野百合碱对培养的肺动脉内皮细胞NO含量、eNOS蛋白表达及肺动脉平滑肌细胞收缩性的影响

目的研究野百合碱(monocrotaline pyrrole,MCTP)对培养的牛肺动脉内皮细胞(calf pulmonary artery endothelial cells,CPAEs)一氧化氮(NO)含量、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达及肺动脉平滑肌细胞收缩的影响。方法采用荧光共聚焦激光显微镜检测培养的牛肺动脉内皮细胞的NO含量;Western blot检测eNOS蛋白表达;胶原凝胶实验分析肺动脉平滑肌细胞收缩性。结果经野百合碱处理的牛肺动脉内皮细胞NO含量和eNOS蛋白表达较对照组明显减少、肺动脉平滑肌细胞收缩性增强。结论MCTP可抑制eNOS蛋白表达,肺动脉内皮细胞NO产生受到抑制,使肺动脉平滑肌细胞收缩性增强,这些改变与肺动脉高压的形成可能存在一定关系。     

3,6-(二甲氨基)-二苯并碘杂六环葡萄糖酸盐对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用

3 ,6 (二甲氨基 ) 二苯并碘杂六环葡萄糖酸盐 (3,6 dimethamidodibenzopyriodoniumgluconate ,IHC 93)是迄今本类药物中水溶性最好的药物。大鼠冠状动脉闭塞 4 0min ,再灌注 12 0min ,造成心肌缺血再灌注损伤(n =10 )。测定大鼠心肌梗死范围 (41± 4 ) % ,肿胀度 (81± 4 ) % ,血清肌酸激酶〔CK ,(5 .6± 0 .9)mmol·min- 1·L- 1〕和肌酸激酶同工酶〔CK MB ,(0 .88± 0 .0 9)mmol·min- 1·L- 1〕活性明显升高 ,血清内皮素 1〔ET 1,(0 .34± 0 .0 4 ) μg·L- 1〕水平明显升高。于冠脉结扎前和再灌注前 1min分别ivIHC 930 .12 5 ,0 .2 5和 0 .5mg·kg- 1(n =10～ 11) ,与缺血再灌组比 ,大鼠心肌梗死范围不同程度缩小 ,分别为 (38± 5 ) % ,(35± 4 ) %和(33± 3) % (中、大剂量组P <0 .0 1) ;心肌肿胀度有所减轻〔(78± 4 ) % ,(76± 3) %和 (77± 2 ) % ,中、大剂量组P <0 .0 1〕 ;CK活性降低〔(5 .1± 0 .8) ,(4.7± 1.0 )和 (4.4± 1.3)mmol·min- 1·L- 1,中、大剂量组P <0 .0 5〕 ;CK MB活性降低〔(0 .12± 0 .0 4 ) ,(0 .11± 0 .0 3)和 (0 .0 9± 0 .0 4 )mmol·min- 1·L- 1,均P <0 .0 1〕 ;ET 1水平降低〔(0 .2 6± 0 .0 3) ,(0 .2 6± 0 .0 3)和 (0 .2 7± 0 .0 3) μg·L- 1,均P <0 .0     

总丹酚酸对过氧化氢诱导内皮细胞损伤的抑制作用(英文)

目的　研究总丹酚酸对过氧化氢 (H2 O2 )诱导血管内皮细胞损伤的影响。方法　培养的人脐静脉内皮细胞 ,用MTT法测定内皮细胞的存活率。用碘化丙啶 (PI)染色和TUNEL法测定H2 O2 诱导内皮细胞的凋亡作用。用荧光法测定半胱天冬酶 (cas pase) 3的活性。用Fura 2 /AM测定内皮细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ] i)。结果　 1 0 0 μmol·L-1 H2 O2可使内皮细胞的存活率下降 40 .2 % ,提前 1h给予总丹酚酸 1 0和 1 0 0mg·L-1 使存活率分别增加8.4%和2 8.6 %。 1 0 0 μmol·L-1 H2 O2 还可引起内皮细胞的凋亡 ,PI染色的结果显示 ,H2 O2 处理内皮细胞 1 8h后 ,凋亡率从 (7.1 %± 0 .7) %升至 (38.1±4.0 ) %。总丹酚酸 1 0 0mg·L-1 提前处理内皮细胞1h,可使内皮细胞凋亡率降至 (1 3 .6± 0 .8) %。TUNEL方法检测结果显示 ,H2 O2 处理内皮细胞后 ,TUNEL染色阳性的细胞从 (3 .0± 0 .8) %升至 (30 .5±2 .9) % ,总丹酚酸 1 0 0mg·L-1 可使TUNEL阳性细胞率降至 (1 9.0± 3 .7) %。此外 ,H2 O2 处理细胞后 ,内皮细胞半胱天冬酶 3的活性增加 1 76% ,[Ca2 + ] i 升高 1 0 1 % ,而总丹酚酸可以抑制H2 O2 引起的半胱天冬酶 3活性的增加和 [Ca2 + ] i 升高。结论　总丹酚酸对H2 O2 引起的内皮细胞损伤具有明显的抑制作     

长春瑞滨诱导人肺癌Calu-3细胞凋亡及机制

目的　观察长春瑞滨 (VRB)诱导人肺癌Calu 3细胞凋亡时Bcl 2和半胱天冬酶 3的表达有无变化。方法　以不同浓度的VRB( 2 0 ,40和 60 μmol·L-1)作用于体外培养的人肺癌Calu 3细胞 2 4h后 ,TUNEL法和吖啶橙染色法观察肺癌细胞凋亡形态学特征 ;流式细胞仪检测肺癌细胞凋亡率和肺癌细胞Bcl 2蛋白表达水平 ;以半胱天冬酶 3荧光分析检测试剂盒测定肺癌细胞半胱天冬酶 3活性。结果　VRB( 2 0 ,40和60 μmol·L-1)处理细胞 2 4h ,TUNEL法及吖啶橙染色均观察到典型的凋亡细胞形态学特征。流式细胞仪检测VRB处理的肺癌细胞凋亡率分别为 ( 3 .1±0 .6) % ,( 7.8± 1 .2 ) %和( 1 9.6± 4.3 ) % ,较对照组 (凋亡率为 0 )显著增高且呈剂量依赖性 (P <0 .0 1 ) ;Bcl 2蛋白阳性表达细胞率分别为 ( 3 7.6±6.9) % ,( 2 5 .4±6.2 ) %和( 8.4±2 .5 ) % ,较对照组 ( 4 8.3±7.1 ) %显著降低且呈剂量依赖性 (P <0 .0 5 ) ;肺癌细胞半胱天冬酶 3活性分别为 ( 3 3 2± 1 6) ,( 4 1 7± 1 1 )和 ( 63 1± 2 7)μmol·L-1·h-1,较对照组 ( 1 95±1 2 ) μmol·L-1·h-1显著增高且呈剂量依赖性(P <0 .0 1 )。结论　VRB可以诱导肺癌细胞凋亡 ,抑制Bcl 2表达及增强半胱天冬酶 3活性     

L-芝麻素对代谢综合征大鼠心肌损伤的抑制作用

目的探讨L-芝麻素对代谢综合征大鼠心肌损伤是否有抑制作用。方法大鼠分正常组、模型组、L-芝麻素(30,60和120mg·kg-1)和辛伐他汀(5mg·kg-1)治疗组,除正常组给予正常饲料外,其余各组给予高脂高糖饲料诱导大鼠代谢综合征。至第9周时,各给药组给予含不同浓度L-芝麻素或辛伐他汀的高脂高糖饲料,每天1次。连续16周后,称体重(BW)、全心湿重(HWW)和左心室湿重(LVWW);取心肌组织测定心肌羟脯氨酸(HYP)、过氧化氢(H2O2)和一氧化氮(NO)含量,及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;HE染色观察心肌组织病理变化;免疫组化法检测心肌诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达和硝基酪氨酸(NT)含量。结果与正常组比较,模型组BW,HWW和LVWW明显增加,心肌H2O2,HYP和NO含量明显升高,SOD和CAT活性明显降低,iNOS表达和NT含量增多,并出现心肌纤维增粗肥大且排列紊乱、组织中大量炎症细胞和脂肪组织浸润等严重的病理性改变。与模型组比较,L-芝麻素60和120mg·kg-1组及辛伐他汀组BW〔(328±11),(313±10)和(310±10)vs(411±14)g〕,HWW〔(0.94±0.07),(0.86±0.11)和(0.85±0.12)vs(1.21±0.19)g〕和LVWW〔(0.77±0.08),(0.65±0.09)和(0.67±0.06)vs(1.03±0.22)g〕降低,心肌H2O2〔(239±50),(201±35)和(182±39)vs(302±41)mmol·L-1〕,HYP〔(1.09±0.09),(0.95±0.06)和(0.88±0.09)vs(1.21±0.07)mg·g-1蛋白〕和NO含量〔(1.51±0.46),(0.98±0.26)和(0.76±0.37)vs(2.61±0.41)μmol·L-1〕明显下降,SOD〔(71±12),(84±10)和(90±10)vs(49±8)μmo·lmin-1.L-1〕和CAT活性〔(27±8),(34±6)和(36±9)vs(20±4)μmol·L-1〕显著升高;心肌iNOS表达和NT含量减少,病理损伤明显减轻。结论L-芝麻素可抑制代谢综合征大鼠心肌损伤,该作用可能与其抑制氧化应激和提高抗氧化能力有关。     

盐酸非洛普对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流的抑制作用

目的　已知盐酸非洛普〔1 (2 ,6 二甲基苯氧基 ) 2 (3,4 二甲氧基苯乙氨基 )丙烷盐酸盐 ,DDPH〕对心肌钙电流和钠电流具有抑制作用 ,为全面了解其抗心律失常作用的离子机理 ,研究其对延迟整流钾电流的影响。方法　全细胞膜片钳技术记录豚鼠心室肌细胞快激活的延迟整流钾电流的尾电流(IKr tail)和慢激活的延迟整流钾电流 (IKs)及其尾电流 (IKs tail)。结果　DDPH(1～ 10 0 μmol·L- 1)浓度依赖性地抑制IKr tail,其IC50 为 7.0 (95 %可信限为4 .2 3～ 9.76 ) μmol·L- 1;DDPH 10 μmol·L- 1对IKr tail具有电压依赖性抑制作用。DDPH 10 ,30和 10 0 μmol·L- 1可浓度依赖性地抑制IKs及其IKs tail,使IKs从给药前的 (9.1± 0 .7)pA·pF- 1分别降至 (7.7± 1.7) ,(7.5± 1.8)和 (5 .6± 1.8)pA·pF- 1(P <0 .0 1) ;使IKs tail从给药前的 (1.4± 0 .2 )pA·pF- 1分别降至(1.1± 0 .2 ) ,(0 .9± 0 .2 )和 (0 .6± 0 .2 )pA·pF- 1(P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;DDPH 30 μmol·L- 1对IKs tail具有电压依赖性抑制作用。结论　DDPH对豚鼠心室肌细胞延迟整钾电流具有抑制作用。     

硝酸异山梨酯静脉滴注对冠心病病人血管内皮功能的影响

目的 :观察硝酸异山梨酯静脉滴注对冠心病病人血管内皮功能的影响。方法 :6 4例冠心病病人随机分为 2组 ,硝酸异山梨酯组 (32例 )予硝酸异山梨酯 2 0mg ,iv ,gtt,qd ;复方丹参组 (32例 )予复方丹参 2 0mL ,iv ,gtt ,qd。均连续用药 4wk。结果 :硝酸异山梨酯组治疗后 6 酮前列腺素F1α(99± 6 9)ng·L- 1]、一氧化氮 [(134± 88) μmol·L- 1]均较治疗前 [(75± 5 8)ng·L- 1,(91± 85 ) μmol·L- 1]上升 ,血组织型纤溶酶原激活物抑制物 [(0 .6 4± 0 .2 7)×10 3AU·L- 1vs (0 .5 4± 0 .2 4 )× 10 3AU·L- 1]、凝血烷B2 [(111± 2 31)ng·L- 1vs (71± 14 6 )ng·L- 1]、内皮素 1[(98± 6 2 )ng·L- 1vs (80± 4 7)ng·L- 1],浓度均下降 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。复方丹参组无此变化 (P >0 .0 5 )。结论 :硝酸异山梨酯静脉滴注可改善冠心病病人血管内皮功能     

复方二精灵多糖对谷氨酸诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨中药复方二精灵多糖(EJL)预防阿尔茨海默病的机制。方法实验分为正常对照组、模型(100μmol.L-1谷氨酸诱导)组、阳性对照组(50μmol.L-1多奈哌齐)及EJL实验组(0.5,1.0,2.0及3.0g.L-1)。体外培养9d的海马神经元先用各药物预处理一定时间后,加入谷氨酸。采用MTT法、Hoechst 33258荧光染色、流式细胞术和Western蛋白质印迹法等方法检测细胞凋亡。结果MTT检测发现,随着EJL浓度的增加,细胞的存活率也增加;与模型组〔(59.6±4.6)%〕比较,EJL2.0及3.0g.L-1组细胞存活率明显升高〔(82.8±2.8)%和(89.4±4.1)%;n=3,P<0.05〕。荧光染色观察形态学变化发现,EJL预处理组凋亡细胞明显减少。FITC-Annexin Ⅴ和PI双染,在直方图中可以发现,模型组的凋亡率为32.33%,EJL预处理组则分别为24.33%,22.01%及12.12%。Western蛋白质印迹法结果显示,与模型组比,EJL2.0g.L-1预处理可以显著提高Bcl-2蛋白表达量,减少Bax蛋白表达量。结论EJL对海马神经元有一定的保护作用。     

国产和进口单硝酸异山梨酯缓释胶囊单次和多次给药的人体药动学(英文)

目的 :比较国产和进口单硝酸异山梨酯缓释胶囊的人体药动学和相对生物利用度。方法 :采用单次和多次给药的 4周期双交叉设计 ,气相色谱 电子捕获检测法 (GC ECD)测定 2 2名健康男性志愿者血浆中单硝酸异山梨酯的浓度。结果 :单次 (2 5mg)口服国产和进口单硝酸异山梨酯缓释胶囊后的药动学参数分别为 :Tmax为 (5 .7±s 0 .5 )h和 (5 .8±1 .0 )h ,Cmax为 (2 3 6± 62 ) μg·L-1和 (2 42± 62 )μg·L-1,T1/ 2 为 (8.3± 1 .6)h和 (8.4± 2 .1 )h ,AUC0 3 6为 (3 .7± 0 .9)mg·h·L-1和 (3 .6±0 .9)mg·h·L-1,AUC0 ∞ 为 (4 .0± 0 .9)mg·h·L-1和 (3 .8± 0 .8)mg·h·L-1,平均滞留时间MRT为 (1 1 .5±0 .8)h和 (1 1 .4± 0 .7)h。多次 (2 5mg,6d)口服国产和进口单硝酸异山梨酯缓释胶囊后的稳态药动学参数分别为 :Tmax 为 (5 .2± 0 .7)h和 (5 .4±0 .9)h,Cmax为(3 1 4± 67) μg·L-1和 (3 1 0± 5 8) μg·L-1,Cmin为(63± 1 4) μg·L-1和 (65± 1 6) μg·L-1,稳态血药浓度均值Cav为 (1 87± 3 8) μg·L-1和 (1 83± 3 8) μg·L-1,AUC0 3 6h为 (5 .0± 1 .0 )mg·h·L-1和 (4 .9± 1 .0 )mg·h·L-1,波动度DF为 (1 3 4± 2 0 )%和 (1 3 4± 1 8) %。单次和多次口服国产与进口单硝酸异山梨酯     

肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞内钙的改变

目的分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞Ryanod-ine受体[Ca2+]i释放功能的改变。方法腹腔注射野百合碱建立大鼠肺动脉高压模型,原代培养肺动脉平滑肌细胞,Fura-2/AM负载培养细胞,荧光测钙技术测量Ryanodine受体激动剂对[Ca2+]i变化的影响。结果10nmol.L-1Ry-anodine使对照组[Ca2+]i平均增加(93.31±12.41)nmol.L-1,使PAH组[Ca2+]i平均增加(141.71±13.59)nmol.L-1。两组样本[Ca2+]i增加的数值差异有显著性(P<0.01);10mmol.L-1Caffine使对照组[Ca2+]i平均增加(149.02±13.02)nmol.L-1,使PAH大鼠PASMC的[Ca2+]i平均增加(191.2±21.26)nmol.L-1,两组样本[Ca2+]i数值的变化差异有显著性(P<0.01)。结论肺动脉高压大鼠原代培养的肺动脉平滑肌细胞对Ryanodine受体激动剂的敏感性增强,提示肺动脉高压时Ryanodine受体释放[Ca2+]i的功能发生了异常改变。     

二甲基阿米洛利对大鼠油酸性急性肺损伤的保护作用

The effect of Na⁺/H⁺ exchange inhibitor dimethyl amiloride(DMA) on rat acute lung injury induced by oleic acid was studied. Five hours after administration (iv) of oleic acid (10 mL·kg^-1), pulmonary coefficient, lung wet/dry weight ratio and protein content, lactic acid dehydrogenase(LDH) activity, total white blood cell(WBC) and polymorphonuclear leukocyte(PMN) in bronchoalveolar lavage(BAL) of rat were increased significantly. However, after pretreatment with DMA(0.2 mg·kg^-1 iv) for 10 min, the pulmonary coefficient and lung wet/dry weight ratio were decreased from 1.12±0.06 to 0.87±0.05 and 5.8±0.5 to 4.5±0.3, respectively. The protein content, LDH activity, total WBC and PMN in BAL were also reduced from (1.69±0.15) g·L^-1 to (1.05±0.13) g·L^-1, (3.37±0.25) μmol·min^-1·L^-1 to (0.81±0.08) μmol·min^-1·L^-1, (4.3±0.9) ×10⁶·L^-1 to (2.4±0.8) ×10⁶·L^-1 and (2.4±0.4) ×10⁶·L^-1 to (1.6±0.4) ×10⁶·L^-1, respectively. These results suggest that activation of Na⁺/H⁺ exchange be involved in the acute rat lung injury induced by oleic acid and that inhibitor of sodium-hydrogen exchange prevent the rat lungs from this injury.     

眼镜蛇毒因子对大鼠油酸型肺损伤的保护作用

采用大鼠油酸型呼吸窘迫综合征的病理模型（ｉｖ油酸０．１ｍＬｋｇ－１）．实验前２４ｈｉｐ眼镜蛇毒因子（ＣＶＦ）１．０ｍｇｋｇ－１耗竭体内补体，能显著对抗油酸引起的肺损伤：使支气管肺泡灌洗液中的细胞计数从（１５±１１）×１０１０Ｌ－１下降至（６±４）×１０１０Ｌ－１，蛋白质含量从５．２±１．９ｇＬ－１降至２．４±１．３ｇＬ－１；减少氧自由基的产生，血清超氧化物歧化酶活性下降和丙二醛含量升高明显受到抑制；降低溶酶体酶的释放，表现为血清β－葡萄糖醛酸酶活性降低；肺病理形态学的改变减轻，其中肺水肿程度，透明膜和肺动脉血栓形成均明显减轻．结果表明补体可能在油酸性肺损伤中起着重要作用，ＣＶＦ耗竭补体能显著减轻肺损伤．     

2,6-二甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氢-3,5-吡啶二羧酸二甲酯对大鼠野百合碱性肺动脉高压的防治作用

用野百合碱(MCT)复制大鼠慢性肺动脉高压(PH)病理模型,探讨钙拮抗剂2,6-二甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氢-3,5-吡啶二羧酸二甲酯(DCDDP)对PH的防治作用. DCDDP 5, 50, 500 μg·kg^-1 ip, 每日1次， 连续28 d; MCT 60 mg· kg^-1在第1次给DCDDP后30 min sc.观察肺血流动力学指标变化,血浆和肺匀浆中内皮素样免疫反应物(ir-ET), 一氧化氮(NO)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的改变. 三种不同剂量的DCDDP分别使平均肺动脉压从4.5±0.9 kPa(MCT组)降至3.2±0.2, 3.5±0.6和3.8±0.9 kPa, 肺血管阻力从118±17 kPa·min^-1·L^-1(MCT组)降至65±16, 68±18和76±18 kPa·min^-1·L^-1(P<0.01), 提示在本实验剂量范围内, 中, 低剂量DCDDP防治效果似较好. DCDDP不影响MCT性PH时血浆和肺匀浆中ir-ET的改变, 但可显著升高肺匀浆中NO的含量和SOD活性, 使肺匀浆中MDA含量降至正常, 这可能是其降低肺动脉压的机理之一.     

人参皂苷R_d及其C_(12)手性异构体对缺氧/再复氧后蛋白酪氨酸磷酸化的抑制作用

目的　探讨人参皂苷Rd C12 手性碳构型改变与其药理活性的关系。方法　建立牛主动脉内皮细胞 (BAEC)缺氧 /再复氧 (H/R)损伤模型 ;MTT法研究Rd 及Rd C12 手性异构体 (12 epi Rd)对H/R损伤BAEC的保护作用 ;Western印迹法检测蛋白酪氨酸磷酸化 (TPP)水平 ,研究二者对H/R损伤BAEC的TPP水平的影响。结果　 0 .5～ 6 4μmol·L- 1的Rd 及12 epi Rd 能浓度依赖性的保护H/R损伤的BAEC ,二者所能达到的最大存活率分别为 (72 .7± 1.5 ) %和 (70 .0± 1.5 ) % ,EC50 分别为 (1.0 6± 0 .19)和 (1.88±0 .5 5 ) μmol·L- 1(P <0 .0 5 )。Rd 及 12 epi Rd 均可抑制H/R引起的TPP水平的提高 ,浓度为 1,4 ,16μmol·L- 1时 ,Rd 的抑制率分别可达 (2 4 .3± 6 .8) % ,(5 2 .6± 8.7) %及 (73.4± 11.4 ) % ;而 12 epi Rd 的抑制率分别可达 (12 .8± 4 .4 ) % ,(2 4 .1± 10 .3) %及(4 2 .5± 13.0 ) % ,二者在三个浓度点的抑制率均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　人参皂苷Rd C12 手性碳构型的改变对其保护H/R损伤BAEC的作用及抑制H/R诱导的TPP水平增强的作用有一定的影响。RdC12 手性碳构型改变明显降低其抑制TPP增强的作用可能是其保护作用下降的重要原因之一。     

黄芩含药血清对脂多糖刺激大鼠原代小胶质细胞的保护作用

目的探讨黄芩提取物(SBE)含药血清对细菌脂多糖(LPS)引起的大鼠原代小胶质细胞活化的抑制作用。方法大鼠ig给予SBE 25 g·kg-1,给药后0.5～6 h眼底静脉丛取血,制备SBE含药血清。将SBE含药血清(终浓度10%)和LPS(终浓度1 mg·L-1)与大鼠原代小胶质细胞共培养24 h。采用MTT法测定细胞存活率;Griess还原法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)含量;用超氧化物歧化酶(SOD)活性测定试剂盒测定SOD活性;分别用微量丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量测定试剂盒测定MDA和GSH含量。结果在不影响细胞存活率的情况下,不同时间点的SEB含药血清可以显著降低LPS刺激的大鼠原代小胶质细胞培养液中NO和MDA的含量,SEB 0.5,1和2 h的含药血清使NO由LPS对照组的(14.2±0.8)μmol·L-1分别降低至12.9±0.6,9.2±0.6和(9.9±0.4)μmol·L-1(P<0.05);SEB 1,2和3 h的含药血清使MDA由LPS对照组的(13.4±0.7)μmol·L-1分别降低至9.42±0.64,9.13±0.57和(11.78±0.71)μmol·L-1(P<0.05);SBE 1和2 h含药血清可以显著增强培养液中SOD活性,分别由LPS对照组的(2.53±0.13)kU·L-1升高至3.52±0.18和(3.74±0.19)kU·L-1(P<0.05);SBE 1和2 h含药血清可以显著升高培养液中GSH含量,分别由LPS对照组的(7.1±1.1)mg·L-1升高至8.6±1.6和(9.2±1.7)mg·L-1(P<0.05)。结论SBE含药血清对LPS刺激的大鼠原代小胶质细胞活化具有一定的抑制作用。     

吡格列酮对脂多糖诱导星形胶质细胞诱导型一氧化氮合酶表达的抑制作用

目的 研究吡格列酮(Pio)对脂多糖 (LPS) 诱导星形胶质细胞(AC)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的抑制作用及其作用机制。方法 AC分别加入Pio 0.1, 1.0和10.0 μmol·L^-1, c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125 20.0 μmol·L^-1, p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580 20.0 μmol·L^-1或过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制剂GW9662 10.0 μmol·L^-1,1 h以后加入LPS 10.0 mg·L^-1, 继续作用24 h。Griess法测定培养AC上清液中一氧化氮(NO)含量。免疫印迹法和免疫荧光法检测iNOS的表达水平。结果 与正常对照组相比,LPS 10.0 mg·L^-1组iNOS表达水平和NO分泌水平均显著增高(P<0.01)。Pio 0.1, 1.0和10.0 μmol·L^-1可明显抑制LPS诱导的iNOS表达上调及NO分泌增加(P<0.05),Pio 10.0 μmol·L^-1组iNOS蛋白表达水平由LPS组1.711±0.283下降到0.157±0.082(P<0.01),NO分泌量由LPS组(16.63±2.25)μmol·L^-1下降到(6.92±1.30)μmol·L^-1(P<0.01)。GW9662 10.0 μmol·L^-1可抑制Pio 1.0 μmol·L^-1的上述作用,iNOS蛋白表达水平由Pio 1.0 μmol·L^-1组0.562±0.100增加到0.847±0.088(P<0.01),NO分泌量由(9.27±1.23)μmol·L^-1增加到(15.54±2.30)μmol·L^-1(P<0.01)。SB203580 20.0 μmol·L^-1和SP600125 20.0 μmol·L^-1的作用与Pio作用相似,使iNOS蛋白表达水平降低到0.434±0.082和0.434±0.076,NO分泌量下降到(11.53±2.40)μmol·L^-1和(8.81±0.58)μmol·L^-1;而单独应用SB203580 20.0 μmol·L^-1和SP600125 20.0 μmol·L^-1对AC的iNOS表达和NO分泌没有影响。结论 Pio能通过抑制LPS诱导的大鼠皮质AC的iNOS表达,从而减少NO的分泌,这种抑制作用可能与其激活PPARγ和阻断JNK和p38MARK信号转导通路有关。     

次乌头碱对乳大鼠原代培养心肌细胞的毒性作用

目的探讨次乌头碱(HA)对心肌细胞的毒性作用。方法制备乳大鼠原代心肌细胞,用锥虫蓝染色法检测心肌细胞存活率,用小鼠抗大鼠α横纹肌肌动蛋白和兔抗大鼠纤连蛋白多克隆抗体免疫化学染色法鉴定心肌细胞。制备的原代细胞培养3～4d,分别加入HA0,3,6,30,60和120μmol·L-1培养5,15,30和60min,记录每组细胞搏动频率;以HA体外引起心肌细胞搏动消失的浓度及作用时间为依据,将心肌细胞分为培养基对照,二甲亚砜(DMSO)对照,HA30,60和120μmol·L-1组,分别连续培养5,15,30和60min,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,倒置显微镜下观察细胞形态的变化。结果与HA0μmol·L-1组比较,HA30μmol·L-1与心肌细胞作用5,15,30和60min时细胞搏动频率增加,由40±26,42±27,38±19和(20±10)min-1分别增加到114±27,98±32,100±32和(49±13)min-1(n=12,P<0.01);HA120μmol·L-1立即导致心肌细胞停搏。不同浓度的HA随着作用时间的延长,导致LDH漏出率不同程度的增加,其中HA30,60和120μmol·L-1作用60min时细胞LDH漏出率分别为(29±8)%,(42±10)%和(57±9)%与同一时间点DMSO组比较有明显差异(P<0.01)。倒置显微镜观察发现,随着HA浓度的增加和作用时间的延长,心肌细胞有死亡现象。结论 HA对心肌细胞有毒性作用,主要表现为细胞搏动频率加快,细胞膜稳定性破坏;HA120μmol·L-1与心肌细胞作用超过120min会引起少量心肌细胞死亡。     

白介素2和肿瘤坏死因子α对大鼠C6胶质瘤细胞产生一氧化氮的影响

用Griess法检测细胞培养上清中NO^÷₂含量作为反映细胞产生一氧化氮(NO)量的指标，观察细菌脂多糖(LPS)，干扰素γ(IFN-γ)，肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素2(IL-2)对大鼠C6胶质瘤细胞产生NO的影响. 结果C6细胞于体外培养8 h时可自发产生NO，24 h达峰值(17.5±1.9 vs溶剂对照组6.5±1.9 μmol·L^-1)，48 h仍有产生. 在所用剂量范围，上述因素单独作用24 h均不影响C6产生NO，而5-500 kU·L^-1 IL-2与0.5 mg·L^-1 LPS或50 kU·L^-1 IFN-γ合用可增强C6产生NO(10.6-13.4 vs 7.2 μmol·L^-1)，LPS，IFN-γ及TNF-α三者合用亦有一定促进C6产生NO作用. 提示炎性刺激与炎性细胞因子共同作用可促进中枢神经胶质细胞产生NO.     

咖啡酸对氧化应激诱导的PC12细胞5-脂氧酶激活的抑制作用

目的探讨咖啡酸是否通过抑制氧化应激诱导的5-脂氧酶(5-LOX)激活而减轻细胞损伤。方法稳定转染绿荧光蛋白(GFP)-5-LOX的PC12细胞,预先给予咖啡酸0.001~10μmol.L-1和对照药MK886,30min后观察缺氧缺糖/恢复(OGD/R)及过氧化氢(H2O2)160μmol.L-1处理后的变化。MTT法和碘化丙啶染色法分析细胞存活率和死亡率;荧光显微镜观察OGD 2 h/R2 h和H2O2处理40 min时5-LOX的核膜移位;ELISA法测定OGD 2 h/R 3 h时5-LOX代谢产物的生成;DCF法检测OGD 2 h/R 0.5 h细胞内活性氧(ROS)的产生。结果 OGD 2 h/R 24 h GFP-5-LOX转染和GFP-转染PC12细胞的存活率分别为(63.1±6.6)%和(70.7±6.9)%;H2O2处理24 h细胞存活率分别为(62.5±7.7)%和(75.7±9.5)%。在GFP-5-LOX转染的PC12细胞中,咖啡酸和对照药MK886可使OGD/R细胞存活率从(63.1±6.6)%分别增加到(87.3±2.0)%和(89.9±6.3)%,细胞坏死率从(31.4±1.5)%降低到(10.1±2.0)%和(11.7±1.3)%(P<0.01);使H2O2处理细胞存活率从(62.51±7.65)%增加到(92.59±4.02)%和(75.31±6.60)%;使OGD/R细胞CysLTs的生成从261.1±33.7降低到108.5±16.7和(90.6±19.5)ng.g-1蛋白(P<0.01)。此外,咖啡酸抑制OGD/R诱导PC12细胞的ROS产生,IC50值为8.021μmol.L-1;抑制OGD/R诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.974μmol.L-1;抑制H2O2诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.501μmol.L-1;MK886无上述作用。结论咖啡酸可抑制氧化应激诱导的PC12细胞5-LOX激活,对缺血损伤的PC12细胞具有保护作用。