斑蝥素抑制NIH/3T3细胞增殖对防治器官组织纤维化的作用

目的 观察斑蝥素对 NIH/3T3细胞的抑制作用,为治疗纤维化有关疾病提供实验依据. 方法 体外培养 NIH/3T3细胞株,加入 1.000 0, 0.500 0, 0.250 0, 0.125 0, 0.062 5, 0.031 3 mg/L浓度的斑蝥素, 24 h后观察细胞形态学,以乳酸脱氢酶为指标观察细胞毒性,用 MTT法检测其增殖活性. 结果 不同浓度的斑蝥素均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在 1 mg/L以下无明显的细胞毒作用. 结论 斑蝥素对 NIH/3T3细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,具有防治纤维化有关疾病的应用前景.     

华蟾素抑制NIH／3T3细胞增殖对防治器官组织纤维化的作用

目的：观察华蟾素对NIH／3T3细胞的抑制作用，为治疗纤维化有关疾病提供实验依据。方法：体外培养NIH／3T3细胞株，加入不同浓度的华蟾素，24h后观察细胞形态学，以碱性磷酸酶为指标观察细胞毒性，用四甲基偶氮唑盐法检测其增殖活性。结果：不同浓度的华蟾素均能改变成纤维细胞形态，抑制细胞增殖，浓度在10mg／L以下无明显的细胞毒作用。结论：华蟾素对NIH／3T3细胞具有抑制作用，并呈剂量依赖关系，具有防治纤维化有关疾病的应用前景。     

华蟾素抑制NIH/3T3细胞增殖对防治器官组织纤维化的作用

目的观察华蟾素对NIH/3T3细胞的抑制作用,为治疗纤维化有关疾病提供实验依据.方法体外培养NIH/3T3细胞株,加入不同浓度的华蟾素,24 h后观察细胞形态学,以碱性磷酸酶为指标观察细胞毒性,用四甲基偶氮唑盐法检测其增殖活性.结果不同浓度的华蟾素均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在10 mg/L以下无明显的细胞毒作用.结论华蟾素对NIH/3T3细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,具有防治纤维化有关疾病的应用前景.     

OGP对NIH3T3细胞作用机理的研究

目的：研究成骨生长肽(OGP)对NIH3T3细胞的作用机理。方法：细胞计数法测定不同浓度的OGP14肽及5肽对NIH3T3细胞的促增殖作用，以流式细胞仪测定细胞膜上OGP的表达。观察0GP抗体对OGP促增殖作用的影响。结果：OGP14肽及5肽在10^-11mol／L时对NIH3T3细胞有促增殖作用，同时细胞膜上OGP表达增加；OGP抗体可抑制OGP的促增殖作用，同时使细胞膜上OGP表达下降。结论：OGP14肽及5肽可以通过对OGP的正反馈来调节NIH3T3细胞的增殖。     

乙醇对NIH3T3成纤维细胞成脂分化的诱导作用

背景：动物实验证明乙醇可引起股骨头内脂肪积聚，导致骨坏死，其作用机制不详。NIH3T3成纤维细胞是一种多潜能干细胞，尚未见关于乙醇对NIH3T3成纤维细胞作用的有关报道。 目的：观察乙醇对NIH3T3成纤维细胞分化为脂肪细胞的作用，及其对成脂转录因子过氧化物酶体增殖子活化受体-1表达的影响。 设计：单一样本观察。 单位：郑州大学基础医学院生物化学教研室和郑州大学第一附属医院骨科。材料：NIH-3T3成纤维细胞由美国弗吉尼亚大学医院骨科实验室提供。 方法：实验于2002-04／2003-06在郑州大学基础医学院生物化学教研室实验室完成。取NIH-3T3成纤维细胞随机分为6组，每天分别加入体积分数为0．998乙醇，剂量为0（对照组），0．03，0．06，0．09，0．15，0.21moL／L，培养至14d，苏丹Ⅳ染色，采用电子计算机图像分析软件Image Pro Plus 4．1，确定脂肪细胞百分比。采用反转录聚合酶链反应技术，检测细胞过氧化物酶体增殖子活化受体-γmRNA的表达。 主要观察指标：①NIH3T3细胞分化为脂肪细胞结果。②乙醇组和对照组细胞基因表达结果。 结果：以递增浓度（0．03，0．06，0．09，n15，0．21mol／L）乙醇处理细胞14d。①各乙醇组中脂肪细胞百分比分别为11．9％，23．8％，28.2％，31．1％，42．6％，分别是对照组（9．6％）的1．2，2．5，2．9，3．2，4．4倍。0．03mol／L乙醇组与对照组的差别无统计学意义（P〉0．05），其余4组与对照组及0．03mol／L乙醇组的差别有高度显著性（P〈0．001）。②各乙醇组细胞中过氧化物酶体增殖子活化受体-γmRNA表达值与18S基因表达值的比值分别为0．218，0．411，0A86，0．473，0．453，分别是对照组（0．197）的1．1，2．1，2．5，2．4，2.3倍。0．03mol／L乙醇组与对照组的差别无统计学意义（P〉0．05）。其余4组与对照组及0．03mol／L乙醇组的差别有高度显著性（P〈0m1）。 结论：乙醇能够直接诱导NIH3T3成纤维细胞大量分化为脂肪细胞，这可能是乙醇性骨坏死时骨髓内脂肪增多的原因之一。     

强力霉素调控小NEIA激活基因阻遏子表达NIH3T3细胞系的建立

背景：前期研究发现，E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管平滑肌细胞的增殖及表型转化，但其表达调控细胞增殖、分化、凋亡的量效关系有待深入探讨。目的：建立强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达的NIH3T3细胞系，拟为定量观察E1A激活基因阻遏子的生物学功能提供研究基础。设计、时间及地点：对比观察实验，于2006—05／2008—03在沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成。材料：强力霉素调控基因表达系统，3T3细胞系。方法：通过反转录一聚合酶链反应方法获得小鼠E1A激活基因阻遏子（mCREG）cDNA序列；将mCREGcDNA序列亚克隆入pRey—TRE载体中，构建强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达pRev—TRE—mCREG载体；分别经G418（新霉素）及潮霉素筛选表达pRev-Tet—On、pRev—TRE—mCREG的NIH3T3细胞克隆；反转录聚合酶链反应鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达。主要观察指标：Western blotting检测不同浓度的强力霉素诱导后NIH3T3细胞中mCREG的表达。结果：成功构建了强力霉素可调控表达的pRev—TRE—mCREG重组载体；筛选出稳定表达双抗性基因的NIH3T3，mCREG细胞克隆；反转录-聚合酶链反应检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性；Western blotting检测发现随强力霉素诱导剂量的增加（O，O．01，0．1，1mg／L），NIH3T3．mCREG细胞中mCREG表达呈剂量依赖性增加。结论：成功建立强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达的小鼠NIH3T3细胞系。     

血管内皮细胞生长因子基因体外转染小鼠NIH3T3细胞的生物活性

目的：用基因工程方法改造成纤维细胞，使其分泌血管内皮细胞生长因子，观察成纤维细胞作为基因转染的靶细胞的可行性。 方法：实验于2005-11在解放军第四军医大学西京医院全军整形外科研究所完成。PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒的扩增、提取、纯化和鉴定后，将培养14d细胞融合约80％的小鼠NIH3T3细胞在24孔板中进行转染，细胞随机分为3组，每组10孔，分别为PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染组．空质粒转染组和不转染质粒组。采用免疫组织化学化学检测血管内皮细胞生长因子表达。ELISA方法检测血管内皮细胞生长因子外分泌。四甲基偶氮唑盐法检测小鼠NIH3T3细胞对PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染的敏感性。 结果：①PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒的基因测序结果显示序列正确。②免疫组织化学染色显示：小鼠NIH3T3细胞转染4d后胞浆内可观察到阳性表达产物，对照组呈阴性结果。③ELISA检测结果：小鼠NIH3T3细胞转染14d后，PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染组、空质粒转染组和不转染质粒组3组培养上清中血管内皮细胞生长因子浓度分别346&;#177;23，0，0ng／L（P〈0．05）。④四甲基偶氮唑盐法检测结果：PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染组、空质粒转染组和不转染质粒组所测的490nm的A值比较差异均无显著性（依次为0．96&;#177;0.11，0．91&;#177;0．10，0．98&;#177;0．16，P〉0．05）。PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染对小鼠NIH3T3细胞增殖无影响。 结论：小鼠NIH3T3细胞可作为血管内皮细胞生长因子基因转染的靶细胞，用于基因治疗。     

具G418抗性NIH3T3细胞饲养层的制备

背景：建立具有抗药（新霉素或潮霉素）性的饲养层细胞是转染外源目的基因胚胎干细胞阳性克隆的筛选必备条件。建成的具有抗药性的NIH3T3细胞系可用于胚胎干细胞其他目的基因的筛选。 目的：建立具有G418抗性的NIH3T3细胞系，用于转染pTet—on基因的胚胎干细胞阳性细胞克隆筛选的饲养层。 设计：细胞培养观察及DNA检测。 单位：中国医科大学实验动物部。 材料：NIH3T3细胞由中国医科大学细胞生物教研室惠赠，pWL／neo质粒为美国哈佛大学医学院金壮教授惠赠。G418、白血病抑制因子（胚胎干细胞GRO 106U／mL）、DMEM为GIBCOBRL产品，丝裂霉素-C、DIG标记及检测试剂盒为Roche产品，脂质体为Invitrogen产品，均购自沈阳联星生物技术有限公司。 方法：①通过脂质体转染的方法，将含有neo基因的质粒pWL／neo导入NIH3T3细胞中。②将细胞传至25mL培养瓶中，加入梯度浓度的G418继续培养，通过观察细胞生长及死亡情况测定G418对NIH3T3细胞最小致死量。③将转染的细胞进行传代，挑取单个细胞的克隆至24孔培养板继续进行筛选扩增，选用正常的NIH3T3细胞加入相同剂量的G418的选择性培养基作为筛选的阴性对照。④采用较低的细胞密度铺板，加入含最小致死量G418的DMEM培养基进行再次筛选；同时选用正常的NIH3T3细胞为对照，使用含有最小致死量G418及未加G418的DMEM培养基进行培养，采用光学显微镜对G418抗性NIH3T3细胞进行观察。⑤选用具有G418抗性的NIH3T3细胞和小鼠胚胎成纤维细胞分别作为饲养层细胞进行传代，采用光学显微镜对培养后胚胎干细胞-D3细胞进行观察，并制备细胞DNA，对其进行PCR和southern blot鉴定。 主要观察指标：①G418对NIH3T3细胞最小致死量的测定结果。②G418抗性NIH3T3细胞的筛选结果。③G418抗性NIH3T3细胞的生长观察结果。④胚胎干细胞-D3细胞生长观察结果及G418抗性NIH3T3细胞的鉴定。 结果：①G418对NIH3T3细胞最小致死量为500mg／L。②经过500mg/L G418压力筛选后，获得了抗G418细胞克隆。③抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异。④饲养层培养的胚胎干细胞呈集落形状生长，边缘光滑，保持未分化的状态。用特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA，可以扩增出对应的核苷酸片段，Southern blot鉴定结果表明neo基因片段已整合入G418抗性NIH3T3细胞中。 结论：成功地培育了G418抗性NIH3T3细胞，生长在G418抗性NIH3T3细胞饲养层上胚胎干细胞细胞基本保持正常胚胎干细胞细胞特征：     

蜂胶水提液影响血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖的作用

目的：观察蜂胶水提液对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖作用的影响。方法：实验于2005-03／2006-04在泰山医学院基础医学研究所完成。组织块法培养人脐动脉平滑肌细胞。取3～5代细胞进行实验。将培养的人脐动脉平滑肌细胞随机分为4组：①对照组：不加任何药物。②模型组：加入100nmol／L的血管紧张素Ⅱ。③蜂胶组：分别加入50mg／L、100mg／L、200mg,／L的蜂胶水提液预处理2h后，再加入终浓度为100nmol／L的血管紧张素Ⅱ。④氯沙坦组：加入1．5μmol／L的氯沙坦预处理2h后，再加入终浓度为100nmol／L的血管紧张素Ⅱ。同步化后，按分组分别加入处理药物孵育24h，倒置显微镜下动态观察细胞形态学的变化，同时计数细胞存活率，并用血细胞计数板计数各组细胞。采用流式细胞仪检测细胞周期，并分析细胞不同周期所占比例。采用免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原。计算增殖细胞核抗原阳性细胞百分率。增殖细胞核抗原阳性细胞百分率（％）=增殖细胞核抗原阳性细胞总数／血管平滑肌细胞总数&;#215;100％。结果：①相差倒置显微镜下观察各组细胞加药前后形态学无明显变化，细胞存活率均达95．0％以上。②模型组细胞计数高于对照组和氯沙坦组（P〈0．01），100mg／L和200mg／L蜂胶组低于模型组（P〈0．01）；50mg／L和100mg／L蜂胶组高于氯沙坦组（P〈0．01），200mg／L蜂胶组与氯沙坦组差异无显著性（P〉0．05）。③模型组G0／G1期细胞百分比低于对照组、氯沙坦组（P〈0．01）；100mg／L和200mg／L蜂胶组高于模型组（P〈0.01）150mg／L蜂胶组低于氯沙坦组（P〈0.05），100mg／L、200mg／L蜂胶组与氯沙坦组差异显著性（P〉0．05）。④模型组增殖细胞核抗原阳性率高于对照组、氯沙坦组（P〈0．01）；100mg／L和200mg／L蜂胶组低于模型组（P〈0．01），蜂胶各浓度组与氯沙坦组间差异无显著性意义。结论：血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的增殖，氯沙坦能阻滞该作用；一定浓度的蜂胶水提液可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞的增殖，其机制可能与限制细胞由G1期向S期转变及增殖细胞核抗原的表达有关。     

姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的：脂肪细胞分化障碍是肥胖引发胰岛素抵抗的途径之一，观察中药姜黄提取物姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响，在细胞水平分析姜黄素防治糖尿病可能的机制。方法：实验于2005—12／2006—03在哈尔滨医科大学营养与食品卫生学教研室完成。以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞，在常规培养时，分别加入0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，80和100μmol／L浓度的姜黄素（购自美国Signm公司），每个剂量设12个平行孔，培养3d，在此期间，分别在24，48，72h时，于姜黄素各剂量组中分别选取4个平行孔，以MTF法测定其增殖情况。在诱导分化时，设一组空白对照，实验组与诱导液同步加入0，2．5，5，10，15和20μmol／L的姜黄素，于诱导分化的第6天，采用油红0染色方法测定3T3-L1前脂肪细胞分化程度。结果：①姜黄素作用3T3-L1前脂肪细胞48h，5，10μmol／L剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加（0．67&;#177;0．01，0．69&;#177;0．02，0．57&;#177;0．01，P〈0．01），15μmol／L剂量组细胞吸光度值与空白对照相比差异无显著性意义（0.54&;#177;0．01，P〉0．05），其余剂量组（20，25，30，35，40，50，80和100μmol／L）细胞吸光度值显著降低（0.53&;#177;0．01，0．47&;#177;0.01，0．42&;#177;0.03，0.45&;#177;0.03，0.18&;#177;0.01，0.2&;#177;0.01，0.16&;#177;0.04，0.44&;#177;0．05，P〈0．01）。②姜黄素作用细胞48h时，促进或抑制细胞增殖的作用最强，40μmol／L以上浓度的姜黄素出现细胞毒性作用，大部分细胞成片脱落死亡。72h时，15-35μmol／L姜黄素组细胞的生长率有所增加，而40μmol／L以下姜黄素处理组细胞生长率仍维持在较低水平。⑧脂肪细胞油红0染色分光光度法结果显示2．5。5，10，15和20μmol／L姜黄素剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加（0．38&;#177;0.05，0．49&;#177;0.04，0．56&;#177;0.06，0．75&;#177;0.06，0．77&;#177;0.1，0．83&;#177;0.06。0．38&;#177;0．05。P〈0．05-0．01）。结论：不同浓度姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞具有促进增殖和抑制增殖双重作用，低浓度姜黄素促进细胞增殖，高浓度姜黄素抑制细胞增殖。姜黄素通过促进3T3-L1前脂肪细胞的分化，从而增加脂肪细胞对胰岛素的敏感性，这可能是其防治糖尿病的机制之一。     

姜黄属中药活性成分对人内皮细胞增殖的抑制作用

目的：分析、比较姜黄、郁金和莪术等3种姜黄属中药中多种活性成分对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell．HUVEC)生长、增殖的抑制作用，以期筛选出活性最强的抗血管生成成分。方法：①采用噻唑兰(3-(4，5-dimethylthiazol-2-y1)-2，5-diphenyl tetrazolium bromide，M1TT)还原实验比较3种姜黄属中药多种活性成分对人脐静脉内皮细胞生长、增殖的抑制作用。②采用流式细胞术(flow cytometry，FCM)实验探讨活性成分对内皮细胞及小细胞肺癌细胞株SPC细胞增殖周期影响的差异性。结果：①3种姜黄属中药挥发油均可抑制人脐静脉内皮细胞的增殖；姜黄挥发油的生物学活性明显高于郁金和莪术，差异有显著性意义(r=6，P=0．014)。②3种醇提物中仅姜黄醇提物对内皮细胞的生长有显著抑制作用。③3种姜黄素单体抑制内皮细胞增殖的生物活性具有显著差异：姜黄素-3&;gt;姜黄素-2&;gt;姜黄素-1，差异有显著性意义(x^2=5～7，P=0．008～0．025)。④浓度为4mg／L时姜黄素-3可将内皮细胞阻滞于S期；姜黄素-3的浓度增至8mg／L以上时不但引起S期细胞积聚更加显著，而且出现明显的诱导凋亡作用。但浓度为10mg／L的姜黄素-3对人小细胞肺癌细胞系SPC的增殖周期仍无明显影响。结论：姜黄色素和姜黄挥发油可能是姜黄属中药抗血管生成作用的主要活性成分；姜黄素-3对内皮细胞增殖周期的抑制作用具有细胞种类特异性。     

人脐静脉内皮细胞中单核细胞趋化因子1表达与糖化白蛋白的影响

背景：研究表明，糖化白蛋白在内皮细胞凋亡过程中发挥重要作用，并通过增加丝裂原活化蛋白激酶、酪氨酸激酶活性和产生活性氧产物介导单核细胞趋化因子1。 目的：观察糖化白蛋白对培养的人脐静脉内皮细胞的单核细胞趋化因子1表达的影响。 设计、时间及地点：单一样本观察，于2006—05／11在东南大学心血管实验室完成。 材料：脐静脉内皮建株人脐静脉内皮细胞ECV304，引自中国科学院上海细胞生物研究所。 方法：实验分两部分，第一部分以糖化白蛋白（浓度为400mg／L）对人脐静脉内皮细胞分别干预0，8，16，24，48，72h；第二部分以不同浓度（100，200，400，800mg／L）的糖化白蛋白对人脐静脉内皮细胞干预24h。两部分实验均用无血清培养基RPMI 1640和不含牛血清白蛋白葡萄糖干预（浓度为400mg／L）的无血清培养基作为对照。 主要观察指标：四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测人脐静脉内皮细胞增殖，酶联免疫吸附法检测人脐静脉内皮细胞上清液单核细胞趋化因子1含量。 结果：①不同时间点糖化白蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用依次为48h〉24h〉16h（相临时间点比较，P均〈0．05）；干预8h对细胞的抑制无明显作用，72h抑制作用弱于48h。②与RPMI1640组和牛血清白蛋白组相比，糖化白蛋白400mg／L及800mg／L对细胞的抑制作用明显增强（P〈0．05），并随着糖化白蛋白浓度的增高而增强。③用浓度为400mg／L的糖化白蛋白干预6h及12h，人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化因子l表达持续升高（P〈0．05）；随着糖化白蛋白浓度加大，细胞的单核细胞趋化因子1表达进一步增高，800mg／L时达到最高峰。 结论：①糖化白蛋白以浓度、时间依赖方式抑制人脐静脉内皮细胞增殖，并在一定时间范围内呈时间依赖性地增加人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化因子1表达。     

碱性成纤维细胞生长因子影响成骨细胞黏附与增殖的实验

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞黏附性与成骨细胞DNA合成的影响。方法：实验于2004-08／12在广州军区广州总医院中心实验室完成。取2只健康新西兰大白兔骨髓基质细胞来源的成骨细胞体外培养。①光镜下观察成骨细胞形态。②进行不同浓度碱性成纤维细胞生长因子（0．1，1，10，100mg／L）诱导成骨细胞，设空白对照，于1，2，4，8h共4个时间点采用体视学计量黏附细胞数量。③流式细胞仪进行细胞DNA含量分析。结果：①成骨细胞特性观察：光镜下成骨细胞呈多角形或梭形表达出高碱性磷酸酶活性。②碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞黏附性的影响：碱性成纤维细胞生长因子浓度为1．0-10mg／L时细胞黏附数呈剂量依赖性，达到100mg／L时，细胞黏附数反而下降，时间到8h后，与对照组间无明显差异。③碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞DNA合成的影响：增殖指数显示碱性成纤维细胞生长因子浓度为1.0～10mg／L时呈剂量依赖性，到100mg／L时，指数略有下降，但仍显著高于对照组。结论：①碱性成纤维细胞生长因子浓度在1.0-10mg／L时可提高成骨细胞的黏附性。②碱性成纤维细胞生长因子浓度在1.0～10mg／L时可促进成骨细胞DNA合成，到100mg／L作用减弱。③碱性成纤维细胞生长因子可调节成骨细胞的黏附与增殖。     

米非司酮增加宫颈癌Caski细胞对顺铂敏感性的研究

目的：探讨米非司酮作用于人宫颈鳞癌Caski细胞后对顺铂敏感性的影响和机制。为临床应用米非司酮治疗宫颈鳞癌提供实验依据。方法：体外培养人宫颈鳞癌Caski细胞，分别或联合应用不同浓度的米非司酮、顺铂处理Caski细胞，采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定米非司酮对Caski细胞增殖活性的作用及其对顺铂敏感性的影响；流式细胞术观察各组细胞凋亡率，并分析细胞周期的变化；异硫氰酸荧光素（FITC）荧光标记流式细胞术（FCM）法测定米非司酮对Caski细胞HPV—E6，p53，Bcl-2，Bax蛋白的表达变化。结果：四甲基偶氮唑蓝比色法结果显示，1．25、2．5mg／L的米非司酮对Caski细胞无显著的抑制作用，其与顺铂合用时能增强顺铂对Caski细胞增殖抑制作用。流式细胞术结果显示，米非司酮（1．25mg／L）对Caski细胞无明显的诱导凋亡作用，但能促进顺铂（1．0、2．0、4．0mg／L）诱导其凋亡。FITC荧光标记FCM法结果显示，米非司酮作用于Caski细胞后，HPV—E6、Bcl-2蛋白表达下调，p53、Bax蛋白表达上调，呈浓度依赖方式。结论：米非司酮能增强顺铂对Caski细胞的增殖抑制和诱导凋亡并对Caski细胞有增殖抑制和化疗增敏作用，与下调HPV16-E6、Bcl-2蛋白表达，上调p53、Bax蛋白表达有关。     

硫酸软骨素对HL60细胞增殖分化的影响

背景：硫酸软骨素是细胞基质的重要成分，可促进肿瘤细胞的增殖，抑制其转移。 目的：观察硫酸软骨素对阿霉素作用下HL60细胞增殖分化的影响。 设计：开放性实验。 单位：青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室。 材料：实验于2003—09／2004—12在青岛大学医学院生物化学与分子生物学研究室完成。HL60细胞株购于中国医学科学院上海细胞库，为人类早幼粒白血病细胞。牛软骨硫酸软骨素（Sigma）。 方法：①细胞传代培养后将进入对数增殖期的细胞用含体积分数0．1灭活胎牛血清的RPMI1640培养液配制成1&;#215;10^8L^-1的细胞悬液，分装于45个培养瓶中，4mL／瓶。②取分装好的细胞悬液15瓶，按照0，5，25，50，75肿g／L浓度加入硫酸软骨素，每个浓度平行3瓶，空白对照组加入等量的0．01mol／L磷酸盐缓冲液。采取细胞计数法测定硫酸软骨素处理后的HL60细胞密度的变化。③取分装好的细胞悬液30瓶，分为硫酸软骨素＋阿霉素组、硫酸软骨素组，各15瓶。按照0，5，25，50，75mg／L浓度向两组加入硫酸软骨素，每个浓度平行3瓶，空白对照组加入等量的0．01mmol／L磷酸盐缓冲液。用MTT法测定硫酸软骨素处理后的HL60细胞加入阿霉素后细胞存活率的变化。④取分装好的细胞悬液15瓶，按照0，5，25，50，75mg／L浓度加入硫酸软骨素，每个浓度平行3瓶，空白对照组加入等量的0.01mol／L磷酸盐缓冲液。用酶联免疫反应测定各组细胞的酸性磷酸酶活性，观察其对细胞分化的影响。 主要观察指标：①硫酸软骨素对HL60细胞增殖的影响。②硫酸软骨素＋阿霉素对HL60细胞存活率的影响。③硫酸软骨素对HL60细胞酸性磷酸酶活性的影响。 结果：共制备细胞悬液45瓶，全部进入结果分析。①与空白对照组比较，不同浓度硫酸软骨素处理24h后HL60细胞密度均显著升高（P〈0．01）；且50，75mg／L硫酸软骨素浓度组的细胞密度升高尤为明显，但两组间比较基本相似（P〉0．05），说明在这个浓度范围内硫酸软骨素对细胞生长的促进作用变化不大。②与空白对照组比较，加入不同浓度硫酸软骨素后，硫酸软骨素＋阿霉素组细胞存活率均有不同程度的降低，硫酸软骨素浓度超过25mg／L时降低明显（P〈0．01）。③与空白对照组比较，5，25，50mg／L硫酸软骨素浓度组HL60细胞酸性磷酸酶吸光度值均明显升高（1．268&;#177;0．038，1．305&;#177;0．101，1．321&;#177;0.021．1．354&;#177;0．013，P〈0．01或0.05），尤其是75mg／L硫酸软骨素浓度组HL60细胞酸性磷酸酶吸光度值高达1．406&;#177;0．113，与空白对照组比较差异有极显著意义（P〈0．001）。 结论：硫酸软骨素在适当浓度时对HL60细胞的增殖产生促进作用，可提高HUD细胞对阿霉素的敏感性，促进细胞分化。     

重组人表皮生长因子对体外培养人角质细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度条件下表皮生长因子对角质形成细胞增殖的影响，分析表皮生长因子对角质形成细胞增殖过程中有无异常影响。方法：实验于2003-09／2005-01在新疆维吾尔自治区包虫病研究所细胞室完成。实验所用细胞从手术中切取的皮片（中厚皮片）获得。采取体外角质形成细胞的原代培养技术，用浓度分别为0．001，0．01，0．1，1，10，100，500μg／L浓度的表皮生长因子干预体外培养的细胞。采用噻唑蓝法检测细胞活性。选择最适浓度表皮生长因子干预的角质形成细胞，用流式细胞仪检测细胞的DNA倍体情况。结果：①角质形成细胞生长过程的观察：细胞培养3d可见部分贴壁，内有各层角质形成细胞；细胞培养12d可见明显的贴壁现象，有圆形或椭圆形细胞核，细胞体呈不规则形态；13d后可见细胞膜片的形成。细胞间隙明显，细胞大部分为多角形。细胞核明显；20d左右可见细胞膜片仍然存在，细胞形态正常，折光性好。②角质形成细胞的鉴定：胞核内可见棕黄色着色，多数可见明显的细胞核。③不同浓度表皮生长因子对人角质形成细胞增殖的影响：进人对数生长期的细胞在表皮生长因子浓度为0．01-100μg/L时，其吸光度值为0．330&;#177;0．014～0．400&;#177;0．018，此浓度下对角质形成细胞有增殖作用；浓度为0．1～1μ／L时，其吸光度值为0．386＋0．043～0．428&;#177;0．024，增殖作用最强；浓度为0．001或500g／L时，其吸光度值为0．344&;#177;0．013和0．251&;#177;0．025，无明显增殖作用。④培养12d时流式细胞仪对表皮生长因子最适浓度下细胞倍体含量的测定：合成前期=95．9％，大多数为二倍体；分裂前期=4．1％，为四倍体；未见非整倍体。细胞分化良好，无异常分化表现。结论：表皮生长因子浓度为0．01～100μg／L时，促角质形成细胞增殖作用明显，在促增殖范围内无致细胞染色体异常分化的现象，细胞多数为合成前期，提示此条件下角质形成细胞具有很强的增生能力。表皮生长因子浓度为500μg／L时，对角质形成细胞有明显的抑制作用，0．001μg／L为最低有效浓度。重组表皮生长因子对细胞生周长期无影响．     

3T3-L1前脂肪细胞的体外培养及胰岛素样生长因子1对其增殖、分化的作用

背景：前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化潜力的特异化的前体细胞，如果能够找到可以强力促进前脂肪细胞增殖和分化的因子或药物，在脂肪组织移植的同时使用，则有希望提高脂肪组织的移植效果。目的：摸索体外培养经典的3T3-L1前脂肪细胞的最佳培养环境并积累培养经验，观察胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的影响，并探求胰岛素样生长因子1的最佳作用剂量。设计、时间及地点：以细胞为对象的对照观察实验，于2007—10／2008-02在辽宁医学院科学实验中心完成。材料：3T3-L1前脂肪细胞株购于上海中科院生命科学院；胰岛素样生长因子1购于美国Biological公司。方法：根据3T3一L1前脂肪细胞的体外培养条件分为6组：空白对照组应用含体积分数为0．1的胎牛血清的标准高糖DMEM培养基培养；各实验组分别应用含有5，10，20，50，100ug／L胰岛素样生长因子1的含体积分数为0．1的胎牛血清的高糖DMEM培养基培养。主要观察指标：倒置显微镜下观察各组3T3-L1前脂肪细胞的生长、增殖及分化情况并拍照记录。待细胞铺满瓶底达到单层汇合时，应用流式细胞仪检测细胞周期，应用四甲基偶氮唑盐比色法测定3T3-L1前脂肪细胞的增殖率；应用油红O染色提取法测定3T3-L1前脂肪细胞内脂肪含量的增殖率。结果：①倒置显微镜下观察分化前3T3-L1前脂肪细胞呈梭形，胞浆内无脂滴，分化后3T3-L1前脂细胞呈圆形，胞浆内含有大量的脂滴，脂滴聚集于核周，被油红O染成橙红色，形成“戒环”样形态。②四甲基偶氮唑盐比色法和油红O染色提取法检测结果均显示，不同剂量的胰岛素样生长因子1组中3T3．L1前脂肪细胞的增殖率及细胞内脂肪含量的增殖率均高于空白对照组（P〈0．05），胰岛素样生长因子120ug／L组对3T3-L1前脂肪细胞的增殖、分化作用最为明显（P〈0．05）；流式细胞仪的分析结果与四甲基偶氮唑盐比色法及油红O染色提取法的检测结果基本一致。结论：体外细胞培养实验表明，胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞的增殖、分化有明显促进作用，其促进作用与浓度并非成正比，而是达到一定剂量后，其促进作用不再增加，而这个剂量接近本实验的最佳剂量值，即20ug/L。     

软骨细胞增殖与胰岛素和氢化可的松联合应用的关系

背景：关节腔内激素注射治疗关节炎能迅速缓解关节疼痛，但可发生进行性软骨损害。加用具有生长因子样作用的胰岛素，是否可产生对关节软骨细胞的保护作用？目的：观察胰岛素和氢化可的松联合作用对软骨细胞生长的影响。设计：分组对比观察，1种药物单独作用采用单因素方差分析，2种药物复合作用采用多因素实验设计资料方差分析的析因分析。单位：广州市创伤外科研究所。材料：4～6周龄的新西兰大白兔膝关节软骨。方法：实验于2000-02／2001-05在广州市创伤外科研究所完成。将软骨碎片分别用透明质酸酶，胰酶及Ⅱ型胶原酶消化，获得软骨单细胞悬液，予以不同作用及其不同剂量的药物干预。根据应用干预药物剂量的不同将其分为4组及相应亚组。对照组(不加氢化可的松和胰岛素)，胰岛素(0．035，0．35，3．5，35mg／L)组，氢化可的松(1，5，10，50，100mg／L)组，胰岛素(0．35mg／L)+氢化可的松(50mg／L)组，应用四氮甲基唑蓝比色分析法观察其对软骨细胞增殖的影响。主要观察指标：①胰岛素对软骨细胞增殖的影响。②氢化可的松对软骨细胞增殖的影响。③氢化可的松与胰岛素联合使用对软骨细胞增殖的影响。结果：①胰岛素可促进软骨细胞增殖：单独使用0．035mg／L即可发挥效应，当浓度增至0．35mg／L时，其促进作用达到最大值。②氢化可的松对软骨细胞增殖的抑制作用：单独使用10mg／L时即可发挥效应，随着浓度增大抑制作用显著，当浓度增大至100mg／L，软骨细胞几乎全部死亡。③0．35mg／L胰岛素与50mg／L氢化可的松联合使用：存在着负协同作用(F：164．9，P&;lt;0．01)。结论：低浓度胰岛素对软骨细胞的增殖有促进作用。但氢化可的松对软骨细胞的增殖有抑制作用。二者联合使用时，氢化可的松可拮抗胰岛素的作用。     

千金子提取液对大鼠肺成纤维细胞增殖的影响及细胞毒性作用

目的：观察原代培养的大鼠肺成纤维细胞给予不同浓度的千金子提取液后，对肺成纤维细胞增殖的影响以及药物的细胞毒性作用。方法：实验于2003-12／2004—03在军事医学科学院附属医院药剂科临床药理室完成。选取纯系Wistar雌性大白鼠10只，千金子为北京首创大地药业有限公司产品，经鉴定为大戟科属植物续随子的种子。经过传代5代以后的肺成纤维细胞大部分呈梭形，可以用于实验，3个实验各自独立。①肺成纤维细胞增殖检测与分组：大鼠肺成纤维细胞在正规生长培养基中传代培养，48h后处于对数生长期，可进行增殖试验。随机分为1个空白对照组和6个实验组。空白对照组加入空白DMEM，实验组分别加入浓度为500，250，125，62．5，31．25，15．625mg／L的千金子提取液。应用四甲基偶氮唑盐比色法观察瑞香狼毒提取液对细胞增殖的影响。②乳酸脱氢酶活性测定与分组：随机分为1个空白对照组和5个实验组。空白对照组加入空白DMEM，实验组分别加入浓度为125，62．5，31．25，15．625，7.813mg/L的千金子提取液。全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶活性值来观察其细胞毒性。③细胞形态学观察与分组：随机分为1个空白对照组和6个实验组。空白对照组加入空白DMEM，实验组分别加入浓度为500，250，125，62．5，31．25，15．625mg／L的千金子提取液．显微镜下观察细胞形态学变化。结果：实验纳入10只大鼠无脱落。①千金子提取液对肺成纤维细胞增殖的影响：浓度为500，250，125，62．5mg／L的千金子提取液的吸光度值明显低于空白对照组（0．108&;#177;0．004，0．089&;#177;0．002．0．093&;#177;0．005．0．187&;#177;0．002，0．285&;#177;0．011，P（0．01）；浓度为31．25，15．625mg/L的千金子提取液的吸光度值仍低于空白对照组（0．23l&;#177;0．014，0．218&;#177;0．023，0．285&;#177;0．011，P〈0．05）。②千金子提取液对细胞的毒性作用：浓度为15．625，7．813mg／L的千金子提取液其乳酸脱氢酶吸光度值与空白对照组比较，均无显著性差异（28．9l&;#177;0．88，26．77&;#177;0．26，25．91&;#177;0．39，P〉0．05），说明千金子提取液在浓度为15．625，7．813mg／L范围内对细胞无毒性作用；而浓度为125，62．5，31．25mg／L的千金子提取液其乳酸脱氢酶吸光度值均显著高于空白对照组（P〈0．05），且随着浓度的增加，毒性作用显著增强。③千金子提取液对肺成纤维细胞形态学的影响：细胞传代至第5代以后，所得细胞已经都是梭形呈放射状的成纤维细胞。用药前伸展良好，折光性较弱，有方向性；而加入千金子提取液后肺成纤维细胞数目显著减少，形状不规则，突起变短，细胞排列混乱，细胞内代谢产物增多。结论：千金子提取液对大鼠原代培养的肺成纤维细胞生长增殖有较强的抑制作用，随着给药剂量的增加，对细胞增殖抑制作用增强，呈剂量依赖性抑制。同时在高浓度范围内千金子提取液对细胞具有一定的毒性作用。     

健脾化瘀复方中药血清影响人肝癌BEL7402细胞增殖的作用

目的：观察健脾化瘀中药复方对人肝癌BEL7402细胞增殖的抑制作用，并与已知阳性药物5-氟尿嘧啶进行比较。 方法：实验于2005—03／06在中山大学动物实验中心完成。①服药前及含药血清获得：健康志愿者1名（了解实验目的并签订知情同意书）空腹12h后按0．83，1．67，2．5mL／kg剂量口服健脾化瘀复方960合剂（由莪术、白术、苦参、白花蛇舌草等组成；广州市中医院提供；先将莪术、白术剪碎后用净水浸泡30min，提取挥发油和芳香成分，其渣再与用净水浸泡30min的苦参、白花蛇舌草等水煎提取水溶性成分，各种有效成分混匀制成口服液，每毫升相当于生药1．0g），分别于服药前、服药后1h抽取外周血液，得到服药前和含有健脾化瘀复方有效作用成分的含药血清。②观察服药前血清与小牛血清对BELT402细胞的作用：分别将服药前血清和小牛血清（购于四季青公司）加入RPMI-1640培养液，血清终浓度50，100和200g／L。⑧观察药物血清对BEL7402细胞的作用：将人肝癌细胞BEL7402（引自中山大学动物实验中心）随机分为7组（每组细胞接种lO孔）：对照组（服药前血清加入RPMI—1640培养液，血清终浓度100g／L），5-氟尿嘧啶组[用含100g／L服药前人血清的RPMI-1640培养液配制，5-氟尿嘧啶（上海旭东海普药业有限公司，批号050106，规格10mL／支）终质量浓度为0．3，0．6，0．9mg／L1和健脾化瘀复方组（将按0．83，1．67和2．50mL／kg剂量服药后人血清加入RPMI-1640培养液，血清终浓度100g／L）。④人肝癌细胞增殖能力检测：用四甲基偶氮唑盐比色法检测人肝癌细胞增殖能力，以吸光度似值）表示。计量细胞增殖抑制率[（观察组A值-对照组A值）／观察组A值]。 结果：①相同质量浓度服药前血清与小牛血清对BEL7402细胞增殖能力影响比较，差异不明显（P〉0．05）。200g／L服药前血清和小牛血清促进BEL7402细胞增殖能力最强，明显强于50g／L时（P〈0．01）。②0．3，0．6，0．9mg／L5-氟尿嘧啶药物血清和1．67，2．50mL／kg健脾化瘀复方药物血清抑制人肝癌细胞增殖的能力和抑制率明显高于对照组（P〈0．05～0．01），且药物血清浓度越高，对癌细胞增殖能力的抑制作用越强。1．67mL／kg健脾化瘀中药复方血清对人肝癌细胞增殖能力的抑制率与0．3mg／L5-氟尿嘧啶药物血清相近（30．0％，35．9％，P〉0．05）。 结论：①服药前人血清与小牛血清一样具有促进BEL7402细胞增殖的作用。②健脾化瘀中药复方具有抑制BEL7402细胞增殖作用，且呈剂量依赖性，其中中剂量（1．67mL/kg）含药血清对人肝癌细胞增殖抑制作用与小剂量（0．3mg／L）5-氟尿嘧啶相近。