CD4+ CD25+ Tr细胞与大鼠肝移植自发免疫耐受关系的研究

目的研究CD4^＋CD25^＋Tr细胞及其相关基因Foxp3与大鼠肝移植自发免疫耐受的关系。方法双袖套法建立大鼠原位肝移植模型;密度梯度离心法分离肝内淋巴细胞;免疫磁性分离法（MACS）分选CD4^＋CD25^＋Tr细胞,流式细胞术（FCM）检测所得细胞纯度。体外细胞增殖试验研究CD4^＋CD25^＋Tr细胞的免疫抑制作用。Western蛋白印迹法检测CD4^＋CD25^＋Tr细胞Scurfin蛋白表达。结果自发耐受组大鼠移植肝内CD4^＋CD25^＋Tr细胞含量显著高于急性排斥组。混合淋巴细胞反应中,LEW大鼠的脾细胞比DA大鼠自身的脾细胞更能刺激CD4^＋CD25^＋T细胞的增殖。CD4^＋CD25^-T细胞能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖,当加入外源性IL-2（200U／ml）时,该抑制作用被逆转。结论转录因子Foxp3介导的CD4^＋CD25^＋Tr细胞的免疫抑制作用可能是诱导大鼠肝脏移植自发免疫耐受的机制之一。     

CD8+CD28-T抑制细胞亚群与肾移植免疫耐受

诱导特异性免疫耐受是临床肾移植中急待解决的问题。CD8^＋CD28-T抑制细胞（TS）所具有的免疫抑制特性，为肾移植后抗排斥治疗提供了新的思路，并为诱导特异性免疫耐受提供了可能性。本文对CD8^＋CD28^-TS细胞的研究历史及近年来新进展作一综述。     

CD4+CD25+调节性T细胞在肝移植术后腹腔感染中的表达及其作用

目的研究移植后细菌感染CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞（Treg）表达的变化。方法以DA大鼠为供体,LEW大鼠为受体,采用改良的Kamada二袖套法建立肝移植模型。术后随机分为3组,G1组术后3d腹腔生理盐水注射;G2组术后3d给予腹腔大肠杆菌注射;G3组术后常规给予免疫抑制药物CsA,3mg/（kg·d）。感染后7d处死动物,每组6个样本,检测血清ALT、TB,并采用流式细胞术检测脾脏Treg的水平,RT-PCR方法检测脾脏Foxp3和肝脏IL-10、TGF-β mRNA的表达。结果G3、G2组Treg表达水平显著升高,分别为：（16.72±0.95）%,（27.4±1.09）%,与G1（9.88±0.98）%比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;脾脏Foxp3和肝脏IL-10、TGF-β mRNA表达水平均增加;感染组的肝功虽然较差,与排斥组相比无统计学意义,但从病理切片观察该组肝脏的急性免疫排斥反应减轻,Banff评分有统计学意义。结论大鼠肝移植术后腹腔细菌感染增加了脾脏Treg的表达,促进了免疫抑制作用的发挥,部分减轻了急性排斥反应。     

性激素与CD4~+CD25~+调节性T细胞的相关性及在肾移植免疫耐受中的作用研究

目的:为明确肾移植术后因供肾、受肾性别差异而排斥反应发生率不同,移植肾存活率不同而进行性激素水平的研究,明确性激素与CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)的相关性及在肾移植免疫耐受中的作用。方法:选取正常对照组、肾移植组患者各20例,用ELISA法测定外周血性激素睾酮(T)、雌二醇(E_2)水平,用流式细胞术(FCM)测定CD4~+CD25~+Treg占CD~+T细胞比值。结果:肾移植术后女性E_2水平逐渐由高变低,男性T水平逐渐由低变高,CD~+CD25~+Treg水平也随时间相关性而逐渐升高,以单因素方差分析发现:E_2水平平稳期与正常对照组比较无显著差异(P0.05);T平稳期与正常对照组比较无显著差异(P0.05);肾移植男性受者早期2周内调节T细胞水平与正常值比较有明显差异(P0.05),门诊随访肾移植达2年患者其调节t细胞与正常对照组无明显差异(P0.05)。T与CD4~+CD25~+Treg术后均依时间相关性而逐渐上升,以直线相关性分析发现两者有明显相关性(P0.05)。结论:肾移植术后随着下丘脑-垂体-性腺轴的恢复,患者性激素水平及CD4~+CD25~+Treg水平均逐渐恢复正常。排除体重、年龄、透析时间、HLA配型、缺血时间、术后糖皮质激素、免疫抑制剂治疗方式等因素的影响,T与CD4~+CD25~+Treg有明显相关性,男性在肾移植术后不仅可以通过雄激素直接抑制效应T细胞发挥主要免疫抑制作用,还可以通过增加CD4~+CD25~+Treg水平来发挥次要免疫抑制作用。     

CD8+CD28-T细胞在脑疝患者的动态变化与临床意义

【摘要】 目的 探讨脑疝患者外周血CD8+CD28-T细胞的动态变化与临床意义。方法〓收集36例脑疝组(A组)患者外周血,以41例未出现脑疝的重型颅脑损伤患者(B组)及32例健康人(C组)作为对照,采用流式细胞术检测外周血CD8+CD28-T细胞及其胞内转化生长因子β1(TGF-β1)及白介素10(IL-10)百分含量。分别在伤后3 h、6 h及12 h观察A及B组患者外周血CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10变化。结果〓三组CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10总体差异均有显著性(P < 0.05),但B组与C组无统计学差异,而A组上述三者均显著低于另外B及C组(P < 0.05)。B组患者在伤后3 h、6 h及12 h的CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10差异均无统计学意义|A组患者3 h、6 h及12 h的CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10均呈进行性下降,表现为任意两个时间点的差异均有统计学意义(P < 0.05),且均显著低于B组(P < 0.05)。结论〓CD8+CD28-T细胞显著下降是脑疝患者的一个重要细胞免疫学特征,其伤后12h内进行性下降与病情进展密切相关。     

CD4+CD45RClowTreg在大鼠肝移植免疫耐受中的调节作用研究

目的 探讨CD4+CD45RClow调节性T细胞(Treg)在肝移植免疫耐受诱导中的作用.方法 建立急性排斥反应(AR)[Lewis→Brown Norway(BN),AR组]与自发耐受(BN→Lewis,耐受组)大鼠肝移植模型,每组6只.并设立假手术组(对照组),Lewis大鼠和BN大鼠各3只.对各组大鼠肝组织进行病...     

肾癌根治术患者手术前后CD8+CD28-T细胞表达及临床意义

【摘要】〓目的〓探讨肾癌根治术患者手术前后CD8+CD28-T细胞表达及临床意义。方法〓收集52例接受根治术的肾癌患者作为观察对象,采用流式细胞术检测手术前后外周血CD8+CD28-T细胞、白介素10(IL-10)及转化生长因子β1(TGF-β1)含量;分析三者含量与肿瘤分期的相关性,并以肾错构瘤患者及正常人作为对照。结果〓肾癌患者CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1均显著高于另外两组,但肾错构瘤患者与正常人之间均无统计学差异(P<0.05);术前III期患者CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1显著高于I及II期(P<0.05);术后各期肾癌患者CD8+CD28-T细胞及TGF-β1含量均显著低于术前(P<0.05),但IL-10却与术前无统计学差异;术后III期患者CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1显著高于Ⅰ及Ⅱ期患者(P<0.05),但术前及术后I及II期患者上述三项指标均无统计学差异。相关性分析显示CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1与分期均呈显著正相关性(P<0.05),其相关程度由大至小依次为CD8+CD28-T细胞>TGF-β1>IL-10。结论〓CD8+CD28-T细胞及其细胞因子表达含量增多可能是肾癌的一个新免疫机制,前者可在一定程度上鉴别肾癌与良性肿瘤,且可以评价手术效果。     

转Fas配体基因的树突状细胞在诱导大鼠肝移植免疫耐受中的作用

目的 探讨受者体内注射转FasL基因垢树突状细胞（DC）诱导大鼠肝移植免疫耐受的作用机制。方法 建立SD大鼠→Wistar大鼠肝移植模型。分别于术前5d给受者腹腔注射转染多药耐药基因（mdr1)的DC细胞或转染FasL基因的DC细胞,并设空白对照组和环孢素A（CsA)对照组。术后3d和7d测定移植肝功能,册时以半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测移植肝组织中Fas,Fas配体（FasL)及白细胞介素12（IL-12）,并观察受鼠的存活时间。结果 空白对照组的大鼠术后9-15d全部死亡,CsA治疗组及转FasL基因治疗组;空白对照组及转mdr1基因治疗组的FasL及IL-12表达增高,而CsA治疗组及转FasL基因治疗组的FasL及IL-12呈不表达或低表达。结论 转染FasL基因的DC细胞能有效地诱导大鼠肝移植免疫耐受,其机理可能与诱导了肝脏内浸润淋巴细胞凋亡及抑制IL-2的表达有关。     

大鼠辅助性肝移植诱导免疫耐受模型的建立

目的利用PVG（TR-1^c）和DA（RT-1^a）大鼠分别为供受体，联合进行辅助性肝移植和异位心脏移植，建立大鼠辅助性肝移植诱导免疫耐受模型。方法辅助性肝移植采用重建门静脉法，异位心脏移植采用腹腔吻合法。结果同品系对照组和实验组动物及其移植心脏存活超过100d，而异品系对照组移植心脏只存活7d。结论在受体肝脏存在的情况下，辅助性供肝依然发挥其诱导耐受的效应。经长期观察，供肝无萎缩，耐受诱导效应持续存在，指示心脏搏动良好。因此，该模型在肝移植基础研究中具有实用价值。     

树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的研究

目的 观察大鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)对同种异体肝移植大鼠免疫耐受的影响.方法 用不同细胞因子诱导培养大鼠骨髓来源的成熟DC(mDC)和不成熟DC(imDC),采用形态学观察、表型分析和功能学实验对培养细胞进行鉴定,构建Wistar大鼠和SD大鼠肝移植模型,并于移植前5 d注射到受体大鼠内,研究它们对移植后大鼠肝脏病理及存活时间的影响情况.结果 DC细胞形态不规则,大多数细胞表面有细长树枝状突起,mDC和imDC表面均表达表面分子OX62,而表面分子CD86在imDC表面低表达,在mDC表面高表达.imDC和mDC与淋巴细胞相互作用,发现imDC对淋巴细胞的增殖无明显作用,相反mDC对淋巴细胞的增殖有明显的促进作用.注射imDC的受体大鼠的存活时间显著长于注射mDC的受体大鼠,注射mDC的肝移植大鼠在移植后较早且出现较强的急性排斥反应,而注射mDC的大鼠在移植后16 d才开始出现轻度急性排斥反应.结论 建立了在体外大量扩增大鼠骨髓来源DC的方法,imDC能显著延长受体大鼠肝移植的存活时间.     

树突状细胞和CD4+CD25+调节性T细胞在免疫耐受中的作用及关系

诱导免疫耐受具有高效、低毒、经济等优点,在器官移植中有着极其重要的意义.在建立免疫耐受中,树突状细胞(DC)起到克隆清除、克隆无能、表达T细胞抑制因子、选择性激活辅助T细胞和诱导调节性T细胞尤其是CD4+CD25+调节性T细胞的产生等作用.而CD4+CD25+调节性T细胞主要以DC为作用靶点,影响其分化成熟,抑制DC向...     

大黄素对大鼠肝移植后CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响

目的研究大黄素对大鼠肝移植后CD4+CD25+调节性T细胞的比例以及对其免疫抑制功能的影响。方法双袖套法建立大鼠原位肝移植模型,以大黄素和环孢素A(CsA)分别在术后腹腔给药,并以给予PBS作为模型对照组,观察不同药物移植后大鼠存活时间的影响,以及对移植术后大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregulatory cells,Treg)亚群的变化以及免疫功能的影响。结果大黄素能显著延长大鼠原位肝移植的术后成活时间,大黄素组大鼠的平均存活时间(17.4±2.5)d与肝移植模型对照组(8.8±1.9)d相比差异具有统计学意义;大鼠肝移植后大黄素给药可显著上调受体大鼠外周血以及肝内CD4+CD25+Treg的比例,并显著增强CD4+CD25+Treg抑制效应性T细胞的增殖能力(P0.05)。结论大黄素能够延长大鼠原位肝移植的术后成活时间,并可能通过上调外周血以及肝内CD4+CD25+Treg的数量及免疫抑制功能来实现移植后免疫排斥反应的抑制。     

CD4+CD25+调节性T细胞对小鼠肝脏移植自发性免疫耐受的影响

目的 研究CD4+CD25+调节性T细胞在诱导自发性肝脏免疫耐受中的作用.方法 向受体和供体注射抗CD25抗体(PC61)后进行小鼠原位肝脏移植,观测其生存时间.术后20～30 d切取移植肝脏行HE染色,同时观察CD4+CD25+T细胞对CD4+T细胞和CD8+T细胞功能的影响.结果 去除受体而不是供体小鼠的CD4+CD25+T细胞可以导致肝移植排斥反应.而且,去除CD4+CD25+T细胞使移植物的白细胞浸润明显增多,组织损伤加重.同时,去除CD4+CD25+T细胞导致CD4+T细胞的增殖活性和CD8+T细胞的细胞毒活性明显增强.结论 受体来源的CD4+CD25+调节性T细胞在小鼠肝脏移植免疫耐受诱导中起重要作用.

Abstract：

Objective To examine the contribution of CD4+ CD25+ regulatory T cells to liver transplant tolerance. Methods After injection of anti-CD25 monoclonal antibody (mAb, PC61), mouse orthotopic liver transplantation was performed and survivals were determined. The paraffin-embedded sections of hepatic allografts were cut and stained with hematoxylin and eosin (HE). Furthermore, the effect of CD4+ CD25+ regulatory T cells on proliferative response of CD4+ T cells and cytotoxicity of CD8+ T cells was examined by depleting these regulatory T cells. Results Depletion of these cells in the recipients but not in the donors before liver transplantation caused rejection. Histological analyses of hepatic allografts with PC61 treatment showed extensive leukocyte infiltration and tissue destruction, whereas those in the control group showed minimal changes. Moreover, elimination of CD4+CD25+ T cells resulted in the enhancement of both proliferative response of CD4+ T cells and cytotoxicity of CD8+ T cells against donor-type alloantigen. Conclusions These results suggest that CD4+CD25+ regulatory T cells were important for tolerance induction to hepatic allografts.     

Clinical consequences of circulating CD28‐negative T cells for solid organ transplantation

CD28 is an important costimulatory molecule expressed on T cells, interacting with CD80 and CD86 on antigen‐presenting cells. All naïve T cells express CD28, but memory T cells may become CD28 negative (CD28neg) as a result of repetitive cell divisions, the influence of TNF‐alpha, and infection with cytomegalovirus. This results in accumulation of CD28neg T cells, which may constitute >50% of the total circulating T‐cell population in the elderly. The frequency of CD28neg T cells is associated with diseases such as cancer, autoimmunity, and atherosclerosis in which they may act as either effector or suppressor cells. This functional heterogeneity probably underlies the finding that the CD8posCD28neg T‐cell population harbors effector cells mediating acute allograft rejection, but also suppressor cells. The CD4posCD28neg T cells are predominantly considered to be a nonclassical risk factor for atherosclerotic disease, and their contribution to alloreactivity is less clear. CD28neg T cells depend on IL‐15 for their proliferation, and they have increased the expression of specific costimulatory molecules, such as NK receptors, TNF‐alpha receptor family members, and the adhesion/costimulatory molecule CD2. Targeting these costimulatory pathways presents potential therapeutic options to block allograft rejection mediated by CD28neg T cells which are resistant to belatacept.     

RNA干扰树突细胞主要组织相容性复合物1表达后诱导抑制性T细胞对小肠移植耐受的影响

目的探讨RNA干扰树突细胞（Dc）组织相容性复合物1（MHC-1）表达后获得的CD8＋CD28-抑制性T细胞（Ts）对小肠移植免疫耐受的的影响。方法通过siRNA干扰DC MHC—I表达后,诱导获得CD8^＋CD28^-Ts。建立由Wistar大鼠移植到SD大鼠的小肠移植模型36例,随机分为A组（转染实验组）、B组（未转染组,注射普通T细胞）和C组（移植对照组,注射生理盐水）。术后14d,每组各随机挑选6例,取移植大鼠小肠和血液标本行移植小肠组织病理学检查．并检测移植大鼠血清TGF-β、IFN-γ水平及回肠黏膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性,观察移植大鼠的存活时间。结果术后第14天,A组移植大鼠血清中TGF—β和IFN-γ表达水平高于B、C组（P〈0．05）。A组大鼠肠黏膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性为（6．3±1．0）kU／g,明显高于B组的（3．6±0．9）kU／g和C组的（2．9±1．3）kU／g（P〈0．05）。A组移植小肠病理Parks评分分级明显低于B组和C组（P〈0．05）。A、B和C组移植后大鼠中位生存时间分别为32．0、17．5和21．0d,A组存活时间明显优于B组和C组（P〈0．05）。结论将RNA干扰DCMHC—I表达所获得的CD8^＋CD28^-Ts过继小肠移植大鼠．可以减轻移植大鼠的损伤程度．抑制免疫排斥反应．     

调节性CD4+T细胞在大鼠自发肝移植耐受中的作用

目的 探讨在肝移植的自发耐受模型中，调节性CD4^＋T细胞的免疫抑制作用机制。方法 利用近交系大鼠从Lewis（LEW）到Wistar Furth（WF）的肝移植组合，对移植后不同时期的宿主注射抗CD4的单克隆抗体（Anti-CD4mAb），然后抽血检测丙氨酸氨基转氨酶（ALT）的动态变化；并结合细胞毒性T淋巴细胞（CTL）试验了解宿主脾细胞中T细胞亚群的动态改变。结果 对肝移植自然生存的宿主注射Afiti—CD4mAb后，术后第21天、42天均能够诱导出肝损害（排斥反应），但第56天、100天以上的则未能诱导出来，且该损害能被抗CD8单克隆抗体阻断。另外CTL试验显示宿主的脾细胞中，初始型CTL前体细胞在移植56d后未能检测出来。结论 在自发性肝耐受模型中。宿主术后早期存在由CD4^＋T细胞介导的下调原始效应性T细胞的作用机制。     

CD4+ T cells, without CD8+ or B lymphocytes, can reject xenogeneic skin grafts

Abstract: Previous experiments have shown that rejection of xenogeneic skin grafts by mice is particularly dependent on CD4⁺ T cells. There are two possible explantations for this finding: either 1) "help" provided by CD4⁺ T cells is essential for CD8⁺ T cell-, B cell-, or NK cell-mediated effector mechanisms of rejection, or 2) CD4⁺ cells are themselves responsible for rejection, perhaps by some nonspecific effector mechanism. To examine these two hypotheses, we transplanted pig skin onto SCID mice and then reconstituted the mice with selected subpopulations of lymphocytes. Mice that did not received CD4⁺ T cells were unable to reject their xenografts, whereas those receiving CD4⁺ cells could do so in the absence of CD8⁺ cells or B cells and even when additionally depleted of NK cells by treatment with anti-Asialo GM1 antibody. Additional experiments were performed both in vivo and vitro to confirm the absence in test mice of CD4⁺ or CD8⁺ and B lymphocytes, respectively. These results suggest that CD4⁺ T cells are not only necessary for rejection of xenogeneic skin grafts by mice, but that they can do so without CD8⁺ cells or B cells, and probably without NK cells. Since CD4⁺ cells in mice have been shown to recognize xenogeneic antigens indirectly, this suggests that a nonspecific effector mechanism may be involved in the rejection of xenografts. In these experiments allogeneic skin grafts behave quite differently as they could not be rejected by this mechanism.