在喉癌发病中的作用及其对喉癌生物学行为及转移的影响...     

原发性肝细胞癌p53基因突变检测

为了解在黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）低含量区以ＨＢＶ为主要危险因素的ＨＣＣｐ５３基因突变情况，并分析它与ＨＢＶ及其它因素的关系，作者筛检了成都地区３２例原发性肝癌（ＨＣＣ），分别应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰＳｏｕｔｈｅｒｎ吸印杂交及免疫组化染色法检测了３２例ＨＣＣ及２７份癌旁肝组织中ｐ５３基因突变、ＨＢＶＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达。结果：所有ＨＣＣ病例均感染过ＨＢＶ，肝癌细胞中ＨＢＶＤＮＡ整合率７１．９％，癌旁组织均有肝硬化或／和慢活肝病变，且ＨＢｓＡｇ表达率９６．３％。３２例ＨＣＣ中检出８例Ｐ５３蛋白阳性（２５％），这种改变与ＨＢＶＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达无明显关系，而与ＨＣＣ发生年龄有关；３２例ＨＣＣ组织中有２例ｐ５３基因第２４９号编码子突变（６．２５％），明显低于ＡＦＢ１高含量区ＨＣＣ，而与台湾、日本等ＡＦＢ１低含量区报道一致，提示：成都地区ＨＣＣ与ＨＢＶ感染确有密切关系；ｐ５３改变在ＨＣＣ发生上有一定作用，但是多数ＨＣＣ并无ｐ５３基因突变又提示ＨＣＣ发生尚涉及其它复杂机制；ＨＢＶ在ＨＣＣｐ５３基因改变中的作用机制值得进一步探索。     

p53,p21及—c—erbB—2蛋白在大肠粘膜和肿瘤中的表达

目的探讨ｐ５３、ｐ２１、及ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白与大肠癌发生和发展的关系。方法运用免疫组化方法检测ｐ５３、ｐ２１、及ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白在６８例大肠癌、１１例大肠腺瘤、２６例癌旁粘膜及１５例正常大肠粘膜中的表达情况。结果①正常粘膜及癌旁粘膜中无ｐ５３蛋白过度表达。大肠癌ｐ５３蛋白表达率比腺瘤高（Ｐ＜０．０５）。正常粘膜ｐ２１及ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的阳性表达率比癌、腺瘤及癌旁粘膜低（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。②正常粘膜以３种蛋白全部阴性者为多，癌旁粘膜以１种蛋白阳性或全阴者为多。③ｐ５３及ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白阳性的大肠癌和腺瘤的ＰＣＮＡ（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）增殖指数高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），而ｐ２１蛋白阳性及阴性的大肠癌和腺瘤的ＰＣＮＡ指数无明显差别（Ｐ＞０．０５）。ｐ２１及ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白阳性对癌旁粘膜及正常粘膜的ＰＣＮＡ增殖指数无明显影响。结论癌基因和抑癌基因蛋白协同表达可能与大肠腺瘤和癌的发生有关，尤其与ｐ５３蛋白的关系较为密切，似通过导致细胞过度增殖而使肿瘤发生和恶性转化。     

胃癌及癌旁组织中p53基因和Rb基因的研究

本文使用Southern杂交方法分析了胃癌组织中p53基因和Rb基因的缺失和重排;使用PCR-RFLP技术分析了p53基因第248位、249位密码子的点突变。研究结果显示:30例胃癌组织中9例有p53基因的缺失或重排;42例胃癌组织中两例有p53基因第248位密码子的点突变;15例胃癌组织中两例有Rb基因的缺失和重排。     

胃癌粘膜基因不稳与染色体端粒长度改变的研究

目的 探讨端粒长度与微卫星不稳定（MSI）和APC/MCC及DCC基因杂合丢失（LOH）的关系。方法 采用Southern杂交检测端粒限制性片段长度;采用PCR为基础的方法对MSI、LOH和移码突变进行分析。结果 68例胃癌中,至少有1个位点发现MSI者17例（25%）。将MSI分为高频率MSI（≥2个位点）8例、低频率MSI（仅为1个位点）9例和MSI阴性51例3组。结果8例高频率MSI中检出TGF-βR Ⅱ移码突变6例,BAX移码突变3例,hMSH6移码突变2例,而低频率MSI和MSI阴性组示见有移码突变者。35例胃癌行TRF分析,其中端粒缩短20例（57.1%）,基本不变12例（34.3%）,延长3例（8.6%）。端粒长度与临床病理参数无关。DCC基因LOH与TRF缩短有关。APC和MCC基因亦有随TRF缩短而LOH率增高的倾向。TRF长度与MSI和移码突变无相关性。结论 胃癌发生涉及二条不同的分子途径。高频率MSI胃癌由于错配修复基因缺陷导致单核苷酸水平突变的积聚和高频率MSI表型,而低频率MSI和MSI阴性胃癌可能涉及LOH病理途径。端粒丢失可能参与了LOH病理途径,而与MSI途径无关。     

肝内胆管癌多基因变异表型分析

目的：探讨参与肝内胆管癌发生的多基因变异谱系,为了肝内胆管癌的发生机理提供基因水平上的依据。方法：采用显微切割术从石蜡组织切片中提取DNA、聚合酶链式反应（PCR）扩增基础上DNA测序的方法,对22例手术切除的肝内胆管癌标本进行了6种肿瘤抑制基因（APC、MCC、DCC、OGG1、p53和RB1）的杂合性缺失（LOH）和Ki-ras-2癌基因点突变的发生率检测。结果7种肿瘤基因的变异率为APC（68．8％）、DCC（46．2％）、OGG1（41．7%）、p53(37.5%)、Ki-ras-2(27．3％）、RB1（22．2％）和MCC（14．3％）。结论多基因变异的协同作用在肝内胆管癌的多阶段发展发生过程中起着重要作用,其中尤以APC、DCC、OGG1、p53和Ki-ras-2构成了肝内胆管癌相关的基本基因谱系。     

Abnormal Change of p53 Gene in Gastric and PrecancerousLesions and APC Gene Deletion in Gastric Carcinoma and Near Tissues

Hypothesisoftumorsuppressorgenehadbeenproposedtwentyyearsag0['],butthefirstsuppressorgeneRb(retinoblas-toma)wasseparatedandcloneduntill986[z].Suppressorgene,includingp53andAPCgenes,n0whasbecomenew"hot"subjectintheareaoftumorresearch.p53genemutation,deleti0nandAPCgenedele-tionoccurredinsomehumantumorsandtheremaybesomerelationbetweenAPCgeneandp53genedeletion[3-7]-Inthispa-per,PCR-RFLP,PCR-SSCPmeth0dswereusedtoanalyzep53,APCgenealterationsingastriccancerandprecancerouslesi0nsinordertoin…     

散发性大肠癌多基因突变与肠道内环境因素关系的研究

目的：探讨肠道内环境中因素与散发性大肠癌多基因突变关系。方法：对106例散发性大肠癌患者进行多基因突变和肠道内环境中有关指标(以粪便为标本)的测定，并进行流行病学的病例一病例研究分析。结果：106例散发性大肠癌患者中APC(MCR)，K—raS(12／13)及P53(5／6，7，8)突变率分别为31．19％(32／106)，37．74％(40／106)及39．62％(42／106)。散发性大肠癌患者p53 249密码子突变占p53总突变的42．86％(18／42)；肠道内粪胆汁酸(OR=1．9280，P=0．0052)，Mg^2^ (OR=0．287l，P=0．0121)和Ca^2^ (OR=O．0659，P=O．0307)进入多因素logistic模型；吸烟指数和肠道内胆汁酸与p53 249密码子突变相关。结论：散发性大肠癌确实普遍存在有多种基因的突变，肠道内高胆汁酸可能是散发性大肠癌相关基因突变的重要危险因素，肠道内ca^2^ 和Mg^2^ 可能为保护性因素；广东地区散发性大肠癌p53基因突变有一定特点，有必要探索AFB1在广东地区散发性大肠癌发生发展中可能作用。     

STUDY OF LOSS OF HETEROZYGOSITY AT DCC AND APC/MCC GENETIC LOCI OF GASTRIC CANCER

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＩｎｔｈｅｃｏｕｒｓｅｏｆｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒｓ,ｔｈｅｌｏｓｓｏｆｃｅｒｔａｉｎｆｒａｇｍｅｎｔｓｏｆａｓｐｅｃｉｆｉｃｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｒｅｇｉｏｎｆｒ...     

液相芯片技术检测非小细胞肺癌多基因突变

目的 建立基于高通量液相芯片技术、可同时检测p53、p16、视网膜母细胞瘤(Rb)和表皮生长因子受体(EGFR)基因热点突变的方法,并探讨其在非小细胞肺癌(NSCLC)分子诊断中的意义.方法 针对p53、p16、Rb和EGFR基因热点突变位点,分别设计正常序列和突变序列探针,将探针固定于标记不同比例荧光物的微球上.分别提取65例NSCLC患者(Ⅰ期23例,Ⅱ期20例,Ⅲ期22例)癌组织标本和其中20例患者癌旁正常组织标本基因组DNA,PCR扩增p53、p16、Rb和EGFR基因.将PCR产物与含寡核苷酸探针的微球混合后用Luminex 100多功能流式点阵仪进行流式荧光检测分析.结果 单独检测p53、p16、Rb和EGFR基因突变时,NSCLC标本突变检出率分别为53.8%(35/65)、20.0%(13/65)、7.7%(5./65)和35.4%(23/65);癌旁正常组织标本为5.0%(1/20)、5.0%(1/20)、0和0.而四基因联合检测,敏感性为81.5%(53/65),特异性为90.0%(18/20),准确性为83.5%(71/85);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期NSCLC标本突变检出率分别为78.3%(18/23)、80.0%(16/20)和86.4%(19/22).结论 成功建立了具有较高敏感性和特异性、可同时检测临床NSCLC标本多基因突变的液相芯片检测方法,该方法有助于提高NSCLC分子诊断的效率,并可能有助于NSCLC的早期诊断.     

中药紫龙金与HMBA对人胃癌不同周期细胞基因表达调控的共性研究

目的　探讨中药紫龙金与环六亚甲基二己酰胺 (HMBA)对人胃癌MGc80 3不同周期细胞癌基因c ras、c myc、抑癌基因Rb、p5 3、p2 1以及蛋白激酶PKC a基因表达的影响。方法　采用Northernblot印迹法检测基因表达情况。结果　MGc80 3不同周期时相细胞用中药紫龙金和HMBA分别处理后 ,癌基因ras、myc表达下降 ,多数抑制率达到 5 0 %以上 ;促进细胞增殖的蛋白激酶PKC基因表达基本与癌基因表达抑制相似。两类药物对抑癌基因的影响则有显著差异 ,HMBA处理后Rb和 p2 1在G1期细胞的表达下降抑制率达 39.5 %和 33.3% ,Rb在S期也抑制 3.0 % ;而中药紫龙金对Rb和 p2 1在各个周期细胞均是促进表达 ,多数时相达 12 5 .0 %～ 2 33.4 %。结论　中药紫龙金与HMBA对癌基因和抑癌基因表达的调节作用基本相似 ,但紫龙金作用优于HMBA ,两类药物对MGc80 3细胞的增殖抑制和促分化作用的分子机制和两类药物对细胞周期内癌基因与抑癌基因调节相关。     

Study of mutations of p53, APC and K-ras genes in 47 cases of intestinalmetaplasia of gastric mucosa

ih order to stUdy the role of the mutations of P53,W and K-ras benes in intestine ~la(IM) of metric muare and caxcin~s, the InUtationS of the gene~onto ~ in 3 mp of m were ~nab withPCR-bumP and PCR~~. ..~ ~ SUbjch Folty~five foryhalin-fad and ~ em.~ s~ of ~ and severe iM were colleded in the - ho I%8 to lOp and 15 f- swear fxnm the stallly ~ cases. ~ the co.spe~, 10 were for the ~ of the ~ents with~ ~c diseases and 50 ho the gb~ tissues of~c carcinoma. Serial SectionS were done for the…     

人喉癌P_（53）、Rb基因突变的PCR－SSCP检测

应用聚合酶链式反应一单链构象多态分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析）技术，检测了喉癌中抗癌基因Ｐ５３第５～８和１１外显子及Ｒｂ基因第２０外显子的突变。结果表明：Ｐ５３、Ｒｂ基因突变与癌组织病理分化程度有关，中、低分化癌的突变例数明显多于高分化癌；Ｐ５３、Ｒｂ基因突变失活与喉癌发生、发展及恶性度有关。应用上述快速敏感的检测方法检测Ｐ５３、Ｒｂ基因突变，对判断喉癌恶性度及估计预后有一定的实用价值。