表皮葡萄球菌引起假体周围感染的生物膜形成机制

关节假体周围感染是人工关节置换术后严重的并发症之一。流行病学研究发现,表皮葡萄球菌是导致假体周围感染的最主要致病菌之一。感染过程中,细菌通过在植入物表面定植形成生物膜,从而有效逃避抗生素和宿主免疫反应,并通过群体感应系统调节生物膜的成长过程。该文就表皮葡萄球菌引起假体周围感染的生物膜形成机制作一综述。     

葡萄球菌假体周围关节感染动物模型的研究进展

假体周围关节感染(periprosthetic joint infection,PJI)是人工关节置换术后最严重的并发症之一,导致灾难性的临床后果。近年来,尽管加强了术中无菌技术和预防性抗生素的应用,但感染率在初次关节置换中仍有0.5%~1.2%,而翻修中约为3%~5%[1]。对于多数假体感染的患者而言,都要接受再次手术,忍受灌洗、清创、移除假体甚至截肢的巨大痛苦;对医院而言,感染病例的花费约是未感染病例的五     

金黄色葡萄球菌感染所致骨量丢失的分子机制研究

目的:探讨金黄色葡萄球菌感染所致骨量丢失的分子机制。方法:将30只雄性8周龄C57BL/6小鼠随机分为3组（ n=10）：对照组、感染组及感染+JAK抑制剂（JAKi）组。造模2周后于股骨和胫骨处取材。通过Micro-CT重建并分析骨小梁体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th...     

表皮葡萄球菌和结核杆菌对关节假体黏附机制的研究进展

关节置换术后感染一直是骨科医师面临的棘手问题,又被称为“关节置换术后的灾难性并发症”,也是阻碍人工关节学科发展的主要障碍。近年来,随着无菌术严格化、操作技术规范化以及预防性运用抗生素等多种手段的应用,关节置换术后的感染率有所下降,但仍然保持在1％-5％^[1,2]。     

表皮葡萄球菌生物膜蛋白在假体周围感染诊断中的应用

目的探讨表皮葡萄球菌生物膜蛋白作为抗原诊断假体周围感染的临床价值。方法制作表皮葡萄球菌感染的假体周围感染动物模型，并收集临床假体周围感染患者的血清。以从表皮葡萄球菌444生物膜中提取的蛋白为抗原，用ELISA方法检测感染动物和临床假体周围感染患者的血清中IgG水平。蛋白印迹杂交寻找特异性抗原蛋白。结果感染动物和感染患者血清中的IgG水平明显高于各自对照组，Western—blot结果显示，表皮葡萄球菌生物膜蛋白大小在15KD-37KD之间具有良好的抗原性。结论表皮葡萄球菌生物膜蛋白成份具有良好的抗原性，是引起机体免疫的重要成份。进一步纯化这些蛋白组分并作为诊断假体周围表皮葡萄球菌感染的抗原，具有重要的临床价值。     

耐药葡萄球菌感染关节翻修假体带菌存留一例

关节置换术后感染的处理较困难,即便经历翻修,术后感染亦常复发,只能长期旷置、甚至采用髋关节融合来治疗.而甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA)因其广泛和高度的耐药性,使感染后的治疗变得更为棘手.我们对1例人工股骨头置换术后MRSA感染行翻修术后多次复发的患者采用带菌存留假体、局部持续负压引流的方法治疗,随访30个月关节假体无明显松动,并获得较好的屈髋活动功能,报告如下.     

金属蛋白酶对涤纶材料表面金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响

目的观察不同浓度下金属蛋白酶(A ur)对金黄色葡萄球菌在涤纶材料表面细菌生物膜形成的影响。方法90片涤纶片按随机数字表法分成3组,每组30片。3组均将涤纶片放入有金黄色葡萄球菌液(105CFU/m l)的无菌瓶中,A组再加入含400ng/m l浓度的A ur,B组再加入含80ng/m l浓度的A ur。3组均置入电热恒温水浴箱(98.6°F)中培育,分别于培育后6h、16h、24h、30h和48h用扫描电子显微镜(SEM),激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察细菌生物膜的厚度和单位面积内细菌生物膜群落数量。结果对照组涤纶片细菌生物膜的厚度和群落数呈时间依赖性明显增加,A组涤纶片金黄色葡萄球菌生物膜的厚度和群落数在各时间点均明显低于B组和对照组(P<0.05),B组生物膜的厚度和群落数在各时间点亦明显低于对照组(P<0.05)。结论A ur对金黄色葡萄球菌在涤纶片上细菌生物膜的形成有抑制作用,其抑制作用的强度与A ur剂量呈正相关。     

雌二醇对乳腺癌假体植入术后表皮葡萄球菌生物膜形成的影响研究

目的探讨雌二醇对乳腺癌术后假体表面表皮葡萄球菌生长以及生物膜形成能力及其结构的影响。方法取表皮葡萄球菌标准株ATCC35984,调整浓度至1×107 CFU/m L或1×108 CFU/m L,与硅胶片和终浓度为125 pmol/L的雌二醇混合培养,制备硅胶材料表面细菌生物膜体外模型。于培养后4、6、12、24、48、72 h,采用结晶紫染色半定量检测硅胶材料表面细菌生物膜形成能力,XTT法检测硅胶材料表面细菌生长动力;根据以上检测结果,选择细菌悬液实验浓度。取实验浓度表皮葡萄球菌ATCC35984悬液以及终浓度为50、125、250、500 pmol/L的雌二醇悬液,分别与硅胶片混合培养制备生物膜体外模型,以未添加雌二醇悬液(0 pmol/L)作为对照;另取实验浓度表皮葡萄球菌ATCC12228悬液,同法制备模型,作为阴性对照。于培养后4、6、12、24、48、72 h同上法检测硅胶材料表面细菌生长动力及生物膜形成能力,扫描电镜观察硅胶材料表面细菌生物膜超微结构;培养6、12、24 h激光共聚焦显微镜观察硅胶材料表面细菌生物膜厚度。结果根据XTT法及结晶紫染色半定量检测结果,选择浓度为1×107 CFU/m L细菌悬液进行实验。XTT法检测示,ATCC12228和ATCC35984菌株分别在4、6、12、24、72 h和4、6、24、72 h时,其125、250、500 pmol/L组细菌生长速度快于0、50 pmol/L组(P0.05),4、6、72 h时500 pmol/L组快于125、250 pmol/L组(P0.05),72 h时250 pmol/L组快于125 pmol/L组(P0.05),其余组间比较差异无统计学意义(P0.05);同一时间点两种菌株相同雌二醇浓度组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结晶紫染色半定量检测:各时间点ATCC12228菌株各雌二醇浓度组生物膜形成均为阴性。而ATCC35984菌株培养4 h即有生物膜形成,随时间延长逐渐增厚,24 h时达峰值;培养4、6 h,0 pmol/L组生物膜厚度大于125、250、500 pmol/L组(P0.05);12 h开始125 pmol/L组生物膜最厚,与其他组比较差异均有统计学意义(P0.05)。激光共聚焦显微镜观察示,ATCC35984菌株在培养6 h时125、250、500 pmol/L组的生物膜厚度小于0、50 pmol/L组(P0.05),其余组间比较差异无统计学意义(P0.05);之后各组生物膜厚度逐渐增加,12、24 h时125 pmol/L组生物膜厚度明显大于其他浓度组(P0.05)。扫描电镜观察示,各时间点与其他浓度组相比,125 pmol/L组形成的生物膜结构范围最广,结构最致密、最丰富、层次最多。结论高浓度雌二醇可促进表皮葡萄球菌生长、生物膜形成和生物膜的成熟。     

兔关节内植物植入术后金黄色葡萄球菌感染模型的建立

目的探索人工关节置换术后金黄色葡萄球菌假体周围感染感染,可靠动物模型的建立方法,比较细菌数量与模型的关系,观察模型建立后实验动物的生存率,以及后期细菌毒力和基因变异情况。方法60只新西兰大白兔使用定制非骨水泥假体行膝关节置换后,随机分入对照组和实验组（共5组,给予金葡菌液1ml,浓度分别为1×10^4,1×10^5,1×10^6,1×10^7,1×10^8CFU／ml）。采用大体评分、组织学、细菌生化检验、金葡菌遗传学和毒理学分析、扩增片段长度多态性（AFLP）细菌遗传物质分析的方法,验证模型构建的效率、安全性和稳定性,基线齐性检验、动物模型大体评分,浓度梯度分析采用多组间卡方分析,细菌致病基因分析采用和AFLP分析采用组间聚类分析一平均联结法方法。结果动物生存率、感染率不完全相同,组问方差分析显示,各组间存在统计学差异（F=3．695,P〈0．01）;组织学、细菌培养、生化检验和23SrRNA基因、nile基因检测支持金葡菌感染,使用1ml,1×10^5CFU／ml金葡菌膝关节直接接种能够成功构建模型。致病基因分析和AFLP检测显示,细菌在自然繁殖过程中出现变异,但各基因变异率和基因组总体变异率低于10％。结论本研究成功构建了稳定的关节置换术后金葡菌感染动物模型,发现细菌感染初期的基因变异和毒理学改变。该模型可用于关节置换术后假体周围急性感染的相关研究。更远期的变异情况可能导致感染模型的不稳定,需进一步研究。     

关节假体周围感染研究进展

关节假体周围感染(PJI)是人工关节置换术最严重的并发症之一,病态肥胖、双侧手术、二次手术、住院时间长和异体输血均为危险因素。关节假体超声波降解液培养的敏感度及特异度超过假体周围组织培养。聚合酶链反应技术对检测曾使用抗生素而培养困难的标本有较高成功率。脱氧葡萄糖正电子发射断层扫描技术正发展为新的PJI诊断技术。抗PJI治疗主要针对培养结果选择抗生素,一般采用利福平联合利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁均有较好效果。目前的观点认为,一期彻底清创、非骨水泥型假体更换联合短期抗生素疗法是治疗PJI的较好方法 。     

金黄色葡萄球菌肽聚糖促进破骨细胞分化的分子机制研究

目的探讨金黄色葡萄球菌肽聚糖(Staphylococcal peptidoglycan,PGN-sa)促进破骨细胞分化的分子机制。方法 Western blot检测:取Raw264.7细胞,以PGN-sa或SC75741(NF-κB激活的强效抑制剂)+PGNsa分别作用0、1、2、3 d,检测活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)蛋白表达;分别作用0、5、10、20、40、60 min,检测破骨细胞分化信号通路相关蛋白[细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、NF-κB、NF-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB-α)、Akt及磷酸化蛋白p-p38、p-ERK、p-JNK、p-Akt、p-NF-κB]表达。ELISA检测:取Raw264.7细胞分为4组,分别以100(A组)、200(B组)、400 ng/m L PGN-sa(C组)及PBS(D组)作用1、2、3 d,检测TNF-α、IL-1α及IL-6的蛋白表达量。结果 Western blot检测:随培养时间延长,NFATc1蛋白表达量呈逐渐增加趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P0.05);但加入SC75741后,NFATc1蛋白表达在2、3 d明显受到抑制,与未加入SC75741前比较差异有统计学意义(P0.001)。PGN-sa刺激后5、10 min时IκB-α蛋白表达量明显降低,p-NF-κB蛋白表达量明显增高,均于20 min后恢复正常,5、10 min时蛋白表达量与其余时间点比较差异均有统计学意义(P0.001),且5 min时p-NF-κB蛋白表达量高于10 min时(P0.001)。加入SC75741后,IκB-α及p-NF-κB的蛋白表达量无变化,各时间点间比较差异均无统计学意义(P0.05)。其他蛋白(ERK、p38、JNK、NF-κB、Akt及p-p38、p-ERK、p-JNK、p-Akt)表达量在各时间点均无明显变化(P0.05)。ELISA检测:各时间点A~D组TNF-α及IL-1α均未见表达。各组IL-6的表达随时间延长呈递增趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P0.05)。培养1 d时,各组间比较IL-6蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);2、3 d时,A、B、C组IL-6蛋白表达显著高于D组,A、B、C组间呈递增趋势,各组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 PGN-sa通过NF-κB信号通路促进破骨细胞的分化形成,IL-6在这一过程中可能起一定作用。     

关节假体感染的预防研究进展

针对膝、髋关节严重关节畸形及功能障碍,关节置换是治疗膝、髋关节终末病变的最为有效、安全的治疗措施。然而这一显著提高患者生活质量的手段还有很多并发症,其中人工关节感染是人工关节置换术后最严重的并发症,一旦发生感染,会给患者带来巨大的身体负担和经济压力。而预防是应对关节感染最为经济有效的措施。所以了解人工关节置换术中导致感染的危险因素,及时采取预防措施十分必要。本文针对这些问题作一综述。     

糖尿病和关节假体感染发病率的相关性研究

目的 探讨我国人群中糖尿病和关节假体感染（PJI）发病率的相关性.方法从2000年1月到2012年12月,本研究系统地收集了49例经过全髋/ 膝关节置换术后发生PJI的患者（病例组）;通过手术时间和手术类型进行匹配,选定252例没有发生PJI的患者为对照组.本组通过条件性Logistic回归来计算比值比（OR）和95% 可信区间（CI）.结果相较于对照组,糖尿病在PJI患者中的发病率更高（36.7% vs.8.3%,P〈0.01）.通过对年龄,性别,BMI等混淆因素进行调节后发现,糖尿病患者发生PJI的概率明显增高（OR=6.2;95%CI：2.8~13.6;P〈0.01）.BMI为18.5～28 kg/m2的糖尿病患者PJI发病率的OR=4.0（95%CI：1.1~14.1;P〈0.05）,而BMI ≥ 28 kg/m2的糖尿病患者发生PJI的概率更高（OR=16.8;95% CI：4.4~64.5;P〈0.01）.结论糖尿病患者特别是伴随BMI ≥ 28 kg/m2时,PJI的发病率显著升高.     

表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因在表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生物膜形成中的作用研究

目的探讨表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因——胞间黏附素A(intercellular adhesion A,ica A)基因、纤维蛋白原结合蛋白(fibrinogen binding protein,fbe)基因、聚集相关蛋白(accumulation-associated protein,aap)基因在表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生物膜形成中的作用。方法实验分为3组,用表皮葡萄球菌标准株ATCC35984(表葡组)及白假丝酵母菌标准株ATCC10231(白念组)分别培养及混合培养(混合组),建立表皮葡萄球菌、白假丝酵母菌及二者混合生长的体外生物膜模型。于培养2、4、6、8、12、24、48、72 h,采用结晶紫染色法半定量检测生物膜形成能力,二甲氧唑黄[(2,3 bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)5〔(phenylamino)Carbonyl〕2H-tetrazolium hydroxide assay,XTT]比色法评价生物膜体外生长动力学;24、72 h扫描电镜观察生物膜超微结构。荧光定量PCR分析培养72 h表葡组及混合组ica A、fbe、aap基因表达情况。结果结晶紫染色法生物膜半定量检测示,混合组和表葡组均在培养12 h生物膜明显增厚,72 h混合组超过表葡组,组间比较除72 h外,其余各时间点两组比较差异均有统计学意义(P0.05);白念组12 h出现生物膜的生长,在整个培养周期白念组生物膜厚度均低于混合组(P0.05)。XTT比色法生长动力学检测示,混合组整体生长速度快于白念组,且48 h后超过表葡组;混合组与表葡组除12 h差异有统计学意义(P0.05)外,其余各时间点比较差异均无统计学意义(P0.05);混合组培养2、4 h时A值低于白念组,但比较差异无统计学意义(P0.05);6 h后各时间点A值均显著高于白念组(P0.05)。扫描电镜观察示,随培养时间延长各组均形成结构复杂、成熟的生物膜。培养72 h荧光定量PCR检测示,与表葡组相比,混合组fbe、ica A、aap基因表达量分别增高1.93、1.52、1.46倍,差异均有统计学意义(P0.05)。结论表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生长能形成比单一微生物结构更复杂的混合生物膜;混合生物膜较单一微生物生物膜更厚,可能与表皮葡萄球菌ica A、aap、fbe基因表达增加有关。     

联合用药对金黄色葡萄球菌生物膜作用的体外研究

目的观察连花清瘟胶囊水溶解物与头孢替唑钠联合用药对金黄色葡萄球菌生物膜的体外破坏作用。方法药物分为头孢替唑钠组、连花清瘟组、联合用药组和空白对照组;微量肉汤稀释法分别测定连花清瘟胶囊水溶解物和头孢替唑钠对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度;用酶标仪检测金黄色葡萄球菌生物膜内活菌数变化;用扫描电镜观察金黄色葡萄球菌生物膜内细菌受药物作用后的形态和大小。结果连花清瘟组活菌数较空白对照组低(P0.05);头孢替唑钠组与空白对照组相比差异无统计学意义(P0.05);联合用药组活菌数低于单独用药组(P0.05)。扫描电镜显示头孢替唑钠组生物膜中,大量细菌密集在一起,但密度较空白对照组稀疏,细菌形态基本正常,大小基本一致;连花清瘟组生物膜中形态不规则,大小不一致;而联合用药组形态更加不规则,大小更加不一致。结论连花清瘟胶囊水溶解物对金黄色葡萄球菌生物膜具有显著破坏作用,与头孢替唑钠联合应用可起到协同增效的作用。     

关节假体周围感染诊断进展

关节假体周围感染（PJI）是全关节置换术（TJA）后严重的并发症之一,日益受到关注。尽管目前PJI的诊断方法有很多种,但仍缺乏金标准。已有研究发现,引入局部取材标本和提高病原检出率的方法有望提高PJI的诊断准确率。该文在讨论现有PJI诊断方法的基础上,提出临床和未来研究中诊断PJI的新视角,并重点介绍基因测序与超声裂解2种PJI诊断方法。     

医院感染金黄色葡萄球菌的耐药性和SCCmec基因型分析

目的 了解天津市肿瘤医院医院感染金黄色葡萄球菌对抗菌药物的耐药状况和葡萄球菌盒式染色体mec（SCCmec）基因型特点。方法检测89株医院感染金黄色葡萄球菌对抗菌药物的敏感性及其mecA携带率,用多重PCR法对mecA阳性菌株进行SCCmec基因分型。结果89株金黄色葡萄球菌中表型甲氧西林耐药率为23．6％（21／89）,mecA基因检出率为43．8％（39／89）,两者比较差异有统计学意义（X^2=8．146．P=0．004）。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）表现出多药耐药特点,未发现万古霉素耐药株。SCCmec基因型以Ⅲ型最为常见,占66．7％（26／39）。结论天津市肿瘤医院分离的MRSA具有多重耐药特点,SCCmec基因型以Ⅲ型为主。     

关节假体周围感染预防的研究进展

目的总结关节假体周围感染(prosthetic joint infection,PJI)预防的研究进展,为临床工作提供参考。方法查阅近年来国内外PJI相关文献,进行综合分析及归纳总结。结果 PJI的预防涉及人工关节置换术前、术中及术后各阶段,目前临床以多种方法综合治疗为主。结论对于人工关节置换术患者,采用多层面综合治疗方法可有效预防PJI。     

金黄色葡萄球菌骨髓炎发病机制的研究进展

正金黄色葡萄球菌作为一种机会性致病菌,可导致包括骨感染在内的多种感染性疾病。在临床上,金黄色葡萄球菌是骨感染最主要的致病菌[1-2]。骨组织在感染金黄色葡萄球菌后如果不能及时得到治疗,感染便会很快转变为慢性,并且很难彻底治愈,造成反复感染。这与金黄色葡萄球菌感染骨组织的特点密切相关。首先,金黄色葡萄球菌在感染骨组织后可以接触成骨细胞并内化进入细胞内长期存活,在这期间它会对骨组织造成严重的破坏。其次,金黄色葡萄球菌可以在病灶内或者植入物表面     

金黄色葡萄球菌感染诱导成骨细胞参与免疫反应

成骨细胞的主要功能是合成骨的细胞外基质及调控破骨细胞形成和活性,从而维持骨组织平衡。近年研究发现金黄色葡萄球菌感染能诱导成骨细胞大量分泌白细胞介素-6、白细胞介素-12和单核细胞趋化蛋白-1等免疫炎性因子,诱导成骨细胞膜表面表达主要组织相容性复合体Ⅱ和分化抗原簇40等免疫反应受体,诱导激活成骨细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体、Toll样受体及丝裂原活化蛋白激酶等免疫反应通路,参与免疫反应。该文主要就金黄色葡萄球菌感染诱导成骨细胞参与免疫反应的机制研究作一综述。