Cytokine associated sensitivity of colon carcinoma cells to FasR-mediated cytotoxicity of CTL

BACKGROUND: Resistance of colon cancer cells to FasR-mediated apoptosis due to loss of Fas receptors and overepression of Fas-associated phosphatase-1 (FAP-1) contributes to their evasion from immune attack by CTLs and NK cells. Therefore, we investigated the effects of recombinant IL-2 on FasR and FAP-1 expression of colon cancer cells, and its influence on the sensitivity of colon cancer cells to FasR-mediated apoptosis. METHODS: Colon cancer cell lines SW480, HT-29 and CaCo2 were incubated with IL-2 for different periods of time. Sensitivity of the cells to FasR-mediated apoptosis was assessed by measuring their apoptosis after treated with agonistic anti-FasR MAb CH-11. Additionally, Fas receptor levels were examined by immunofluorescence and mRNA expression of FasR and FAP-1 was investigated by RT-PCR. RESULTS: IL-2 incubation increased CH11-induced apoptosis in all colon cancer cell lines in a time-dependent manner (P < 0.05). In parallel, IL-2 up-regulated Fas receptor expression on HT-29 and CaCo2 cells at both protein and mRNA levels (P < 0.05), which were low before treatment, while high expression of FasR on SW480 cells remained unchanged. Additionally, IL-2 down-regulated FAP-1 mRNA expression on SW480 and CaCo2 cells, which was high before treatment (P < 0.05). However, low expression of FAP-1 on HT-29 cells remained stable after IL-2 treatment. CONCLUSION: IL-2 enhances susceptibility of colon cancer cells to FasR-mediated apoptosis by up-regulating Fas receptor levels and by down-regulating FAP-1 expression, which accounts for its therapeutic effects on abolishing immune evasion in colon cancer cells.     

Fas/FasL在异源融合瘤诱导结肠癌细胞早期凋亡中的作用

目的 探讨Fas/FasL通路在人异源树突状细胞（dendritic cell,DC）/结肠癌细胞融合瘤诱导结肠癌细胞凋亡中的作用.方法 使用50%聚乙二醇（PEG）将健康人外周血来源DC与结肠癌细胞SW480融合,用其致敏T淋巴细胞,采用流式细胞术检测致敏细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对结肠癌细胞凋亡的影响;使用免疫组化法分别检测SW480细胞Fas分子的表达以及T淋巴细胞活化前后FasL的表达情况.结果 结肠癌SW480细胞的早期凋亡率为46.88%;结肠癌SW480细胞高表达Fas分子用融合瘤致敏T细胞后,其FasL分子的表达明显增加.结论 异源树突状细胞融合瘤可能通过Fas/FasL通路来诱导结肠癌细胞的早期凋亡.     

Hyaluronan mediates adhesion of metastatic colon carcinoma cells

BACKGROUND: Hyaluronan (HA) is a cell-surface glycosaminoglycan that has been implicated in cancer progression. Cells isolated from metastatic colon carcinoma (SW620) produce greater amounts of pericellular HA than cells isolated from a primary tumor (SW480). Inhibition of hyaluronan synthases (HAS) by transfection with antisense cDNA decreases HA production. Because adhesion to the extracellular matrix (ECM) is required for invasion and metastasis, we hypothesized that pericellular HA mediates adhesion to ECM proteins such as laminin, collagen, and fibronectin and that inhibition of HA production or removal of HA by digestion with hyaluronidase would impair adhesion. MATERIALS AND METHODS: SW480, SW620, and antisense transfectants (SW620 cells transfected with vector alone, antisense HAS2, antisense HAS3, and both antisense HAS2 and HAS3) were assessed for adhesion to laminin, Type 1 collagen, or fibronectin-coated plates. To confirm that adhesion was mediated by HA, cells were treated with or without hyaluronidase prior to the assays. RESULTS: Metastatic SW620 cells adhered well to laminin; SW480 cells demonstrated 46% less adhesion (P < 0.05; Student's t test). SW620 cell adhesion to Type 1 collagen and fibronectin was >50% less than adhesion to laminin. Inhibition of HAS2 and/or HAS3 or pretreatment with hyaluronidase significantly decreased adhesion of SW620 cells to laminin (P < 0.05), suggesting that adhesion was dependent upon pericellular HA. CONCLUSIONS: Metastatic SW620 cells that produce large amounts of pericellular HA adhered well to laminin. Inhibition of HAS2 and/or HAS3 expression, or hyaluronidase digestion of pericellular HA significantly inhibited adhesion. These data suggest that HA promotes adhesion to laminin and may thereby facilitate invasion of the basement membrane and metastasis in colon carcinoma.     

原花青素对人结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的:观察葡萄籽提取物原花青素对人结肠癌细胞株SW620细胞增殖和凋亡的影响。方法:SW620细胞与20、40、60、80μg/mL的原花青素共同孵育24h～8d,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况,分光光度法检测Caspase-3酶活性。结果:不同浓度(20～80μg/mL)的原花青素对SW620细胞的生长有明显的抑制作用,呈现出一定的剂量依赖性;含原花青素20、40、80μg/mL的观察组细胞凋亡发生率分别为6.9%、18.6%及22.9%,不含药的对照组细胞凋亡发生率为1.3%。SW620细胞与含药(40μg/mL)或不含药的培养基共同培养48h或72h,对照组细胞几乎无法检出Caspase-3酶活性,而给药组细胞活性显著增加。结论:原花青素在体外可呈浓度依赖性抑制人结肠癌细胞株SW620的增殖并通过Caspase-3通路促进其凋亡。     

萝卜硫素对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响

目的研究萝卜硫素（SFN）对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响。 方法MTT法测定不同浓度SFN对SW480细胞生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外迁移能力的影响,Western blotting法测定1、2、5 μmol/L SFN处理后SW480细胞Notch、Hes1、Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、E-cadherin蛋白表达水平。 结果与对照组比较,1、2、5、10、20、40 μmol/L SFN处理后均能显著抑制SW480细胞增殖（P<0.05）。5 μmol/L SFN作用48 h后对SW480细胞抑制率为（26.38±3.24）%,细胞活力大于70%,为防止SW480细胞活力过低导致侵袭实验和划痕实验出现假阳性结果,因此后续实验选取SFN浓度1、2、5 μmol/L进行。侵袭和迁移实验发现,与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后侵袭能力、迁移能力、Ki-67、PCNA、MMP-9蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,呈浓度依赖性;与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后,Notch、Hes1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。 结论SFN可能通过阻断Notch通路活化,下调Hes1表达水平,达到抑制结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭的目的。     

miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达状况,以及miR-338-5p过表达对结肠癌细胞系HCT116和SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法使用实时定量PCR方法检测miR-338-5p在40例临床诊断为结直肠癌患者配对癌组织及癌旁组织中的表达情况。随后使用miR-338-5p-mimics转染结肠癌细胞系HCT116和SW620,确认过表达成功后,分别使用CCK-8法、FITC-AnnexinV．PI法及Propidiumiodide法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和细胞周期的改变。结果①miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达明显低于其在相应的癌旁组织中的表达（P〈0．01）。②与转染阴性对照比较,转染miR-338．5p．mimics后,HCT116和SW620细胞增殖能力明显减弱（P〈0．01）,凋亡率明显增加[HCT116细胞：（11．43±0．67）％比（7．98±0．36）％,P〈0．01;SW620细胞：（10．5±0．2）％比（7．93±0．5）％,P〈0．01],诱导HCT116和SW620细胞G1期阻滞[HCT116细胞：（80．41±1.34）％比（64．87±1．83）％,P〈0．01;SW620细胞：（68．76±0．41）％比（54．89±0．78）％,P〈0．01]。结论miR-338-5p可能作为抑癌基因在结直肠癌中发挥作用,并对细胞增殖、凋亡和周期有显著影响。     

RNA干扰转录因子激活蛋白4基因表达对结肠癌细胞株SW480的影响

目的观察转录因子激活蛋白4（AP-4）基因对结肠癌细胞株SW480生物学行为的影响。方法设计合成针对AP-4基因外显子7的小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒,用脂质体转染SW480细胞,通过RT-PCR技术、Western印迹、四甲基偶氮唑盐实验（MTT法）、流式细胞仪和Transwell体外侵袭实验等检测该siRNA对SW480细胞基因表达、细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡能力和浸润转移能力等生物学行为的影响。结果AP-4siRNA转染SW480细胞96h后,其AP-4mRNA水平下降了58%,培养液上清AP-4蛋白浓度下降了75%（P〈0.01）。细胞增殖受到明显抑制,抑制率达61%～78%;流式细胞仪检测结果显示,AP-4siRNA组SW480细胞凋亡率为（21.70±2.51）%,显著高于阴性对照组的（2.31±0.14）%（P〈0.01）,G0-G1期细胞比例增加（P〈0.01）,G2-M期细胞减少（P〈0.05）;Transwell体外侵袭实验显示,AP-4siRNA能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力（P〈0.01）。结论应用siRNA技术沉默AP-4基因能有效抑制SW-480细胞AP-4的表达,进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡,为以AP-4为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段。     

树突状细胞融合瘤诱导抗结肠转移癌免疫应答

目的 检测结肠转移癌细胞SW620和树突状细胞（DC）融合构建的肿瘤疫苗对结肠转移癌细胞SW620及其同源结肠癌细胞SW480的杀伤作用。方法 应用促融合剂50％聚乙二醇（PEG）对SW620细胞和从外周血单个核细胞（PBMC）诱生的DC进行融合,用流式细胞仪（FCM）分析其表型并检测融合效率,电镜及免疫细胞化学观察DC、SW620和融合细胞（DC／SW620）形态;^51Cr释放法检测DC／SW620致敏CTL对SW620及SW480细胞的杀伤作用。结果 从PBMC成功诱生出高表达HLA-ABC、HLA-DR、CD80、CD86、CD83的成熟DC,DC／SW620的融合效率达到27．12％。融合细胞兼具DC与肿瘤细胞的结构特点及免疫表型。^51Cr释放法检测DC／SW620激活的CTL对SW620及SW480的杀伤作用强于各对照组（P〈0．01）。结论 DC与SW620细胞融合体外致敏自体T淋巴细胞能生成抗原特异CTL,对结肠转移癌细胞SW620及同源结肠癌细胞SW480有一定的杀伤作用。     

体外转染KISS-1基因对SW480细胞系侵袭和迁移力的影响

目的 探讨人肿瘤转移抑制基因KiSS-1对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响.方法 将携有KISS-1基因的重组真核表达质粒pRc/CMV2-KISS-1转化大肠杆菌DH5et并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pRc/CMV2-KISS-1体外转染SW480细胞(SW480-FH1T),筛选稳定转染的细...     

脆性组氨酸三联体基因对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨脆性组氨酸三联体基因（FHIT）转染对结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 将重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480（实验组）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞作为阴性对照,以正常SW480细胞作为空白对照.应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western blot分析caspase-8酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-8 mRNA水平的改变,肽核酸标记底物的比色法检测caspase-8的相对活性.结果 转染96 h后,实验组和阴性对照组细胞生长抑制率分别为71.7%和16.9%,G0/G1细胞比例分别为（63.3±3.5）%和（50.6±2.1）%,细胞凋亡率分别为（40.5±3.1）%和（18.6±2.6）%,caspase-8 mRNA条带光密度积分值分别为107和41,caspase-8蛋白相对活性分别为0.43和0.25;上述差异均有统计学意义（P＜0.05）.当加入FHIT抑制剂后,caspase-8蛋白相对活性恢复至对照组水平（0.22）.结论 FHIT基因转染能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G0/G1期阻滞,其作用机制可能与caspase-8表达及活性上调有关.     

脆性组氨酸三联体基因转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响

目的 观察脆性组氨酸三联体基因(FHIT)转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响.方法 将重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞(SW480-pRc/CMV2)和正常SW480细胞为对照.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测FHIT基因的mRNA转录水平.以奥沙利铂作用于3组细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞的生长抑制率,用流式细胞仪检测奥沙利铂处理前后各组结肠癌细胞的凋亡率及细胞周期的变化.结果 SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;经奥沙利铂处理后,转染FHIT基因的SW480细胞的凋亡水平与空质粒转染组及结肠癌细胞株组比较明显增高(第2、3、4天A值比较P<0.05),并且FHIT基因与奥沙利铂有轻度的协同促进凋亡作用;同时奥沙利铂处理前后实验组结肠癌细胞的生长周期较对照组均出现了明显的G_0/G_1期阻滞,且细胞的生长抑制率存在浓度和时间依赖性.结论 外源性FHIT基因表达与奥沙利铂协同促进SW480细胞凋亡及细胞周期阻滞,FHIT基因可增加结肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性.     

缺氧诱导因子-1抵抗缺氧诱导的肿瘤细胞凋亡

目的 通过对结肠癌SW480细胞中缺氧诱导因子-1(HIF-1)的有效干扰,观察沉默HIF-1后对肿瘤细胞缺氧环境下凋亡的影响.方法 以三气培养箱诱导缺氧环境,pGenesil-11 质粒为载体转染SW480细胞沉默HIF-1.透射电镜观测肿瘤细胞的形态学变化;荧光染料Hoechst 33258、DNA Ladder检测细胞凋亡.结果 与第3天(0.19±0.02)、第15天(0.20±0.03)比较,第7天(0.16±0.02)时RNA干扰效果最好(P<0.05).RNA阳性干扰组结肠癌SW480细胞:电镜下可见凋亡小体形成等形态学变化;细胞凋亡荧光检测,染色呈强蓝色荧光,并可见核碎裂;DNA Ladder检测出现细胞凋亡时典型的梯状条带.结论 HIF-1具有对抗缺氧诱导的肿瘤细胞凋亡的作用.     

胰岛素样生长因子1对结肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的研究胰岛素样生长因子1(IGF-I)通过磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI-3K/Akt)信号通路对结肠癌细胞株SW480凋亡率的影响及凋亡抑制蛋白survivin表达水平的变化。方法在培养结肠癌SW480细胞株时,采用不同浓度的IGF-I不同时间作用于SW480细胞,然后采用Western blot检测凋亡抑制蛋白survivin表达变化。100 ng/mL IGF-I作用于SW480细胞2 h内,Westernblot检测Akt的磷酸化表达变化;Akt特异性抑制剂LY294002处理前后,利用Western blot检测Akt磷酸化表达的变化,Western blot及细胞免疫荧光检测survivin表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果IGF-I能上调SW480细胞的survivin表达,且其表达水平与IGF-I的作用时间、浓度呈依赖性(IGF-I作用SW480细胞不同时间后,survivin蛋白表达显著升高,并在12 h时达到峰值,所有实验组survivin蛋白的表达均显著高于对照组;IGF-I浓度为100 ng/mL时,survivin蛋白的表达达到顶峰);IGF-I快速激活SW480细胞中PI-3K/Akt信号通路(IGF-I作用SW480细胞15,30 min后,p-Akt蛋白的表达达到高峰);IGF-I能通过PI-3K/Akt信号通路上调SW480细胞survivin的表达;IGF-I能通过PI-3K/Akt信号通路抑制SW480细胞凋亡[利用流式细胞术检测空白组、刺激组、阻断组各组SW480细胞的凋亡率,分别为(5.18±0.415)%,(0.85±0.052)%,(3.15±0.411)%,各组之间差异有统计学意义(P0.05)]。结论IGF-I可通过PI-3K/Akt通路诱导survivin表达,从而抑制结肠癌细胞SW480的凋亡。     

吉非替尼对结肠癌细胞的生长抑制作用与PTEN表达的关系

目的 观察表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人结肠癌细胞的生长抑制作用,探讨这种作用与结肠癌细胞PTEN表达的关系.方法 应用体外药物敏感实验检测吉非替尼对6种人结肠癌细胞系的生长抑制作用;应用RT-PCR检测不同结肠癌细胞中PTEN mRNA水平;应用Western blot 检测结肠癌细胞中PTEN蛋白表达水平.结果 吉非替尼在体外对6种结肠癌细胞系的生长抑制作用差异很大(F=325.51,P＜0.05).吉非替尼作用浓度为1 μmol/L时,Lovo细胞系抑制率达34%,对吉非替尼最为敏感,其半量抑制浓度(IC50)＜10 μmol/L;HT29和SW480为中度敏感(10μmol/L＜IC50＜100 μmol/L);而HCT116、LS174T和SW620不敏感,其IC50＞100 μmol/L.各个细胞系中PTEN mRNA和PTEN蛋白均有表达.结论 吉非替尼对结肠癌细胞的生长抑制作用与PTEN mRNA和PTEN蛋白表达水平无明显相关,即PTEN表达状态还不能作为预测结肠癌对吉非替尼敏感性的可靠生物学指标.     

巨噬细胞抑制SW480结肠癌细胞侵袭和迁移的实验研究

目的探讨巨噬细胞对SW480结肠癌细胞侵袭和迁移的影响及可能机制。方法流式细胞仪检测共培养体系中不同激活状态的巨噬细胞对SW480细胞凋亡和细胞周期的影响,侵袭实验、划痕实验检测巨噬细胞对SW480结肠癌细胞侵袭和迁移的影响,酶联免疫吸附（ELISA）方法检测Transwell共培养体系上清中血管内皮生长因子（VEGF）的变化。结果空白对照组、非激活组、ILl4激活组SW480细胞凋亡及S期细胞百分数差异无统计学意义,IL-4激活的巨噬细胞明显抑制SW480细胞的侵袭和迁移（P〈0．05）。激活组的VEGF浓度显著降低（P〈0．05）。结论IL-4激活的巨噬细胞能够抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和迁移,其机制可能与下调VEGF的分泌有关。     

重组人内皮抑素对结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的 观察重组人内皮抑素对结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响.方法 在培养液中加入梯度浓度的重组人内皮抑素(0.1、0.5、1.0,5.0、10.0、20.0mg/L)分别作用24、48、72 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,扫描及透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果 内皮抑素对SW620细胞的增殖有抑制作用.其中,作用48 h的抑制率分别为13.46%、15.38%、20.82%、24.71%、30.12%和37.44%,呈剂量依赖关系.给药后24 h和48 h,内皮抑素组细胞G0/G1期比例增高,而s期细胞比例降低(P＜0.05).72h两组差异无统计学意义(P＞0.05).24 h和48 h的凋亡率分别为(1.430±0.145)%和(1.760±0.054)%,均高于对照组(0.670±0.181)%和(1.260±0.138)%(P＜0.05).透射电子显微镜下,内皮抑素组细胞微绒毛减少,染色质厚薄不均,位于核膜下.结论 重组内皮抑素可以在体外直接抑制结肠癌细胞的增殖,诱导凋亡,影响细胞骨架等结构.

Abstract：

Objective To investigate the effect of endostatin on the proliferation of colon cancer SW620 cells. Methods The SW620 cells were treated by recombinant human endostatin(0. l ,0. 5,1.0,5.0,10.0,20.0 mg/L). The effect of endostatin on the proliferation, cell cycle, apoptosis and ultrastructure of SW620 cells were examined after 24,48 and 72 h. Results The proliferation of SW620 cells were inhibited by endostatin compared with the control group. The inhibiting rates were 13. 46% ,15. 38% ,20. 82% ,24. 71% ,30. 12% and 37.44% .respectively (P ＜0.05). Endostatin arrested SW620 cells at G0/G1 phase (P ＜ 0. 05); The apoptotic rates were (1.430 ± 0. 145) % and (1. 760 ± 0. 054) % in endostatin group after 24 and 48 h, respectively. This was a significant increase when compared with the control group after 24 and 48 h (0. 670 ±0. 181)% and (1.260 ±0. 138)% (P＜0. 05). Under TEM,both the number of protrusions and microfilaments of SW620 cells in the endostatin group decreased. Conclusion Recombination human endostatin inhibits the proliferation of SW620 cells,induce the apoptosis,and changes the skeleton of SW620 cells directly.     

咖啡酸苯乙酯对大肠癌SW480细胞生长和周期的影响

目的　探讨咖啡酸苯乙酯 (CAPE)对体外培养的大肠癌细胞SW 4 80增殖和细胞周期的影响。方法　不同浓度CAPE处理体外培养的大肠癌SW 4 80细胞后 ,采用MTT法检测细胞的增殖活性 ;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果　CAPE处理SW 4 80细胞后 ,SW 4 80细胞的生长抑制率明显升高 ,抑制作用表现为剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞仪细胞周期分析表明CAPE作用 2 4h后 ,细胞G0 /G1期比例上升 ,S期比例下降。同时发现CAPE作用后 ,细胞出现胞浆混浊 ,胞体缩小、变圆、皱缩 ,核固缩粹裂等凋亡形态学特征。结论　CAPE对大肠癌SW 4 80细胞株具有明显的生长抑制作用 ,其作用机制与阻滞细胞周期G1期和诱导细胞凋亡有关。     

复方苦参含药血清体外诱导人结肠癌细胞SW480的凋亡

目的:进一步探讨复方苦参含药血清对人结肠癌细胞SW480的凋亡诱导作用.方法:采用血清药理学方法研究复方苦参对结肠癌细胞SW480的体外效应.观察含药血清对SW480细胞克隆形成率的影响,应用荧光染色,流式细胞仪及透射电镜观察含药血清对SW480的凋亡诱导作用.结果:含药血清对SW480细胞克隆形成率有一定抑制作用.含药血清作用细胞48 h后,可观察到胞核固缩、荧光染色增强、胞核碎裂等凋亡形态学变化,流式细胞仪检测到亚G1峰.结论:复方苦参含药血清体外抑制SW480细胞的增殖并能诱导其凋亡,诱导凋亡是其抗肿瘤的机制之一.     

去泛素化酶 USP9X在 etoposide 促结肠癌细胞 SW620 凋亡中的作用研究

目的：探讨USP9X在etoposide促结肠癌细胞SW620凋亡中的作用和可能的机制。方法：设计并合成USP9X的shRNA和对照shcontrol,采用半定量RT-PCR和Western blot检测干扰效率。结肠癌细胞SW620分别转染USP9X-shRNA和shcontrol后用etoposide处理,检测MCL1的蛋白水平变化并通过c-PARP的水平检测细胞的凋亡水平。结果：半定量RT-PCR和Western blot检测显示在SW620细胞中USP9X-shRNA能够显著例氏USP9X的mRNA和蛋白的表达,抑制率达70％,该条shRNA可以作为有效干扰序列进行后续实验。20μg／mL etoposide处理24h后,经c-PARP的水平检测发现感染USP9X-shRNA的SW620细胞比对照组细胞的凋亡率显著增加。结论：以RNA干扰技术沉默USP9X基因可增加结肠癌细胞SW620对etoposide的敏感性,显著增加etoposide诱导的结肠癌SW620细胞的凋亡,推测USP9X基因可能成为结肠癌基因治疗的一个新靶点。     

XIAP和Smac/DIABLO在乳腺癌发生、发展中的表达及意义

目的：探讨XIAP、Smac/DIABLO基因的表达及二者的相对关系在乳腺癌发生和发展中的作用。方法：采用实时定量PCR方法检测正常乳腺组织（6例）、乳腺增生组织（16例）、乳腺癌组织（62例）中XIAP mRNA和Smac/DIABLO mRNA的表达,并分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。结果：在所有标本中均检测到了XIAP和Smac/DIABLO的表达,乳腺癌组织中的XIAP mRNA水平和XIAP/Smac比值明显高于正常乳腺组织和乳腺增生组织（P〈0.05）;从原位癌到浸润性乳腺癌,XIAP mRNA水平和XIAP/Smac比值无明显提高（P〉0.05）;Smac/DIABLO mRNA水平在正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中基本保持恒定。发生淋巴结转移的乳腺癌组织中的XIAP/Smac比值明显高于无淋巴结转移的乳腺癌组织（P〈0.05）。结论：XIAP和Smac/DIABLO间的平衡在乳腺癌发生、发展过程中被逐渐打破,XIAP的相对高表达诱导凋亡抵抗,对乳腺癌的发生、发展起促进作用。