果糖二磷酸钠镁对缺血突触体乳酸含量及ATP酶活性的影响

目的 :研究果糖二磷酸钠镁 (FDPM)对缺血突触体乳酸含量及ATP酶活性的影响 ,以探讨其脑保护作用机制。方法 :制备正常大鼠脑突触体 ,氧糖剥夺培养建立缺血突触体模型 ,分别加 1.3mmol·L- 1硫酸镁 ,4 .0mmol·L- 11,6 二磷酸果糖 (FDP)及 1.3mmol·L- 1果糖二磷酸钠镁共培养 6 0min ,测定突触体乳酸含量及Na+ K+ATP酶和Ca2 + Mg2 +ATP酶活性。结果 :FDPM可明显降低缺血突触体乳酸含量 ,升高Na+ K+ATP酶和Ca2 + Mg2 +ATP酶活性(P <0 .0 5 ) ,其作用强于FDP的作用。结论 :FDPM保护脑缺血的作用机制可能与其改善脑缺血后能量代谢 ,减轻脑组织酸中毒状态有关     

低浓度毒毛旋花子苷原对离体豚鼠衰竭心脏的影响

目的　研究低浓度毒毛旋花子苷原 (strophanthidin ,Str)对离体衰竭心脏心功能及心肌细胞膜Na+,K+ ATP酶活性的影响。方法　Langendorff离体心脏灌流装置制备戊巴比妥钠心衰模型 ,八道生理记录仪测定不同浓度Str对心功能的影响 ,无机磷法测定各组心肌细胞膜Na+,K+ ATP酶活性。结果　Str 1× 10 -9～ 1× 10 -7mol·L-1均能不同程度地持续增加衰竭心脏的心率、左室收缩压及左室收缩的最大速率 ,但 1× 10 -7mol·L-1对Na+,K+ ATP酶活性无明显抑制 ,1× 10 -10 ～ 1× 10 -8mol·L-1则可升高Na+,K+ ATP酶的活性 (P <0 0 5或P <0 0 1)。 1× 10 -6 ～ 1× 10 -4 mol·L-1可使心功能指标先升高、后降低 ,且伴有心脏收缩不规则和心律失常 ,也可剂量依赖性地抑制Na+,K+ ATP酶活性 (P <0 0 1)。结论　高浓度Str的正性肌力及伴有的心脏毒性作用是通过抑制Na+,K+ ATP酶实现的 ;而低浓度的正性肌力作用则和Na+,K+ ATP酶抑制无关     

外源性腺苷三磷酸和腺苷对食管癌TE-13细胞株凋亡的影响

目的　探讨腺苷三磷酸 (ATP)和腺苷 (ADO)是否具有诱导人食管低分化鳞癌细胞株TE 13凋亡的作用。方法　MTT法 ,AO/EB双荧光染色法 ,琼脂糖凝胶电泳 ,流式细胞仪方法。结果　ATP在0 .1～ 1.0mmol·L- 1或ADO在 0 .0 1～ 1mmol·L- 1浓度范围内 ,可不同程度地抑制TE 13细胞的增殖 ,ATP和ADO作用 72h后 ,对TE 13细胞的最大抑制率分别达 (80 .5± 6 .2 ) %和 (74 .0± 5 .3) %。细胞经0 .3mmol·L- 1的ATP或ADO处理 4 8h后 ,细胞形态出现了凋亡特征 ;电泳可见明显的“梯状”条带 ;ATP和ADO可浓度依赖性地诱导细胞的凋亡 ,1mmol·L- 1的ATP和ADO诱导细胞的凋亡率分别为 (16 .6± 1.1) %和 (16 .9± 1.2 ) %。结论　ATP和ADO均有诱导食管癌TE 13细胞凋亡的作用     

外源性三磷酸腺苷和腺苷对肿瘤细胞增殖的影响

目的　研究三磷酸腺苷 (ATP)和腺苷 (ADO)对人红白血病细胞株K5 6 2、人胃中分化腺癌细胞株HGC 2 7、人食管低分化鳞癌细胞株TE 13细胞增殖的影响。方法　采用MTT法测定ATP和ADO抑制肿瘤细胞增殖的作用 ,Wright’s Giemsa染色观察细胞形态学的改变。结果　在 0 0 1～ 1 0mmol·L-1浓度范围内 ,ATP和ADO可不同程度地抑制TE 13、HGC 2 7和K5 6 2细胞的增殖 ,其中对TE 13的作用最强 ;ATP和ADO作用 72h后 ,对TE 13细胞的抑制率分别为80 5 2 %和 74 0 3%。细胞经高浓度 (1mmol·L-1)的ATP和ADO处理后 ,细胞形态出现了凋亡的特征。结论　ATP抗TE 13和HGC 2 7肿瘤细胞增殖的作用与其代谢产物ADO部分相关 ,ATP和ADO的作用机制可能涉及细胞凋亡     

淫羊藿苷对氧自由基所致大鼠脑线粒体损伤的保护作用

目的设想神经元缺氧损伤与自由基损伤线粒体有关,由此探讨淫羊藿苷的保护作用机制。方法采用Fe2+/维生素C(VitC)为氧自由基生成系统建立氧自由基损伤线粒体的体外模型。观察淫羊藿苷对线粒体肿胀度、呼吸链复合体酶Ⅰ～Ⅳ活性、丙二醛(MDA)含量的影响。结果Fe2+/VitC(1mmol·L-1/1mmol·L-1,10mmol·L-1/10mmol·L-1)可使线粒体的肿胀度和MDA含量显著增加,呼吸链复合体酶Ⅱ～Ⅳ活性不同程度下降。预先加入淫羊藿苷(0.03和0.1mg·L-1)能显著抑制线粒体肿胀,减少MDA含量,提高呼吸链复合体酶Ⅱ～Ⅳ的活性。结论淫羊藿苷对氧自由基损伤的大鼠脑线粒体呼吸链具有保护作用。     

培哚普利对胰岛素抵抗的影响

目的 :研究培哚普利对胰岛素抵抗高血压大鼠胰岛素抵抗 (IR)的影响。方法 :选择雄性SD大鼠 30只分成 2组 ,对照组饲以基础饲料 ,培哚普利组饲以高糖高盐饲料 ,4wk后用培哚普利 0 .8mg·kg- 1·d- 1灌胃 4wk ,观察 2组实验前、4wk、8wk时收缩压 (SBP)、空腹血糖 (FBG )、空腹血胰岛素 (FINS)、胰岛素敏感性指数 (ISI)及红细胞膜Na ,K ATP酶活性测定的变化。结果 :培哚普利组 4wk时SBP升高 ,上升值为 (4 .4±s 1.6 )kPa ,FBG上升值 (0 .4± 0 .3)mmol·L- 1,FINS升高 (12 .7±2 .1) μU·L- 1,ISI降低 ,差值 1.30± 0 .2 0 ,红细胞膜Na ,K ATP酶活性降低 (12± 6 )nmoL·pi·mg- 1·pro·h- 1,P <0 .0 1。 8wk与 4wk时比较分别为 ,SBP[(13.2± 1.2 )kPavs (17.0± 2 .0 )kPa](P <0 .0 1) ,FBG分别为 [(2 .9± 0 .7)mmol·L- 1vs (3.8± 0 .3)mmol·L- 1](P <0 .0 1) ,FINS分别为 [(8.0± 1.5 ) μU·L- 1vs (18± 3) μU·L- 1](P <0 .0 1) ,ISI分别为 [(- 3.2 0± 0 .2 0 )vs (- 4.2 0± 0 .2 0 ) ](P <0 .0 1) ,红细胞膜Na ,K ATP酶活性分别为[(36± 9)nmoL·pi·mg- 1·pro·h- 1vs (2 6± 6 )nmoL·pi·mg- 1·pro·h- 1](P <0 .0 1)。结论 :培哚普利能改善高糖高盐饲养大鼠的IR。     

人血清对氧磷酶的部分纯化及解毒效应

目的　寻求对氧磷酶 (paraoxonase ,EC 3.1.8.1)作为外源性抗毒剂对抗G类有机磷毒剂的可能性。方法　采用亲和凝胶柱层析进行了人血清对氧磷酶的部分纯化 ,测定了其对于不同底物的米氏常数 (Km)以及钙离子对于酶活性的影响 ,比较了不同种属的对氧磷酶活性 ,采用体外解毒 ,体内染毒的方法检测了对氧磷酶对于不同的底物的作用。结果部分纯化的对氧磷酶对于梭曼和对氧磷均有较好的催化水解作用。以对氧磷为底物时 ,Km 值为 0 .2 2mmol·L- 1,比活性为 375 μmol·min- 1·g- 1蛋白 ;以梭曼为底物时 ,Km 值为 0 .6 0mmol·L- 1,比活性为 4 34μmol·min- 1·g- 1蛋白。不同种属来源的血清对氧磷酶的活性差异较大 ,是造成不同种属动物对有机磷毒剂中毒敏感性差别的原因之一。部分纯化的对氧磷酶在含 1mmol·L- 1CaCl2 的缓冲液中活性良好 ,加入乙二胺四乙酸 (EDTA)后 ,无论以对氧磷或梭曼为底物 ,酶活性均受到明显抑制 ,表明人血清对氧磷酶是钙离子依赖性酶。EDTA的pI50 约为 1.8mmol·L- 1。人血清对氧磷酶能有效地水解对氧磷、梭曼、沙林、塔崩及敌敌畏 ,但对VX及乐果无效 ,表明其对P F、P CN及P O键有选择性 ,对P S键无作用。结论　对氧磷酶可作为G类毒剂的抗毒剂     

ATP敏感性钾电流与蛋白激酶关系的研究

目的观察蛋白激酶A(PKA)及蛋白激酶C(PKC)抑制剂和蛋白脱磷酸化物质对大鼠心室肌细胞ATP敏感性钾电流 (IKATP)的影响 ,探讨克罗卡林 (cromakalim)开放ATP敏感性钾通道的作用机制。方法采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞IKATP。结果在37℃时克罗卡林 (1μmol·L-1)可阻断ATP的抑制作用 ,诱导出IKATP。PKA抑制剂PKI(6～22)amide (1μmol·L -1),可模拟克罗卡林的作用 ,激活IKATP;而PKC抑制剂calphosticC无此作用。同时还观察到蛋白脱磷酸化物质butanedioemonoxime(BDM,5mmol·L -1)也可诱发出IKATP。结论克罗卡林开放IKATP 机制与抑制PKA的活性有关 ,而与PKC无关。     

山萘黄素是一种有效的体外重组人蛋白激酶CK2的抑制剂(英文)

目的　为了筛选蛋白激酶CK2的抑制剂,观察山萘黄素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及其酶动力学机制。方法　利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶,通过测定转移到CK2底物上的[γ32 P]ATP的32 P的放射性活性来检测CK2的活性。向反应体系中加入不同浓度的山萘黄素,观察其对CK2的抑制效果;通过固定酪蛋白浓度为2g·L- 1 ,ATP浓度为1 0 ,2 0 ,4 0和80 μmol·L- 1 或固定ATP的浓度为1 0 μmol·L- 1 ,改变酪蛋白浓度( 1 ,2 ,4和8g·L- 1 ) ,观察其酶动力学机制。结果　山萘黄素能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50 =1 .9μmol·L- 1 )。抑制作用强于已知的CK2抑制剂白杨素、桑色素和金雀异黄素。酶动力学分析表明,山萘黄素与ATP(Ki=1 .1 μmol·L- 1 )及酪蛋白(Ki=3 .1 μmol·L- 1 )均呈非竞争性抑制CK2的活性。初步的化合物结构分析表明,2′和3位上的羟基对山萘黄素及芹黄素发挥其抑制效果产生实质性的负面影响。结论　山萘黄素是一种新的体外蛋白激酶CK2的有效抑制剂。黄酮类CK2的抑制剂可能通过不同的位点作用于CK2 ,这种作用主要取决于其羟基的数目和位置     

ATP通过P2受体调节大鼠近端结肠纵行肌的舒张与收缩反应(英文)

目的腺苷三磷酸(ATP)对大鼠离体远端结肠纵行肌运动的影响已明确,对近端结肠纵行肌的影响可能不同,但未有报告,为此对此进行观察并探讨其受体机制。方法观察静息张力时或预收缩时0.1μmol·L-1～1mmol·L-1ATP和1～100μmol·L-1腺苷对大鼠近端结肠纵行肌的抑制和兴奋作用。结果在静息张力下,1μmol·L-1～1mmol·L-1ATP对大鼠近端结肠纵行肌产生3种效应,即抑制自发性收缩反应,一过性轻度降低基础张力(0.05～0.08g),随后产生浓度依赖性收缩反应(0.04～0.44g)。0.1μmol·L-1河豚毒素不影响ATP的上述作用。在静息张力下,1～100μmol·L-1腺苷对近端结肠纵行肌未产生明显的收缩反应。应用5羟色胺(5HT)或乙酰胆碱(ACh)预收缩标本时,1μmol·L-1～1mmol·L-1ATP产生明显的浓度依赖性舒张反应(23.2%～94.6%,5HT预收缩;24.8%～92.4%,ACh预收缩),而腺苷引起的舒张反应明显小于ATP。结论在大鼠离体近端结肠纵行肌,ATP主要通过嘌呤嘧啶(P)2受体介导收缩反应,部分通过P1受体介导舒张反应。     

α－双炔失碳酯对红细胞膜和钙调蛋白功能的影响

探讨α－双炔失碳酯对细胞膜功能的影响．结果表明，α－双炔失碳酯对红细胞溶血有很强的保护作用．１ｍｇ·Ｌ－１时保护率达７０％。该作用与α－双炔失碳酯对钙调蛋白功能的抑制有关。α－双炔失碳酯对钙调蛋白激活的Ｃａ２＋．Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和钙调蛋白依赖性磷酸二酯酶的活力都有较明显的抑制作用，提示α－双炔失碳酯对钙信号系统的干扰可能与其抗肿瘤作用密切相关。     

兴奋毒性对海马脑片Ca2+/CaM PK Ⅱ活性的影响

用离体孵育的大鼠海马脑片模型,研究兴奋毒性与Ca²⁺/CaMPKII活性的关系。结果表明,外源性谷氨酸或NMDA均可抑制Ca²⁺/CaMPKII的活性,此活性的抑制可被MK801完全拮抗,而DNQX却无明显拮抗作用;无胞外Ca²⁺时,谷氨酸导致的酶活性抑制程度不如有胞外Ca²⁺时显著;无胞外Mg²⁺时,谷氨酸导致的酶活性抑制程度比有胞外Mg²⁺时显著。结果提示兴奋毒性对Ca²⁺/CaMPKII活性的抑制与NMDA受体介导的兴奋毒性有关。     

人参茎叶皂甙在体外对兔脑Ca~(2+)-ATP酶和Mg~(2+)-ATP酶活力的影响

体外实验发现,人参茎叶总皂甙(GNS)、人参茎叶三醇组皂甙(PTS)均能显著抑制兔大脑Ca~(2+)-ATP酶和Mg~(2+)-ATP酶的活力;而人参茎叶二醇组皂式(PDS)在10和100mg/L时,显著兴奋Ca~(2+)—ATP酶的活力,在1000mg/L时,则显著抑制Ca~(2+)—ATP酶活力,对Mg~(2+)-ATP酶的活力也具有抑制作用;氯丙嗪(CPZ,0.35和0.70mmol/L)对Ca~(2+)-ATP酶和Mg~(2+)—ATP酶的活力均呈现非常显著的抑制作用。     

羟苯氨酮激活家兔血管平滑肌细胞钙敏感钾通道

目的研究羟苯氨酮(oxyphenamone,Oxy)扩张血管作用机理。方法用全细胞膜片钳技术,监测家兔肠系膜阻力血管平滑肌细胞钙敏感钾通道电流变化以及Oxy对其的影响。结果0.1 μmol·L^-1 Oxy明显增加钙敏感钾通道电流,冲洗后恢复至给药前水平;0.01～10 μmol·L^-1 Oxy明显增加钙敏感钾通道电流,且呈现浓度依赖性。结论 Oxy呈浓度依赖性和可逆性的增大血管平滑肌细胞钙敏感钾通道电流。     

Inhibition of calmodulin stimulation of phosphodiesterase and Ca2+, Mg2+-ATPase activities and shape change of erythrocyte ghosts by chloroquine

The effects of chloroquine on calmodulin (CaM)-related enzyme activities and the shape of human erythrocytes have been studied. It was found that the CaM activation of rat brain phosphodiesterase was abolished by the addition of chloroquine. CaM was included in the assay of phosphodiesterase activity at the concentration that gave half-maximal activation. The concentration of chloroquine that caused 50% inhibition of CaM stimulation of phosphodiesterase was 7 X 10(-5)M. The type of inhibition was competitive with respect to CaM. The CaM-stimulated Ca2+, Mg2+-ATPase in erythrocyte membrane was also inhibited by chloroquine, the 50% inhibitory concentration of which was about 2 X 10(-4)M. Its mode of action was also competitive with respect to CaM. The shapes of erythrocyte ghosts prepared by hypotonic hemolysis were examined in a solution consisting of 2 mM MgCl2, 154 mM NaCl and 10 mM Tris-HCl (pH 7.4); they were discocytic in the presence of 2 mM ATP and in its absence. They were converted to the invaginated form by the addition of chloroquine in the concentration range of 1 X 10(-4)-5 X 10(-4)M. This concentration is similar to that which caused the inhibition of CaM activation of Ca2+, Mg2+-ATPase.     

Adenosine triphosphatase activities in plasma liver membranes of rats treated with DDT and toxaphene

The effect of exposure to chlorinated insecticides (DDT and toxaphene) on Na+,K+-ATPase, Mg2+-ATPase and Ca2+-ATPase activities of the plasma membrane of hepatocytes was determined. Acute treatment with DDT (200 mg per kg body weight) or toxaphene (110 mg per kg body weight) produced a significant decrease in Na+,K+-ATPase activity (80% and 85%, respectively) 24 h after treatment. DDT also produced a 30% decrease in Mg2+-ATPase and Ca2+-ATPase activity, but toxaphene treatment did not modify these enzymes. The effect of exposure to daily doses of DDT (30 mg per kg body weight) or toxaphene (16.5 mg per kg body weight) for a period of 3.5 months was also studied. Animals were sacrificed at 15-day intervals and results showed that Na+,K+-ATPase activity decreased 80% from the beginning of each treatment and the activity remained low throughout the treatment period. DDT, but not toxaphene, also led to a decrease in Mg2+-ATPase (20%) and Ca2+-ATPase (35%) activity. The low values observed from the beginning remained low throughout the treatment period. We believe that the general mechanism of ATPase inhibition by organochloride compounds could be the result of its interaction with membrane lipid components, although some differences could arise from differences in their spatial structure.     

Effects of nitrate and nitrite, chemical intermediates of inhaled nitrogen dioxide, on membrane components of red blood cells of rats

Rat blood was incubated at 37 degrees C for 60 min with either NaNO3 or NaNO2 to examine the relationship between the decrease in the hexose content and Ca2+,Mg2+-ATPase activity of red cell membranes, and NO3- and NO2-. The hexose content decreased depending on the NaNO2 concentration up to 100 microM reaching 76% (p less than 0.05) of the control value. NaNO3 had little effect on the hexose content. On the other hand, the Ca2+,Mg2+-ATPase activity decreased depending on the NaNO3 concentration up to 200 microM, where the activity reached 75% (p less than 0.01) of the control value. The effect of NaNO2 on this activity was smaller than that of NaNO3. The sialic acid content and the Na+,K+-ATPase activity did not show significant alterations by incubation with NaNO2 and NaNO3 at below 100 microM. To examine the in vivo effects of NO2- and NO3-, 50 mM NaNO3 was intravenously injected into rats five times at hourly intervals (dose: 1.0 ml/kg body weight), and blood was collected 1 hr after the last injection. The activities of Ca2+,Mg2+- and Na+,K+-ATPases of red cell membranes were decreased to 68% (p less than 0.05) and 80% of the control value, respectively. Reduction by injection of 50 mM NaNO2 was smaller than that by 50 mM NaNO3. The results show that the hexose content and the Ca2+,Mg2+-ATPase activity of red cell membranes were decreased by NO-x that increased in the blood during short-term exposure of rats to NO2.     

镍对豚鼠心室肌收缩活动及慢反应电位的影响

应用微张力换能及微电极方法观察了镍离子(Ni2 +)对豚鼠心室肌收缩活动及慢反应电位的影响 .结果显示 :①NiCl2 0 .0 5mmol·L- 1有增加收缩活动的倾向 ,而在大于 0 .50mmol·L- 1时 ,收缩活动呈剂量依赖性下降 .②Ni2 +能明显抑制正阶梯现象及静息后增强效应 ,但未使正阶梯现象翻转 .③Ni2 +使慢反应电位的幅度及 0期最大上升速率 ( Vmax)降低 .④高浓度Ni2 +对收缩活动的抑制作用强而持久 ,且对活动心肌的影响更加明显 .上述结果表明 :Ni2 +通过多种途径拮抗Ca2 +而影响心肌的收缩活动 ,它是一种非特异性的Ca2 +拮抗剂 .而低浓度Ni2 +增加收缩活动的现象 ,则提示Ni2 +对心肌收缩活动的影响可能存在不同的机理