重组人肿瘤坏死因子诱导HL－60白血病细胞分化及调控原癌基因表达的作用

采用２０～２００Ｕ／ｍｌ的重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α）处理体外液相培养的人早幼粒白血病细胞珠ＨＬ－６０，观察到５０～２００Ｕ／ｍｌ的小剂量ＴＮＦ具有诱导其向单核－巨噬细胞途径分化及抑制其增殖的效应。采用细胞总ＲＮＡ打点杂交技术检测１～１００Ｕ／ｍｌＴＮＦ诱导ＨＬ－６０细胞早期（１２小时内）对其ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达的影响，发现ＴＮＦ可抑制ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ水平及ｃ－ｆｏｓ短暂性表达增高。结果表明此小剂量ｒｈＴＮＦ－α具有诱导白血病细胞分化的效应及调控多癌基因表达的作用。     

SD鼠未成熟心肌细胞缺氧/复氧期c-fos,c-myc mRNA的表达

目的 研究未成熟细胞缺氧／复氧期间ｃ－ｆｏｓ,ｃ－ｍｙｃ的表达。方法 建立Ｓ大鼠未成熟心肌细胞原代培养及缺氧／复氧模型应用原位分子杂交技术,观察ｃ－ｆｏｓ,ｃ－ｍｙｃ在心肌细胞核内的表达。结果 未成熟心肌细胞在缺氧前ｃ－ｆｏｓ,ｃ－ｍｙｃ,ｍＲＮＡ无表达,对照（１）组和（２组）ｃ－ｆｏｓ,ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ在缺氧１２０ｍｉｎ开始表达,复氧６０ｍｉｎ表达程度进一步升高。牛磺酸保护组（Ⅲ）组在缺氧１     

鬼臼叉甙诱导HL－60细胞分化时c－myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关系。结果：与ＲＡ一样，小剂量ＶＰ－１６能诱导ＨＬ－６０细胞向粒系分化。并且在ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ蛋白水平明显降低。ＶＰ－１６处理的ＨＬ－６０细胞其ｃ－ｍｙｃ蛋白降低与其诱导分化作用呈负相关。结论：实验结果提示，ｃ－ｍｙｃ原癌基因表达的变化可能是ＶＰ－１６诱导ＨＬ－６０细胞分化的机制之一。     

反义寡核苷酸对HL60细胞c—myc基因表达的抑制和诱导分化作用

研究ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞中ｃ－ｍｙｃ基因的表达及ＨＬ６０细胞分化的影响。方法 采用针对原癌基因ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ５’非翻译区的一个１８ｂｐ的反义寡核苷酸５‘ｄ（ＣＴＴ ＣＴＣ ＧＡＧ ＧＣＡ ＧＧＡ ＧＧＧ）３「与人早幼粒白血病细胞系ＨＬ６０细胞共培养５ｄ，检测ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ量的变化及其对ＨＬ６０细胞分化的影响。     

应用PCR检测HL—60细胞诱导分化前后c—myc癌基因的扩增

应用ＰＣＲ方法研究了维甲酸（ＲＡ）和二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）诱导ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ基因扩增的变化。结果：ＨＬ－６０细胞内ｃ－ｍｙｃ基因扩增为１１，经ＲＡ诱导６ｄ后，其扩增程度无明显变化，而ＤＭＳＯ诱导３ｄ后，ｃ－ｍｙｃ基因扩增出现下降，至５ｄ，较未诱导分化前下降约３０％。提示了ＲＡ和ＤＭＳＯ对ＨＬ－６０细胞不同的诱导分化机制。     

应用PCR检测HL－60细胞诱导分化前后c－myc癌基因的扩增

应用ＰＣＲ方法研究了维甲酸（ＲＡ）和二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）诱导ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ基因扩增的变化。结果：ＨＬ－６０细胞内ｃ－ｍｙｃ基因扩增为１１，经ＲＡ诱导６ｄ后，其扩增程度无明显变化，而ＤＭＳＯ诱导３ｄ后，ｃ－ｍｙｃ基因扩增出现下降，至５ｄ，较未诱导分化前下降约３０％。提示了ＲＡ和ＤＭＳＯ对ＨＬ－６０细胞不同的诱导分化机制。     

反义寡核苷酸对HL60细胞c-myc基因表达的抑制和诱导分化作用

目的研究ｃｍｙｃ反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞中ｃｍｙｃ基因的表达及ＨＬ６０细胞分化的影响。方法采用针对原癌基因ｃｍｙｃ的ｍＲＮＡ５’非翻译区的一个１８ｂｐ的反义寡核苷酸５’ｄ（ＣＴＴＣＴＣＧＡＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧ）３’与人早幼粒白血病细胞系ＨＬ６０细胞共培养５ｄ，检测ｃｍｙｃｍＲＮＡ量的变化及其对ＨＬ６０细胞分化的影响。结果用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测出ＨＬ６０细胞ｃｍｙｃｍＲＮＡ的含量减少；细胞形态学变化以及非特异性酯酶（ＮＳＥ）染色、硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验均提示ＨＬ６０细胞出现了分化，部分细胞向粒细胞方向分化，部分细胞向单核细胞方向分化。结论ｃｍｙｃ反义寡核苷酸能够抑制ｃｍｙｃ基因的表达并能诱导ＨＬ６０细胞分化。     

4－甲基组胺对HL＿（60）细胞增殖、分化及c－myc基因表达的影响

用体外液体培养法，观察组胺Ｈ＿２受体激动剂４－ＭＮ对人类早幼粒白血病细胞系ＨＬ＿（６０）细胞的增殖和分化的影响。结果表明，１０￣（－３）～１０￣（－５）ｍｏｌ·Ｌ￣（－１）的４－ＭＨ能抑制ＨＬ＿（６０）细胞增殖，促进其分化。用胞浆ＲＮＡ斑点杂交技术检测到１０￣（－４）ｍｏｌ·Ｌ￣（－４）４－ＭＨ能降低ＨＬ＿（６０）细胞ｃ－ｍｙｃ基因的ｍＲＮＡ表达。     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。     

8—Br—cAMP对人白血病HL—60细胞生长,分化及有关基因表达的影响

观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对ＨＬ－６０细胞生长，分化及其相关基因的调节。方法组化化学、原位杂交和完整细胞ＲＮＡ斑点印迹结果８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ作用２４ｈ，ＨＬ－６０细胞ｃ－ｆｏｓ癌基因和ｐ＾２１ｗａｆｌ抑癌基因表达明显升高，ｃ－ｍｙｃ癌基因表达明显降低；８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ作用４８ｈ，ＨＬ－６０细胞生长、增殖明显受抑制，并向中性粒细胞方向分化。结论８－Ｂ可调整ＨＬ－６０细胞生长，分化及相关癌基因和抑癌基因     

C-myc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＤＮＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％（Ｐ＜０．０５）,２１．６％和１４．７％（Ｐ＜０．０１）,３６．３％和２７．２％（Ｐ＜０．０１）;对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达抑制率分别为７１．３％（Ｐ＜０．０５）,８０．７％（Ｐ＜０．０５）,９２．５％（Ｐ＜０．０１）;５０μｇ／ｍｌ反义核酸对Ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达抑制率是７９．７％,１０、２０μｇ／ｍｌ组无抑制作用。Ｃ－ｍｙｃ反义核酸能显著抑制内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖,其作用系依赖反义核酸的序列特异性和剂量依赖。     

鬼臼叉甙诱导HL—60细胞分化时c—myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关     

重组人肿瘤坏死因子诱导HL－60白血病细胞分化及调控原癌基因表达的作用

重组人肿瘤坏死因子诱导ＨＬ－６０白血病细胞分化及调控原癌基因表达的作用｜｜［袁跃传，沈素芸．中华医学杂志，１９９４；７４（１１）：６６６～６６９］作者采用２０～２００Ｕ／ｍｌ的重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α）处理体外液相培养的人早幼粒白血病细胞株...     

反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制

研究两个反义核酸（１８ｍｅｒ，２１ｍｅｒ）对人白血病ＨＬ－６０细胞中ｃ－ｍｙｃ基因表达的抑制作用。用ＨＬ－６０活细胞计数，ＲＮＡ含量的ＲＴ－ＰＣＲ测定和ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的免疫组化染色检查，结果：两个反义核苷酸都以抑制ＨＬ－６０细胞的增殖，增殖抑制率为１１－７５％。反义核酸还抑制ｃ－ｍｙｃＲＮＡ和Ｍｙｃ蛋白的表达，而对ｃ－ｍｙｃ基因正常表达的红白血病细胞Ｋ５６２的增殖和ＰＨＡ刺激的人淋巴细胞的增殖     

Cmyc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制 …

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＮＤＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％     

蛋白激酶C在维甲酸诱导人早幼粒白血病细胞成熟分化中的作用

为探究维甲酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）诱导人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０分化的作用机理，作者以鱼精蛋白为底物，用［γ－￣（３２）Ｐ］ＡＴＰ同位素标记，动态检测诱导前后蛋白激酶Ｃ（ＰｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）的活性变化，并观察ＰＫＣ亚细胞分布。结果发现，ＲＡ诱导后细胞质ＰＫＣ活性显著升高，以ＰＫＣ抑制剂（Ｈ－７）处理后再进行诱导，ＨＬ－６０细胞分化受阻。表明细胞质ＰＫＣ活性增高在ＲＡ诱导ＨＬ－６０细胞分化中起重要作用；但未见ＰＫＣ向细胞膜转移，提示ＲＡ诱导ＨＬ－６０细胞分化可能还通过其它途径进行。     

C—myc癌基因在正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株上的表达

目的 探讨癌基因Ｃ－ｍｙｃ在正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株上的表达情况。方法 分离正常人外周血淋巴细胞，采用异流握酸胍一步法提取正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株ＲＮＡ，利用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。比较正常人与肿瘤细胞株Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达程度。结果 ＨＬ－６０细胞系Ｃ－ｍｙｃＲＮＡ表达最强，ＧＢＣ胃癌细胞株较正常人为高。结论 Ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达程度。结果 ＨＬ－６０细胞系     

重组人肿瘤坏死因子突变体的构建和表达

运用ＰＣＲ技术，对天然人肿瘤坏死因子α（ｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ一α，ＴＮＦ）基因进行了改造，去除了天然ＴＮＦＮ端的７个氨基酸，同时以Ａｒｙ￣８Ｌｙｓ￣９Ａｒｇ１０Ｐｈｅ１５７分别取代了原来的ＰｒｏＳｅｒＡｓｐＬｅｕ，形成新的突变体ＴＮＦ△。将突变体克隆于表达载体ｐＢＶ２２０后，在Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α中得到了表达，表达产物的分子量为１７ＫＤ。表达量为菌体总蛋白量的１５％。Ｌ９２９细胞的杀伤活性为２．２×１０６Ｕ／ｍｌ，是天然ＴＮＦ活性的七倍。本工作对研制高效低毒副作用的ＴＮＦ制剂具有重要意义。     

r—干扰素对过度增生的血管平滑肌细胞癌基因表达的抑制作用

本实验建立了兔腹主动脉球囊扩张（ＢＡ）动物模型。以地高辛标记的ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ癌基因探针进行ＢＡ术后血管段组织的原位杂交，以生物素标记的ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ探针以经ＢＡ组织培养液刺激的、培养的血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）进行细胞的原位杂交。结果显示：（１）ＢＡ术后再狭窄的血管段中ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ－Ｎ－ｒａｓ三种癌基因表达均增高，而且表达颗粒主要分布于粥样斑块再狭窄     

TNF与卡铂联合应用对A549肺癌细胞系细胞毒作用的研究

采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验及台盼蓝活细胞拒染法观察了肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）与卡铂联合应用对Ａ５４９肺癌细胞的细胞毒作用，实验分为空白对照组，ＴＮＦ组（５００Ｕ／ｍｌ），卡铂组（４０μｇ／ｍｌ）ＴＮＦ（５００Ｕ／ｍｌ）加卡铂（４０μｇ／ｍｌ）组＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验结果表明，联合用药增强了药物对Ａ５４９细胞ＤＮＡ合成的 制作用，抑制率为６９．３％，而ＴＮＦ组与卡铂组的抑制率则分别为２５．１％和５６．