Cl~-通道及Ca~(2+)通道阻断剂对ATP触发的牛脑血管平滑肌细胞Ca~(2+)内流作用的影响

采用Fura 2荧光测定胞浆游离Ca2 + 浓度([Ca2 + ]i)变化技术 ,在培养的牛脑中动脉平滑肌细胞上 ,观察电压依赖Ca2 + 通道 (VDCC)抑制药尼莫地平 ,非电压依赖Ca2 + 通道 (NVDCC)SK&F96365以及Cl-通道抑制药呋塞米 ,印防己毒素对ATP引起的[Ca2 + ]i 反应的影响 .实验表明ATP可使 [Ca2 + ]i 呈现双相升高反应 ,即快速峰相及随后持续稳定的平台相 .尼莫地平 ,SK&F96365及印防己毒素对ATP触发的Ca2 + 内流无明显影响 ,而呋塞米能呈浓度依赖性地抑制ATP触发的Ca2 + 内流 .提示ATP触发的牛脑中动脉平滑肌细胞Ca2 + 内流是经SK&F96365不敏感的NVDCC ,与呋塞米敏感的Cl- 通道开放有关 .     

蛋白酪氨酸磷酸化参与调控主动脉平滑肌细胞容积调节性氯通道电流

目的　探讨蛋白酪氨酸磷酸化在胚胎鼠主动脉平滑肌细胞系A10细胞容积调节性氯通道电流中的调控作用。方法　膜片钳全细胞记录技术。结果　①在A10细胞 ,低渗溶液激活一外向整流电流 ,该电流在正电位 (≥ 6 0mV)时缓慢失活。其反转电位为 (- 1 5± 3 4 )mV ,接近Cl-平衡电位 (Ecl=0mV)。降低胞外Cl-浓度其反转电位随之变化。高渗溶液可抑制该电流。②DIDS(10 0 μmol·L-1)电压依赖性抑制容积调节性氯通道电流 ,在 +80mV和 - 80mV的抑制率分别为 5 3 7%± 6 2 %和 2 9 8%± 4 9%。③酪氨酸激酶抑制剂genistein (30 μmol·L-1)抑制该电流 ,在 +80mV和 - 80mV对其抑制率分别为6 2 3%± 11 3%和 6 6 9%± 10 5 % ,其抑制作用无电压依赖性。④酪氨酸磷酸酶抑制剂sodiumorthovanadate(Na3 VO4,5 0 0 μmol·L-1)增强该电流 ,其作用无电压依赖性 ,在 +80mV和 - 80mV电流幅度分别增加了 4 4 8%±14 5 %和 4 7 1%± 13 6 %。结论　A10细胞上存在有容积调节性氯通道。蛋白酪氨酸磷酸化参与调节A10细胞容积调节性氯电流的激活     

ATP和凝血酶诱导的血管内皮细胞Ca~(2+)内流比较

采用fura 2荧光测定细胞 [Ca2 +]i 变化技术 ,在培养的牛主动脉内皮细胞上观察ATP和凝血酶诱导的Ca2 +内流的特性 .ATP和凝血酶均能诱导内皮细胞 [Ca2 +]i 呈双相升高 ,它们诱导的Ca2 +释放是环匹阿尼酸 (CPA)敏感Ca2 +池的一部分 .ATP诱导的Ca2 +释放和Ca2 +内流不完全通过激活磷脂酶C介导 ,而凝血酶诱导的Ca2 +释放和Ca2 +内流则完全通过激活磷脂酶C介导 .硝苯地平对ATP和凝血酶诱导的Ca2 +内流均无影响 ;SK&F 96 36 5与三七皂甙 2A对凝血酶诱导的Ca2 +内流没有影响 ,但可抑制ATP诱导的Ca2 +内流 ,且此作用比它们对CPA诱导Ca2 +内流的抑制作用小 .SK&F 96 36 5和三七皂甙 2A敏感的Ca2 +内流的特性不同 .结果表明ATP和凝血酶激活不同受体 ,引起Ca2 +内流的机理不同     

蛋白质酪氨酸磷酸化和氯通道参与瞬时受体电位蛋白介导钙池耗竭引起的钙内流

目的　探讨蛋白质酪氨酸磷酸化与Cl-通道对瞬时受体电位 (TRP)蛋白参与的Ca2 + 池耗竭引起的Ca2 + 内流(SOC)的调控作用。方法　采用脂质体转染和Fura 2 /AM荧光光度法 ,测定胞浆游离Ca2 +浓度 ( [Ca2 + ]i) ,比较转染人源性TRP1 (hTRP1 )和人源性TRP3 (hTRP3 )cDNA对毒胡罗卜素 (TG)引起的Ca2 + 内流的作用 ,并观察酪氨酸激酶抑制剂染料木黄酮、Cl-通道阻断剂呋塞米和 4,4 二异硫氰基芪 2 ,2 二磺酸 (DIDS)对其的影响。结果　HEK2 93细胞转染hTRP1cDNA后 ,TG引起的Ca2 + 内流显著增加 ;转染hTRP3cDNA则无明显影响。 5～ 3 0 μmol·L-1染料木黄酮、1～ 8μmol·L-1呋塞米、0 .5～ 1μmol·L-1DIDS对转染hTRP1cDNA细胞的TG诱发的Ca2 + 内流均有抑制作用。结论　hTRP1蛋白可能是HEK2 93细胞SOC的物质基础 ;酪氨酸激酶和Cl-通道均参与HEK2 93细胞SOC的调控 ,而且酪氨酸激酶可能直接作用于TRP1蛋白     

人脐静脉血管内皮细胞容量激活和钙激活氯离子通道(英文)

目的:研究人脐静脉血管内皮细胞的氯离子通道及其不同的调节机制。方法:全细胞膜片箝技术。结果:13.5％和27％的低渗液体灌流细胞激活一外向电流(I_(Cl·vol))。该电流有弱的外向整流特性,无明显时间和电压依赖性;电流大小为(58±5)pA/pF;分别为(20±3),(58±4)增加细胞内钙或胞外应用ATP能激活I_(Cl,Ca)。该电流幅值较小(23±5)pA/pF;外向整流特性明显,在正电压下缓慢激活。两种电流均被DIDS及维拉帕米抑制。在同一个细胞上,在激活I_(Cl,Ca)的基础上灌流低渗液体可进一步激活I_(Cl,vol)。结论:HUVEC表达有两种氯通道,改变细胞容积可激活I_(Cl,vol),而增加细胞内钙则诱导出I_(Cl,Ca)。     

dl—白花前胡甲素对人大脑皮层ATP敏感钾通道的作用

目的:研究白花前胡甲素(Pd-Ia)对人大脑皮层神经元ATP敏感钾通道的作用。方法:应用膜片箱全细胞记录技术,采用累积给药方式。箝制电压-40mV,指令电压-30到 100mV,时程600ms。结果:Pd-Ia以浓度依赖方式激活ATP敏感钾通道。当用含不同浓度的(0.01,0.01,0.1和1μmol/L)Pd-Ia细胞外液灌流时,电流值分别从给药前的(0.9±0.4)nA增大到给药后的(1.0±0.4)nA,(1.1±0.4)nA,(1.2±0.4)nA和(1.3±0.4)nA(P<0.01,n=5)。然后用含ATP敏感钾通道的特异抑制剂格列苯肥(10μmol/L)的细胞外液冲洗,电流减小至(0.90±0.37)nA(P<0.01,n=5)。结论:Pd-Ia可开放ATP敏感钾通道,是一种钾通道开放剂。     

小剂量缓激肽对大鼠脑微血管内皮细胞和C6细胞钙激活钾电流的作用

目的研究小剂量缓激肽对大鼠脑血管内皮细胞和C6细胞钙激活钾电流的作用。方法应用膜片钳全细胞记录模式。结果指令电位为+60 mV时,1μmol.L-1缓激肽可使大鼠脑血管内皮细胞和C6细胞钙激活钾电流分别由给药前的(770±220)pA和(630±220)pA降至给药后的(370±40)pA和(308±19)pA(n=6,P<0.01)。结论小剂量的缓激肽通过抑制脑微血管内皮细胞和C6细胞的钙激活性钾电流,引起细胞的去极化。     

前列腺素E1对豚鼠心室肌细胞ATP敏感K+通道的影响

目的从离子通道水平,探讨前列腺素E1(PGE1)对ATP敏感K+(KATP)通道的作用.方法膜片钳制技术全细胞记录模式.结果PGE1可诱导KATP通道开放并呈浓度依赖关系.保持电位-40mV,指令电位+20mV,持续时间1s条件下,,10μmol·L1PGE1使外向K+电流由给药前的(2.27±0.34)nA增加到(5.46±0.34)nA(n=6,P＜0.01),增加了(3.18±0.23)nA.并且增加的钾电流可被KATP通道特异阻断剂Glibenclamide(10μmol·     

Cl~-通道阻断剂对5-HT和CPA引起的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞Ca~(2+)内流的影响

目的　在培养的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞上观察5 HT和CPA诱导的Ca2 + 内流的特性 ,电压依赖性Ca2 + 通道 (VDC)抑制药尼莫地平 ,非电压依赖性Ca2 + 通道抑制药SK&F963 65及Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB对两种激动剂引起 [Ca2 + ]i 反应的影响 ,以探讨脑血管平滑肌细胞中 5 HT引起Ca2 + 内流的特性、Cl-通道与Ca2 + 内流的关系。方法　采用生物荧光双波长影像分析系统瞬即测定单细胞胞质[Ca2 + ]i 技术。结果　① 5 HT和CPA均能诱导平滑肌细胞[Ca2 + ]i 呈双相升高 ,并且 5 HT诱导的Ca2 + 释放是环匹阿尼酸 (CPA)敏感Ca2 + 池的一部分 ;②尼莫地平对 5 HT和CPA触发的Ca2 + 内流无明显影响 ,而SK&F963 65可阻止二者触发的Ca2 + 内流 ;③Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB呈浓度依赖性抑制Ca2 + 内流 ,在SK&F963 65最大限度抑制Ca2 + 内流后 ,DIDS、NPPB可进一步抑制Ca2 + 内流 ;而Ca2 +内流被DIDS、NPPB分别最大抑制后 ,SK&F963 65也可进一步抑制Ca2 + 内流。结论　 5 HT引起的Ca2 + 内流是经SK&F963 65敏感的非VDC ,其中包含Ca2 + 释放引起的Ca2 + 内流 (CRAC)成分与非CRAC成分 ,并且这两部分Ca2 +内流均与DIDS、NPPB敏感的Cl-通道开放有关     

盐酸埃他卡林对脑神经元钠、钾、钙通道的影响

目的　研究盐酸埃他卡林 (Ipt)对脑神经元钠、钾、钙通道的影响。方法　在原代培养的大鼠海马神经元上 ,应用膜片钳全细胞记录技术观察Ipt对钠、钾、钙离子通道电流的影响。结果　Ipt对钠、钙电流幅度以及电流 -电压曲线无影响 ,可增强外向钾电流幅度 ,使电流 -电压曲线上移。其中 ,Ipt 1、10、10 0 μmol·L-1分别使钾通道电流峰值增大为给药前的 (12 1 9± 8 1) %、(114 7± 7 1) %和 (10 9 1±10 0 ) % (P <0 0 1～ 0 0 5 )。给予盐酸埃他卡林 1μmol·L-1的同时给予ATP敏感性钾通道拮抗剂格列本脲 30 μmol·L-1时 ,对钾通道电流无影响。结论　盐酸埃他卡林对脑神经元ATP敏感性钾通道具有激活作用 ,它不影响神经元钠通道和钙通道     

超氧阴离子对培养的牛动脉平滑肌细胞内钙及收缩性的影响

目的研究超氧阴离子对牛主动脉平滑肌细胞内钙及收缩性的影响。方法采用Ｆｕｒａ－２测定牛肺动脉平滑肌细胞内钙及采用胶原凝胶实验方法分析平滑肌细胞的收缩性。结果超氧阴离子作用于平滑肌细胞后使ＡＴＰ（１０μｍｏｌ·Ｌ－１）诱导的细胞内钙浓度的增加从（２０６± １０） ｎｍｏｌ·Ｌ－１降到（１４７±１５） ｎｍｏｌ·Ｌ－１。 ５ ｍｉｎ内细胞内钙浓度增加的积分（∫　△［Ｃａ２＋］ｉ·ｄｔ）从（１２．２± ０．５）μｍｏｌ· Ｌ－１·ｓ－１降至（９．８± ０．８）μｍｏｌ·Ｌ－１·ｓ－１。ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ在无钙溶液中诱导的细胞内钙浓度的增加不受超氧阴离子的影响,而在含钙的Ｋｒｅｂａ溶液中,超氧阴离子能使随后的钙释放激活的钙进入（△［Ｃａ２＋］ｉＣＲＡＣ）从（２７．３ ±１．０） ｎｍｏｌ·Ｌ－１降到（１３．５ ±１．０） ｎｍｏｌ·Ｌ－１。ＡＴＰ诱导的凝胶面积减少的百分比从２４％±５％降到 ７．４％ ±０．２％;在无钙 Ｋｒｅｂｓ溶液中,ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ诱导的凝胶面积减少的百分比从 ３．５％± ０．６％降到－０．５％±０．７％。结论超氧阴离子通过影响平滑肌细胞的内钙动员而降低它的收缩性。     

灵芝多糖对小鼠T细胞胞浆游离Ca~(2+)浓度和胞内pH的影响

目的通过考察灵芝多糖（ＧＬＰ）对免疫细胞信号转导过程的影响,探讨ＧＬＰ免疫调节作用机制。方法采用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）技术,动态监测ＧＬＰ均一体组分ＧＬＢ７对小鼠Ｔ细胞胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋）和胞内 ｐＨ（［ｐＨ］ｉ）的影响。结果 ＧＬＢ７（２０ｍｇ·Ｌ－１）引起小鼠 Ｔ细胞中［Ｃａ２＋］;和［ｐＨ］;明显升高,１ｍｉｎ即分别升高至３３４．７０％±１６,４％（ｎ＝３）、１７１．６％ ± １０．４％（ｎ＝３）,之后一直分别维持在该平台期,至 １０ ｍｉｎ仍维持高峰水平。加入ＥＣＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理后, １０ ｍｉｎ ＧＬＢ７ 引起 Ｔ细胞［Ｃａ２＋］;和［ｐＨ］;分别升高为 ２０２．４％± １３．６％（ｎ＝３）。１４０．２％±７．８％（ｎ＝３）,与正常对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０1）。以 ＥＧＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理后,再分别以 ｈｅｐ－ｅｒｉｎ和 ｐrocaine处理细胞 １０ ｍｉｎ,之后以 ＧＬＢ７刺激Ｔ细胞,１０ｍｉｎ［Ｃａ２＋］ｉ值分别为１５１．５％±９．４％（ｎ＝３）、１４３．２％± ８．１ ％（ ｎ＝ ３）,与 ＥＧＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理组相比差异有显著性（ Ｐ＜ ０．０１）。同时以     

Effects of ATP on cultured smooth muscle cells from rat aorta.

1. Membrane ionic currents provoked by externally applied ATP were studied by patch-clamp techniques in cultured aortic smooth muscle cells of the rat. 2. Using standard bath and pipette solutions and whole-cell voltage-clamp, ATP evoked an inward current when the cell membrane potential was held at -50 mV and an outward current when the potential was held at 30 mV, with a reversal potential near -10 mV. 3. Application of ATP gamma S gave results similar to those obtained with ATP, while adenosine, AMP and alpha,beta-methylene ATP were ineffective. The ATP-activated current was inhibited by suramin, 100 microM. 4. ATP also induced a biphasic rise in internal free Ca levels as shown directly by Fura-2 measurements and by the increase in Ca-dependent K single-channel activity in cell-attached patches. 5. With outward current through K channels blocked by internal Cs and TEA, modification of the ionic composition of bath and pipette solutions revealed that the reversal potential for the ATP-induced whole-cell current closely followed ECl, the chloride equilibrium potential, and was insensitive to manipulations of the monovalent cation gradient. 6. These results indicate that in rat cultured aortic smooth muscle cells, ATP binding to P2-purinoceptors produces increases of internal free Ca levels and subsequent activation of both Ca-dependent K and Cl currents.     

Effects of excitatory neurotransmitters on Ca2+ channel current in smooth muscle cells isolated from guinea-pig urinary bladder.

1. A whole-cell voltage clamp technique was used to examine the effects of purinoceptor and muscarinic receptor agonists on voltage-sensitive Ca2+ channels in guinea-pig isolated urinary bladder cells. 2. When the cell membrane was clamped at the holding potential, rapid application of ATP elicited a large inward current in normal solution containing 2.5 mM Ca2+, and reduced the subsequent Ca2+ channel current evoked by a depolarizing pulse (0 mV). Carbachol (CCh) elicited little membrane current, but similarly reduced the Ca2+ current. 3. When purinoceptor agonists were rapidly applied during conditioning depolarizations at +80 mV, an outward current was elicited, and the Ca2+ channel current evoked by the subsequent test potential of 0 mV was not affected. Application of CCh at +80 mV also elicited an outward current, but it reduced the subsequently evoked Ca2+ current. 4. The inhibitory effect of muscarinic agonists on the Ca2+ channel current was attenuated by caffeine (10 mM). 5. In Ca(2+)-free, low-Mg2+ solution, a Na+ current flowing through voltage-dependent Ca2+ channels was evoked by depolarization. This current was not reduced by bath application of purinoceptor agonists (ATP and alpha,beta-methylene ATP). 6. These results suggest that the main effect of purinoceptor stimulation is opening of non-selective cation channels, and that muscarinic stimulation triggers Ca2+ release from intracellular stores. Voltage-sensitive Ca2+ channels are inactivated through an increase in intracellular Ca2+ induced by either activation of purinoceptor or muscarinic receptors.     

N-甲基小檗胺对人心房肌细胞瞬时外向钾电流和延迟整流钾电流的作用(英文)

目的　动物实验表明N 甲基小檗胺 (NMB)通过抑制豚鼠心室肌细胞ATP敏感性钾电流和钙电流来发挥抗心律失常和抗心肌缺血作用 ,故进一步研究NMB对人心肌细胞电流的作用。方法　膜片钳制技术全细胞记录模式研究NMB对人心房肌细胞瞬时外向钾电流 (Ito)和延迟整流钾电流 (IK)的作用。结果　指令电位为 +60mV时 ,NMB 0 .1 ,1 ,1 0 μmol·L-1 分别使Ito幅值下降 (1 6± 4) % ,(2 5±4) %和 (49± 3) % ,使IK 幅值下降 (42± 6) % ,(47±7) %和(65± 3) %。结论　NMB对人心房肌细胞Ito和IK 均有抑制作用。     

KB-R7943对豚鼠心室肌细胞Na~ -Ca~(2 )交换电流的作用

目的　观察KB R7943对豚鼠心室肌细胞Na Ca2 交换电流 (INa Ca)的内向电流成分和外向电流成分的影响。方法　采用缺血再灌时胞内Na 超载的细胞模型 ,在同时记录内向、外向电流的双向离子条件下 ,用膜片钳全细胞技术 ,记录INa Ca的电流 电压关系曲线。结果　 10 -6和 10 -5mol·L-1KB R7943 ,在 5 0mV时 ,对INa Ca的抑制率分别是 2 9 4%和 6 1 7% ;在 - 80mV时抑制率分别是 2 2 1%和 5 6 9%。结论　KB R7943对豚鼠心室肌细胞INa Ca有抑制作用 ,但对外向成分和内向成分的抑制不具选择性。     

T型钙通道在心肌肥厚大鼠心肌细胞钙内流中的作用

目的研究T型钙通道在心肌细胞钙离子内流中的作用及其对心脏兴奋收缩耦联的可能影响。方法测定选择性T型钙通道阻滞剂米贝拉地尔对培养的SD乳大鼠心室肌细胞和二肾一夹心肌肥厚大鼠心室肌细胞[Ca2+]i的影响。结果血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激使乳大鼠心室肌舒张期细胞[Ca2+]i增高,收缩期细胞[Ca2+]i降低,[Ca2+]i上升和下降的时间延长。米贝拉地尔1.25～5μmol·L-1浓度依赖性降低AngⅡ引起的细胞[Ca2+]i变化。在心肌肥厚模型大鼠,咖啡因刺激后,[Ca2+]i增幅和最高[Ca2+]i明显降低。而米贝拉地尔25mg·kg-1·d-1(灌胃给药7～9周)组加入咖啡因刺激后细胞内[Ca2+]i增幅和最高[Ca2+]i明显增高。结论T型钙通道异常开放可以引起心肌细胞内钙超载。阻断T型钙通道,可能通过改善肌浆网摄取及释放钙的功能而抑制心肌细胞钙超载。     

Elevation of cytosolic calcium by cholinoceptor agonists in SH-SY5Y human neuroblastoma cells: estimation of the contribution of voltage-dependent currents.

1. Muscarinic but not nicotinic receptor stimulation in SH-SY5Y human neuroblastoma cells induces a concentration-dependent increase in [3H]-inositol phosphate formation and a biphasic increase in [Ca2+]i. The latter involves release from both an intracellular store and Ca2+ entry across the plasma membrane. Here we examine the possibility that this agonist-stimulated Ca2+ entry occurs indirectly, as a consequence of depolarization. 2. Electrophysiological characterization, by whole cell patch-clamp techniques revealed that SH-SY5Y cells possess a tetrodotoxin-sensitive inward sodium current, a dihydropyridine-insensitive calcium current and an outward potassium current which was blocked by tetraethylammonium, 4-aminopyridine and intracellular caesium ions. The outward potassium current showed voltage-dependent activation and inactivation, similar to that seen for A-currents. 3. Application of nicotinic agonists evoked an inward current in cells voltage-clamped at negative holding potentials, but this current rectified, resulting in little or no outward current flow at positive potentials. The mean amplitude at a holding potential of -60 mV was -1.14 nA. Extrapolation of the current-voltage relation gave a reversal potential of +8 mV, indicative of a non-specific cationic permeability. 4. Application of muscarinic agonists had no detectable effect in most of the cells tested. However, in one third of cells studied, a small slowly activating inward current was observed. The mean amplitude of this current at a holding potential of -60 mV was -8.3 pA.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)