应用聚合酶链单链构象多态技术检测葡萄糖6磷酸脱氢酶基因突变

为了探索一种快速、灵敏及准确的检测红细胞葡萄糖６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因点突变方法，我们采用单链构象多态技术（ＳＳＣＰ），对２０例Ｇ６ＰＤ变异型基因外显子２进行分析。发现有４例患者双链ＤＮＡ中有一条链出现泳动变位，明显慢于正常人及其他患者，用ＰＣＲ直接侧序表明在ｃＤＮＡ第９５位核苷酸发生碱基置换（Ｔ→Ｃ）。结果说明ＳＳＣＰ技术检测点突变具有广泛的应用前景，比现行的点突变检测方法简便易行。作者还对ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的优点和所检测突变的特点进行了探讨。     

Crouzon综合征FGFR2基因第9外显子突变的研究

目的：研究Ｃｒｏｕｚｏｎ综合征的病因。方法：应用聚合酶链反应－－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术结合ＰＣＲ产物直接测序方法对６例Ｃｒｏｕｚｏｎ综合征家系（２１名患者，１５名正常人）的成纤维细胞生长因子受体２（ＦＧＥＲ２）基因第９外显子进行了分析。结果：ＳＳＣＰ检测发现５种异常泳动变位，ＤＮＡ直接测序证实为种突变类型，Ｔｙｒ３４０Ｈｉｓ，Ｃｙｓ ３４２Ｔｒｐ，Ｃｙｓ ３４２ Ｔｙｒ及３４４Ａｌａ     

人胰腺腺癌中抗癌基因P53的突变

用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析及ＤＮＡ直接测序法检测了１６例胰腺腺癌的Ｐ５３基因５－８外显子，结果发现３７．５％有Ｐ５３基因点突变，突变分布于外显子５－８，无特殊突变倾向点。６例有Ｐ５３突变者，５例为１个等位基因突变，另１个等位基因丢失；１例同时含有突变型和隆型等位基因。     

慢性宫颈炎组织内P53突变的检测

目的：通过对慢性宫颈炎组织内Ｐ５３基因５－９外显子突变的研究，探讨慢性宫颈炎的发生是否与Ｐ５３的突变有关，并为临床妇科实验室建立一种分子生物学的基因检测方法。方法：应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术，对慢性宫颈炎活检组织内Ｐ５３ ５－９外显子的突变进行了检测。结果：在１８例慢性宫颈炎组织中，仅有１例在ＰＣＲ后初步判断为可疑结果，但ＳＳＣＰ结果显示无突变，其余１７例ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测结果均无Ｐ５３ ５－９外     

应用改进的PCR—SSCP银染色法检测卵巢上皮肿瘤p53基因突变？…

目的：探讨ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法检测基因点突变的准确性和检测卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因的点突变率。方法：建立ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因第５￣９外显子的点突变。结果：ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染正常时出现２条带，突变时出现３条带，卵巢上皮癌ｐ５３基因突变率为３０．６％；第５、６、７、８、９外显子分别为１、１、６、３、０例，突变率在临     

聚合酶链反应技术在腓骨肌萎缩症基因诊断中的应用

目的 探讨应用聚合酶链反应（ＰＧＲ）技术建立中国人腓骨肌萎缩症（ＣＭＴ）基因诊断的方法。方法 分别应用ＰＣＲ－双酶切、聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－变性梯度凝胶电泳（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ）或ＰＣＲ直接测序等方法对３２个确诊的ＣＭＴ家系进行了ＰＭＰ２２、ＭＰＺ、Ｇx３２等致病基因的突变检测。结果 ２１．９％的ＣＭＴ家系患者有Ｇx３２、ＭＰＺ和ＰＭＰ２基因的突变。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测到１０个家系有异常泳带,经ＰＣＲ测序证实有５个为多态;另５个为与疾病相关的致病的点突变,即４个Ｇx３２和１个ＭＰＺ基因的点突变。PCR-双酶切诊断了２个包含ＰＭＰ２２基因在内的大片段重复突变的ＣＭＴ１Ａ型家系。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ仅１个家系患者异常泳带,该结果也可经ＰＣＲ－ＳＳＣＲ方法检出。结论 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－双酶切可作为Ｇx３２、ＭＰＺ、ＰＭＰ２２基因的点突变和ＣＭＴ１Ａ的大片段重复突变的初筛的方法,而ＰＣＲ－ＤＧＧＥ方法用于Ｇx３２基因的突变检测不理想,点突变应经ＤＮＡ测序证实。     

应用改进的PCR-SSCP银染色法检测卵巢上皮肿瘤p53基因突变的研究

目的：探讨ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法检测基因点突变的准确性和检测卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因的点突变率。方法：建立ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因第５～９外显子的点突变。结果：ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染正常时出现２条带，突变时出现３条带；卵巢上皮癌ｐ５３基因突变率为３０．６％；第５、６、７、８、９外显子分别为１、１、６、３、０例；突变率在临床各期、组织学分级和组织学类型之间无明显差异；卵巢上皮交界瘤仅１例ｐ５３基因第７外显子发生突变，良性卵巢瘤无１例发生突变。结论：ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法检测卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因点突变准确率高，有助于区分卵巢上皮肿瘤的良恶性     

Rett综合征患者线粒体DNA突变的初步分析

目的 探讨线粒体ＤＮＡ在Ｒｅｔｔ综合征发病中的作用。方法应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析及ＤＮＡ直接测序结合错配ＰＣＲ的方法，对１５例Ｒｅｔｔ综合征患儿及其中１４例的母亲的外周血白细胞线粒体ＤＮＡ的部分片段进行分析。结果１３例患儿及其中１１例的母亲的线粒体ＤＮＡ上，编码１６ＳｒＲＮＡ基因的２６５０－３０００区域ＤＮＡ突变，其中７例患儿及其中６例的母亲存在２８３５位点的点突变（Ｃ－Ｔ），３０例正常对照均未发现有此点突变。结论线粒体ＤＮＡ在Ｒｅｔｔ综合征的发病中起一定作用。     

白血病中P16基因突变的检测

用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ直接测序和多重ＰＣＲ法，检测了１８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ），１例Ｋ５６２细胞株，９例急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ），６例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ），２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血／培养细胞ＤＮＡ中Ｐ１６基因的点突变和基因缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ共筛查出５例ＣＭＬ中Ｐ１６基因的异常，突变率为２７．８％（５／１８），对其中１例外显子２异常者经测序证实为第１５１密码子ＣＣＣ→ＣＧＣ的转换，导致Ｐｒｏ→Ａｒｇ的错义突变；并检出１例ＭＭ中Ｐ１６基因外显子３的异常；受检的ＡＬＬ，ＡＭＬ，Ｋ５６２细胞株中，未检出突变。各病例中均未检出Ｐ１６基因的缺失。本文探讨了白血病中Ｐ１６基因突变的意义。     

PCR—SSCP—银染法在基因突变分析中的应用

探讨ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法在基因突变检测中的应用。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法分析了苯丙酮尿症患者的ＰＡＨ基因外显子４,７,１０,１１和１２,并对部分样中进行ＤＮＡ测序,结果：检出部分已知突变如Ｒ２４３Ｑ,Ｒ４１３Ｐ等,并发现当ＳＳＣＰ带型不同于阳性,阴性对照时,或是外显子其它突变,或内内含子碱基变化引起,也可见于碱基序列正常的样品中,结论：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法在有较好对照,严格控制曩因素条     

应用不对称PCR—SSCP检测人胰腺癌P53抑癌基因的突变

目的：了解内蒙古地区胰腺癌患者Ｐ５３抑癌基因的突变情况。方法：采用不对称ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测胰腺癌患者Ｐ５３基因在５，６，７和８外显子的基因突变，它与传统的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ相比有更多的优势，克服了传统方法中双链ＤＮＡ不完全变性或非特异扩增造成的解读困难和错误判读，而且应用一对引物中不同当量的２个引物配成的反应混合物Ｍｉｘ１和Ｍｉｘ２，对标本进行两次检验，可以两次判定结果，进一步增加了实验的可靠     

P53肿瘤抑制基因突变分析的技术方法探讨

聚合酶链反应－单链构型多态分析－脱氧核糖核酸序列测定技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ技术），对正确检测和评价人食管癌和癌前病变组织肿瘤抑制基因Ｐ５３的基因变化的影响进行了分析。结果：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ序列测定技术是分析肿瘤抑制基因Ｐ５３变化的较灵敏和可靠的方法。但是，肿瘤组织的取样误差和处理不当可造成对Ｐ５３基因突变的发生率和性质的错误结论。利用免疫组织化学技术定位检测Ｐ５３蛋白的变化，并据此在镜下组织切片中收集Ｐ５３蛋白免疫组化阳性细胞，然后进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＤＮＡ分析有助于提高Ｐ５３基因变化的检出率，阳性细胞浓集数量与Ｐ５３基因变化检出率呈正相关。     

应用PCR—SSCP银染技术检测非小细胞癌p53基因点突变

我们应用聚合酶链反应－单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术对３１例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中ｐ５３基因第５，６，７，８，外显子进行检测，结果发现有１５例（４８．３８％）发生基因突变，其中第７外显子８例，第５，８外显子各３例，第６外显子１例，说明５～８外显子为突变热点区域；ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一种敏感，快速，经济，实用检测点突变方法。     

PCR对SSCP检测p53基因杂合性缺失的影响

对比观察了常规ＰＣＲ及半巢式ＰＣＲ对ＳＳＣＰ检测乳腺用ｐ５３基因杂合性缺失的影响。结果显示，半巢式ＰＣＲ能将石蜡包埋组织ｐ５３基因第４外显子ＤＮＡ片段ＰＣＲ扩增成功率由８２．５％提高到１００％，但应用半巢式ＰＣＲ产物对１３例杂合子病人ＳＳＣＰ分析显示，乳腺癌组织ｐ５３基因杂合性缺失由常规ＰＣＲ─ＳＳＣＰ检出阳性６例降低至１例。本研究结果表明，半巢式ＰＣＲ虽能提高ＰＣＲ的敏感性，但由于乳腺癌组织往往混杂有一些正常组织成分，二次ＰＣＲ扩增增加了正常组织ＤＮＡ对肿瘤组织ＤＮＡ的影响，因而不适用于乳腺癌ｐ５３基因杂合性缺失的研究。     

AT基因突变与食管癌及结肠癌的关系

探讨共济失调毛细血管扩张症基因突变与食管癌及结肠癌发病的关系。方法：运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及ＤＮＡ同位素测等技术，对１７例食管癌和１５例结肠癌患者和ＡＴ基因第４１－５１外显子进行突变检测。结果：１５例结肠癌标本的ＳＳＣＰ带型与正常对照组织无差异；１７例食管癌标本中有１例ＳＳＣＰ带型比常对照组织多一条带，测序发现，该例标本在ＡＴ基因４９外显子发生单碱基缺失。结论ＡＴ基因突变可能与某些类型的食管癌发病有     

宫颈癌组织中P53基因5～6外显子的检测及分析

应用ＧＰ ＰＣＲ 技术对４０ 例宫颈癌活检组织进行ＨＰＶ 感染的检测，发现有３５ 例为阳性（ 阳性率为８７％ ），同时利用ＰＣＲ ＳＳＣＰ（单纯ＤＮＡ构象多态性）分析技术，对３５ 例ＨＰＶ 阳性的宫颈癌组织进行Ｐ５３ 基因５ ～６外显子的检测，其突变率仅为２－８５ ％（１／３５），而在５ 例ＨＰＶ 阴性的宫颈癌组织中未检测到Ｐ５３ 基因突变，结果表明：Ｐ５３ 基因的突变在宫颈癌的发生过程中不起主要作用，并且与ＨＰＶ的感染无相关性。     

家族性腺瘤性息肉病患者APC基因胚系突变的检测

探讨国有家族性腺瘤性息肉病患者ＡＰＣ基因胚系突变的规律。方法；运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法对１５个ＦＡＰ家系１８例患者的ＡＰＣ基因４个片断的胚系突变情况进行检测。结果：６例来自不同家系的患者存在突变，其中一个患者在３个片段有突变，国一个患者在两个片断有突变。结论：此方法具有简便，快速，敏感，经济和无同位素污染等特点，可望成为ＦＡＰ症前及产前基因诊断的新技术。     

宫颈癌组织中P53基因5～6外显子的检测及分析

应用ＧＰ－ＰＣＲ技术对４０例宫颈癌活检组织进行ＨＰＶ感染的检测,发现有３５例为阳性（阳性率为８７％）,同时利用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（单纯ＤＮＡ构象多态性）分析技术,对３５例ＨＰＶ阳性的宫颈癌组织进行Ｐ５３基因５￣６外显子的检测,其突变率仅为２．８５％（１／３５）,而在５例ＨＰＶ阴性的宫颈癌组织中未检测到Ｐ５３基因突变,结果表明：Ｐ５３基因的突变在宫颈癌的发生过程中不起主要作用,并且与ＨＰＶ的感染无相关     

肝细胞癌患者中p53基因的突变研究

为了解肝细胞癌（ＨＣＣ）中ｐ５３基因的突变情况，收集８６例ＨＣＣ手术切除术标本，采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ），聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ／ＲＦＬＰ）和ＤＮＡ序列分析，研究了ｐ５３基因的突变情况，８６例ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变率为３６％，其中，密码子２４９的突变率为３３．７％，１例ＳＳＣＰ和ＲＦＬＰ均提示密码子２４９存在突变者经ＤＮＡ序列分析显示密码子２４９     

人大肠腺癌组织P^53基因突变与表达

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术和免疫组织化学方法检测１８例人大肠腺癌和腺瘤变组织Ｐ＾５３基因第５－８外显子的突变和Ｐ＾５３蛋白的表达，另对９７例大肠腺瘤和腺瘤癌变组织Ｐ５３蛋白表达进行了检测。１８例大肠腺癌中８例Ｐ＾５３基因，第５－６外显子中存在突变。１０例（５６％）Ｐ＾５３表达阳性。