细胞密度调节结肠癌细胞整合素αvβ6表达——癌细胞永生化侵袭生长机制的研究

目的：探讨细胞高密度和细胞挤压状态对结肠癌细胞表面整合素αvβ6表达的影响效果，探讨结肠癌细胞永生化侵袭生长的机制。方法：用流式细胞术检测结肠癌细胞系WiDr、Sw480细胞株和人正常角质细胞系HaCaT细胞株，在高低密度培养条件下各细胞表面的αvβ6表达水平；同时将100例结肠癌标本高细胞密度易侵袭的肿瘤边缘部分及低细胞密度的肿瘤中心部分制作成200点的组织芯片，用免疫组织化学方法检测整合素叫B6在结肠癌不同部位的分布和表达差异。结果：表达αvβ6的结肠癌细胞出现细胞密度依赖的αvβ6表达增加，而缺乏αvβ6表达的癌细胞和正常角质细胞系HaCaT细胞在高低密度培养条件下αvβ6表达没有改变。组织芯片免疫组织化学检查结果显示结肠癌αvβ6阳性表达率为38％，在癌细胞密度高、细胞拥挤的肿瘤边缘部分αvβ6高表达占73．7％（28／38），且αvβ6密布于肿瘤侵袭边缘，而肿瘤中央组织以仅αvβ6低表达为主，高表达仅占28．9％（11／38）。结论：细胞高密度和细胞挤压状态诱导癌细胞αvβ6表达可能是构成结肠癌细胞永生化侵袭性生长的基础。     

整合素αvβ3在大肠癌中的表达及其意义

整合素αvβ3是血管整合素的一种，在血管中的表达具有较高的特异性，被认定为新生血管的标志物。为了进一步探讨整合素αvβ3在大肠癌中的变化规律，我们采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）技术及免疫组织化学技术分别在mRNA转录水平和蛋白水平检测大肠癌标本肿瘤组织及远癌切端组织中整合素αvβ3的表达，探讨整合素αvβ3在大肠癌中侵袭转移的作用，为大肠癌合理的临床诊治及准确的预后评估提供理论依据。     

整合素αvβ3和VEGF在前列腺癌的表达及临床意义

目的 探讨整合素αvβ3和血管内皮生长因子（VEGF）在前列腺癌（PCa）中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法（SP法）检测整合素αvβ3和VEGF在41例前列腺癌中的表达,20例正常前列腺组织作对照.结果 前列腺癌组织中整合素αvβ3和VEGF的表达上调,与正常组织比较差异具有统计学意义（P〈0.01）.整合素αvβ3和VEGF的表达均随着PCa的病理分级、临床分期增加其表达上调（P〈0.05）,与PCa的病理分化程度呈负相关（P〈0.01）.在各术前血清PSA值组中,整合素αvβ3及VEGF表达无统计学差异（P〉0.05）.整合素αvβ3与VEGF表达呈正相关（rs=0.220）,相关有显著性（P〈0.05）.结论 整合素αvβ3和VEGF可能在前列腺癌的发生、发展及恶性进展过程中起重要作用.将二者结合分析,有助于判断PCa的恶性程度、转移潜能和预后.     

黄芪通过c-met调控TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化

AB 目的：探讨黄芪对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质分泌的作用及机制。方法：体外培养正常大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）,应用倒置相差显微镜观察NRK52E细胞形态学变化;免疫组织化学染色法及实时荧光定量PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,肝细胞生长因子HGF受体（c-met）的表达;ELISA法定量检测细胞上清液中胶原Ⅰ（Col-Ⅰ）,胶原Ⅲ（Col-Ⅲ）和纤维黏连蛋白（FN）的水平。结果：TGF-β1可诱导肾小管上皮细胞肌成纤维细胞转分化（TEMT）,TGF-β1诱导组细胞肥大、拉长,呈长梭形,α-SMA表达明显增强,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN分泌增加（P〈0.05）。加入不同浓度黄芪后,细胞形态接近正常肾小管上皮细胞形态,α-SMA表达、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN分泌均较TGF-β1诱导组明显抑制（P〈0.05）,c-met表达较TGF-β1诱导组增加（P〈0.05）且呈剂量依赖性。结论：TGF-β1可以诱导肾小管上皮细胞肌成纤维细胞转分化,增加细胞外基质成分Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的分泌;黄芪能够抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞转分化以及细胞外基质的分泌;黄芪抑制细胞转分化的机制可能与其增强c-met的表达有关。     

整合素αvβ6与钙黏蛋白Fat1在结肠癌中的表达差异性及其意义

目的：探讨整合素αvβ6和钙黏蛋白Fat1在结肠癌中的表达情况,进一步揭示其背后的意义。方法：将100例结肠癌标本的肿瘤边缘部分及肿瘤中心部分制作成200点的组织芯片,用免疫组织化学方法检测整合素αvβ6和钙黏蛋白Fat1在结肠癌不同部位的分布和表达差异。利用siRNA技术和转基因技术对HT-29结肠癌细胞和SW480结肠癌细胞进行试验分组,用流式细胞术检测各组结肠癌细胞表面整合素ανβ6和钙黏蛋白Fat1表达水平;应用Western Blot分析各组结肠癌中Ras蛋白活化的情况。结果：肿瘤侵袭边缘,整合素αvβ6呈现高表达,而钙黏蛋白Fat1低表达;瘤体中央,整合素αvβ6低表达,而钙黏蛋白Fat1高表达。流式细胞分析证实在结肠癌细胞表面,整合素αvβ6和钙黏蛋白Fat1表达水平同样呈现负相关关系。Western Blot分析证实,整合素αvβ6能够促进结肠癌细胞Ras蛋白的活化水平。结论：整合素αvβ6和钙黏蛋白Fat1在结肠癌中呈现负相关表达,αvβ6通过抑制Fat1功能促进Ras蛋白的活化。     

整合素αvβ6在胃癌AGS细胞增殖和凋亡中的作用

目的：研究整合素αvβ6在胃癌AGS细胞增殖和凋亡中的作用。方法：用单克隆抗体10D5封闭AGS细胞表面αvβ6功能,并采用10D5的阴性对照剂鼠IgG2a处理细胞作为阴性对照。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot检测caspase-3蛋白的表达情况。结果：用10D5封闭αvβ6后,10D5组AGS细胞的存活率较对照组和IgG2a组下降,而凋亡率和caspase-3的表达水平则增加,差异均有统计学意义（P〈0.05）。IgG2a组与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：整合素αvβ6表达促进胃癌AGS细胞增殖并抑制其凋亡。     

整合素αvβ3对乳腺癌骨髓微转移的作用

目的研究整合素αvβ3在乳腺癌骨髓微转移中的作用.方法流式细胞仪检测乳腺癌细胞株MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s中整合素αvβ3的表达,细胞黏附、迁移试验及共聚焦显微镜检测整合素αvβ3功能,实时荧光定量RT-PCR检测抗整合素αvβ3抗体LM609对裸鼠乳腺癌骨髓微转移模型的影响.结果MCF-7细胞膜上整合素αvβ3受体为阴性,MDA-MB-231、MDA-MB-435s细胞膜上整合素αvβ3受体为阳性.用LM609封闭αvβ3受体后,αvβ3受体阳性细胞对细胞外基质蛋白中玻璃体结合蛋白的黏附和迁移能力显著减弱.以αvβ3受体阳性细胞制作的裸鼠乳腺癌骨髓微转移模型中,经LM609处理后,可显著减少乳腺癌骨髓微转移的肿瘤细胞（P＜0.05）.结论整合素αvβ3受体过度表达增强乳腺癌细胞黏附和迁移能力,从而促进肿瘤细胞的骨髓微转移,而以Lm609封闭αvβ3受体可抑制上述作用.     

功能性β1整合素-GFP融合蛋白稳定过表达肝癌细胞系的建立

目的建立β1整合素-绿色荧光蛋白（GFP）稳定过表达人肝癌细胞系并检测其对各基质蛋白的黏附能力。方法构建β1整合素-GFP融合蛋白真核细胞重组表达质粒，并将其转染至人肝癌Hep3B细胞，建立稳定过表达β1整合素的肝癌细胞系。利用RT-PCR，Western印记，免疫沉降和荧光显微镜观察融合基因；检测转染细胞的增殖情况及对各基质蛋白的黏附能力。结果获得即整合素-GFP融合蛋白稳定转染过表达Hep3B细胞系；转染的β1整合素能与内因性α1，α5，α6整合素亚型形成二聚体；转染β1整合素对细胞增殖无明显影响，但使细胞对各基质蛋白的黏附能力明显增高。结论建立了功能性β1整合素-GFP稳定过表达的人肝癌细胞系，为进一步研究β1整合素基因的功能提供了一个有效的细胞系。     

整合素αvβ6-ERK信号通路负调控钙黏蛋白Fat-1促进结肠癌细胞侵袭的分子机制研究（英文）

目的 :明确整合素αvβ6能否调控钙黏蛋白Fat1表达,及其可能的信号传导通路,进一步揭示其促进结肠癌侵袭的分子机制。方法:分别孵育HT-29及SW480结肠癌细胞,利用si RNA技术和转基因技术调控整合素αvβ6的表达,并根据其表达情况进行实验分组;应用Western Blotting分析各组结肠癌细胞中Total-ERK、phosphate-ERK和Fat-1蛋白的表达情况。利用ERK特异性抑制剂PD98059,观察阻断ERK活化后Fat-1的表达情况。明胶酶谱分析αvβ6的表达与否与肿瘤细胞分泌Gelatinase B的情况。结果:通过干预整合素αvβ6表达,能够负向调控钙黏蛋白Fat-1表达,阻断ERK磷酸化过程能够抑制αvβ6对Fat-1的负向调控作用。明胶酶谱分析证实整合素αvβ6能够促进Gelatinase B表达。结论:整合素αvβ6对钙黏蛋白Fat1在结肠癌中的表达有负向调控作用,αvβ6-ERK信号通路可能涉及这一分子机制,增强αvβ6表达能够促进肿瘤细胞侵袭转移。     

elF4E和整合素αvβ6在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨elF4E和整合素αvβ6在结肠癌组织中的表达及临床意义.方法：采用免疫组化SP法检测69例结肠癌及30例正常结肠组织中elF4E和整合素αvβ6蛋白的表达,并分析二者与结肠癌临床病理因素的关系.结果：结肠癌组织中elF4E和整合素αvβ6蛋白的表达明显高于正常结肠组织,差异有统计学意义（P＜0.01）.elF4E表达与淋巴结转移有关（P=0.013）,整合素αvβ6表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床TNM分期有关（P=0.027,P=0.034,P=0.031）.结肠癌组织中elF4E与整合素αvβ6蛋白的表达呈低度正相关（P=0.016,r=0.288）.Kaplan-Meier法生存分析显示,elF4E和整合素αvβ6蛋白的表达与患者5年生存率显著相关（P=0.008,P=0.040）.Cox回归分析显示,elF4E及整合素αvβ6蛋白的表达水平、组织分化程度、肿瘤浸润深度和年龄是结肠癌的独立危险因素,其中elF4E高表达和α V β 6阳性表达的相对危险度分别是4.212 （95％ Cl：1.779,9.973）和2.774（95％ Cl：1.148,6.700）.结论：结肠癌组织中elF4E和整合素αvβ6蛋白可作为结肠癌患者术后预后不良的独立预测指标,二者潜在的信号通路可能成为治疗结肠癌的新靶点.     

TGF-β诱导人肝癌细胞系凋亡信号转导机理的研究

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人肝癌细胞系凋亡及其与β53基因及Smad4的关系。方法选用3种含有不同β53基因状态的人肝癌细胞系，均分为TGF-β1诱导组（实验组）和对照组；应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）对TGF-β1诱导的肝癌细胞的凋亡进行定量检测；另外，应用Lipofectamine 2000把含有Smad4结合元件和荧光素酶基因的TGF—β1可诱导的荧光素酶报告质粒对细胞进行转染，再经TGF-β1作用，分别检测其相对荧光素酶活性。结果在应用TUNEL检测的3个细胞系中，TGF—β1能诱导HepG2细胞（野生型β53）凋亡，其细胞凋亡率实验组明显高于对照组（P〈0．05）；而Huh-7（突变型β53）和Hep3B细胞（缺失型β53）凋亡细胞较少，其细胞凋亡率实验组与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。荧光素酶检测提示，HepG2细胞的Smad4表达活性实验组明显高于对照组（P〈0．05）；而Huh-7和HepB细胞的Smad4表达较低，实验组与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Hep2细胞系比Huh-7和HepB细胞系更易发生TGF-β1诱导的凋亡．Smad4是TGF-β1信号转导途径的主要调控因子之一。     

核因子κB反义寡核苷酸对转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下，核因子κB（NF-κB）反义寡核苷酸对体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化的影响。 方法 采用脂质体介导的方法将NF-κB反义寡核苷酸（AS-ODN）导入细胞，以TGF-β1（10 μg/L）刺激HK-2细胞24 h后，用RT-PCR方法检测细胞中NF-κB mRNA及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA表达，用荧光光谱法分析α-SMA蛋白的表达，并以倒置相差显微镜观察细胞转分化过程的形态变化。 结果 TGF-β1诱导24 h后，HK-2细胞中NF-κB mRNA的表达显著上调，为空白对照组的8倍以上（P < 0.01）。NF-κB反义寡核苷酸导入细胞后，可显著抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞的 NF-κB mRNA表达，比TGF-β1组减少75％（P < 0.05），同时，α-SMA mRNA和蛋白表达亦较TGF-β1组均明显下调（P < 0.05）。 结论 NF-κB反义寡核苷酸可抑制TGF-β1诱导肾小管上皮细胞NF-κB的表达，抑制肾小管上皮细胞转分化，可能有利于肾间质纤维化的防治。     

新型接头蛋白CARMA3在肝癌HepG2细胞中的表达与意义

目的观察新型接头蛋白CARMA3在肝癌HepG2细胞中的表达,以及CARMA3在G蛋白偶联受体诱导核转录因子κB(NF-κB)激活中的作用。方法提取肝细胞肝癌的总mRNA和蛋白,用逆转录PCR、免疫沉淀和免疫印迹方法检测肝脏肿瘤细胞中CARMA3基因和蛋白的表达水平。负显性CARMA3质粒转染肝脏肿瘤细胞24 h后用溶血磷脂酸(LPA)诱导NF-κB的激活,提取胞浆蛋白和核蛋白,用免疫印迹和电泳迁移试验检测负显性CARMA3的表达和IKK及NF-κB的活化。结果肝细胞肝癌表达CARMA3。在肝脏肿瘤细胞中转染负显性CARMA3后,LPA所诱导IKK和NF-κB的激活被显著抑制。结论肝细胞肝癌表达CARMA3。GPCR(LPA)-CARMA3-NF-κB信号传导通路存在于肝细胞肝癌中。抑制CARMA3的功能可以阻遏GPCR(LPA)所诱导的NF-κB的激活,由此为肝细胞肝癌的治疗提供了新的思路。     

去甲斑蝥素阻断αvβ6-ERK-ETS1信号通路抑制结肠癌细胞上皮-间质转化实验研究

目的:探讨去甲斑蝥素抑制结肠癌细胞上皮-间质转化的分子机制,为中药抗癌机制的研究奠定基础。方法:将HT-29结肠癌细胞经NCTD处理后,光镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测处理前后细胞表面上皮表型及间质表型标志物的变化情况;Western Blotting分析常见调控细胞EMT过程信号传导通路中关键分子及其磷酸化状态的变化;转录因子活化技术观察核因子磷酸化状态的变化。结果:显微镜下观察发现,经NCTD处理后,结肠癌细胞EMT过程受到抑制;流式细胞术证实肿瘤细胞整合素αvβ6表达降低,同时上皮表型标志物表达升高,间质表型标志分子表达减少;Western Blotting分析常见调控细胞EMT过程信号传导通路中仅有ERK及p-ERK表达水平降低,其他关键蛋白无明显变化;转录因子活化技术发现利用si RNA技术干扰整合素αvβ6后,ERK下游的核转录因子中仅有ETS-1磷酸化水平改变,Western Blotting分析证实经NCTD处理后出现与干扰αvβ6表达造成的一致性改变。结论:去甲斑蝥素通过阻断αvβ6-ERK-ETS1信号通路抑制结肠癌细胞上皮-间质转化过程,从而发挥抗癌作用。     

整合素连锁激酶介导转化生长因子β1上调肾小管上皮细胞表达纤连蛋白的研究

目的 研究转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肾小管上皮细胞合成纤连蛋白（FN）与整合素连锁激酶（ILK）表达的关系.方法 培养人肾小管上皮细胞（HKC）,用蛋白印迹方法检测TGF-β1诱导HKC合成FN和表达ILK的作用.通过基因转染的方法,将含人野生型ILK基因的表达质粒pCMV-wtILK和无激酶活力的人ILK基因表达质粒pCMV-kdILK转染HKC细胞,观察ILK过度表达和抑制ILK活力对TGF-β1诱导的HKC合成FN的影响.结果 TGF-β1能够刺激HKC合成FN,其作用呈剂量依赖性.TGF-β1刺激8 h即可上调HKC细胞ILK的表达,与TGF-β1所致的FN合成的增加相一致.转染pCMV-wtILK质粒的HKC细胞,其FN的表达呈增加趋势.转染pCMV-kdILK抑制ILK的活力能够显著拮抗TGF-β1刺激HKC表达FN的作用.结论 TGF-β1刺激肾小管上皮细胞FN合成与其所致的ILK表达密切相关.抑制ILK的活力能够拮抗TGF-β1导致的FN合成.     

整合素αVβ3、VEGF及MMP-9在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的：检测整合素αVβ3、血管内皮细胞生长因子（VEGF）及基质金属蛋白酶9（MMP-）在人膀胱移行细胞癌的表达,探讨整合素αVβ3与膀胱移行细胞癌血管生成及浸润转移的关系。方法：采用免疫组织化学SABC法检测59例膀胱移行细胞癌组织及15例正常膀胱黏膜组织中整合素αVβ3、VEGF、MMP-9的表达情况。结果：59例膀胱移行细胞癌中αVβ3、VEGF、MMP9的阳性表达率分别为45.76％、64.41％和55.93％,15例正常膀胱黏膜组织中三者的阳性表达率分别为13.33％、6.67％和6.67％三种蛋白在膀胱移行细胞癌与正常膀胱黏膜组织间的表达阳性率差异均有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）;αVβ3、VEGF、MMP-9的表达与膀胱移行细胞癌的分级分期相关;αVβ3、VEGF的表达与膀胱移行细胞癌的癌灶直径、单发／多发相关;αVβ3的表达与膀胱移行细胞癌患者的年龄相关;整合素αVβ3与VEGF及MMP-之间的阳性表达均呈正相关（r=0.3703,r=0.3182,P〈0.01）。结论：整合素αVβ3在膀胱移行细胞癌中表达升高,并与分级分期等指标相关,表明其具有促进膀胱移行细胞癌生长的作用。整合素αVβ3可能通过协同VEGF及MMP-9作用,促进膀胱移行细胞癌的血管生成及侵袭转移。     

机械负荷调节猪腰椎间盘细胞表达α5β1整合素的体外研究

目的研究α5β1整合素在体外培养的猪腰椎间盘细胞中的表达和机械负荷对其的影响。方法取10只年龄5-6周、体重25-30kg的猪，处死后12h内，无菌条件下切取完整的腰椎，剔除腰椎周围的韧带和软组织，尤其是椎间盘周围的韧带。从腹侧一次性切开椎间盘取出髓核（nucleus pulpous，NP），仔细分离纤维环（anulus fibrous，AF），将两者立即置于Hanks平衡盐溶液中，制成细胞悬液。分别对腰椎间盘的AF和NP细胞施加1MPa、1Hz，3h／d，共3d的周期性液压，通过对细胞的形态学观察、Western免疫印迹和免疫组织化学染色，检测α5β1整合素在正常腰椎间盘AF细胞和NP细胞中的表达及周期性压力对其的影响。结果经周期性液压后，NP细胞的存活率大于90％，AF细胞的存活率大于85％，加压后的AF细胞和NP细胞均可见体积缩小。α5β1整合素在正常腰椎间盘AF细胞和NP细胞中的表达呈强阳性。Western免疫印迹结果显示：加压后α5β1整合素在AF细胞中的表达均明显减少，P值分别为0．000、0．003，与对照组比较差异有统计学意义；α5β1整合素在NP细胞中的表达也明显减少，P值分别为0．001、0．015，与对照组比较差异有统计学意义。结论机械负荷可引起腰椎间盘细胞中α5β1整合素的变化，提示α5β1整合素在腰椎间盘细胞中可能发挥力学传感器的作用。     

整合素αvβ6在甲状腺乳头状癌中的表达

目的:探究整合素αvβ6在甲状腺乳头状癌中的表达及其对肿瘤生物学行为的影响。方法:选取2014年11月—2015年9月60例PTC肿瘤及相应癌旁组织标本,免疫组化法检测整合素αvβ6的表达情况;在PTC细胞系TPC-1及B-CPAP中利用siRNA干扰整合素αvβ6表达,CCK8实验及Transwell侵袭实验分别检测PTC细胞增殖能力及侵袭能力的变化。结果:整合素αvβ6在癌旁组织中几乎不表达,在肿瘤组织中表达显著,且在伴有周围侵犯的肿瘤组织中表达高于不伴有周围侵犯的肿瘤组织。体外干扰αvβ6表达后,肿瘤细胞增殖能力及侵袭能力受到显著抑制。结论:在PTC组织中整合素αvβ6表达显著上调,上调的整合素αvβ6与肿瘤的侵袭浸润显著相关,干扰整合素αvβ6的表达可以显著抑制PTC细胞的增殖能力与侵袭能力。     

子宫内膜整合素αvβ3表达与体外受精-胚胎移植反复种植失败的相关性研究

目的研究整合素αvβ3在人各时期子宫内膜及蜕膜组织的表达,并探讨其与体外受精-胚胎移植（IVF-ET）反复种植失败的相关性。方法以40例IVF-ET治疗反复种植失败的患者为研究对象,以40例因男性因素行卵胞浆内单精子注射（ICSI）治疗的患者及5例正常孕早期患者作为对照,获取患者各个时期的子宫内膜及蜕膜组织,采用免疫组织化学法检测整合素αvβ3蛋白的定位和表达,并对所获得的结果应用Image-ProPlus6．0图像分析软件测定阳性反应强度。结果整合素αvβ3蛋白定位于子宫内膜腺上皮细胞和腔上皮细胞的细胞浆;增殖早、中、晚期及分泌早期内膜上均无表达,分泌中期、晚期内膜明显表达,蜕膜中表达最强（P〈0．05）。反复种植失败患者子宫内膜整合素αvβ3的表达同样存在周期性变化,但其在分泌中、晚期的表达要明显弱于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论整合素αvβ3在正常子宫内膜组织中的表达呈现明显周期依赖性,与胚胎种植密切相关;而其在IVF—ET反复种植失败患者种植窗期子宫内膜组织中的表达明显减弱,可能是导致胚胎种植失败的原因之一。     

CIP4对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响

目的 观察骨架调节蛋白CIP4（Cdc42 interacting protein 4）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化（EMT）的影响,并探讨其产生的机制。 方法 10 ?滋g/L TGF-β1刺激72 h诱导人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）向间充质转分化。Western印迹法检测各组细胞内E-cadherin和α-SMA蛋白的表达。倒置显微镜观察细胞形态的变化。根据GenBank人CIP4的完全cDNA序列,设计1条特异性干扰CIP4表达的RNA片段（CIP4-siRNA）和含野生型CIP4的重组真核表达质粒（pcDNA3.1-hCIP4）,利用lipofactamine 2000将其转染HK-2细胞。Western 印迹法检测对照组、TGF-β1刺激组、CIP4-siRNA转染组、pcDNA3.1-CIP4转染组细胞内CIP4、E-cadherin和α-SMA蛋白的表达,共聚焦显微镜观察 E-cadherin和α-SMA蛋白的分布改变;用PI3K-Akt特异性抑制剂渥曼青霉素（wortmannin） 1 μmol/L干预TGF-β1刺激的HK-2细胞48 h,Western 印迹法检测对照组和干预组CIP4表达的变化。 结果 TGF-β1干预后HK-2细胞E-cadherin蛋白表达显著减少（P ＜ 0.05）,α-SMA蛋白表达显著增多（P ＜ 0.05）,细胞形态由典型的上皮细胞向肌成纤维细胞转变,表明TGF-β1诱导肾小管上皮细胞EMT模型成功。CIP4-siRNA抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞表达CIP4后,E-cadherin蛋白表达显著增多（P ＜ 0.05）,α-SMA蛋白表达显著减少（P ＜ 0.05）,部分逆转了上述TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT。pcDNA3.1-hCIP4转染使CIP4高表达后,HK-2细胞E-cadherin蛋白表达显著减少（P ＜ 0.05）,α-SMA蛋白表达显著增多（P ＜ 0.05）,诱导了肾小管上皮细胞EMT。用渥曼青霉素干预TGF-β1刺激的HK-2细胞48 h,CIP4可能蛋白表达显著减少（P ＜ 0.05）。 结论 TGF-β1通过PI3K-Akt途径上调CIP4表达,CIP4可能进一步参与TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT过程。