Ⅰ型脊髓灰质炎病毒中和抗原决定簇在白喉病毒融合蛋白中的表达

白喉杆菌分泌的白喉毒素(DT)是由二硫键连接的两个多肽链(A和B)所组成.纯化的DT经甲醛去除毒性后可用作菌苗.DT的中和抗原决定簇主要位于B片段中与膜受体结合处(即羧基末端).现已建立了在大肠杆菌中表达和纯化可诱导动物产生保护性抗体的DT重组蛋白的系统.本文报道一种新的基因工程DT融合蛋白,是将脊髓灰质炎病毒(PV)抗原决定簇插入DT B片段的羧基末端产生的.     

抗Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和性单克隆抗体的产生及其特性

作者分别用Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株、MEF-1及Saukett株作免疫原,通过26次融合,用中和试验筛选出350株能稳定地分泌抗脊髓灰质炎病毒中和性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞.其中分泌抗Ⅰ型病毒的McAb55株,Ⅱ型180株、Ⅲ型115株.先用各型的2个参考毒株检测McAb的中和活性,若为阳性,再与每个血清型已知特性的5个类疫苗株(VL)及5个     

用单克隆中和抗体确定Ⅰ型脊髓灰质炎病毒的亚型

脊髓灰质炎病毒型内抗原差异的分析在流行病学以及灰质炎疫苗安全性和效果的研究中具有重要意义。灰质炎病毒的型内鉴别方法很多,其中以应用交叉吸附免疫血清的抗原标志试验最好,但所有这些方法都不易制备高特异性的     

脊髓灰质炎病毒抗原部位和疫苗

鉴于最近脊髓灰质炎病毒中和抗体部位和应用合成肽疫苗的讨论,作者使用以下定义,发表了自己的观点。病毒中和抗原部位(N-Ag)这一术语,描述了衣壳蛋白质的一个部位,该部位由氨基酸组成,具有诱发和结合中和抗体的功能。     

Ⅰ型和Ⅱ型脊髓灰质炎减毒活疫苗的猴体神经毒力

[Marsden SA et al:J Biol Stand8(4):303,1980(英文)] 猴体神经毒力试验对脊髓灰质炎减毒活疫苗来说,仍然是一项重要的检定项目。Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎减毒活疫苗使用历史表明,它的猴体神经毒力随病毒株在细胞培养中传代水平而增高。为了确定Sabin株Ⅰ、     

Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法的建立及应用

目的  建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV）D抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,用于sIPV的体外效力评价。方法  以纯化D抗原分别免疫西门塔尔牛和BALB/c小鼠,获得牛免疫血清和小鼠单克隆抗体（单抗）杂交瘤细胞株,以杂交瘤细胞株免疫小鼠制备单抗腹水。牛血清和小鼠腹水分别经沉淀和亲和层析后得到纯化牛多克隆抗体（多抗）和小鼠单抗。以多抗为包被抗体、单抗为检测抗体进行配对筛选,建立D抗原定量检测的双抗体夹心ELISA。对方法的线性、范围、特异性、准确度、精密度以及在sIPV制备过程中样品检测的适用性进行验证。结果  纯化多抗和单抗均具有中和抗体活性,纯度分别达到80%和90%以上。经抗体配对筛选,确定3H10、901、1H10作为检测抗体,分别用于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA的建立。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型包被抗体的使用浓度分别为1:8 000、1:8 000、1:10 000, 3H10、901、1H10检测抗体的使用浓度分别为1:10 000、1:20 000、1:10 000。建立的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原检测方法的检测范围分别为0.4~13.0、0.4~12.0和0.4~20.0 DU/ml,线性回归决定系数≥0.99。该法能特异性检出D抗原,与C抗原、不同型别D抗原以及生产过程中的其他物质无交叉反应。用该法对高、中、低浓度样品进行测定,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型测定值/理论值（×100%）分别为97%～111%、91%～104%和95%～102%、相对标准偏差分别为≤7%、≤9%和≤10%;采用该法检测sIPV生产过程中的样品,显示出抗原纯化趋势。结论  建立了脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法,可有效用于sIPV的体外效力评价。     

在免疫人群中引起脊髓灰质炎爆发的Ⅲ型脊髓灰质炎病毒的抗原特性和分子特性

1984年8月至1985年1月,芬兰发生了一次小型脊髓灰质炎爆发流行。9例麻痹病人均由Ⅲ型脊髓灰质炎病毒引起,700份健康人粪便标本中有100份分离到Ⅲ型病毒。芬兰通过接种死疫苗来预防脊髓灰质炎,接种率达97%以上。这次爆发流行前的最后1例病人发生于1961年,自1964年以来从未在人群中分离到脊髓灰质炎病毒。在预防接种工作做得这样好的人群中发生脊髓灰质炎爆发流行,其原因值得研究。对从麻痹病人粪便标本中分离的7株病毒和从健康接触者粪便中分离的3株病毒作     

培养温度对脊髓灰质炎病毒繁殖及D抗原的影响

目的 选择脊髓灰质炎病毒繁殖的最佳温度,同时观察温度对病毒繁殖及D抗原的影响。方法   分别在25℃、33℃和37℃培养脊髓灰质炎病毒(Sabin株Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型),从24 h开始间隔12 h取样,至细胞完全病变或96 h,用ELISA检测病毒D抗原含量,绘制变化曲线;用微量细胞病变法检测感染性滴度,绘制病毒生长曲线。结果   三个型的脊髓灰质炎病毒在25℃均不繁殖;33℃和37℃均适合病毒繁殖。对于Ⅰ和Ⅲ型病毒,33℃的繁殖滴度及D抗原水平比37℃高;Ⅱ型病毒在两种温度下繁殖特性基本一致。结论   温度对脊髓灰质炎病毒繁殖起决定性作用,综合Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型病毒的温度繁殖特点,33℃培养比37℃更适合脊髓灰质炎病毒繁殖。     

Ⅰ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株间的重组病毒可作为候选Ⅲ型活疫苗株

本文报道在脊髓灰质炎病毒Mahoney株与和减毒Ⅰ型Sabin株间进行重组,应用感染性cDNA克隆构建了4个重组病毒:PV1(SM)IC-8b、PV1(SM)IC-11b、PV1(SM)IC-8a和PV1(SM)IC-11a。这4个重组病毒与其亲本株Mahoney和Ⅰ型Sabin株进行比较,包括猴神经毒力试验和体外表型特征试验。结果表明,主要编码病毒核壳蛋白的基因区段与神经毒力或减毒表型几乎没有关系,影响Ⅰ型病毒神经毒力或减毒表型的主要位点在基因组5′端非编码区。编码核壳蛋白的基因区域表现出对Ⅰ型病毒的神经毒力和减毒表型仅有微弱影响,     

两种方法对Ⅰ型Sabin株脊髓灰质炎病毒神经毒力的共同评价

目的 研究PCR和限制性内切酶分析突变（mutant analysis by PCR and restriction enzyme cleavage,MAPREC）技术和猴体神经毒力试验（monkey neurovirulence test,MNVT）评价同一批Ⅰ型Sabin株脊灰病毒神经毒力的结果差异。方法 采用MAPREC技术,检测Ⅰ型Sabin株脊灰病毒神经毒力关键位点480和525位点突变率;采用MNVT病理切片分析,评价Ⅰ型Sabin株脊灰病毒神经毒力。结果 MAPREC检测待测样品核酸480和525位点突变率均值为0.460%,低于高突变参考品的1.288%。MNVT切片结果分析表明,有效猴病变分值差合格。结论 对同一批样品,MAPREC与MNVT分析结果一致。     

Ⅰ型脊髓灰质炎病毒壳体蛋白VP1在大肠杆菌中的表达

脊髓灰质炎(以下简称脊灰)病毒壳体多肽中的VP1能诱生中和性抗体,在探索用DNA重组技术生产亚单位脊灰疫苗时,应研究VP1在大肠杆菌中的纯化和表达。     

Ⅰ型脊髓灰质炎疫苗有关病毒和野病毒在人体内繁殖过程中的分子变异

[Nottay BK et al:Virology.108(2):405,1981(英文)] 作者用寡核苷酸图谱法和PAGE对临床上分离的脊髓灰质炎Ⅰ型病毒株从基因组水平及基因产物(病毒核酸及病毒蛋白)的水平上,分析研究了其分子变异的情况。     

酶联免疫吸附试验测定脊髓灰质炎Ⅱ型病毒特异IgG抗体

近年来酶联免疫吸附试验(简称ELISA)已应用于检测多种病毒抗原或抗体的研究工作。目前肠道病毒血清抗体的鉴定一般用中和试验,但需时间长,过程复杂,而ELISA在肠道病毒常规诊断上的应用仍处在研究阶段,我们也进行了ELISA检测血清中脊髓灰质炎病毒抗体的初步研究,现将实验结果报导如下:     

脊髓灰质炎病毒中和抗体检测血清参考品的制备及稳定性

目的 制备抗脊髓灰质炎(脊灰)病毒血清作为检测参考品,并研究其稳定性.方法 用1、2、3型脊灰病毒分别接种非洲绿猴肾细胞,收获病毒液,超滤浓缩后纯化病毒抗原,并进行蛋白含量和纯度检测.用纯化的病毒抗原免疫新西兰白兔获得分别抗3个型别的血清,过滤、分装、冻干后,进行无菌检验、支原体检验、水分测定,用微量细胞病变抑制法进行特异性检测.3名实验员各标定5次候选参考品的中和抗体效价,计算变异系数.血清放置于-20℃进行稳定性分析.结果 纯化的1、2、3型脊灰病毒抗原蛋白含量分别为12.3、10.4、9.8μg/ml.电泳蛋白条带的相对分子质量与文献报道一致.高效液相色谱法检测的1、2、3型脊灰病毒抗原蛋白纯度分别为100％、99％和96％.抗各型脊灰病毒血清仅可中和对应型别,而不能中和另两个型别脊灰病毒或肠道病毒.无菌检验、支原体检验结果及水分含量(均低于3％)均符合药典要求.血清参考品的抗1、2、3型脊灰病毒中和抗体效价分别为73 587、3 264、34 857.候选参考品在-20℃放置5年后中和抗体效价未降低(t=-1.25,P=0.225).结论 制备的抗1、2、3型脊灰病毒冻干血清参考品稳定性好,适用于检测Sabin株脊灰灭活疫苗免疫原性及脊灰病毒特异性中和抗体.     

脊髓灰质炎灭活疫苗保护转基因小鼠抵抗3型脊髓灰质炎病毒的攻击

作者用5种脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)接种7～8周龄的表达人脊髓灰质炎病毒受体(PVR)的转基因(Tg)小鼠(TgPVR21).IPV A、B和C分别为单价3型Saukett株、Sabin-Pfizer株和Saukett株疫苗.A与B的制备方法及大鼠试验免疫原性相同,C与A、B生产技术细节不同.IPV D和E为三价疫苗(1型Mahoney,2型MEF-1,3型Saukett     

Ⅰ型和Ⅱ型精神分裂症的脑MRI比较

目的:探讨Ⅰ型和Ⅱ型精神分裂症是否存在脑MRI差异。方法:回顾性分析精神分裂症Ⅰ型(40例)和Ⅱ型(40例)患者的脑MRI检查情况。结果:MRI的总异常率为21.25%,其中精神分裂症Ⅰ型为7.5%,Ⅱ型为35.0%,两型比较差异有显著性。同时发现精神分裂患者脑MRI异常与家族遗传史有关。结论:Ⅰ型和Ⅱ型精神分裂患者脑MRI存在差异,支持Ⅱ型精神分裂症代表着一种器质性改变。     

鉴别来自疫苗的和野型脊髓灰质炎病毒株的参数

在50年代,简单的血清学试验对已知三个型脊髓灰质炎病毒的检定,几乎满足了诊断的需要。随着脊髓灰质炎活疫苗的问世和广泛应用,就需要更有价值的试验(遗传特征试验)来标定分离毒株的型内特征。显然,对脊髓灰质炎病毒所做的适当试验,必须回答公共卫生上首当其冲的两个问题:一、所研究的毒株是减毒株,仰或是强毒株;二、     

用单克隆抗体分析白喉毒素:Ⅰ.抗原决定簇的定位和细胞毒的中和

用白喉类毒素免疫小鼠,将其脾细胞与NS1骨髓瘤细胞融合,得到43株产生抗白喉毒素单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系.用此McAb对毒素分子的抗原决定簇定位的方法是用固相ELISA和/或Western印染法测定McAb和以下物质的反应情况:(1)分离出的毒素的A片段(Fa)和B片段(Fb);(2)提早终止的tox基因产物;(3)同CNBr结合     

脊髓灰质炎病毒衣壳多肽VP1、VP2和VP3诱生中和抗体

作者研究了脊髓灰质炎(以下简称脊灰)病毒的三个重要衣壳多肽VP1、VP2和VP3的抗原性和免疫原性。采用提纯的脊灰活毒或福尔马林灭活病毒(I型Mahoney株、11型MEF株及l型Saukett株)作为分离衣壳多肤的原材料,用SDSpAGE进行分离。每隔3~6周给Wistar鼠及新西兰兔重复肌注50一10郊g多肤以制备抗多     

脊髓灰质炎病毒衣壳多肽VP1、VP2、和VP3诱导中和抗体

作者证明了脊髓灰质炎病毒的3个重要衣壳多肽VP1、VP2和VP3有诱导中和抗体的能力。采用提纯的脊髓灰质炎清病毒或福尔马林灭活病毒(Ⅰ型Mahoney株、Ⅱ型MEF株和Ⅲ型Saukett株)作为分离衣壳多肽的原材料。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离农壳多肽。每隔3～6周给Wistar鼠及新英格兰兔重复肌肉注射50～100μg多肽以制备抗多