线性探针耐药技术对两种方法培养的结核分枝杆菌药敏结果差异评价

目的比较BACTEC MGIT 960液体培养法和比例法培养出的结核分枝杆菌(MTB)对利福平(RFP)和异烟肼(INH)药敏结果的符合性,探讨不同方法下药敏结果不一致的原因和线性探针耐药技术对临床诊断的价值。方法从378例临床分离结核分枝杆菌中筛选出29株两种方法药敏结果不一致菌株,再用线性探针耐药检测技术检测MTB对RFP和INH耐药相关的rpoB、katG和inhA基因8个位点的基因突变判断其耐药性,比较三者结果的符合率。结果 BACTEC MGIT 960液体法和比例法药物敏感性试验检测MTB对RFP、INH耐药性符合率分别为89.1%和88.9%;线性探针耐药法和BACTEC MGIT 960液体法对RFP、INH耐药性符合率分别为100.00%和94.44%;线性探针耐药法和比例法和对RFP、INH耐药性符合率分别为87.5%和82.35%;线性探针耐药法分析29株MTB中发现有12株可能存在异质性耐药。结论线性探针耐药法和BACTEC MGIT 960液体法对RFP、INH耐药性符合率明显高于线性探针耐药法和比例法;线性探针耐药检测技术比表型耐药更具精确、快速、敏感性高的特点,对结核分枝杆菌的耐药监测和早期治疗方案的确立具有重要意义。     

线性探针检测技术对痰标本中耐药结核分枝杆菌快速检测的应用评价

目的评价线性探针检测技术(LPAs)直接从痰标本中检测结核分枝杆菌复合群及其对耐多药结核病的快速检测。方法连续收取193例临床涂片抗酸染色阳性的痰标本,直接用LPAs法从痰标本中进行结核分枝杆菌复合群及其对利福平和异烟肼耐药性的检测,结果与MGIT960系统药物敏感性试验以及利福平、异烟肼耐药相关基因rpoB、katG、inhA和ahpC的基因测序结果进行比较,评价线性探针检测技术从痰标本中检测耐药结核分枝杆菌的灵敏度、特异度和符合率。统计学分析采用kappa检验。结果 LPAs法对涂阳痰标本结核分枝杆菌复合群检测的灵敏度为100.0%,耐利福平、耐异烟肼和耐多药结核分枝杆菌复合群检测的灵敏度分别为96.0%(48/50)、92.8%(64/69)和90.0%(45/50),特异度分别为99.3%(142/143)、100.0%(124/124)和99.3%(142/143),符合率分别为98.4%(190/193)、97.4%(188/193)和96.9%(187/193)。结论 LPAs法能够直接从涂阳痰标本中检测耐多药结核分枝杆菌,对耐利福平和耐异烟肼菌株具有较高的灵敏度和特异度,与MGIT960系统药物敏感性试验结果的一致性较好,能够明显缩短从样本接收到得到药物敏感性试验结果的报告周期,为临床准确、快速地诊断耐多药结核病提供可靠的实验室依据,有利于耐药结核病的早期诊断。     

线性探针技术在四川地区结核分枝杆菌耐药检测中的应用评价

目的评估线性探针技术(LPA)在四川地区结核分枝杆菌耐药检测中的应用价值。方法对2014-04收集的297例分枝杆菌分离培养物进行传统比例法药敏实验和线性探针检测,分析线性探针技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼耐药性及MDR-TB的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、一致性及Kappa值。结果以传统比例法药敏为金标准,线性探针技术检测利福平耐药情况的灵敏度为90.00%,特异度为96.08%,阳性预测值为78.26%,阴性预测值为98.39%,一致性为95.25%,Kappa值为0.81;检测异烟肼耐药情况的灵敏度为85.00%,特异度为97.87%,阳性预测值为91.07%,阴性预测值为96.23%,一致性为95.25%,Kappa值为0.85;检测MDR-TB的灵敏度为88.46%,特异度为97.40%,阳性预测值为76.67%,阴性预测值为98.87%,一致性为96.61%,Kappa值为0.80。利福平耐药菌株中,rpoB主要突变位点为531、526和516,异烟肼耐药菌株的主要突变位点为katG S315T1。结论线性探针技术能够快速准确的检测利福平、异烟肼的药物敏感性,有利于耐多药结核病的快速筛查和诊断。在基层应用时应加强管理和人员培训。     

乐山市应用线性探针法快速检测耐药结核病研究

目的评价线性探针法在四川省乐山市结核耐药性检测中的应用效果。方法收集2017-04/2019-02乐山各县区疾控中心结核病实验室痰培养获得的270株结核菌株作为研究对象,同时采用线性探针法和标准方法比例法检测结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药情况,采用一致性检验和χ2检验进行分析,计算Kappa值评价线性探针法和比例法结果的一致性,以P0.05为差异具有统计学意义。结果 270株结核菌株标本中,使用线性探针法检测异烟肼耐药性的灵敏度为84.00%,特异度为97.54%,阳性预测值为77.78%,阴性预测值为98.35%,Kappa值为0.79;对利福平耐药性的灵敏度为95.83%,特异度为96.34%,阳性预测值为71.88%,阴性预测值为99.58%,Kappa值为0.80;对耐多药结核的灵敏度为80.00%,特异度为98.03%,阳性预测值为80.00%,阴性预测值为98.81%,Kappa值为0.73。与标准方法比例法相比,两者具有高度的一致性。结论线性探针法具有高度的特异性和敏感性,且高效、快速,能有效的弥补标准方法的不足,为乐山市耐药结核病的早发现、早治疗提供了有力的保障。     

江西1010例PCR-线性杂交酶显色法检测结核分枝杆菌耐药性结果分析

目的 评价PCR-线性杂交酶显色法在江西的应用效能，分析江西地区结核分枝杆菌相关耐药基因rpoB、katG、inhA的变异特征。方法 采集江西省肺结核涂阳患者痰标本或经离培养获得的分离株共1010例，采用PCR-线性杂交酶显色法检测rpoB、katG、inhA基因突变情况，同时对其中860例进行了罗氏药敏检测。结果 以罗氏药敏为“金标准”评价PCR-线性杂交酶显色法检测利福平耐药性的敏感度和特异度分别为88.69%和96.24%；检测异烟肼耐药性的敏感度和特异度分别为77.29%和96.39%。在304株利福平耐药rpoB突变株中，突变频率高的位点是531位点、526位点次之；309株katG和inhA基因突变株中，katG S315T1占73.14%、inhA C15T占12.62%。异质性耐药突变菌株占3.61%。结论 PCR-线性杂交酶显色法是耐药结核病快速筛查的有效方法，江西利福平、异烟肼耐药株主要基因突变型为rpoB的S531L和katG的S315T1，高水平耐药菌株所占比例大。     

BACTEC MGIT 960系统在分枝杆菌属菌种初步鉴定及药敏中的应用

目的评价BACTEC MGIT 960系统在分枝杆菌属菌种鉴定及药敏中的应用价值。方法显微镜观察BACTEC MGIT 960系统分离的162株分枝杆菌在液体培养基中的形态,传统生化和核酸检测法同时鉴定分枝杆菌属菌种,分析细菌形态与菌种之间的关系;应用BACTEC MGIT 960系统对分离的141株结核分枝杆菌进行药敏试验。结果 162株分枝杆菌属在MGIT液体培养基中呈索条状、分枝状、点粒状和分散状4种形态;呈索条状132株分枝杆菌属均为结核分枝杆菌,呈点粒状10株和分散状6株分枝杆菌属均为非结核分枝杆菌;对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药率分别为9.9%、14.2%、9.2%和6.4%,总耐药率18.4%,同时耐利福平和异烟肼的为8.5%;药敏平均检测时间为9.3 d。结论 BACTEC MGIT 960系统可快速将分枝杆菌属初步鉴定为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌,能快速准确获得临床一线抗结核药物的药敏结果。     

DNA芯片联合检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌及其临床应用

目的 开发快速检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因突变的DNA芯片.方法 根据结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核分枝杆菌的基因组DNA,PCR扩增含有上述几个基因突变位点的特异DNA片段,并事先在PCR引物的5′端作生物素标记,然后与膜条芯片上的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,通过生物素-链霉亲和素-过氧化物酶体系显色,直接观察突变情况,以此来判断耐药结果 .结果 35个利福平和异烟肼单耐药或多药耐药的结核分枝杆菌中有82.9%用芯片法检出的结果 与药敏培养法一致;其中利福平耐药样品突变检出率为100.0%;有20.0%异烟肼耐药的样品芯片未检出突变,可能是突变发生在芯片检测位点范围之外.结论 用DNA芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核分枝杆菌耐药性检测.     

BACTEC MGIT 960用于结核分枝杆菌快速培养的初步评价

目的评价BACTEC MGIT 960系统快速分离结核分枝杆菌及药敏试验的效果。方法对临床拟诊结核病患者痰样本,采用直接涂片萋-尼法抗酸染色显微镜检、BACTEC MGIT 960和改良罗氏(L-J)培养法进行检测,并对分离到的结核分枝杆菌进行药敏试验。比较其分离的阳性率、培养及药敏所需的时间。结果共对634例拟诊结核病患者痰样本进行了检测,MGIT960培养的阳性率(51.7%)明显高于L-J法(37.7%),直接涂片法阳性率最低(14.7%)。MGIT960和L-J法的污染率分别为4.9%和4.4%。MGIT960和传统的L-J法的检出时间分别为12.0 d和32.0 d。MGIT960和L-J法对异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇的药物敏感性检出时间分别为9.0 d和36.5 d。结论 BACTEC MGIT 960可以明显提高分离培养阳性率、缩短培养和药敏试验的时间。     

MGIT 960系统快速检测结核分枝杆菌药物敏感性的应用评价

[目的]评价液体培养及快速药敏检测技术(BACTEC MGIT 960系统)检测结核分枝杆菌对一线、二线8种抗结核药物敏感性的效果. [方法]用BACTEC MGIT 960系统对结核分枝杆菌临床分离株进行一线、二线8种抗结核药物的药物敏感性试验,以传统的L-J比例法药敏试验作对照,从结果报告时间和符合率等方面进行评价.统计学分析分别采用配对f检验和Kappa检验. [结果]用MGIT 960法与L-J比例法同时对202株结核分枝杆菌临床分离株进行一线药物异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇的药物敏感性检测,该两种方法对此4种药物的符合率分别为98.0％(198/202)、96.5％(195/202)、94.1％(190/202)和83.7％(169/202);而该两种方法对77株结核分枝杆菌临床分离株进行二线药物卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的药物敏感性检测符合率,分别为87.0％(67/77)、93.5％(72/77)、97.4％(75/77)和68.8％(53/77).MGIT 960法完成一线、二线药物药敏试验的时间中位数分别为11d和8d,而比例法规定判读时间为28 d,二者检测时间差异有统计学意义(P＜0.01). [结论]与传统比例法相比,BACTEC MGIT 960系统能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对一线、二线抗结核药物的敏感性,有利于耐药结核病的早期诊断和治疗.     

基因芯片法与线性探针法对痰标本中结核分枝杆菌检测的应用价值

目的探讨基因芯片法与线性探针法检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)的应用价值。方法海南医学院第二附属医院2018年3—7月门诊和住院的106例疑似肺结核患者纳入研究,采用基因芯片法、线性探针法对患者送检的痰进行检测,并与改良罗氏培养法进行比较;以比例法药敏试验为金标准,分析上述两种方法检测利福平和异烟肼耐药性的效能。结果对106份痰标本进行改良罗氏培养,阳性率为52.83%(56/106),经鉴定其中46份标本为MTB阳性。基因芯片法和线性探针法分别检出MTB46、53株,基因芯片法、线性探针法与改良罗氏培养法检测MTB结果比较,差异均无统计学意义(均P0.05)。基因芯片法、线性探针法与比例法检测MTB对利福平的耐药性比较,差异均无统计学意义,且具有较好一致性(均P0.05,均Kappa0.75)。对利福平的耐药性检测,基因芯片法的灵敏度、特异度分别为84.62%、90.00%,线性探针法分别为84.62%、85.00%。基因芯片法、线性探针法与比例法检测MTB对异烟肼的耐药性比较,差异均无统计学意义,但一致性一般(均P0.05、均Kappa0.75)。对异烟肼的耐药性检测,基因芯片法的灵敏度、特异度分别为69.23%(18/26)、95.00%(19/20),线性探针法分别为65.38%(17/26)、85.00%(17/20)。结论基因芯片法和线性探针法均可准确、快速地从大部分疑似结核病患者的痰标本中鉴定出MTB,也适用于利福平和异烟肼耐药结果的快速检测,从而指导临床用药,值得临床推广。     

2种快速检测技术在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用评价

目的探讨噬菌体扩增技术和基因芯片技术在结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药性检测中的应用价值。方法应用噬菌体法和基因芯片法直接检测380份痰样本,分析MTB对利福平的耐药性,同时对痰样本进行BACTEC MGIT 960培养,并用培养法对培养菌株做药敏试验,对3种方法检测的药敏结果进行比较。涂片阴性培养阳性样本,用临床分离株进行以上3种方法利福平耐药性检测并比较结果。对与培养法结果不一致的样本进行DNA测序。结果以培养法为参考方法,噬菌体法的综合灵敏度、特异度、准确度分别为87.8%(36/41)、94.1%(95/101)、92.3%(131/142);基因芯片法的综合灵敏度、特异度、准确度分别为82.9%(34/41)、96.0%(97/101)、92.3%(131/142),2种检测方法的综合灵敏度、特异度和准确度差异均无统计学意义(χ2=0.391、χ2=0.421、χ2=0,P0.05)。结论本次研究显示噬菌体法和基因芯片法检测结核分枝杆菌利福平耐药性均有较高的灵敏度、特异度和准确度,具有准确、快速的特点,在结核病快速诊疗领域有较好的应用前景。     

应用线性探针方法快速检测结核分枝杆菌耐药性的效果评价

目的评估线性探针方法快速检测结核分枝杆菌的耐药性效果。方法选取2013年-2014年江西省耐药监测点分离培养的阳性菌株,收集菌体,提取DNA,采用MTBDRplus试剂盒进行检测,以国际标准的比例法检测结果作为对照,评价其敏感度及特异度,并分析突变分布情况。结果检测利福平耐药的灵敏度为93.33%,特异度为98.35%;检测异烟肼的灵敏度为76.31%,特异度为98.83%。耐利福平基因突变频率最高的位点为rpo B H531L(57.89%),耐异烟肼基因突变频率最高的位点是kat G S315T1(60.61%)。结论可利用MTBDRplus快速检测利福平和异烟肼的耐药性,是快速发现耐药结核分枝杆菌的有效方法。     

线性探针技术快速诊断本溪地区耐多药肺结核效果评价

目的 评价线性探针技术(LPA)在本溪地区快速检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的特异性和敏感性。 方法 采用传统罗氏培养法培养2013年3月-2014年6月期间全市县区所有登记的414例涂阳肺结核患者痰标本,获得菌株经比例法药物敏感性试验和线性探针技术检测利福平和异烟肼耐药性,并以比例法药物敏感性试验为金标准分析线性探针方法的特异性和敏感性。 结果 经培养获得394株结核分枝杆菌菌株,与比例法药物敏感性试验相比较,线性探针技术检测利福平和异烟肼的特异性分别为97.9%和96.6%,敏感性分别为91.1%和81.3%;对耐多药检测的特异性和敏感性分别为98.8%和89.9%。 结论 线性探针技术是一快速、敏感、特异的诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼耐药和耐多药(MDR)的有效方法,可在本溪地区推广应用。     

两种快速方法联合检测结核分枝杆菌耐药性

目的建立联合检测结核分枝杆菌耐药性试验方法,以提高耐药检测方法的灵敏度和特异度。方法对126株已知耐药浓度的结核分枝杆菌耐药株和敏感株分别采用硝酸盐还原试验(Nitrate Reductase Assay,NRA)和反向斑点杂交试验(reverse-dot blot hybridization,RBH),检测其对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)的耐药性,并将结果与绝对浓度法结果相比较。结果硝酸盐还原试验和反向斑点杂交试验联合检测与绝对浓度法比较具有高度的一致性(P﹥0.05),异烟肼灵敏度95.5%,特异度100%;利福平灵敏度100%,特异度98.1%;链霉素灵敏度93.2%,特异度92.7%;乙胺丁醇灵敏度94.1%,特异度94.6%。结论硝酸盐还原试验和反向斑点杂交试验联合检测可作为快速结核分枝杆菌耐药性试验方法。     

实时荧光聚合酶链反应和结核培养仪法对非痰液标本结核杆菌检测的比较

目的评估比较实时荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)和结核培养仪(BACTEC960)法在检测非痰液标本中结核分支杆菌的特异性和灵敏度。方法对34例临床可疑患者用BACTEC960法和FQ-PCR技术2种方法作阳性检出率比较。结果FQ-PCR诊断肺外结核病的特异度为95%,灵敏度为14·3%。BACTEC960法诊断肺外结核病的特异度为100%,灵敏度为21·4%。结论BACTEC960法诊断结核病的特异性和灵敏度与国内外文献报道较一致,而实时荧光PCR技术诊断结核病的特异性和灵敏度与国内外文献报告有较大差异,明显低于平均阳性检出率。     

高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌对利福平耐药性研究

目的评价高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的临床应用价值。方法用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的50株临床分离菌进行耐药性检测。以rpoB基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用SPSS 17.0分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ~2检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异性。用Kappa检测分析两种结果的一致性。结果药敏试验结果显示,50株菌中有1株为非结核分枝杆菌;49株中有20株同时对利福平和异烟肼耐药、1株仅对利福平耐药;HRM检测结果显示,21株对利福平耐药,28株为敏感株。以传统药敏试验为参考,HRM检测利福平耐药性的敏感性为86.36%,特异性为92.59%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论 HRM可快速检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。     

GenoType MTBDRplus方法对结核杆菌耐药性的检测

目的应用Geno Type MTBDRplus方法和传统比例法,对结核分枝杆菌利福平耐药性进行对比检测。方法同一份痰标本分别进行Geno Type MTBDRplus方法和传统比例法检测,检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性。结果 52份涂片阳性痰标本,Geno Type MTBDRpuls方法检测结核分枝杆菌利福平耐药性的敏感度为75%,特异度为97.9%。结论Geno Type MTBDRpuls方法检测利福平耐药性,为临床早期诊断耐药结核病提供快速检测依据,利于临床早期合理治疗。     

Xpert MTB/RIF技术对结核分枝杆菌检测和耐多药结核快速筛查的研究

目的探讨Xpert MTB/RIF技术检测涂阳痰标本结核分枝杆菌和利福平耐药性的效能,分析该技术在不同利福平耐药率患者中进行耐多药结核诊断的应用价值。方法连续纳入769例涂阳肺结核患者的痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、分枝杆菌初步菌型鉴定、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测。结果 Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌的灵敏度为98.15%,特异度为70.00%。检测利福平耐药性与比例法药敏结果比较,Kappa值为0.859,灵敏度为93.04%,特异度为95.71%,复治涂阳患者特异度低于初治涂阳患者,阳性预测值和阴性预测值分别为85.47%和98.07%。结论 Xpert MTB/RIF技术能够快速检测出涂阳痰标本中结核分枝杆菌和利福平耐药性,具有较高的灵敏度和特异度。在云南省用于耐多药结核病患者快速筛查时,优先用于利福平耐药率较高的定点医院以及罹患耐多药高危人群。     

基因芯片技术在雅安市结核分枝杆菌耐药检测中的应用

目的评价基因芯片技术在雅安市结核分枝杆菌耐药检测工作中的应用价值。方法收集2016-06/2018-11雅安市结核病可疑患者痰培养分离株190株进行基因芯片菌种鉴定、耐药检测和比例法药敏试验。以比例法药物敏感试验为金标准,分析基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼和耐多药诊断的敏感度、特异度、正确指数。采用McNemar检验比较两方法有无差异;采用Kappa检验比较两方法的一致性。两方法有差异的部分样本用基因测序的方法进行比对。结果基因芯片技术进行菌种鉴定,190株分离株中,有186株为结核分枝杆菌,4株为非结核分枝杆菌。以传统比例法药敏试验为金标准,186株结核分枝杆菌对利福平检测的敏感度和特异度为90.0%和96.6%,正确指数为0.866;对异烟肼检测的敏感度和特异度分别为89.5%和99.4%,正确指数为0.889;对耐多药的敏感度和特异度分别75.0%和99.4%,正确指数0.744。两种检测方法比较差异均无统计学意义(McNemar检验,P值分别为0.125、1.000和1.000)。两种检测方法具有较高的一致性(Kappa值分别为0.701、0.910、0.792)。基因芯片技术检测利福平耐药相关rpoB基因突变率最高的位点为531;异烟肼耐药相关katG基因主要突变位点为315。结论基因芯片技术与比例法药敏试验具有较好的一致性,灵敏度高、特异性好,是一种值得推广的耐药结核病诊断方法,在地市级结核病检测中具有重要的应用价值。     

反向杂交膜片检测结核菌耐利福平基因突变

目的利用一种新型的反向点杂交膜片,快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变.方法根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计寡核苷酸探针并固定于尼龙膜上,用生物素标记的引物增扩结核分枝杆菌rpoB基因片断,与膜片上探针杂交,膜片检测结果与常规药敏试验结果和测序结果进行对照.结果对63株临床分离株进行检测,10株利福平敏感株未检测到突变,53株耐利福平株,其中48株检测到突变.灵敏度为90.6%,特异度为100%,阳性预测值100%,阴性预测值66.7%.用反向点杂交膜片检测27份肺结核患者的痰标本,17份非结核的痰液标本.12份耐利福平的痰标本中,11份检测到突变,膜片检测与药敏结果的符合率为92.3%;15份利福平敏感的痰标本中,膜片检测结果有6份出现突变信号;17份非结核病的其他患者的痰液标本中有1份检测到突变.检测痰标本的灵敏度为91.7%,特异度为78.1%,阳性预测值61.1%,阴性预测值96.1%.结论反向点杂交膜片可简便、快速、较准确地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变.