过表达 TRPM8对膀胱癌 T24细胞增殖和侵袭的影响

目的：观察过表达TRPM8基因的质粒pcDNA3．1－TRPM8对人膀胱癌 T24细胞增殖和侵袭能力的影响。方法将连有 TRPM8的质粒 pcDNA3．1－TRPM8稳定转染 T24细胞后筛选出阳性克隆。根据转染的质粒不同分为3组： T24组（未转染）、T24－0组[转染 pcDNA3．1（＋）质粒]和 T24－TRPM8组（转染 pcDNA3．1－TRPM8质粒）。应用 RT －PCR 检测 TRPM8 mRNA 改变,MTT 法检测 T24细胞的增殖情况,Transwell 检测细胞侵袭转移能力。结果T24－TRPM8组 TRPM8的 mRNA 水平表达较其他两组升高（P ＜0．05）,MTT 和 Transwell 分别显示 T24－TRPM8组 T24细胞增殖和转移率较其他两组增加（P ＜0．05）。结论过表达 TRPM8可以促进 T24细胞增殖及侵袭能力,从而促进膀胱癌的进展,是潜在的膀胱癌治疗靶点。     

人参皂苷通过NF-κB/NLRP3途径改善狼疮性肾炎小鼠肾损伤

目的探讨土贝母苷甲通过调控miR-215-5p表达对膀胱癌T24细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法不同质量浓度土贝母苷甲(10、20、30 mg/L)处理人膀胱癌细胞T24。细胞分别转染miR-NC、miR-215-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-215-5p,随后用土贝母苷甲(30 mg/L)处理T24细胞。CCK-8实验检测细胞增殖；平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力；Transwell实验检测细胞迁移及侵袭；qRT-PCR法检测miR-215-5p的表达；Western blotting法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达。 结果土贝母苷甲作用于T24细胞后,细胞存活率和MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞克隆形成、迁移及侵袭降低(P＜0.05),而miR-215-5p表达升高(P＜0.05),且呈剂量依赖性递减或递增。miR-215-5p过表达可抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭(P＜0.05)；抑制miR-215-5p可逆转土贝母苷甲对T24细胞恶性行为的抑制作用。 结论土贝母苷甲可通过促进miR-215-5p的表达而抑制膀胱癌细胞恶性行为。     

miR-34a调控Survivin表达对膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-34a调控生存素(Survivin)表达对人膀胱移行细胞癌T24细胞生物学行为的影响。方法:以实时定量逆转录PCR技术(qRT-PCR)和Western Blot免疫印迹技术分别检测人膀胱移行细胞癌T24细胞在转染miR-34a模拟物前后miR-34a和Survivin蛋白的相对表达量。同时以四甲基偶氮唑盐比色法(methyl-thiazol-tetrazolium,MTT)实验、划痕实验和Transwell实验分析转染后T24细胞生长、迁移及侵袭能力的改变。结果:与正常人膀胱上皮细胞SV-HUC-1细胞相比,T24细胞miR-34a丰度明显降低而Survivin蛋白表达明显上调(P<0.05)。在稳定转染miR-34a模拟物后,随着T24细胞中miR-34a表达丰度上升,Survivin蛋白的表达明显受抑(P<0.05)。而转染miR-34a模拟物后的T24细胞与转染前相比,其细胞增殖率、迁移和侵袭能力也显著降低(P<0.05)。结论:miRNA-34a可以通过抑制其靶基因Survivin影响人膀胱移行细胞癌T24细胞的多种生物学,是膀胱癌潜在的治疗靶点。     

miR-760靶向CDK8基因对人乳腺癌细胞 MDA-MB-231增殖与迁移的影响

目的探讨miR-760对人乳腺癌细胞中CDK8蛋白表达影响及其在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的功能。方法使用实时定量PCR方法检测miR-760在人乳腺癌细胞中的表达;使用脂质体介导的miRNA转染、Western印迹法、MTr法、流式细胞仪技术分别检测转染miR-760前后CDK8蛋白表达差异及其对乳腺癌细胞增殖、迁移等细胞功能和细胞周期的影响。结果人乳腺癌细胞中miR-760表达水平较正常乳腺细胞降低;外源性上调miR-760可有效抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231CDK8蛋白表达（抑制效率为46．3％,P〈0．05）;人乳腺癌细胞株MDA-MB-231转染miR-760后,其细胞增殖、迁移能力显著降低（P〈0．05）。结论miR-760可能通过靶向CDK8影响人乳腺癌细胞增殖与迁移,在乳腺肿瘤发生发展中起到抑癌基因作用。     

MiR-143在膀胱移行细胞癌中的表达和功能

目的:探讨microRNA 143(miR-143)在膀胱移行细胞癌中的表达及其对膀胱癌细胞系生物学行为的影响?方法:实时定量 RT-PCR法验证miR-143在膀胱癌中的表达?应用化学方法合成成熟miR-143(miR-143 mimics),瞬时转染J82?T24细胞,分别通过流式细胞计数和MTS检测miR-143对J82?T24细胞凋亡和增殖的影响?结果:miR-143在膀胱肿瘤中普遍低表达,体外转染miR-143能抑制J82?T24细胞生长,但对细胞凋亡无影响?结论:MiR-143可能参与膀胱癌的发生发展?     

MicroRNA-143对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨microRNA-143（miR-143）对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭、迁移和增殖的影响。方法在脂质体介导下将miR-143抑制剂（miR-143 inhibitors）转染入MCF-7细胞,以inhibitor negative control（inhibitor NC）作为阴性对照。通过MTS试剂盒检测细胞增殖能力,以Transwel 侵袭实验和迁移实验分别检测细胞侵袭能力和迁移能力。结果（1）miR-143 inhibitors组与inhibitor NC组间细胞增殖活性无明显差异（P＞0.05）;（2）Transwel 侵袭及迁移实验显示转染miR-143 inhibitors后,MCF-7细胞的侵袭及迁移能力均明显增强（P＜0.05）。结论 miR-143对人乳腺癌MCF-7细胞的侵袭及迁移能力存在负性调控作用,可能成为乳腺癌治疗的潜在靶点。     

调控microRNA-99b表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用

【目的】探讨上调microRNA-99b（miR-99b）表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。【方法】宫颈癌SiHa细胞分正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组。利用siPORT NeoFX Transfection Agent，阴性对照组细胞转染Cy3 dye labeled PremiR Negative Control，miR-99b调控组细胞转染Pre-miR-hsamiR-99b miRNA Precursor。实时定量PCR方法检测miR-99b表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测靶基因细胞分裂周期25A（CDC25A）蛋白表达。【结果】实时定量PCR结果显示，miR-99b调控组细胞，miR-99b表达增加107．23倍。正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组细胞增殖率分别为（3．26&#177;0．44）％、（3．65&#177;0．47）％和（2．24&#177;0．45）％，细胞凋亡率分别为（8．12&#177;1．54）％、（8．75&#177;1．67）％和（14．26&#177;1．70）％，细胞CDC25A蛋白表达分别为0．50&#177;0．06、0．59&#177;0．05和0.31&#177;0．05。与正常对照组和阴性对照组比较，miR．99b调控组细胞增殖率、凋亡率和CDC25A蛋白表达差异均有统计学意义（P〈0．05）。【结论】上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC25A表达，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，miR-99b可能成为宫颈癌治疗的靶基因。     

MiR-26b通过下调COX-2表达抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移

目的：观察不同级别神经胶质瘤中miR-26b和环氧化酶(COX)-2的表达情况,研究miR-26b对于神经胶质瘤 细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：运用Western印迹和实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测不同级别神经胶质瘤中 miR-26b和COX-2的表达情况;使用miR-26b mimic转染人神经胶质瘤细胞U87,上调miR-26b的表达;qRT-PCR检测miR- 26b mimic转染后miR-26b和COX-2 mRNA的表达变化情况;双荧光素酶报告基因系统检测miR-26b对COX-2转录活性的 影响;使用Transwell侵袭实验检测miR-26b对人神经胶质瘤细胞U87侵袭能力的影响;使用划痕实验检测miR-26b对人 神经胶质瘤细胞U87迁移能力的影响;使用CCK-8(cell counting kit-8)检测miR-26对人神经胶质瘤细胞U87增殖能力的影 响;裸鼠体内成瘤实验检测过表达miR-26b后胶质瘤细胞成瘤能力的变化。结果：随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加, miR-26b表达明显降低(P<0.05),而COX-2明显增加,差异有统计学意义(P<0.001);双荧光素酶实验证实miR-26b可以 直接靶向调控COX-2的蛋白表达水平;使用miR-26b mimic明显上调miR-26b的表达(P<0.05);上调miR-26b可以显著降 低COX-2的表达(P<0.05);上调miR-26b可以抑制神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05)。实验组和对照组相 比肿瘤的质量和体积都变小。结论：随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加,miR-26b表达逐渐降低,而COX-2表达逐渐增 加。miR-26b可通过抑制COX-2表达从而抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移。     

miRNA-381靶向HMGB1对IHH-4细胞生长侵袭及迁移的影响

目的探究微小RNA-381 (miR-381)调控高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)对甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞生长、侵袭及迁移的影响。方法购置甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞及正常甲状腺细胞Nthy-ori-3各1株,取第3代细胞培养48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-381和HMGB1在甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞和正常甲状腺Nthy-ori-3细胞中的表达水平。利用Lipofectamine 2000转染miR-381 mimic后,检测IHH-4细胞中miR-381和HMGB1的表达水平。生物信息学预测miR-381和HMGB1的靶向关系,并用荧光素酶报告实验验证两者的靶向关系。每孔按2×105/m L细胞密度接种IHH-4细胞,分为IHH-4组(甲状腺乳头状瘤细胞IHH-4组)、miR-381 mimic组(miR-381 mimic转染组)、pc-HMGB1组(HMGB1过表达转染组)、mimic+pc-HMGB1组(miR-381 mimic和pc-HMGB1共同转染组),每组设3个复孔,采用CCK8法检测各组IHH-4细胞活性,Transwell及划痕实验分别检测IHH-4细胞侵袭及迁移能力,免疫印迹法检测IHH-4细胞中Ki67、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9和晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达水平。结果与Nthy-ori-3细胞比较,IHH-4细胞中miR-381mRNA水平降低,HMGB1 mRNA水平升高,差异有统计学意义(P <0. 01)。与IHH-4组相比,miR-381 mimic组miR-381表达增加(P <0. 01)。miR-381和HMGB1存在靶向关系。与IHH-4组相比,miR-381 mimic组细胞增殖倍数、Ki67表达、侵袭细胞数、划痕闭合率、MMP-2、MMP-9和RAGE表达均降低(P均<0. 01),pc-HMGB1组上述指标均升高(P均<0. 01);与miR-381mimic组相比,mimic+pc-HMGB1组细胞增殖倍数、Ki67表达、侵袭细胞数、划痕闭合率、MMP-2、MMP-9和RAGE水平也明显上升(P均<0. 01)。结论 miR-381通过靶向下调HMGB1表达,抑制IHH-4细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-143-3p在甲状腺乳头状癌发展进程中的临床意义

目的 关于miR-143-3p在甲状腺乳头状癌(PTC)中的临床意义和作用机制尚不完全清楚,文中旨在探讨miRNA-143-3p在PTC组织的表达及临床意义,并探讨其对PTC细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法 收集2019年1月至2020年8月在河北北方学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科手术切除的52例患者的PTC组织及距肿瘤边缘2cm以上的癌旁组织。RT-PCR检测PTC及癌旁组织、人PTC细胞系TPC-1、BCPAP、K1及滤泡上皮Nthy-ori 3-1细胞中miR-143-3p的表达情况;脂质体转染法分别将miR-143-3p mimics、mimics-NC转染至TPC-1细胞,实验分为：空白对照组(无转染TPC-1)、阴性对照组(mimics-NC转染TPC-1)、mimics-143-3p组(miR-143-3p mimics转染TPC-1细胞)。以生长曲线、划痕实验及transwell实验检测3组细胞增殖、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验验证miR-143-3p与TFF3的靶向关系;Western blot检测miR-143-3p对EMT相关蛋白的影响。结果 ...     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

c-M yc和 COX-2在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

[目的]探讨原癌基因（c-Myc）和环氧合酶-2（COX-2）在年轻宫颈鳞癌（SCC）中的表达、微血管密度（MVD）及临床意义。[方法]选择年轻女性SCC组织标本40份、宫颈上皮内瘤变（CIN）标本31份,正常宫颈组织（NCE）10份,采用免疫组化SP法检测各组c-Myc、COX-2的表达水平和MVD ,分析其表达与肿瘤分期、病理分型、淋巴结转移等相关性。[结果]SCC中c-M yc 、COX-2的阳性表达率分别为62．5％（25/40）、67．5％（27/40）,均显著高于 CIN 组和 NCE组（ P ＜0．01）;c-Myc表达与分化及淋巴结转移有关（ P ＜0．01）,与分期无关;COX-2的表达与SCC的分期及淋巴结转移有相关性（ P ＜0．01）;NCE、CIN、SCC组中M VD呈逐渐升高趋势,在SCC组中c-M yc 、COX-2阳性表达和阴性表达的M VD值具有明显相关性（ P ＜0．01）;SCC组织中c-Myc 、COX-2表达呈正相关。[结论]c-Myc和COX-2在SCC发生、发展中起重要作用,两者在宫颈癌血管生成中有协调作用。     

蜂毒多肽对人膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用

目的探讨蜂毒多肽对人膀胱癌T24细胞的增殖及细胞周期的影响。方法以浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μg/ml的蜂毒多肽作用于体外培养的人膀胱癌T24细胞,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）的培养增殖抑制作用,用流式细胞仪检测蜂毒多肽对细胞增殖核抗原（PCNA）表达及对该细胞周期的影响。结果蜂毒多肽能够在体外抑制人膀胱癌T24细胞的增殖活性;抑制PCNA的表达,呈剂量依赖性,各浓度组PCNA量均较对照组降低（P〈0.05或P〈0.01）;干扰细胞周期,各浓度组G0/G1期均低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,S期高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,浓度10.0μg/ml和100.0μg/ml组G2/M期均高于对照组（P〈0.01）。结论蜂毒多肽可抑制膀胱癌T24细胞的增殖,其作用机制可能与PCNA的表达抑制及细胞周期受到干扰有关。     

膀胱癌中miR-203的表达及其对吉西他滨化疗敏感性的影响

目的 探讨microRNA-203(miR-203)在膀胱癌中的表达以及其对吉西他滨化疗敏感性的影响.方法 应用Vita-Blue法检测膀胱癌细胞系对吉西他滨的敏感性差异并测定半数抑制浓度(IC50)值.应用探针法实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Taqman-qRT-PCR)检测27例膀胱癌组织和癌旁组织以及膀胱癌细胞系5637、Um-Uc-3、J82、SCaBER、 T24、Biu87中miR-203的表达水平.同时构建带有四环素诱导表达系统的miR-203超表达载体(pINDUCER21-EGFP-miR-203), 在吉西他滨化疗耐受的 Um-Uc-3细胞中转染 pINDUCER21-EGFP-miR-203,并用多西环素诱导表达,未诱导表达的为阴性对照,在化疗敏感的T24细胞中分别转染 miR-203 Antagomir 和 Antagomir control,同样使用 Taqman-qRT-PCR 和Vita-Blue方法检测膀胱癌细胞系中miR-203表达水平的变化及对吉西他滨的敏感性.结果 在膀胱癌组织中miR-203的表达显著低于癌旁组织,在膀胱癌细胞系 T24中miR-203的表达水平最高,Um-Uc-3细胞系中表达水平最低(P＜0.01).膀胱癌细胞系T24和Um-Uc-3细胞中对吉西他滨的IC50值分别为(0.46 ±0. 08)ng/ml和(5. 94 ± 0. 53)ng/ml(P＜0.01);pINDUCER21-EGFP-miR-203(D +)可以明显增加Um-Uc-3细胞的化疗敏感性,而miR-203 An-tagomir可以显著抑制T24细胞对吉西他滨的化疗敏感性.结论 miR-203与膀胱癌的发生发展相关,其高表达水平将提高膀胱癌对吉西他滨的化疗敏感性.     

miR-548c-5p对乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的研究miR-548c-5p转染乳腺癌MCF-7细胞株后对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度的miR-548c-5p（50、75、100、125、150nmol／L）分别在24、48、72h不同时间点对细胞增殖的影响;miR-548c-5p转染MCF-7乳腺癌细胞株后,荧光定量PCR法检测其转染效率;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;流式细胞术分析干扰后细胞周期的变化;荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞凋亡的变化。结果使用RNA干扰技术成功地将miRNA转染入乳腺癌细胞株,使得miR-548c-5p的表达升高。转染后48hmiR-548c-5p浓度为125nmol／L时,对乳腺癌细胞的抑制作用最明显。miR-548c-5p表达上调后细胞G0／G1明显增多,而s期明显减少（P〈0．01）,能-定程度上抑制细胞的迁移。荧光显微镜观察发现早期凋亡细胞升高。结论miR-548c-5p通过干扰细胞周期,增加G0／G1期的乳腺癌细胞数,进而抑制细胞增殖。抑制乳腺癌细胞株MCF-7的迁移能力并显著促进其凋亡。miR-548c-5p影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡,有望成为乳腺癌诊疗的靶点之一。     

反义微小RNA-21对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨微小RNA-21（miRNA-21）反义寡核苷酸（ASOND）对人膀胱癌细胞株T24增殖和凋亡的影响,为膀胱癌的治疗提供理论依据。 方法：将脂质体介导的反义寡核苷酸（AS-miRNA-21）转染T24细胞,设转染无义序列组、对照组和AS-miRNA-21转染组,采用蛋白印迹(Western blotting)检测转染细胞miRNA-21表达水平,噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞仪（FCM）分别检测转染细胞的增殖和凋亡情况,转染无义序列组、对照组分别与AS-miRNA-21转染组比较。 结果：经过转染AS-miRNA-21的T24细胞miRNA-21表达水平下降,细胞增殖能力受抑。AS-miRNA-21组T24细胞增殖率为53.6%,转染无义序列组T24细胞增殖率为92.5%,对照组为100%;相对应的凋亡率分别为13.8%、1.9%和2.7%。上述3组间T24细胞的增殖率、凋亡率比较差异均有显著性（P<0.01）。 结论：反义miRNA-21对人膀胱癌细胞T24具有抑制增殖和促进凋亡的作用,抑制miRNA-21表达有望成为膀胱癌基因治疗的有效方法。     

靶向沉默Notch1基因对膀胱癌细胞系T24增殖的影响

目的探讨Notch1基因沉默对人膀胱癌细胞增殖的影响。方法用pGenesil质粒构建靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA1,并将其转染到膀胱癌细胞系T24中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测Notch1沉默后膀胱癌细胞生长变化、细胞周期和凋亡情况。逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记法（Western Blot）检测Notch1基因的mRNA和蛋白在转染前后表达变化。结果转染psiRNA1质粒后T24细胞的生长受到显著抑制,呈一定的时间依赖性（60?h内）,凋亡率增加,G0/G1期细胞明显增多（未转染组、空载体组、阴性对照组）,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且Notch1基因在mRNA和蛋白水平表达相对于对照组明显下调（P＜0.05）。结论沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖,Notch1在膀胱癌中可能具有癌基因的作用。