3种检测方法在疟疾实验室诊断中的比较分析

目的比较3种实验室检测方法在疟疾诊断中的优缺点,为疟疾诊断提供参考依据。方法分别采用镜检、快速诊断试剂和巢氏PCR 3种检测方法对收集到的222份疟疾样本进行检测,并对检测方法及结果进行比较分析。结果综合3种检测方法,222份疟疾样本最终确诊220例,阳性率为99.10%,其中镜检阳性率为93.24%,快速诊断试剂检测阳性率为94.59%,巢氏PCR检测阳性率为96.40%。以最终诊断结果为金标准,镜检、快速诊断试剂和巢式PCR灵敏度分别为94.09%,95.45%,97.27%。结论镜检、快速诊断试剂和巢氏PCR 3种检测方法各有优缺点,建议三者结合起来提高疟疾诊断的效率。     

实时荧光定量PCR技术在常见呼吸道传染病检测中的应用

目的:建立快速筛查呼吸道标本的实时荧光定量PCR法,考察其在呼吸道病原体快速筛查中的应用。方法:采用国家标准细菌培养、病毒培养、实时聚合酶链反应(PCR)技术对2007年-2009年12月份丽水市10起常见呼吸道疫情的232份样本进行检测,比较方法的灵敏度、特异性及准确性。结果:166份样本的细菌培养与实时荧光定量PCR检测结果符合率为62.50%,其中6份普通细菌培养阴性,PCR阳性。66份样本的病毒培养与实时荧光定量PCR检测结果符合率为88.89%。结论:实时荧光定量PCR不但检测速度快,操作方便,而且具有准确、灵敏度高、特异性好的优点。     

实时荧光PCR法快速分离食源性致病菌

目的建立快速的食源性沙门菌和志贺菌检测方法,以提高对该菌的检验速度和准确性,为公共卫生,食源性致病菌监测,突发性群体性食物中毒事件提供技术支持。方法采用实时荧光PCR法和培养法对40份不同类食品进行沙门菌和志贺菌的检测,并对分离的菌株进行血清分型和定量检测,比较两种方法的特异性,灵敏度,准确性。结果采用实时荧光PCR法检测40份样本,其中8份沙门菌核酸阳性,阳性率20%;采用培养法检测这40份样本,4份样品分离出沙门菌,阳性率10%,且4份样品经核酸检测均为阳性,32份核酸阴性样本采用培养法检测,均未分离到沙门菌和志贺菌。结论实时荧光PCR法结合传统分离培养法适宜食品中沙门菌,志贺菌的快速筛查鉴定及食物中毒等突发事件的快速诊断。     

2015年大连市疟疾病例实验室检测结果分析

目的:分析大连市疟疾病例实验室检测结果,为疟疾诊断方法的选择提供理论依据。方法 :收集2015年大连市疟疾患者的血片和血液样本,应用镜检,RDT和巢氏PCR(Nest-PCR)分别对血片和血样进行检测。结果:17份样品镜检检出恶性疟原虫10例,卵形疟原虫1例,阴性6例;RDT检出恶性疟原虫13例,共同抗原阳性者1例,阴性3例,与镜检结果一致率为82.4%(14/17);巢式PCR检出恶性疟原虫13例,阴性4例,与镜检结果一致率为82.4%(14/17),与RDT结果的一致率为94.1%(16/17)。结论:采用镜检和RDT联合应用的方法,能够提高检测的敏感性,巢式PCR可提高虫种鉴定的准确性。     

实时荧光定量PCR在HLA-B~*5801等位基因检测中的性能评价

目的:评价采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测人类白细胞抗原B位点5801(HLA-B*5801)等位基因的重复性、准确性和最低检出限。方法:选取HLA-B*5801阳性和阴性样本各2例,每一样本每批内测定5次,连续测定2 d,共重复测定10次,评价方法的重复性。收集20例已知阳性和阴性样本,实时荧光定量PCR方法进行检测,同时与金标准DNA测序法的结果进行比对,评价方法的准确性。同时进一步选取其中1例阳性DNA样本进行梯度稀释后再行检测,评价方法的最低检出限。结果:4例样本重复性检测阳性和阴性符合率为100%;实时荧光定量PCR法与DNA测序法检测结果符合率为100%,收集的20例已知阳性和阴性样本中HLA-B*5801阳性8例,阴性12例;实时荧光定量PCR的最低检出限为2.5 ng/μl DNA。结论:实时荧光定量PCR可方便、快捷地检测HLA-B*5801等位基因,其准确度高,重复性好,适用于临床常规样本的检测。     

实时荧光定量PCR技术在副溶血性弧菌快速检测中的应用

目的:建立副溶血性弧菌荧光定量PCR检测方法,应用于食品、食物中毒样本的快速检测。方法:食品样本先选择性增菌,取上层液提取DNA,粪样直接提取DNA,用实时荧光定量PCR方法进行检测,并与常规培养法进行比较。结果:用实时荧光定量PCR检测食品54份,食物中毒粪样12份,检测阳性食品21份、粪样9份,检测结果与培养法比较,阳性检出率分别为食品38.9%、31.5%;粪样均为75.0%。结论:副溶血性弧菌的实时荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏的优点。     

国境口岸疟疾快速联合检测方法应用评估

目的对疟疾快速检测方法的联合应用进行评价,探索适用于口岸的疟疾快速检测方法。方法选取来源于中国科学院寄生虫病研究所的疟原虫镜检阳性滤纸血样本,其中30例恶性疟,28例间日疟和20例正常人对照样本;同时使用检测疟疾的实时荧光PCR方法、交叉引物恒温扩增方法、胶体金技术对其进行检测;分析各方法检测的敏感性和特异性。结果实时荧光PCR法检测恶性疟原虫的灵敏度高于交叉引物恒温扩增法和胶体金法(P值分别为0.019、0.043,P<0.05);对低原虫密度的恶性疟样本(原虫密度10～100及101～1000个/μl),实时荧光PCR法检测的灵敏度较高,交叉引物恒温扩增法和胶体金法对于低原虫密度的恶性疟样本检测灵敏度显著低于PCR法;交叉引物恒温扩增和胶体金法联合检测在恶性疟各原虫密度下的灵敏度均高于使用单一方法的灵敏度,与实时荧光PCR法的灵敏度比较,差异无统计学意义(各原虫密度下,两者比较的P值分别为0.29、0.302、1.000、1.000,P>0.05)。实时荧光PCR法对间日疟样本检测灵敏度较高,交叉引物恒温扩增和胶体金法的灵敏度显著低于实时荧光PCR法,两者共检能提高检测的灵敏度。结论交叉引物恒温扩增法和胶体金法联合检测,可以较好地筛选出各种原虫密度的感染者,该联合检测方法的灵敏度和特异性与实时荧光PCR法相当,适合国境口岸对疟疾现场快速检测的要求。     

基于M基因构建的麻疹病毒实时荧光PCR检测技术

目的:建立麻疹病毒的实时荧光PCR检测方法并应用于临床标本的检测。方法:根据四十年来在我国流行的麻疹病毒M基因序列,设计用于病毒实时荧光PCR检测的引物和探针,建立麻疹病毒实时荧光PCR检测方法。用此法对40例麻疹的病人标本进行检测,并与血清学检测结果比较。结果:通过40例病人标本中实时荧光PCR检测,39份阳性,1份阴性,阳性率97.5%,高于血清学检测(阳性率77.5%)。结论:该方法方便快捷、特异性强、敏感性高,可用于麻疹病毒的快速诊断和分子流行病学调查。     

套式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫方法的建立及其应用研究

目的建立简便、灵敏、低成本的恶性疟原虫与间日疟原虫套式PCR检测方法,并探讨应用于间日疟原虫实验室检测的效果。方法制备抗凝静脉血的干滤纸血滴标本,采用干滤纸5%Chelex-100煮沸法提取疟原虫DNA,并进行套式PCR反应;通过比较PCR检测结果与疟原虫镜检结果,评价套式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫方法的效果。结果在42份样本中,有34份血样PCR检测结果与镜检结果一致,占81%;5份镜检结果无法判断的血样,PCR检测为阳性或阴性;2份镜检结果为阴性的血样,套式PCR检测为阳性。结论套式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫结果可靠,比镜检方法灵敏,有望在疟疾的实验室诊断中得到应用。     

水痘病毒快速检测方法研究

目的:建立水痘病毒快速检测方法,应用于学校、托幼机构群体性水痘疫情的快速检测,及时控制疫情蔓延。方法:采集疫情病例的血液、鼻咽拭子,运用ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒(VZV)IgM抗体;用实时荧光定量PCR方法检测核酸,并与常规细胞培养法进行比较。结果:疑似水痘疫情病例血液样本,ELISA法检测42份,阳性17份,阳性率40.5%;荧光定量PCR法检测34份,阳性17份,阳性率50.0%。常规细胞培养法检测12份鼻咽拭子样本,阳性6份,阳性率50.0%。经统计学分析(χ2=0.23,P>0.05)无统计学差别。结论:ELISA法检测快速、方便;荧光定量PCR法灵敏、准确,两者可应用于水痘突发疫情的快速检测。     

实时荧光聚合酶链反应检测解脲脲支原体的临床意义

目的探讨实时荧光聚合酶链反应(PCR)在检测解脲脲支原体(Uu)中的临床意义。方法对278例未经治疗的门诊就诊者和35例确诊为Uu感染的患者经抗菌药物应用两周停药1周后分别采用实时荧光PCR和培养技术进行Uu的检测。结果 278例首次就诊者经实时荧光PCR检测Uu阳性125例,阳性率44.96%,培养阳性113例,阳性率40.65%,两者比较差异无统计学意义,35例确诊为Uu患者经抗菌药物治疗后停药1周,采用实时荧光PCR检测阳性12例,阳性率34.29%,但病原体含量要远远低于用药初期,35例患者经培养阳性5例,阳性率14.29%;两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论实时荧光PCR在判断是否存在Uu感染时要较培养法灵敏,对经抗菌药物治疗停药后判断是否治愈时培养法要较荧光PCR更为准确。     

两种方法比对食品中阪崎肠杆菌检验

目的:比对食品中阪崎肠杆菌检验的国标法和实时荧光PCR法,确保检测结果准确。方法:分别按照GB4789.40-2010《食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》和PCR法操作要求进行检验,所得结果进行比对分析。结果:查10类食品共850份样品,检出阪崎肠杆菌54株,国标法检出率为6.4%;PCR法阳性率为7.4%。结论:联合使用两种方法鉴定阪崎肠杆菌可提高检测结果的可靠性,报告以国标法为准。     

大肠埃希菌O157:H7的实时荧光PCR检测方法研究

目的建立一种敏感、特异、快速的大肠埃希菌O157:H7的检测方法,应用于突发公共卫生事件及食源性致病菌流行病学调查的检测。方法根据GenBank大肠埃希菌O157:H7rfbE基因序列,设计引物和TaqMan探针,对实时荧光PCR反应条件进行优化,建立实时荧光PCR检测大肠埃希菌O157:H7的反应体系,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果大肠埃希菌O157:H7菌株的检测结果均为阳性,而所有其它菌株检测结果均为阴性;该方法检测的灵敏度可达1×102cfu/ml。模拟污染的猪肉、羊肉、鸡肉、生食蔬菜样品,均可检出1×104cfu/ml的细菌。从细菌核酸提取至完成检测约需3 h。结论建立的实时荧光PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、快速等优点,可用于大肠埃希菌O157:H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

荧光PCR方法快速检测食物中毒标本中的金黄色葡萄球菌

目的快速检测食物中毒标本中的金黄色葡萄球菌。方法采集到的肛拭子和剩余食物标本直接进行金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测，并做分离培养。结果从采集到的肛拭子和剩余食物标本分离到金黄色葡萄球菌，而且PCR检测结果阳性。结论金黄色葡萄球菌是此次食物中毒的病原体。     

实时荧光PCR检测风疹病毒的应用研究

目的建立风疹病毒的实时荧光PCR检测方法并应用于临床标本的快速检测。方法分析近四十年来流行的风疹病毒E1基因序列,设计用于病毒实时荧光PCR检测的引物和探针,建立风疹病毒实时荧光PCR检测方法。对30例临床诊断为风疹的患者标本进行实时荧光PCR检测,并与血清学检测结果进行比对。结果 30例患者标本中实时荧光PCR检测,27份阳性,3份阴性,阳性率为90.0%,远高于血清学检测(阳性率70.0%)。结论该方法具有方便快捷、特异性强、敏感性高等特点,为风疹病毒的快速诊断和分子流行病学调查提供了技术支撑。     

Evaluation of a real-time PCR assay for malaria diagnosis in patients from Vietnam and in returned travellers

Real-time PCR diagnosis of malaria has advantages over traditional microscopic methods, especially when parasitaemia is low and when dealing with mixed infections. We have developed a new real-time PCR with specific genes in each Plasmodium species present only in one copy to identify the four pathogenic Plasmodium spp. for humans. The sensitivity was less than 25 parasites/microl. No cross-hybridisation was observed with human DNA or among the four Plasmodium spp. Using LightCycler PCR and conventional microscopy, we compared the diagnosis of malaria in patients from Vietnam and in returned European travellers with suspicion of malaria. In patients from Vietnam with suspicion of malaria, one mixed infection was observed by PCR only; the remaining data (54 of 55 patients) correlated with microscopy. In 79 patients without symptoms, low parasitaemia was detected in 7 samples by microscopy and in 16 samples by PCR. In returned travellers, PCR results were correlated with microscopy for all four species in 48 of 56 samples. The eight discrepant results were resolved in favour of real-time PCR diagnosis. This new real-time PCR is a rapid, accurate and efficient method for malaria diagnosis in returned travellers as well as for epidemiological studies or antimalarial efficiency trials in the field.     

多重荧光PCR检测婴幼儿食品中常见病原菌

目的建立婴幼儿食品中3种常见病原菌的多重荧光PCR检测方法。方法根据阪崎杆菌16S-23SrDNA保守区、金黄色葡萄球菌耐热核酸酶（nuc）基因序列和蜡样芽胞杆菌cerA特异基因,设计合成引物和探针,优化反应条件。结果建立的多重荧光PCR方法只特异性地扩增目标病原菌;用国标法和多重荧光PCR方法同时对194份奶粉和米粉样品进行检测,结果完全一致。多重荧光PCR方法检测过程可在8h内完成。结论建立的多重荧光PCR法敏感性高、特异性强、快速、准确,可同时检测婴幼儿食品中的阪崎杆菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌,适合批量样本检测,有很好的应用前景。     

基于cfb和scpb基因的无乳链球菌PCR检测方法比较及临床应用

目的 比较基于cfb和scpb基因检测无乳链球菌(GBS)的两种PCR方法,建立合理的实时荧光PCR检测体系,实现快速检测生殖道无乳链球菌的目的.方法 通过对60株临床分离的无乳链球菌和15株非无乳链球菌进行PCR扩增,对比和验证cfb和scpb基因的敏感性和特异性,选择检测性能更好的基因为靶标,建立实时荧光定量PCR...