重度烧伤休克大鼠L—选择素转录水平表达的研究

目的和方法：２４只ＳＤ大鼠随机分为３组：正常对照组、烧伤１ｈ组、烧伤３ｈ组。用８０℃热水烫伤腰部以下肢体３０ｓ造成深Ⅱ度烧伤，复制大鼠重度烧伤休克模型。采集３组动物外周血，分离提取外周血白细胞总ＲＮＡ，与长臂光敏生物素标记的Ｌ－选择素探针进行点杂交。结果：与正常对照组比，两烧伤组Ｌ－选择素转录均下调，烧伤３ｈ组比烧伤１ｈ组又有下降。结论：休克时Ｌ－选择素转录减少可以减轻游离的白细胞进一步附壁粘着，这可能是休克时机体的自身保护机制之一；Ｌ－选择素转录减少可能造成炎症或感染时白细胞游出的减少，使机体的抵抗力下降。     

沉默微小RNA-218表达保护STZ诱导的糖尿病大鼠肾组织

目的:探讨沉默微小RNA-218(microRNA-218,miR-218)表达对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠肾脏组织的保护作用及其可能机制。方法:采用单次腹腔注射STZ(50 mg/kg)方法制备糖尿病大鼠模型并构建miR-218短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。SD大鼠被随机分为健康对照组、糖尿病模型组、空载慢病毒组及miR-218-shRNA组。于自动生化仪上检测不同时点(4、8和12周)大鼠血糖、24h尿蛋白量、血清肌酐(serum creatinine,SCr)及血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量。实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测肾脏组织miR-218的表达。RT-qPCR和Western blot检测血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、肾病蛋白(nephrin)和p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的mRNA及蛋白表达水平。Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测肾脏组织细胞凋亡。结果:与健康对照组相比,STZ处理后大鼠miR-218表达水平显著升高。同时模型大鼠的血糖、24 h尿蛋白量、SCr及BUN含量显著升高(P0.05);模型大鼠肾脏组织中HO-1和nephrin的mRNA和蛋白表达水平显著降低,而p38 MAPK蛋白的磷酸化水平显著升高;另外,模型大鼠肾脏组织中的caspase-3活性也显著升高。模型大鼠感染miR-218-shRNA后,miR-218表达水平显著下降并可以显著逆转上述效应。miR-218-shRNA组肾脏组织细胞的凋亡水平显著低于糖尿病模型组及空载慢病毒组。结论:miR-218参与了糖尿病大鼠的肾脏损伤,慢病毒载体沉默其表达能有效抑制肾脏组织细胞的凋亡,提示miR-218可以作为糖尿病肾病的基因治疗靶点。     

高粘血症大鼠心肌缺血缺氧时热休克蛋白,原癌基因表达的变化及意义

目的：研究高粘血症大鼠心肌发生缺血缺氧性损伤时原癌基因c－fos热休克蛋白（Hsp70）表达的变化及意义。方法：用免疫组化法（ABC法）检测高粘血症大鼠心肌组织和体外培养的心肌细胞缺氧后Hsp70和c－fos蛋白变化；用原位杂交法检测c－fosmRNA变化。用光镜、电镜观察心肌组织和心肌细胞的损伤。结果：发现c－fos蛋白在高粘血症大鼠心肌中明显增强，在体外培养的大鼠心肌细胞缺氧1h和4h后较对照组明显增强。c－fosmRNA表达也明显增强。上述变化与细胞损伤间呈正相关。结论：高粘血症引起的缺血缺氧可诱导c－fos表达增强和Hsp70增加，后者可能是心肌对缺血缺氧产生的应激反应产物。它们是一种早期防御代偿反应，并参与调节其他基因的变化。     

脊髓损伤大鼠远端神经元及骨骼肌的变化

背景:目前针对脊髓损伤病灶的研究较多,而对脊髓损伤后远端神经、肌肉及运动终板三者形态结构实时变化观察和研究的文献很少。目的:观察大鼠脊髓损伤后远端肢体神经、运动终板和骨骼肌随时间推移形态学变化的自然病程。方法:将50只雌性SD大鼠随机分为对照组5只(不做处理)、假手术组10只和脊髓损伤组35只,假手术组行单纯椎板切除术,脊髓损伤组在椎板切除基础上,用横断法制成T10完全脊髓损伤模型,然后在第1,2,4,12,24周分别观察3组大鼠坐骨神经-运动终板-内侧腓肠肌的形态变化。结果与结论:1脊髓损伤组大鼠4周时部分有髓神经纤维髓鞘出现板层分离;24周时崩解髓鞘板层已模糊、碎裂髓鞘增多,薄髓与无髓神经纤维较12周时增多。2脊髓损伤组大鼠运动终板在脊髓损伤12周时明显退变突触结构与较完整突触结构并存;24周时已找不到运动终板。3脊髓损伤组大鼠内侧腓肠肌在脊髓损伤24周时,肌细胞融合,细胞核密集,融合细胞间可见大小不一空隙,结缔组织增生更加明显。结果表明大鼠在完全性横断性脊髓损伤后自然病程中,损伤平面以下周围神经、运动终板、骨骼肌的形态结构均呈规律性改变,损伤后12周时已有显著变化,24周时呈结构毁坏性改变。     

热休克蛋白70在高脂血症大鼠肾脏中表达及意义

目的探讨高脂血症大鼠肾脏内热休克蛋白70(HSP70)的表达变化。方法 10只健康大鼠适应性喂养一周后随机分成正常组和高脂血症组。12周后取血,检测血脂;取肾组织分别进行HE染色和HSP70免疫组织化学染色,应用计算机图像分析系统检测HSP70的平均光密度变化。结果血脂检测结果显示:正常组TG、TC和HDL-C与高脂血症组存在差异。HE染色结果显示:高脂血症组部分肾小管上皮细胞破碎,核固缩,胞浆轻微肿胀变性,细胞排列紊乱。肾小囊周围有少量炎性细胞浸润,肾小囊内细胞有空泡形成。免疫组化结果显示:高脂血症组肾小管HSO70表达强于正常组。图像分析结果显示:与正常组HSP70的平均光密度值(0.1185±0.0078)比较,高脂血症组HSP70平均光密度值(0.3106±0.0484)增高,有统计学差异(P0.05)。结论高脂血症可导致大鼠肾组织内HSP70表达增高,高脂血症大鼠肾组织形态学损伤与HSP70含量的增高具有一致性。     

休克大鼠骨骼肌微循环中白细胞流态的变化及虎杖4号的治疗作用

研究表明白细胞粘着于细静脉壁和嵌塞毛细血管是重症难治性休克治疗以后,微循环灌流量不易恢复的主要原因之一。休克时细静脉中白细胞和内皮细胞的相互作用带来两方面的损害;一是使毛细血管后阻力明显增     

系统性红斑狼疮患者外周血中微小RNA-148a及靶基因的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中微小RNA-148a及靶基因DNA甲基转移酶1的表达变化及其临床意义。方法采集来自我院的31例SLE患者和22名健康对照者的外周抗凝血,定量PCR检测外周血单个核细胞中微小RNA-148a(hsa-miR-148a)及DNA甲基转移酶1mRNA水平,进一步分析hsamiR-148a的含量与DNA甲基转移酶1的表达和SLE患者疾病活动指数的相关性。结果 SLE患者的外周血中hsa-miR-148a的表达水平明显高于对照组(P0.05),DNA甲基转移酶1的mRNA水平显著低于对照组(P0.05),两者的含量呈显著负相关(P0.001)。而且SLE患者的外周血细胞hsa-miR-148a表达与SLEDAI积分正相关(P0.01)。结论 hsamiR-148a可能通过调节靶基因DNA甲基转移酶1的表达、降低细胞基因组甲基化水平从而参与SLE的发病,hsa-miR-148a可能成为一个新的SLE分子标志物及药物干预靶点。     

微小RNA-125b在急性白血病中的表达及作用研究

目的分析微小RNA-125b在急性白血病中的表达和作用。方法选取我院2013年7月~2014年12月收集急性白血病标本67例为研究对象,依照患者治疗表现分为初治组31例、难治复发组16例和完全缓解组20例,另外选取我院同期收治非恶性血液病患者骨髓11例为对照组,分析微小RNA-125b表达。结果紫外光分光光度计检测,大部分OD260/280比值在1.8~2.2,纯净度和完整性较高,初治白血病mi RNA-125b表达相对量(3.052±0.118)显著高于对照组(0.878±0.161)和完全缓解组(1.489±0.062),P0.05,白血病患者mi RNA-125b表达均显著高于对照组,P0.05,经过化疗,患者mi RNA-125b表达下降,对照组患者mi RNA-125b表达(0.878±0.161)显著低于ANLL(2.952±0.152)、ALL(1.866±0.857),P0.05,AML患者M3亚型mi RNA-125b表达显著高于其他类型,P0.05,初治组PML/RARa基因阳性患者mi RNA-125b表达(3.105±0.861)显著高于对照组(0.878±0.161),且mi RNA-125b表达显著高于融合基因阴性患者(1.463±0.169),P0.05,mi RNA-125b表达与骨髓原始幼稚细胞呈现正相关,P0.05,与其他临床因素、年龄、性别无明显关系,P0.05。结论急性白血病患者微小RNA-125b过表达,表达水平与疾病类型和程度有关,推测动态监测微小RNA-125b表达可以作为预后分子为临床治疗提供指导意义。     

热休克蛋白20在大鼠急性尿潴留膀胱中的表达及意义

目的研究热休克蛋白20（Hsp20）在大鼠急性尿潴留（AUR）模型膀胱中的表达及其与逼尿肌收缩功能的关系。方法通过结扎尿道口的方法建立大鼠急性尿潴留动物模型,利用充盈性膀胱测压的方法检测膀胱收缩功能,采用免疫荧光染色的方法分别检测急性尿潴留膀胱排空后不同时相点（0 h、1 h、6 h、12 h、24 h、3 d、5 d、7 d）大鼠膀胱逼尿肌Hsp20的表达情况,采用western blot的方法比较尿潴留后不同时相点Hsp20含量的差异。结果 AUR后1h、6h、12h、24h组大鼠逼尿肌收缩力呈时间依赖性递减,均较0h组显著下降（P〈0.05）;3d、5d、7d组最大逼尿肌压较1h、6h、12h和24h组显著回升,但仍低于0h组和对照组（P〈0.05）;AUR各组Hsp20表达明显高于对照组,梗阻后24 h内Hsp20表达呈逐步上升趋势,而24 h至7 d则是逐渐降低的,其差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 AUR后膀胱逼尿肌中Hsp20表达的上调很可能对逼尿肌细胞有一定的保护作用,但AUR后Hsp20的高表达可能也是逼尿肌细胞收缩功能受到抑制的重要因素之一。     

热休克蛋白27在大鼠急性尿潴留膀胱中的表达及意义

目的研究热休克蛋白27（HSP27）在大鼠急性尿潴留（AUR）模型膀胱中的表达及其与逼尿肌收缩功能的关系。方法通过尿道口钳夹的方法建立大鼠急性尿潴留动物模型,利用充盈性膀胱测压的方法检测膀胱收缩功能,采用免疫荧光染色的方法分别检测急性尿潴留膀胱排空后不同时相点（0、2、4、6h）大鼠膀胱逼尿肌HSP27的表达情况,采用Western-blot的方法比较尿潴留后不同时相点HSP27含量的差异。结果 AUR后2、4、6h大鼠逼尿肌收缩力呈时间依赖性递减,均较0 h组显著下降（P〈0.05）;其膀胱组织中HSP27的含量亦显著低于0h组,各组的HSP27表达均高于对照组（P〈0.05）。结论 HSP27可能在急性尿潴留致逼尿肌收缩功能障碍发病过程中起到重要作用。     

有氧训练大鼠腓肠肌组织微小RNA-133a和肌细胞增强因子2的表达***

背景：研究表明微小RNA-133a、肌细胞增强因子2和成肌分化抗原可调解骨骼肌的分化与重塑。 目的：观察有氧训练对腓肠肌微小RNA-133a、肌细胞增强因子2和成肌分化抗原表达的影响。 方法：将SD大鼠随机分为对照组和有氧训练组,有氧训练组采用大鼠跑台运动模型,而对照组不进行运动训练。训练4,6周后采集各组大鼠腓肠肌组织,并称取腓肠肌的质量,实时定量PCR检测骨骼肌中肌球蛋白、微小RNA-133a、肌细胞增强因子2与成肌分化抗原mRNA的表达,并采用免疫组织化学的方法检测腓肠肌Ⅱ型肌纤截面积的改变。         结果与结论：训练4,6周,有氧训练组大鼠腓肠肌的相对质量以及肌球蛋白重链-Ⅱa的表达水平较对照组显著增加(P < 0.05或P < 0.01),Ⅱ型肌纤维横截面积即显著增大(P < 0.05),其微小RNA-133a和肌细胞增强因子2 mRNA的表达较对照组显著升高(P < 0.05,P < 0.01),而成肌分化抗原mRNA的表达在各组间差异均无显著性意义。证实,有氧训练可上调大鼠腓肠肌组织微小RNA-133a、肌细胞增强因子2 mRNA的表达。     

巨噬细胞中脂多糖诱导微小RNA-155表达与地塞米松的抑制

BACKGROUND: It is unclear about dexamethasone effect on the regulation of microRNA-155 expression in macrophages. OBJCTIVE: To explore whether dexamethasone can regulate the expression of microRNA-155 in macrophages. METHODS: (1) Lipopolysaccharide stimulation of mouse macrophages: mouse macrophage cell lines, Raw264.7 cells, were cultured in vitro and stimulated by lipopolysaccharide. Cultured cells were collected at 0, 0.5, 2, 6 hours after culture to detect the dynamical expression of microRNA-155. (2) Dexamethasone intervention for macrophages: Macrophages were divided into four groups: control group treated with phosphate buffer; lipopolysaccharide group stimulated by lipopolysaccharide; combined group given intervention with dexamethasone and lipopolysaccharide; dexamethasone group cultured with dexamethasone. At 6 hours after culture, cell supernatant was collected to detect the expression of tumor necrosis factor α and interleukin-6 using ELISA method. Real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of microRNA-155 in the Raw264.7 macrophages. RESULTS AND CONCLUSION: Lipopolysaccharide significantly increased the expression of tumor necrosis factor α, interleukin-6 and microRNA-155 after 6 hours of culture (P < 0.05). Combined use of dexamethasone and lipopolysaccharide slightly increased the expression of tumor necrosis factor α, interleukin-6 and microRNA-155 (P < 0.05). Dexamethasone alone had no influence on the expression of tumor necrosis factor α and interleukin-6, but significantly decreased the expression of microRNA-155 (P < 0.05). These findings indicate that dexamethasone can inhibit the expression of microRNA-155 in the macrophages induced by lipopolysaccharide.      

脓毒症糖尿病大鼠肺组织DDAH2表达变化及意义

目的：观察二甲基精氨酸二甲胺水解酶2（dimethylarginine dimethylaminohydrolase 2,DDAH2）在糖尿病脓毒症机体中的表达变化,探讨血管内皮功能损害的发生机制。方法：64只Wistar大鼠随机分为正常对照组、单纯脓毒症组、糖尿病组、糖尿病脓毒症组,每组16只。免疫组织化学方法观察肺组织结构变化及DDAH2表达的分布变化。Griess法测定血清及肺组织一氧化氮（nitrite oxide,NO）含量,real-time PCR测定肺组织DDAH2 mRNA水平。结果：免疫组织化学显示糖尿病组大鼠肺组织平均光密度值（average optical density value,AOV）无明显变化,RT-PCR显示DDAH2 mRNA表达水平低于正常对照组（P〈0.05）;脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）腹腔注射后,单独脓毒症组和糖尿病脓毒症组肺组织DDAH2 AOV值及mRNA表达较正常对照组均明显降低（均P〈0.01）;且糖尿病脓毒症组AOV值低于单纯脓毒症组（P〈0.01）,DDAH2 mRNA表达亦低于单纯脓毒症组（P〈0.05）。糖尿病脓毒症组及单纯脓毒症组血清及肺组织中NO水平均增高,血清测定前者低于后者（P〈0.05）,但肺组织中前者高于后者近2倍（P〈0.05）。结论：脓毒症肺表现为DDAH2表达下调,糖尿病脓毒症肺组织表现为DDAH2表达更为明显下调,提示存在更为严重的血管内皮细胞损害,因此DDAH2表达下调可能参与脓毒症糖尿病机体肺损伤的发生。     

肾性高血压大鼠主动脉HO-1表达的变化及意义

目的：为了探讨肾性高血压时血红索加氧酶(HO)／一氧化碳(CO)系统是否发生了改变，我们利用两肾一夹(2K1C)肾性高血压大鼠模型，检测了不同时期高血压大鼠HO的活性改变及4周时HO-1蛋白表达的情况，以明确血红索加氧酶在肾性高血压发病过程中的变化和作用。方法：(1)制作两肾一夹肾性高血压大鼠模型，分别于2、4、6、8周记录大鼠的血压变化，并利用放免法测定了组织和血浆中血管紧张索Ⅱ的含量；(2)利用体外反应测终产物胆红索生成量方法取大鼠主动脉测定微粒体中HO的活性；(3)取4周高血压大鼠主动脉，利用Western blot方法测定HO-1蛋白的表达情况。结果：(1)术后1周血压     

胰岛素抵抗大鼠骨骼肌蛋白激酶B的表达

蛋白激酶B(pmtein kinaseB,PKB)具有促进生长、增殖、抑制凋亡的作用,对糖代谢有明显影响。本研究通过高脂喂养诱导sprague-Dawley(SD)大鼠产生胰岛素抵抗,检测大鼠骨骼肌中胰岛素诱导的蛋白激酶B的表达的改变,揭示胰岛素抵抗与蛋白激酶B表达的关系。     

小鼠止血带休克后肾组织ACE/ACE2表达变化及意义

目的: 通过观察小鼠止血带休克(TS)后,不同时点血管紧张素转换酶(ACE)和血管紧张素转换酶2(ACE2)在肾脏的表达变化与肾损伤程度的关系,探讨ACE/ACE2表达失衡在TS后肾损伤中的作用。方法: 复制小鼠TS模型,Western blotting测肢体缺血再灌注后12 h内肾组织ACE和ACE2蛋白的表达;利用化学比色方法测定血清和肾组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;制作肾病理切片,观察肾组织形态变化,并利用免疫组织化学方法观察ACE和ACE2的表达部位。结果: Western blotting结果显示,各时点与对照组比较,TS后ACE表达升高,ACE2表达降低;与对照组比较血清和肾MDA水平增高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05);HE病理切片显示,TS后各时点肾组织有充血、炎细胞浸润等不同程度损伤;免疫组化结果显示,ACE在肾小管上皮细胞胞浆表达,TS后表达明显增强;ACE2主要在肾小管上皮细胞管腔膜表达,TS后表达明显降低。结论: TS后肾组织ACE表达升高,ACE2表达降低,ACE/ACE2表达失衡可能与肾损伤有关。     

严重烫伤大鼠脑内MMP-9及NOS表达变化及意义

目的:观察严重烫伤大鼠脑内基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及一氧化氮合酶(NOS)的表达变化,分析两者之间的关系及意义。方法:建立30%TBSAⅢ度烫伤SD大鼠模型,应用免疫组化法检测大鼠脑内MMP-9的表达变化,NADPH-d组织化学方法检测脑内NOS的表达变化,用干湿法检测脑百分含水量。结果:严重烫伤后脑百分含水量增高,以6～12h最为显著;烫伤后3hMMP-9阳性细胞数开始增多,12～24h阳性细胞数增加达高峰;48h阳性细胞数开始下降。大鼠严重烫伤后3,12,24h大脑皮质及烫伤后3,24h的纹状体内NOS阳性神经元数量明显增多。讨论:严重烫伤后脑内MMP-9和NOS均升高,可能与血脑屏障损害及脑水肿的形成有关。     

休克时淋巴微循环变化的意义

大鼠68只,分4组。应用活体显微电视录像、观察出血性休克早期、晚期补液期及补液后期肠系膜微淋巴管(MLV)自主收缩性和静态口径的变化;肠淋巴管插管,观察相应时期肠淋巴流量、淋巴蛋白含量和淋巴