胰腺癌细胞TYMS 基因表达与化疗敏感性的关系

目的: 探讨胸苷酸合成酶( thymidylate synthase,TYMS) 在胰腺癌细胞中mRNA 表达差异及其表达水
平与胰腺癌细胞化疗敏感性的关系。方法: 使用Real－time PCR 及Taqman 探针法检测其TYMS mRNA 表达水
平,利用CCK－8 试剂盒检测6 株胰腺癌细胞( AsPC－1,MIAPaCa－2,Capan－1,SU 86． 86,PANC－1 与COLO 357)
对5－FU 的化疗敏感性。结果: 在6 株人胰腺癌细胞中TYMS 基因mRNA 表达水平各不相同,TYMS 基因mRNA
表达水平相比较发现,细胞株AsPC－1,MIAPaCa－2,Capan－1,SU 86． 86 中TYMS mRNA 水平低( 低TS 表达组) ,
而PANC－1 与COLO 357 中TYMS mRNA 表达水平较高( 高TS 表达组) ,低TS 表达组的细胞在低中高3 个不同
药物浓度下对5－FU 抑制率分别为0． 692±0． 137,0． 781±0． 102 与0． 885±0． 083。同浓度下高TS 表达组的细胞
对5－FU 抑制率分别为0． 370±0． 157,0． 548±0． 018 与0638±0． 020。TYMS mRNA 表达低的细胞对5－FU 化疗敏
感性明显高于TS 表达高的细胞,差异有统计学意义( P＜0． 05) 。结论: 在胰腺癌细胞株中,TYMS mRNA 表达水
平与其对5－FU 的化疗敏感性密切相关。     

多药耐药相关蛋白MRP在胰腺癌细胞中的表达及意义

目的初步探讨多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein,MRP）在胰腺癌细胞中的表达情况及意义。方法采用反转录多聚酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法,分别在基因和蛋白水平上检测MRP在8株人胰腺癌细胞株（SW1990、PCT-2、PCT-3、PCT-4、Aspc-1、Capan-1、Mia-PaCa-2及Panc-1）中的表达情况。结果RT-PCR结果显示,MRP存在于所有的胰腺癌细胞株中,平均表达水平为0.44±0.18,在PCT-2细胞中表达水平最低（0.10±0.03）;免疫细胞化学结果证实在SW1990、Capan-1和Mia-PaCa-2三株细胞中MRP蛋白呈弱表达,在PANC-1、ASPC-1、PCT-4和PCT-3细胞中呈较强表达较强,而在PCT-2细胞中呈过度表达。结论MRP在胰腺癌原发性耐药中可能占有重要地位,在某些时候可能不通过提高转录水平而直接提高翻译产物的表达量而发挥其耐药作用。     

长链非编码RNA PCAT-1对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的 研究长链非编码RNA前列腺癌相关转录本1(lncRNA PCAT-1)对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 qRT-PCR检测lncRNA PCAT-1在胰腺癌细胞系Capan-1、Capan-2、PANC-1、SW1990和正常胰腺细胞hTERT-HPNE中的表达水平.lncRNA PCAT-1表达最高的胰腺癌细胞系分为sh-NC组和sh-PCAT-1组,进行NC干扰慢病毒(shRNA)和PCAT-1 shRNA感染,qRT-PCR检测各组细胞中lncRNA PCAT-1的表达水平.3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓(MTS)实验检测沉默lncRNA PCAT-1的表达对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测沉默lncRNA PCAT-1的表达对细胞周期和凋亡的影响;皮下移植瘤实验检测沉默lncRNA PCAT-1的表达对胰腺癌细胞体内生长能力的影响;Western blot检测lncRNA PCAT-1对细胞周期相关蛋白、凋亡相关蛋白和PI3 K/AKT信号通路关键蛋白的表达影响.结果 qRT-PCR检测结果显示lncRNA PCAT-1在胰腺癌细胞系的表达水平高于在正常胰腺细胞hTERT-HPNE中的表达(P＜0.05),与Capan-1、Capan-2和SW1990细胞相比,PANC-1细胞中lncRNA PCAT-1的表达最高.PANC-1细胞感染PCAT-1 shRNA,qRT-PCR结果显示,与sh-NC组相比,sh-PCAT-1组细胞中lncRNA PCAT-1的表达降低(P＜0.05);沉默lncRNA PCAT-1的表达后,PANC-1细胞的增殖能力降低,细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加,细胞体内裸鼠成瘤能力降低,细胞周期蛋白cyclinD1和CDK6蛋白的表达减少,抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白减少,促凋亡蛋白Bax蛋白表达增加,PI3 K/AKT信号通路关键蛋白pPI3K和pPAKT蛋白表达减少.结论 沉默lncRNA PCAT-1的表达可能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制胰腺癌细胞增殖和促进细胞凋亡.lncRNA PCAT-1可能是治疗胰腺癌的新型靶标.     

胰腺癌细胞胸苷酸合成酶基因多态性与其蛋白表达及5-FU化疗敏感性的关系

Background  Thymidylate synthase (TS) is a key regulatory enzyme for de novo DNA synthesis. TS activity is also an important determinant of the response to chemotherapy with fluoropyrimidine prodrugs, and its expression may be affected by gene polymorphisms. In this study, we investigated the associations between polymorphisms of the TS gene and its protein expression, and the implications on the efficacy of 5-fluorouracil (5-FU) in pancreatic cancer cells.

Methods  Genotypes based on the 28-bp TS tandem repeat for pancreatic cell lines were determined by electrophoretic analysis of PCR products. A single nucleotide polymorphism (SNP) at nucleotide 12 of the second 28-bp repeat of the 3R allele was determined by nucleotide sequencing. The chemosensitivity of pancreatic carcinoma cells to 5-FU in vitro was evaluated using Cell Counting Kit-8 (CCK-8). TS protein expression was analyzed by Western blotting.

Results  Seven pancreatic carcinoma cell lines had different genotypes in terms of the 28-bp TS tandem repeat, as follows: homozygous 2R/2R (T3M4 and BxPC-3 cells), heterozygous 2R/3R (AsPC-1, Capan-1, and SU86.86), and homozygous 3R/3R (PANC-1 and COLO357). The optical density ratio of genotypes 3R/3R, 2R/2R and 2R/3R was 1.393±0.374, 0.568±0.032 and 0.561±0.056, respectively. Cells with the 2R/3R or 3R/3R genotypes were further analyzed for the G to C SNP at nucleotide 12 of the second 28-bp repeat of the 3R allele, yielding heterozygous 2R/3Rc (AsPC-1, Capan-1, and SU86.86), homozygous 3Rg/3Rg (COLO357) and homozygous 3Rc/3Rc (PANC-1). The optical density ratio of homozygous 3Rg/3Rg cells and homozygous 3Rc/3Rc cells was 1.723±0.062 and 1.063±0.134, respectively, and this difference was statistically significant (P <0.05). Cells with the 2R/2R and 2R/3R genotypes of TS were hypersensitive to 5-FU in vitro as compared with those with the 3R/3R cells.

Conclusions  Polymorphisms in the TS gene influenced its protein expression and affected sensitivity of 5-FU in seven pancreatic cancer cell lines. Cells with the 3R/3R genotype had higher TS protein expression than the 2R/2R or 2R/3R genotypes. Cells of the 3R/3R genotype with high TS protein expression were shown lower 5-FU sensitivity than cells with the 2R/2R or 2R/3R genotypes. These data warrant large-scale clinical studies to assess the role of polymorphisms in the TS gene on its protein expression and chemosensitivity to 5-FU in pancreatic cancer.

     

Fascin-1在胰腺癌中的表达及意义

目的探讨Fascin-1蛋白在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫印迹法检测Fascin-1蛋白在5株胰腺癌细胞株(AsPC-1、HPAC、PANC-1、Capan-2、BxPC-3)中的表达。采用免疫组织化学染色SP法测定62例人胰腺癌中和53例癌旁正常组织中Fascin-1蛋白的表达情况,统计分析其与胰腺癌临床病理参数(TNM分期、淋巴结转移、组织分化等)的关系。结果胰腺癌细胞株AsPC-1、HPAC、PANC-1及Capan-2中Fascin-1蛋白呈阳性表达,BxPC-3中Fascin-1蛋白无表达。胰腺癌组织中Fascin-1蛋白的表达率为61.3%,癌旁正常组织中Fascin-1蛋白不表达,差异有统计学意义(P<0.05)。Fascin-1蛋白的表达与胰腺癌的TNM分期、组织分化程度、门脉是否受侵及有无淋巴结转移有关(均P<0.05),与患者的性别、年龄及肿瘤大小无关(均P>0.05)。结论 Fascin-1蛋白在胰腺癌细胞株及癌组织中高表达,在癌旁正常组织中不表达,提示其可能参与胰腺癌的发生、侵袭及转移过程。     

胸苷酸合成酶基因多态性与不同种族乳腺癌FEC方案化疗不良反应相关性研究

目的 了解胸苷酸合成酶基因（TYMS）多态性在乳腺癌患者中的分布及其基因型与化疗不良反应的关系。方法 选取雌激素受体基因5′端非编码区的28 bp串联重复序列（VNTR）作为遗传标记,运用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析法对50例白种人和23例亚裔乳腺癌患者进行基因分型,结合患者临床病理特征、FEC化疗不良反应和生存数据进行分析。结果 TYMS 28 bp VNTR 基因型在白种人群2R/2R、2R/3R和3R/3R的基因型频率分别为12.0%、62.0%和26.0%,在亚裔人群分别为4.4%、30.4%和65.2%,差异有统计学意义（P〈0.05）。TYMS 28 bp VNTR位点的等位基因及基因型与患者组织学类型、组织学分级、淋巴结转移、临床分期、雌激素受体、孕激素受体和人类表皮生长因子受体-2表达等无关。所有患者平均随访时间43.21个月,复发5例,死亡5例;单因素及多因素分析提示TYMS基因型不是影响预后因素。亚裔人群化疗后3-4级白细胞减少症发生率显著高于白种人群（86.96% vs 60.00%,P=0.021）;TYMS 28 bp VNTR 3R/3R基因型中,3-4级白细胞减少症发生率高于2R/3R、2R/2R,但差异无统计学意义（75.00% vs 65.79%,57.14%,P=0.578）。结论 白种人与亚裔乳腺癌患者FEC化疗耐受性存在差异,可能与两者TYMS基因28 bp VNTR多态性差异有关。     

c-Met抑制剂对不同胰腺癌细胞系增殖迁移能力的影响研究

目的 研究c-Met抑制剂SU112748对不同胰腺癌细胞系的增殖和迁移能力的影响.方法 采用WesternBlot技术检测人胰腺癌细胞系PANC、PaCa2、KP-1NL、BxPC-3、KP-3、KP-2、AsPC1及Patu8988中c-Met蛋白的表达量,不同浓度（0.1、1、5及10 μmol/L） c-Met抑制剂SU11274处理c-Met高/低表达细胞各两株,另一组未使用c-Met处理做空白对照.采用MTT法检测细胞增殖、Transwell assay检测细胞迁移能力的改变.结果 c-Met蛋白在BxPC-3、KP-3、KP-2、AsPC1和Patu8988细胞中表达量较高,在PANC、PaCa2和KP-1NL中表达量较低.10μM SU11274作用24h对KP-3细胞株的最大抑制率达（58.3±6.5）％,KP-2细胞株的最大抑制率达（57.2±6.1）％.对KP-2和KP-3细胞的迁移能力有明显抑制作用,分别为对照组的35.7％和41.3％.结论 c-Met抑制剂SU11274能够抑制胰腺癌细胞系的增殖和迁移能力,从而有可能抑制胰腺癌的发生发展.但是应遵循个性化治疗方案,依照照患者c-Met依赖程度进行个性化给药.     

囊素五肽对人肺成纤维细胞细胞外基质及转化生长因子β1／Smad信号通路的影响

目的观察囊素五肽（BP5）对转化生长因子β1（TGF-1）刺激的人肺成纤维细胞分泌的细胞外基质以及对转化生长一β1／Smad信号通路的影响,探讨囊素五肽抗肺纤维化的机制。方法HLF细胞分为阴性对照组、TGF- β1 刺激组、TGF-β1＋BP5药物干预组（三组均用TGF-β1刺激后分别使用不同浓度BP52．5、5及10μg／mL进行干预）。免疫荧光法测定细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,Westernblot方法检测collagen—Ⅰ、p-Smad2／3、p-Smad3和Smad7蛋白的表达。结果TGF—β1刺激细胞经免疫荧光标记显示α-SMA阳性表达,说明人肺成纤维细胞在TGF-β1刺激下转化为肌成纤维细胞（MF）,TGF-β1刺激同时加BP5不同药物浓度组中,10μg／mL的BP5药物浓度能显著减少细胞增殖转化。经TGF-β1刺激后,人肺成纤维细胞collagen—Ⅰ[（1．402±0．158）比（0．605±0．367）]、p-Smad2／3[（1．457±0．111）比（0．815±0．039）]、p-Smad3[（1．320±O．147）比（0．623±O．128）]蛋白表达较刺激前表达明显增多（P〈0．01）,Smad7表达较对照组降低[（0．613±0．107）比（0．865±0．063）,P〈0．05）];与TGF-β1处理组相比,BP5可抑制由TGF-β1刺激人肺成纤维细胞引起的collagen—Ⅰ蛋白[（0．718±0．049）比（1．402±0．t58）]、p-Smad2／3[（0．696±0．031）比（1．457±0．111）]p-Smad3[（0．766±0．006）比（1．320±0．147）]表达上调（P均〈0．01）,而Smad7的蛋白表达明显增加[（1．237±0．173）比（0．614±0．107）,P〈0．05]。结论BP5可能通过抑制TGF—β1／Smads信号通路激活,下调TGF-β1刺激下人肺成纤维细胞的collagen-Ⅰ及d—SMA蛋白的表达,提示BP5可能对肺纤维化具有一定的干预作用。     

PUVA诱导HL-60细胞凋亡时对Fas、FasL表达的影响

[目的]探讨补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病细胞HL-60凋亡时对Fas、FasL表达的影响。[方法]以HL-60细胞为研究对象。以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标，观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径，并采用多因素方差分析法进行统计学处理。[结果]（1）PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL～60细胞发生凋亡，对照组、80μg／mL PSO组、5min UVA组及PUVA（80μg／mL PSO＋5min UVA）组凋亡率分别为（10．60±0．31）％、（26。94±0．26）％、（28．53±0．05）％、（37．72±0．09）％，各组间P〈0．01，PUVA的作用明显强于前两者。（2）电镜下观察经PUVA处理后的HL-60细胞超微结构，可见明显的凋亡形态学改变。（3）PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60细胞Fas在基因、蛋白水平的表达，下调FasL在基因、蛋白水平的表达。上述四组FasmRNA的表达量分别为（8．40±0．59）×10^3、（1．62±0.36）×10^5、（1.50±0.26）×10^5、（7．88±0．38）×10^6拷贝数／μg；Fas蛋白的表达量分别为（3．29±0．39）％、（18．73±1．22）％、（18．17±1．07）％、（47．03±1．36）％；FasL mRNA的表达量分别为（8．69±0．44）×10^7、（2．71±0．29）×10^7、（2.64±0．31）×10^7、（2．61±0.33）×10^5拷贝数/μg；FasL蛋白的表达量分别为（58．67±1．75）％、（37．40±1.73）％、（33．90±1．90）％、（15．60±1．42）％，各组间P〈0．01，PUVA的作用明显强于前两者。[结论]（1）PUVA可诱导白血病细胞HL-60发生凋亡，作用强于PS0及UVA照射。（2）PUVA诱导HL-60凋亡的途径之一为上调HL-60细胞FasmRNA表达水平，下调FasL mRNA表达水平。     

Aurora-A表达与胰腺癌吉西他滨耐药关系的实验研究

目的探讨Aurora-A的表达与胰腺癌吉西他滨耐药之间的关系。方法40只裸鼠采用随机数字表法分为两组,分别采用人胰腺癌细胞株PANC-1和吉西他滨耐药株PANC-1/R2皮下移植再原位移植的方法构建动物模型（PANC-1组、PANC-1/R2组）。采用实时定量基因扩增（qPCR）法测定PANC-1和PANC-1/R2中Aurora-AmRNA的表达。建模后第5周处死裸鼠,测定并比较两组裸鼠体重、肿瘤转移情况、肿瘤质量;采用免疫组化方法测定并比较两组瘤体Aurora-A蛋白的表达。结果PANC-1组、PANC-1/R2组第5周裸鼠体重、肿瘤重量及肿瘤转移率分别为（23.2±1.41）g、（0.453±0.110）g、36.8%及（22.91±1.13）g、（0.564±0.203）g、50.0%,两组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）,两组Aurora-AmRNA表达分别为1.002±0.040及1.845±0.069,差异有统计学意义（P＜0.05）;两组Aurora-A蛋白阳性表达率分别为83.3%及57.9%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论Aurora-A高表达与胰腺癌细胞株的吉西他滨耐药有关,新方法构建的PANC-1/R2耐药株Aurora-A高表达,可用于胰腺癌吉西他滨耐药研究的载体。     

百里醌联合吉西他滨对胰腺癌BxPC-3细胞体外生长的影响

目的 探讨百里醌联合吉西他滨对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用CCK-8法检测细胞相对活性,Hoechst染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、XI-AP）、半胱天冬酶（cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9）、PTEN、Akt及phospho-Akt蛋白的表达.结果 百里醌呈浓度依赖性地抑制胰腺癌BxPC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡.吉西他滨组（GEM）、百里醌组（TQ）、百里醌联合吉西他滨组（TQ＋GEM）、百里醌与吉西他滨序贯给药组（TQ-GEM）相对细胞活性分别为83.7％±4.1％、51.8％±6.0％、48.25％±6.50％、33.3％±3.9％;早期凋亡率分别为12.2％±3.8％、30.4％±4.3％、43.5％±5.7％、58.3％±6.1％;各组相对细胞活性均明显低于对照组（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著增高（P＜0.05）;与GEM组比较,TQ-GEM组与TQ＋ GEM组相对细胞活性明显下调（P ＜0.001）,凋亡率明显上调（P ＜0.001）;TQ-GEM组较TQ＋ GEM组出现更明显的增殖受抑（P ＜0.001）,更高的细胞凋亡率（P＜0.001）.百里醌-吉西他滨序贯给药作用于胰腺癌BxPC-3细胞后,BxPC-3细胞中Bax蛋白表达明显下调,而Bcl-2、XIAP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达明显上调.百里醌可显著上调BxPC-3细胞PTEN的表达,明显抑制Akt磷酸化.结论 百里醌可明显增强吉西他滨对体外胰腺癌细胞生长抑制作用,可能是通过上调PTEN,Akt去磷酸化,促使Bcl-2、XIAP表达上调及Bax表达下调,活化caspase-3、caspase-9诱导细胞凋亡而实现。     

吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中甲基化诱导静止基因的表达与半胱氨酸天冬氨酸酶-1、核转录因子活性的研究

目的检测吉西他滨（gemeitabine,GEM）诱导胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化诱导静止基因（TMSl／ASC）的表达,并探讨半胱氨酸天冬氨酸酶-1（cysteine aspartase,caspase-1）、核转录因子（nuclear factor—κB,NF—κB）的活性与TMSl／ASC之间的关系。方法用噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTr）比色法检测GEM在不同浓度（1、2、4、8、16μg／m1）及不同时间（24、48h）下对胰腺癌细胞PANC-1存活率的影响;RT—PCR技术检测PANC—1细胞在GEM（4．27μg／m1）刺激组（实验组）和空白组（对照组）培养24h和48h后TMS1／ASCmRNA的表达情况。用抗KB抑制蛋白（inhibitory protein of NF—κB,IKBR）多克隆抗体、抗caspase-1多克隆抗体和内参β—actin单克隆抗体通过Western blot技术检测并比较IKBa和caspase-1在实验组和对照组中的蛋白表达水平,从而分析NF．KB和caspase-1的活化状态。结果GEM对PANC-1细胞生长的抑制有浓度和时间依赖性,其半数抑制率（IC50）为24h4．27μg／ml;24h时实验组和对照组TMSl／ASC的表达量分别为（0．3±0．004）和（0．1±0．001）,48h实验组和对照组分别为（0．63±0．007）和（0．21±0．006）,2组相比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。Westernblot结果显示：随着培养时间延长,caspase-1在对照组中未发生活化,GEM可促进其活化;GEM实验组与对照组相比It（Bet的表达量无明显变化,GEM不能促使NF—KB活化。结论GEM能抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖并促进凋亡,随着作用时间的延长其药物敏感性减低。GEM作用-定时间可诱导TMS1／ASC表达增加,caspase-1可能参与GEM诱导胰腺癌细胞株PANC-1凋亡的信号转导途径,NF-κB不参与GEM诱导胰腺癌细胞株PANC—1凋亡的信号转导途径。     

慢病毒shRNA靶向干扰RegⅣ基因胰腺癌细胞株的构建

 目的  构建并鉴定再生基因4 (regenerating islet-derived family member 4,RegⅣ)短发夹干扰RNA (short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,继而建立稳定干扰RegⅣ基因表达的胰腺癌细胞株PANC-1。方法  使用聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction,PCR)检测RegⅣ基因在胰腺癌细胞株中的表达情况。构建重组靶向干扰RegⅣ基因的shRNA 慢病毒表达质粒pGC-shRNA-RegⅣ,用脂质体转染的方法将载体导入胰腺癌细胞,建立稳定表达shRNA的细胞株。使用荧光定量PCR检测干扰效率。RegⅣ基因过表达载体的构建方法为:将获取的目的基因与pEGFP-RegⅣ-3FLAG过表达质粒载体分别进行双酶切,利用电泳回收双酶切产物,转化感受态细胞并进行测序验证,验证成功后,使用Western blot检测其在293T细胞中的表达强度。结果  PCR结果显示RegⅣ在PANC-1中表达最高,在BxPC-3中表达最低。测序验证pGC-shRNA-RegⅣ重组质粒构建成功。将重组质粒稳定转染入胰腺癌细胞株PANC-1后能明显抑制RegⅣ mRNA 表达水平。过表达载体pEGFP-N1-3FLAG-RegⅣ合成成功后进行Western blot鉴定,验证pEGFP-N1-3FLAG-RegⅣ过表达载体构建成功。过表达RegⅣ基因转染BxPC-3后,与空质粒组相比,RegⅣ表达量明显提高。结论  成功建立了靶向稳定干扰RegⅣ基因表达的shRNA胰腺癌细胞株PANC-1。     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用。方法构建胰腺癌荷瘤裸鼠模型,将成瘤裸鼠随机分为4组,分别给予纯水（对照组）和含有不同浓度（0．05％、0．1％、0．15％）的塞来昔布饮水,观测裸鼠肿瘤生长情况并测量不同时间的体积变化,于治疗28d后处死裸鼠,测瘤体重量,应用caspase-3试剂盒检测caspase-3活性,免疫组织化学法检测肿瘤增殖指数（PI）和微血管密度（MVD）。结果治疗组裸鼠肿瘤体积的变化呈浓度依赖性和时效性;治疗28d后,治疗组瘤重量均明显低于对照组[（0．96±0．09）g、（0．78±0．06）g、（0．64±0．07）gvs（1．16±0．12）g,P〈0．01）];治疗组caspase-3相对活性明显高于对照组（0．021±0．002、0．026±0．003、0．031±0．002VS0．006±0．001,P〈0．01）。0．1％组、0．15％组的PI和MVD均明显低于对照组（P〈0．05）;0．05％组的PI和MVD虽均低于对照组。但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论COX-2抑制剂塞来昔布可显著抑制荷胰腺癌裸鼠的肿瘤生长,其作用机制可能是通过提高caspase-3活性来诱导细胞凋亡,通过抑制肿瘤细胞的增殖和新生血管的形成来发挥抗肿瘤效应,在临床上具有潜在的应用价值。     

血小板因子-4对人脑胶质瘤细胞增殖能力的影响

目的探讨PF-4对人脑胶质瘤细胞增殖能力的影响。方法人脑胶质瘤细胞U251传代培养,分别加入浓度为0（对照组）、900ng／ml、1200ng／ml、1500ng／ml的PF-4。采用MTT比色法测定0D值;利用LSCM测定经Fluo3标记的脑胶质瘤细胞内游离Ca2＋荧光强度。结果1．对照组0D值为0．261±0．016;实验组（）D值分别为0．210±0．008、0．193±0．010、0．162±0．019。经Student—Newman—Keul法比较,P〈0．05。2．对照组脑胶质瘤细胞内游离Ca2＋荧光强度为24．21±2．36;实验组脑胶质瘤细胞内游离Ca2＋荧光强度分别为39．35±3．31、52．39±3．26、65．56±2．81。经单因素方差分析,各组间差异P〈0．05。结论PF-4对人脑胶质瘤细胞增殖有明显的抑制作用,且具有剂量依赖性．随浓度的增加其抑制作用逐渐增强。     

Relationship between single nucleotide polymorphisms in the deoxycytidine kinase gene and chemosensitivity of gemcitabine in six pancreatic cancer cell lines

Background  Single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the deoxycytidine kinase (dCK) gene are associated with chemosensitivity to nucleoside analogs. 2′,2′-Difluoro 2′-deoxycytidine (gemcitabine) is a first-line nucleoside analog drug in the treatment of pancreatic cancer. However, the association between SNPs in the dCK gene and chemosensitivity to gemcitabine has not been fully established. Therefore, the present study aimed to investigate the relationship between SNPs in the dCK gene and chemosensitivity to gemcitabine in human pancreatic cancer cell lines.

Methods  Seven SNPs in the dCK gene were sequenced in six human pancreatic cancer cell lines. The chemosensitivity of these six cell lines to gemcitabine were evaluated in vitro with a Cell Counting Kit-8 (CCK-8) test. Inhibition rates were used to express the chemosensitivity of pancreatic cancer cell lines to gemcitabine.

Results  The genotype of the A9846G SNP in the dCK gene was determined in six human pancreatic cancer cell lines. The cell lines BxPC-3 and T3M4 carried the A9846G SNP genotype AG, whereas cell lines AsPC-1, Mia PaCa2, SW1990 and SU86.86 carried the GG genotype. Cell lines with the AG genotype (BxPC-3 and T3M4) were more sensitive to gemcitabine compared with cell lines with the GG genotype (AsPC-1, Mia PaCa2, SW1990 and SU86.86) and significantly different inhibition rates were observed between cell lines carrying the AG and GG genotypes (P <0.01).

Conclusions  Variants in the A9846G SNP of the dCK gene were associated with sensitivity to gemcitabine in pancreatic cancer cell lines. The dCK A9846G SNP may act as a genetic marker to predict chemotherapy efficacy of gemcitabine in pancreatic cancer.

     

不同CYP2C9基因型的2型糖尿病患者服用磺脲类药物的比较

目的：探讨不同CYP2C9基因型的2型糖尿病服用磺脲类药物后的达标情况.方法：对283例2型糖尿病患者进行CYP2C9基因型检测,检测出CYP2C9＊1/＊1野生型个体及CYP2C9＊1/＊3突变型个体.入选患者分成CYP2C9＊1/＊1野生型组和CYP2C9＊1/＊3突变型组,所有患者均单独使用磺脲类药物治疗（使用的磺脲类药物包括格列美脲2 mg、格列齐特缓释片30 mg、格列吡嗪5 mg）.比较两组患者治疗前、治疗后3个月末及6个月末的空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2HPG）和糖化血红蛋白（GHbA1c）达标情况.结果：CYP2C9＊1/＊3突变型组患者[治疗后6个月空腹血糖（6.27±0.62）mmol/L、GHbA1c（6.46±0.62）mmol/L]比CYP2C9＊1/＊1野生型组患者[治疗后6个月空腹血糖（7.04±0.97）mmol/L、GHbA1c（6.96±0.68）mmol/L]具有更高的达标率.结论：在治疗前检测2型糖尿病患者的CYP2C9基因型,能指导选择治疗方案,对于CYP2C9＊1/＊3突变型个体选用磺脲类药物.在避免低血糖发生的情况下可更有效控制患者的空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2HPG）和糖化血红蛋白（GHbA1c）的水平.