枸杞糖缀合物和糖链对小鼠巨噬细胞功能的影响

目的确定巨噬细胞是枸杞糖缀合物和糖链免疫作用的靶细胞之一。方法应用中性红吞噬实验和鸡红细胞吞噬实验测定了枸杞糖缀合物LbGp4和糖链LbGp4-OL对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;用硝酸根还原法、酶联免疫吸附实验(ELISA)和生物活性测定法测定了巨噬细胞产生一氧化氮(NO)、IL-1β和TNF-α含量和生物活性的变化。结果LbGp4和LbGp4-OL在(10~100)mg.L-1剂量范围内均可剂量依赖性地促进静息巨噬细胞吞噬中性红的能力,增加活化的巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数;增加巨噬细胞培养上清NO、IL-1β和TNF-α的浓度,并增强对L929细胞的杀伤活性,促进胸腺细胞的增殖反应。结论LbGp4和LbGp4-OL对静息和活化的腹腔巨噬细胞的吞噬功能具有明显的促进作用,对巨噬细胞产生NO、分泌IL-1β和TNF-α的含量和生物活性亦具有明显的促进作用,表明巨噬细胞是LbGp4和LbGp4-OL免疫作用的靶细胞之一。     

枸杞糖缀合物LbGp2的理化性质和活性研究

目的　分离纯化枸杞糖缀合物(LbGp2 )并研究其理化性质及活性。方法　采用柱色谱法得到LbGp2 ,经HPLC ,CE ,GC ,SEC及糖含量分析、元素分析和氨基酸分析等研究其理化性质,并用半体内法、形态学计数法和比色法等研究了Lbp2对腹腔巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞的转化以及对小鼠血清半数溶血等的影响。结果　LbGp2是均一组份,其分子量为6.8×10⁴,糖含量为90.7% ,糖组成为Ara Gal 3∶4(摩尔比) ,并含有18种天然氨基酸。免疫活性试验表明Lbp2具有显著的免疫增强作用。同时还具有很好的抗氧化作用。结论　LbGp2是均一的糖缀合物,有免疫活性和抗氧化活性     

枸杞粗多糖的免疫活性

为进一步分离纯化枸杞多糖并进行深入的免疫药理学研究 ,应用淋巴细胞增殖 ,溶血空斑 ,杀伤性T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性测定 ,酶联免疫测定法和噻唑蓝等方法研究了枸杞粗多糖 (LBP)的免疫活性特点 .结果发现 :口服给予LBP对LACA小鼠脾细胞增殖反应和抗体生成反应均具有明显的促进作用 ,但对CTL细胞特异性杀伤P815瘤细胞的杀伤活性无明显影响 ;明显增加快速老化模型小鼠(SAMP8)脾抗体生成细胞的数目 ,升高脾细胞产生抗体IgG水平 .结果提示 ,LBP是枸杞子中主要免疫活性成分 ,促进或改善体液免疫功能可能是其对免疫系统的主要作用之一 .     

刺糖多糖免疫活性的初步研究

目的研究刺糖多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。方法采用水提醇沉法得刺糖多糖。建立免疫抑制小鼠动物模型,小鼠灌胃刺糖多糖,利用碳粒廓清实验测定非特异性免疫功能;血清溶血素实验反映抗体生成水平;测定血清中细胞因子的生成水平来评价刺糖多糖的免疫活性。结果刺糖多糖可以增强免疫抑制小鼠的碳粒廓清能力和血清溶血素水平,能够提升由环磷酰胺造成的免疫抑制小鼠血清中IL-2、IL-10的含量。结论刺糖多糖对免疫抑制小鼠免疫功能有促进作用。     

钝顶螺旋藻糖缀合物SPPA-1的理化性质及活性的研究

目的　研究螺旋藻多糖中的均一组分SPPA-1的分离方法、糖组成、分子量及生物活性。方法　采用丙酮分部沉淀,三氯乙酸去蛋白,再经SephadexG-75和CM-SephadexC-50柱色谱得到SPPA-1,用气相色谱法测定单糖组成,GPC法测定分子量,IR和NMR法确定糖苷键类型。结果　经高压液相色谱和毛细管电泳鉴定为均一性组分。其总糖含量为91.70%,N含量为0.96%,分子量为69.00×10⁴Da。糖组成分析表明其由单一的葡萄糖组成,红外光谱、核磁共振¹HNMR谱分析表明,其单糖类型为α-吡喃型。ESR研究表明SPPA-1具有清除O^-₂自由基活性。结论　SPPA-1为一具抗氧化活性的葡聚糖。     

钝顶螺旋藻糖缀合物SPPA-1的理化性质及活性的研究

目的　研究螺旋藻多糖中的均一组分SPPA 1的分离方法、糖组成、分子量及生物活性。方法　采用丙酮分部沉淀 ,三氯乙酸去蛋白 ,再经SephadexG 75和CM SephadexC 5 0柱色谱得到SPPA 1,用气相色谱法测定单糖组成 ,GPC法测定分子量 ,IR和NMR法确定糖苷键类型。结果　经高压液相色谱和毛细管电泳鉴定为均一性组分。其总糖含量为 91 70 % ,N含量为 0 96 % ,分子量为 6 9 0 0× 10 4 Da。糖组成分析表明其由单一的葡萄糖组成 ,红外光谱、核磁共振1HNMR谱分析表明 ,其单糖类型为α 吡喃型。ESR研究表明SPPA 1具有清除O·2 自由基活性。结论　SPPA 1为一具抗氧化活性的葡聚糖     

钝顶螺旋藻糖缀合物SPPA-1的糖链化学结构研究

目的研究从钝顶螺旋藻中分离纯化得到的糖缀合物SPPA-1的糖链结构。方法应用了气相色谱、甲基化分析和1H,¹³CNMR及2DNMR技术研究糖链结构。结果SPPA-1的糖链是由单一葡萄糖组成,其重复单元是由1→4连接的葡萄糖糖残基组成的主链且具有分支。结论SPPA-1的糖链部分为一新的葡聚糖。     

枸杞子糖缀合物及其糖链对LDL氧化修饰的抑制作用

目的　研究枸杞子糖缀合物及其糖链对LDL氧化修饰的抑制作用。方法　在Cu²⁺诱导的LDL氧化模型中测定了脂质过氧化产物硫代巴比妥酸反应物质（TBARS）的含量及LDL在琼脂糖凝胶电泳上的迁移率以反映从枸杞子中分离、纯化得到的糖缀合物及糖链对LDL氧化修饰的抑制作用。结果　枸杞子糖缀合物及糖链抗LDL氧化的能力是不同的,其中LbGp5可明显的抑制LDL的氧化。结论　枸杞子糖缀合物具有抗LDL氧化作用,而糖链不具有抗LDL氧化的作用。     

枸杞多糖联合氟尿嘧啶对荷瘤小鼠免疫功能影响的实验研究

目的探讨枸杞多糖单独应用及与氟尿嘧啶联合应用于荷S180小鼠的抗肿瘤机制。方法小鼠右前侧腋窝接种S180肿瘤细胞,制造荷瘤小鼠模型。实验分为生理盐水组、氟尿嘧啶组、枸杞多糖高、中、低剂量组以及枸杞多糖加氟尿嘧啶组。实验结束后,检测各干预组脾指数、瘤重、肿瘤抑制率,MTT法检测淋巴细胞增殖反应、LDH检测NK细胞毒作用及中性红实验评估巨噬细胞吞噬能力,Griess法检测NO浓度,ELISA法测定TNF-α水平。结果枸杞多糖抑制荷S180小鼠肿瘤生长,刺激脾细胞增殖反应,提高NK细胞细胞毒效应以及巨噬细胞吞噬能力,刺激巨噬细胞NO分泌量,提高血清TNF-α水平。与氟尿嘧啶联合应用降低了氟尿嘧啶导致的免疫系统损伤。结论枸杞多糖可能是化疗药物的有效辅助药物。     

Structure elucidation of glycan of glycoconjugate LbGp3 isolated from the fruit of Lycium barbarum L

The structure of the repeat unit of the glycan of glycoconjugate LbGp3 with pronounced immuno-activity, isolated from the fruit of Lycium barbarum L. was elucidated based on methylation analysis, partial acid hydrolysis and ¹H, ¹³C NMR spectroscopy of the original glycan and products of its partial hydrolysis.     

不同产地枸杞药材中多糖的含量测定

目的建立枸杞多糖的含量测定方法,并测定不同产地枸杞药材中多糖的含量。方法采用水提醇沉法制备枸杞多糖,将枸杞多糖脱蛋白后制得精制枸杞多糖,以精制枸杞多糖测得枸杞多糖对葡萄糖的换算因子后,用苯酚-硫酸法测定不同产地枸杞药材中多糖的含量。结果平均回收率为98.8%,测得不同产地枸杞药材中多糖含量分别为4.03%、7.55%、2.92%、4.99%、3.54%和4.67%。结论该法操作简单,结果较接近真实值;不同产地枸杞中多糖含量的差异较大,该结果为枸杞多糖质量控制和药效评价的进一步研究奠定了基础。     

不同产地宁夏枸杞果实品质比较研究

目的检测不同产地枸杞子药材的主要品质指标,比较各产地药材的异同。方法在对不同产地的枸杞子进行外观品质指标测量的基础上,采用分光光度法进行枸杞多糖和甜菜碱含量测定,应用滴定法进行枸杞总糖含量测定。结果青海产枸杞果实百粒质量最高,河北最低,总体呈现青海>甘肃>新疆>宁夏>内蒙古>河北的变化趋势。枸杞果实主要药用成分多糖以宁夏、甘肃和新疆栽培的枸杞果实含量相对最高,且三者间差异不显著,其次为内蒙古产枸杞,河北和青海产枸杞果实多糖含量最低;总糖含量以宁夏和青海最高,其次为内蒙古、甘肃和新疆,且三者差异不显著,河北产枸杞总糖含量最低。甜菜碱含量以河北产枸杞最高,其次为青海、甘肃、内蒙古和新疆,而以宁夏产枸杞最低。结论不同产地枸杞质量存在差异,且不同产地枸杞果实百粒质量大小与主要有效成分含量间无准确的对应关系,提示现行枸杞商品等级划分标准尚需进一步完善。     

吡虫啉在枸杞中的残留动态研究

目的:研究20%吡虫啉可溶性液剂在枸杞中的消解动态。方法:采用高效液相色谱法,样品经甲醇提取,二氯甲烷萃取,层析柱净化,采用十八烷基键合硅胶柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1%磷酸-乙腈,梯度洗脱;检测波长270nm。结果:样品的添加回收率为87.6%～96.0%,RSD 为1.5%～3.1%。吡虫啉在枸杞中的半衰期为1.63 d,施药10 d 后残留量降至0.0126 mg·kg~(-1),最终残留量在0.002 mg·kg~(-1)以下。结论:在正常喷药浓度的加倍剂量2000倍条件下,安全采收间隔期为5 d 以上。     

枸杞中重金属及有害元素形态分布及其安全性评价

目的对枸杞Lycium barbarum L.中重金属(Cu、Cd、Pb和Hg)及有害元素As的形态进行分析,了解枸杞样品中重金属及有害元素的形态分布,并对其安全性进行评价。方法采用Tessier连续提取法提取枸杞样品中不同形态的重金属及有害元素,利用原子吸收分光光度法对所测重金属及有害元素的含量进行测定;参照2015年版《中国药典》枸杞项下的重金属限量标准对其进行安全性评价。结果所测枸杞样品不同形态的4种重金属元素Cu、Cd、Pb和Hg的总量分别为44.351 7,0,2.614 1和0.056 9mg·kg-1,有害元素As的总量为0.359 5mg·kg-1;其中Cu元素以残渣态为主,占总量的24%;Pb元素几乎全以铁-锰氧化物结合态存在;Hg元素以水溶态为主,占其总量的18%;As元素残渣态含量最高,占其总量的29%。所测4种重金属及有害元素的单一形态含量均符合2015年版《中国药典》的规定。结论研究结果对枸杞的临床应用及其重金属和有害元素的控制有一定的指导意义。     

薄层色谱法鉴别枸杞子的实验研究

归纳枸杞子的薄层色谱展开条件,经系列实验确立最佳展开系统为:甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.2)。     

RP-HPLC法测定不同产地枸杞中绿原酸含量

目的建立反相高效液相色谱法测定宁夏枸杞中绿原酸含量的方法。方法色谱分析条件Shim-pack VP-ODS色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,以乙腈∶水∶冰乙酸（5∶94.5∶0.5）为流动相A,乙腈∶水∶冰乙酸（70∶29.5∶0.5）为流动相B,采用梯度洗脱,流速0.5ml/min,检测波长342nm,柱温30℃。结果绿原酸线性范围为10～100μg/ml（相关系数为r=0.9995）,平均回收率为98.6%（n=5）;不同产地、不同年份宁夏枸杞样品中绿原酸含量存在差异,随保存时间的延长,绿原酸含量减少,但减少程度不明显。结论本方法重现性好,适用于测定枸杞中绿原酸的含量。     

枸杞子的化学成分

从宁夏枸杞（Licium barbarum L.）的果实（枸杞子）中分离得到13个化合物，经光谱等方法鉴定其结构为8个长链脂肪酸（1－8），对羟基桂皮酸（p-coumaric acid,9），胡萝卜甙（daucosterol,10），β－谷甾醇－（β－sitosterol,11），甜菜碱（betaine,12），莨菪亭（scopoletin,13）。其中化合物1－10为首次从枸杞了中得到。