HBV血清标志物和DNA联合检测对提高输血安全性的价值

目的 探讨2种方法联合检测对提高输血安全性的价值.方法 采用酶联免疫吸附测定(ELISA)和荧光定量PCR技术,分别对确诊或疑似乙型肝炎血液标本(346份)和初筛合格献血员标本(300份)进行HBV血清标志物和DNA含量检测.结果 经ELISA法检测,346份确诊或疑似乙型肝炎血液标本,HBV标志物阴性62份,其中检出HBV-DNA阳性1份(1.5%);在300份初筛合格的献血员标本中,检出HBV-DNA阳性6份(2.0%),其中222份ELISA法全阴性的标本,检出HBV-DNA阳性2份(0.9%).结论 在HBsAg阴性者中,也可能存在HBV感染;HBV血清标志物和DNA的联合检测,对提高输血安全性有重要意义.     

3种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA阴性结果的比较

目的：为了解实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）不同试剂间的假阴性差异,分析其原因,寻找消除办法。方法：用深圳匹基基因诊断技术有限公司的FQ-PCR试剂（A方法）检测2 333份血清病毒学标志为HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc阳性病人血清中的HBV-DNA,对HBV-DNA阴性标本,用2种试剂盒进行复核。结果：2 333份HBeAg阳性标本A方法检出48份HBV-DNA阴性标本,阴性率为2.06%,经广州中山大学达安基因股份有限公司试剂（B方法）复核,有28份转为HBV-DNA阳性;上海申友基因技术诊断公司试剂（C方法）复核,有31份转为HBV-DNA阳性。结论：FQ-PCR不同试剂检测HBV-DNA存在假阴性,且假阴性率较高,其原因可能与试剂引物设计保守序列与HBV某些变异造成不相匹配有关,可以采用多种试剂进行复核的方法弥补。当FQ-PCR检测HBV-DNA低于检测值时,应用其他试剂进行复核,以减少假阴性错误的发生,为临床诊断提供可靠的依据。     

3种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA结果比较

乙型病毒性肝炎(乙肝)是一种严重影响我国人民健康的传染病,检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量是反映HBV复制的程度,考核抗病毒药物治疗效果的重要依据。用PCR检测HBV-DNA是最常用的检测方法,由于该法受一系列的技术以及人为因素影响,易使检测结果产生误差,甚至造成假阴性的结果。为此,我们对48份HBV-DNA检测阴性标本,用多种不同厂家生产的PCR试剂进行同步复核,探讨其假阴性结果的真实性,现报道如下。材料与方法1标本来源宁波市传染病院2005~2005年住院和门诊乙肝患者2333份血清标本,均未经抗病毒药物治疗,其血清病毒学标志检…     

HBV-LP与HBV-DNA检测法在HBeAg阴性乙肝患者及正常人中的比较

目的:通过检测餐饮从业人员、学生等公共卫生体检人员中乙肝病毒大蛋白(hepatitis B virus large proteins,HBV-LP)的情况,探讨HBV-LP与HBV-DNA检测法在HBeAg阴性HBV患者和正常人中检测效果的异同。方法:采用酶联免疫法(ELISA)测定乙肝两对半(HBV M)以及乙型肝炎病毒大蛋白(HBV-LP);采用Real-time PCR法检测HBV-DNA,对各类体检人员的709份血清标本和200份正常人的血清标本分别进行检测。结果:(1)在489份HBeAg阴性乙肝患者的标本中,HBV-LP与HBV-DNA检测法的检测结果差别无统计学意义(χ2=0.58,P>0.05)。(2)HBV-LP S/CO值与HBV DNA拷贝数呈正相关(r=0.951,P<0.05)。(3)在乙肝二对半(HBV-M)均阴性200份餐饮从业人员的标本中,两种方法的检测结果差别亦无统计学意义(χ2=0.40,P>0.05)。结论:乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)像HBV-DNA一样能够有效、真实地反映HBV病毒复制情况,该方法可以在体检领域推广使用。     

沉淀浓缩检测HBV DNA含量在乙型肝炎诊治中的临床价值

目的通过沉淀浓缩法检测HBVDNA,探讨HBV DNA含量的临界值及其在乙型肝炎诊治中的临床价值。方法28例患者以血清标志分为三组:HBsAg、HBeAg、抗-HBcIgG、抗-HBcIgM阳性(大三阳)患者2例,HBsAg、抗-HBe、抗-HBcIgG、抗-HBcIgM阳性(小三阳)患者22例,HBsAg、抗-HBcIgG阳性、抗-HBcIgM阳性患者4例,肝功能均有异常,且HBVDNA阴性的患者标本,经病毒裂解、核酸沉淀后用75%乙醇抽提,离心后烘干沉淀,加入沉淀溶解液,将患者血清处理后进行扩增。结果28例抗-HBcIgM阳性、HBVDNA定量阴性的患者血清经沉淀处理后:小三阳患者22例,19例HBV DNA定量阳性;大三阳患者2例,HBV DNA定量均为阳性;HBsAg、抗-HBcIgG阳性患者4例,HBVDNA定量2例为阳性。HBV DNA定量最大值为3.7×103拷贝/L,最小值为4.5×102拷贝/L,平均值为2.1×103拷贝/L。结论对于抗-HBcIgG阳性、抗-HBcIgM阳性,肝功能有不同程度异常的乙型肝炎患者,HBV DNA若为阴性则应对其血清标本进行沉淀浓缩,再检测其HBV DNA含量。同时应降低HBV定量临界值的下限,并提高HBV定量检测试剂的灵敏度,这对慢性乙型肝炎的诊治具有重要临床价值。     

Pre-S1抗原在临床及健康体检中的应用价值

目的探讨Pre-S1抗原检测的临床意义。方法采用ELISA方法检测乙肝病毒“两对半”及Pre-S1抗原,HBV-DNA检测运用荧光定量PCR方法。结果在HBsAg阳性的标本中,HBV-DNA检出率为69.3%,而Pre-S1检出率为65.8%;97例Pre-S1阳性而HBeAg阴性的标本,占Pre-S1总阳性病例的27.8%,在HBeAg阴性的病例中HBV-DNA阳性为97例,占HBV DNA总阳性病例的25.5%。在HBsAg阴性组的标本402例中,检出Pre-S1阳性9例。结论Pre-S1抗原与HBV-DNA高度相关;PreS1可替代或补充HBe系统及HBV-DNA的检测,建议纳入从业人员健康体检和献血员筛查的检测项目。     

献血员乙型肝炎病毒感染筛查安全性初步评价

[目的]探讨HBsAg阴性血清中是否有HBV-DNA的存在,以对我国目前献血员的乙型肝炎筛查安全性进行初步评价.[方法]利用酶联免疫吸附试验对HBsAg阴性的1430例非献血员和1608例献血员血清进行乙肝标志物检测,剔除单独anti-HBs阳性和全阴性血清,其余血清采用聚合酶链反应定量检测HBV-DNA拷贝数.[结果]剔除单独anti-HBs阳性和全阴性血清后,非献血员标本中其他阳性组合模式有52份(3.64%),HBV-DNA呈阳性1份(0.07%);献血员标本有182份(11.32%),HBV-DNA呈阳性4份(0.25%);所有HBV-DNA阳性血清均为anti-HBc阳性.[结论]HBsAg阴性血清中仍有HBV-DNA存在的可能,仅检测HBsAg筛查献血员是不够的,应对献血员进行更严格的HBV标志物检查,例如增加anti-HBc的检测.如有条件,可检测HBV-DNA.     

HBsAg阴性安全性初步评价

目的 探讨HBsAg阴性血清中是否有HBV-DNA的存在以及其传染性强弱,使用PCR仪对我国目前献血员的乙肝筛查安全性进行初步评价.方法 利用酶联免疫吸附实验对HBsAg阴性的1430例非献血员和1608例献血员血清进行乙肝标志物检测,剔除单独Anti-HBs阳性和全阴性血清,其余血清采用聚合酶链反应定量检测HBV-DNA拷贝数.结果 剔除单独Anti-HBs阳性和全阴性血清标本后,非献血员标本中其他阳性组合模式有52份（3.64% ）,HBV-DNA呈阳性1份（0.07% ）;献血员标本有182份（11.32% ）,HBV-DNA呈阳性4份（0.25% ）;所有HBV-DNA阳性血清均为Anti-HBc阳性.结论 HBsAg阴性血清中仍有HBV-DNA存在的可能,仅检测HBsAg筛查献血员是不够的,应对献血员进行更严格的HBV标志物检查,例如增加Anti-HBc的检测.如有条件,可检测HBV-DNA.     

乙型肝炎病毒血清标志物与HBV-DNA关系探讨

目的探讨乙型肝炎病毒血清学标志物(HBV-M)含量与HBV-DNA载量之间的关系。方法运用电化学免疫发光法(ECLIA)和实时荧光定量PCR两种方法同时定量检测262份血清标本中血清标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb含量和HBV-DNA载量,并对各项检测结果进行统计学分析。结果 262份血清标本出现了9种血清模式,其中152份HBV-DNA阳性,对HBVDNA阳性标本进行相关性分析,发现其与HBsAg、HBeAg、HBeAb呈正相关(r=0.207、0.542、0.607,P<0.05),且在HBeAg阳性组更显著(r=0.425、0.752、0.701,P<0.01)。152份HBV-DNA阳性中79例HBeAg阴性,其中29例HBV-DNA载量对数值≥5,占HBeAg阴性者的36.7%;25例HBsAg<250 IU/mL,其中12例HBV-DNA载量对数值≥5,占48%。结论 HBV血清标志物含量与HBV-DNA载量之间有相关性,但是单一检查难以对体内HBV感染情况作出准确诊断,需要将HBV血清标志物检测与HBV-DNA载量两者联合检测,以准确判断HBV在体内的存在情况。     

血清HBV-DNA荧光定量PCR检测与乙肝病毒标志物模式的相关性

目的 探讨HBV-DNA荧光定量PCR检测与乙肝病毒标志物模式之间的相关性.方法 将265例血清标本同时进行乙肝病毒标志物和HBV DNA的荧光定量PCR检测,按照不同的乙肝病毒标志模式情况分组后,进行HBV DNA与乙肝病毒标志物的分析研究.结果 乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组HBV-DNA阳性率98.3%,HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性组阳性率77.8%,HBsAg、HBcAb阳性组阳性率83.3%;HBsAg阳性组阳性率60%;:HbeAb、HBcAb阳性组阳性率42.1%;HBsAb阳性组阳性率38.1%;全阴性组阳性率3.1%.结论 HBV DNA荧光定量PCR法检测在各种模式的HBV标志阳性血清甚至全阴性的血清中均可检出,但检出率相差甚大(3.1%～98.3%);乙肝病毒标志中HBeAg阳性者其HBV-DNA阳性率较高;HBsAg及其抗体阳性者也可检出HBV DNA,甚至乙肝模式全阴性者仍可检出HBV DNA.说明仅仅依靠乙肝病毒标志进行早期诊断以及判断患者是否具有传染性是不够的.因此同时检测乙肝标志物和HBV DNA有助于乙肝的早期诊断、疗效观察和预后判断.     

荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果比对分析

目的:探讨分析应用荧光定量PCR仪检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA的结果。方法:选取2018年8月~2019年9月本院收治的30例乙型肝炎患者,按数字法随机分两组,各15例,对照组仪器采用RLC480仪检测,观察组仪器采用荧光定量PCR仪检测,通过对患者HBV DNA水平的测定,对比分析不同仪器检测的结果。结果:RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器两种仪器测定结果未出现离群值;两台仪器的检测HBV DNA结果的相关性良好(r>0.975);两台PCR检测仪器检测结果的偏倚度百分比为3.18%(<7.51%),一致性良好,且系统误差在可接受的范围内。结论:ABI7500型荧光定量PCR仪器和RLC480型荧光定量PCR仪器检测HBA DNA的一致性极高,误差小,测算乙型肝炎DNA结果偏倚度在可控范围内,两种仪器运用于乙型肝炎的测量结果可用于以后的临床检测中。     

乙肝病毒DNA水平与表面抗原滴度水平比较

目的 比较荧光定量PCR检测乙肝病毒与表面抗原滴度检测的结果符合率，探讨PCR检测HBV DNA方法的应用前景。方法 抽取服务行业从业人员体检血清1025份，进行HBV荧光定量PCR和ELISA结果以及表面抗原滴度检测结果的比对分析，以确认标准方法。结果 荧光PCR与乙肝两对半ELISA结果相比符合一般规律，而PCR检测结果与表面抗原滴度结果无明显相关性。结论 HBV DNA定量对治疗及确认是否具传染性起指导作用，可以取代表面抗原滴度检测方法对E抗原阴性而表面抗原阳性的服务行业从业人员进行传染性判定。     

定量PCR-微流芯片法定量检测血清HBV DNA含量

目的应用定量PCR-微流芯片法定量检测临床血清标本HBV DNA含量,以了解该方法的灵敏度。方法将定量PCR-微流芯片法应用于10倍梯度稀释的HBV DNA参比品的定量检测,并与Taqman荧光定量法作比较;同时,应用这两种方法平行检测49份HBsAg阳性乙型肝炎患者的血清标本。结果Taqman荧光定量法可检测出104拷贝/mL的HBV DNA参比品,测得临床血清标本HBV DNA阳性率为63.27％(31/49),阳性血清的HBV DNA含量均值为9.60×106±19.54拷贝/mL;而PCR芯片法可测出103拷贝/mL HBV DNA参比品,测得临床血清标本HBV DNA的阳性率为77.55％(38/49),阳性血清的HBV DNA含量均值为6.95×106±15.43拷贝/mL。两者差异无显著性(P>0.05)。结论两种方法均能有效检测临床血清标本HBV DNA含量,而定量PCR一微流芯片法的敏感性更高,尤其适合于低病毒载量检测及患者抗病毒药物选择和疗效的监测。     

Real-time PCR assay with an endogenous internal amplification control for detection and quantification of Anaplasma marginale in bovine blood

Bovine anaplasmosis is a tick-borne rickettsial disease, causing significant economic losses in many countries. The main causative agent of bovine anaplasmosis is Anaplasma marginale (Rickettsiales, Anaplasmataceae). To date, several PCR assays for A. marginale DNA detection were proposed, but most of them do not provide an internal amplification control, which allows to prevent false-negative results and is required for reliability of the results of pathogen DNA detection by PCR assay. In the present study, a real-time PCR assay based on the species-specific and highly conserved fragment of msp1α gene was developed for detection and quantification of A. marginale in bovine blood. The real-time PCR assay is able to detect as few as one copу of msp1α gene per reaction. To prevent false-negative results, simultaneous amplification and detection of the bovine genomic DNA fragment as an endogenous internal amplification control (IAC) was provided. The assay can be used as a highly specific and sensitive method for detection and quantification of A. marginale in infected cattle, and for the evaluation of the efficacy of anti-rickettsial drugs and anaplasmosis vaccines.     

肽核酸生物传感器直接检测临床标本中提取的病毒基因组DNA

目的 以肽核酸生物传感器检测系统直接检测从临床标本中提取的乙型肝炎病毒基因组DNA。方法 抽取63例临床免疫学检测证实为乙型肝炎病毒(HBV)感染者标本血清的DNA，以及15例免疫学检测全阴的标本血清中的DNA，分别用肽核酸生物传感器法以及定量PCR法检测，比较两种方法的优劣并确定传感器法的检测限。结果 传感器法检测60例标本阳性，阳性率为95．24％，而定量PCR法检测63例均为阳性；15例阴性血清两种方法检测均为阴性；传感器法的检测限为8．6pg／L；两种方法检测HBV差异无显著性，但传感器检测法所用时间更短，且无需进行探针的标记。结论 利用肽核酸生物传感器成功地绕过了PCR扩增而直接检测出了临床标本中的HBV基因组DNA。     

HBV cccDNA SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法的建立及初步应用

目的 建立一种稳定、特异、敏感的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA (cccDNA) SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.方法 根据乙肝病毒松弛环状DNA (HBVrcDNA)与cccDNA的结构差异,设计跨越双缺口的特殊引物,并利用一种ATP依赖不降解质粒的DNA酶(Plasmid-SafeTMATP dependent DNase,PSAD)提高反应的特异性;建立荧光定量PCR标准曲线,并进行特异性、敏感性和重复性检验.应用所建立的方法评价拉米夫定和阿德福韦酯对HBVcccDNA的抑制效果.结果 该方法能特异性检测到HBV cccDNA,在2.68×1082.68×103 copies/μl检测范围之间有良好的线性关系,相关系数为-1.00,扩增效率为102％;最低检测限为2.68×101 copies/μl.拉米夫定和阿德福韦酯对HBVcccDNA均有很好的抑制效果.结论 该实验所建立的方法稳定性强、特异性好、灵敏度高,可快速定量检测HBVcccDNA,用于抗HBV药物的评价.     

2种荧光定量PCR扩增仪检测结果的比较

目的:观察2种荧光定量PCR扩增仪测定乙肝病毒定量(HBV DNA)的结果是否一致。方法:用2台PCR扩增仪同时对20份标本进行检测,观察2台荧光定量PCR定量扩增仪对HBV DNA测定结果的差异。结果:对20份标本HBV DNA含量的对数值进行相关性分析,二者相关性良好(r=0.96)。结论:通过2种荧光定量PCR扩增仪对20份随机样本的检测结果比较,2种仪器检测结果具有较好的一致性,可用于同时检测HBV DNA。     

乙型肝炎患者血清Pre-S1抗原检测的临床分析

目的分析HBVPre-S1抗原、HBV标志物和HBVDNA的关系,并探讨其相应的临床意义。方法574例HBV感染的患者血清,用全自动酶免仪(TRITURUS)检测HBV标志物及Pre-S1抗原(Pre-S1),对其中73例采用PCR实时定量荧光检测技术作HBV DNA检测,同时对HBV标志物均阴性的正常健康人70名也进行了Pre-S1的检测。结果574例HBsAg阳性患者中,Pre-S1检出率为54.5%,HBeAg检出率为23.9%,Pre-S1的检出率较HBeAg高(P<0.01)。Pre-S1与HBV DNA的检出率差异无统计学意义(P>0.05),HBeAg与HBV DNA的检出率有差异有统计意义(P<0.01),Pre-S1与HBeAg检出率的差异有统计学意义(P<0.01)。结论Pre-S1较HBeAg更敏感地反映HBV的复制情况,与HBV活动性复制关系密切,可作为乙型肝炎(乙肝)传染性筛选的重要补充。     

干扰素治疗慢性乙肝反应的研究

目的：总结干扰素治疗慢乙肝的反应规律及特点。方法：150例慢乙肝患者随机分为干扰素治疗组和一般扩肝的对照组。采用前瞻性研究方法，对治疗组患者定期连续进行肝功能试验、HBV DNA斑点杂交检测、HBV DNA定量PCR检测、乙肝病毒标记物检测。结果：干扰素治疗过程中，转氮酶总体呈下降趋势；HbeAg应答与患者治疗前转氮酶有关，转氮酶重中度升高患者下降明显；用药前HBV DNA阳性患者、开始用药后第2月末HBV DNA转阴者，HbeAg转阴率较高。HbeAg应答大多发生在治疗第3月左右，平均转时间为3.4月；干扰素治疗前HB VDNA女性低于男性，HbeAg应答组低于无应答组。治疗过程中HBV DNA在总体上呈下降趋势，转阴平均时间为1.9月，与HbeAg应答及肝功能恢复有一定相关性。结论：干扰素对慢性肝炎治疗有效。     

医院环境空气及物表次氯酸雾化消毒效果

目的观察雾化次氯酸形成气溶胶对医院空气及物表微生物的消毒净化效果。方法采用现场消毒试验方法,以500 ml/h的雾化量流速释放次氯酸消毒液,分别消毒前和消毒作用1、3、5、10 min后对环境空气和物体表面进行采样和检测,评价雾化次氯酸的消毒效果。结果以次氯酸进行雾化消毒,分别在消毒1、3、5 min后,空气中的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭率均达到了100.00%;用该次氯酸消毒液对物体表面进行雾化消毒,5 min后木质表面上的大肠埃希菌杀灭率达到了100.00%;消毒10 min后,木质表面上的金黄色葡萄球菌、枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭率达到了100.00%。结论通过雾化次氯酸消毒液可快速有效地杀灭空气中及物体表面上的微生物。