盐酸小檗碱抑制人颊黏膜成纤维细胞炎症反应的初步实验研究

目的 观察盐酸小檗碱对脂多糖刺激人颊黏膜成纤维细胞炎症反应的抑制作用.方法 原代培养人颊黏膜成纤维细胞作为对照组;脂多糖刺激组作为炎症组,同时加入小檗碱和脂多糖组作为实验组.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清液中前列腺素E2的含量作为细胞炎症反应指标.结果 炎症组较对照组上清液中前列腺素E2浓度明显升高[(8.682±1.984)μg/L vs (22.509±1.245)μg/L,P<0.05],药物组较炎症组上清液中前列腺素E2浓度明显降低[(11.381±1.652)μg/L vs (22.509±1.245)μg/L,P<0.05].结论 盐酸小檗碱可以明显抑制由脂多糖刺激人颊黏膜成纤维细胞分泌的前列腺素E2.盐酸小檗碱在抗人颊黏膜成纤维细胞的炎症反应中具有重要的作用.     

大鼠肺成纤维细胞的体外培养及急性炎症模型的建立

目的:探讨大鼠肺成纤维细胞体外培养及急性炎症模型建立的方法.方法:采用胰酶消化法、差速贴壁法,分离、纯化肺成纤维细胞,然后采用H-DMEM培养液进行细胞培养.采用免疫荧光法对所分离的细胞进行鉴定.采用脂多糖(LPS)干预建立成纤维细胞体外急性炎症模型,实验分组:空白组、0.1 μg/mL LPS组、1μg/mL LPS组、10 μg/mL LPS组,并利用细胞增殖/毒性检测试剂(MTT)在干预后3、6、9 h分别测定吸光度(OD)值.结果:成纤维细胞体外培养24 h后,镜下可见组织块周边有长梭型细胞爬出,72 h后生长迅速,4d接近融合.经免疫荧光测定,肺成纤维细胞波形蛋白(vimentin)阳性,CD31阴性.在干预后各时间段中,1 μg/mL LPS组测得的OD值高于其他各组,在1μg/mL LPS组中,干预后6h测得的OD值高于其他各时间段,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:该法可以体外培养出大鼠肺成纤维细胞,用浓度为1 μg/mL的LPS干预体外培养的成纤维细胞6h能建立较为合理的急性炎症模型.     

丙泊酚对小鼠原代肝细胞PTEN表达的影响

目的探讨丙泊酚对小鼠原代肝细胞PTEN表达的影响。方法采用两步胶原酶灌注法分离小鼠原代肝细胞,均分为三组:对照组(C组)、溶剂对照组(D组)、丙泊酚组(P组)。首先用MTT法检测不同培养浓度[(1～100)μg/mL]下丙泊酚对小鼠原代肝细胞活性的影响,接着选取10μg/mL的丙泊酚(终浓度)作为培养条件,用MTT法检测不同培养时间[(1～32)h]下小鼠原代肝细胞活力变化。P组选用10μg/mL的丙泊酚(终浓度)处理小鼠原代肝细胞24 h。用Real-time PCR检测各组PTEN mRNA表达,用Western blot检测各组PTEN蛋白含量。结果在所有检测项目上,C组与D组的差异均无统计学意义(P0.05)。与C组相比,丙泊酚浓度为1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL时小鼠原代肝细胞活性的差异无统计学意义(P0.05),丙泊酚浓度为100μg/mL时小鼠原代肝细胞活性显著降低(P0.01)。不同培养时间的各组与C组相比,小鼠原代肝细胞活性的差异无统计学意义(P0.05)。P组PTEN蛋白含量显著高于D组(P0.01),P组PTEN mRNA水平高于D组(P0.05)。结论丙泊酚可引起小鼠原代肝细胞PTEN表达增强。     

藓化饮对体外培养的人口腔黏膜上皮细胞增殖活性的影响

目的 探讨藓化饮对体外培养的人口腔黏膜上皮细胞增殖活性的影响.方法 DispaseⅡ及胰酶消化法原代培养人口腔黏膜上皮细胞,传代后HE染色,光镜下进行形态学观察.免疫组织化学抗角蛋白抗体染色,进行来源鉴定.取第二代培养细胞,随机分为4个实验组和1个对照组.制备藓化饮药液,实验组分别加入经无血清培基稀释为104、105、5×105、106μg/L 4个浓度梯度的藓化饮液继续培养;对照组只加无血清培基继续培养.甲基噻唑基四唑法测定培养细胞的增殖活性.结果 原代培养的人口腔黏膜上皮细胞呈扁平椭圆形或多角形,胞核清晰.细胞抗角蛋白抗体染色阳性.藓化饮在105μg/L浓度下增殖活性吸光度值明显高于其他浓度组和对照组(P＜0.05).而在104μg/L、5×105μg/L、106μg/L浓度下增殖活性吸光度值虽高于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 使用无血清培养基可成功进行人口腔黏膜上皮细胞原代培养及传代培养.藓化饮在浓度为105μg/L下能明显增强体外培养的人口腔黏膜上皮细胞的增殖活性.     

氯喹与拓扑替康联用协同抑制A549肺癌细胞株的增殖

目的观察氯喹(CQ)与拓扑替康(TPT)联用对A549肺癌细胞株的影响,为增敏化疗及氯喹在抗肿瘤方面的研究、开发和临床应用提供理论支持和实验依据。方法 MTT法检测细胞抑制率,取对数生长期的肺癌细胞A549种于96孔板内6,×103个/孔2,00μL/孔。实验分为对照组(注射用水)和实验组,实验组加入0.05～25.6μg/mL的TPT,分别培养48 h和72 h;实验组加入不同浓度的单药或以固定比例(TPT∶CQ=1∶10)联合药物,TPT/CQ为0.39/3.90、.78/7.8、1.56/15.6、3.13/31.3和6.25/62.5μg/mL;37℃放置4 h后,弃上清液,加入100μLDMSO,摇床上摇匀使紫色结晶充分溶解。用酶标仪测定波长为570 nm处的吸光度(OD)值,计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率=(1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%。每组实验重复3次。结果应用浓度为0～25μg/mL TPT处理A549细胞48 h和72 h,通过MTT检测可发现TPT对A549细胞的生长抑制呈现时间及浓度依赖性,在72 hI,C50值为(1.769±0.288)μg/mL,CQ(0.39～6.25μg/mL)与TPT(3.9～62.5μg/mL)联用对A549细胞的增殖抑制作用,通过软件分析在上述浓度范围内,两药的联合指数(CI)均<1。结论 CQ能增强TPT对A549细胞的增殖抑制作用。     

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞病变的影响

目的分析槟榔碱对口腔粘膜成纤维细胞(OMFb)微丝骨架及胶原吞噬的影响。方法取正常人口腔黏膜,行组织块法培养,取第6代细胞行不同浓度槟榔碱(0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL)干预,检测12h、24h、48h后细胞增殖情况;分析24h后胶原吞噬率变化情况;观察24h后细胞微丝骨架变化情况。结果槟榔碱干预12h后,不同槟榔碱浓度OMFb增殖情况差异无统计学意义(P0.05);24h后,10μg/mL、20μg/mL浓度组OMFb增殖率上升,且20μg/mL浓度组增殖率10μg/mL浓度组;30μg/mL、40μg/mL浓度组OMFb无增殖;48h后,各浓度槟榔碱均对OMFb增殖存在抑制效用。10μg/mL、20μg/mL浓度组OMFb胶原吞噬能力存在明显改善,而30μg/mL、40μg/mL浓度组胶原吞噬能力被抑制。此外,10μg/mL、20μg/mL浓度组其OMFb细胞微丝骨架表现为粗大束状排列,出现张力纤维,细胞极性增强,且10μg/mL浓度组变化情况高于20μg/mL浓度组;而40μg/mL浓度组其OMFb细胞微丝骨架明显减少,30μg/mL浓度组次之,细胞皮层出现大量染色聚集物质。结论低浓度槟榔碱在增强OMFb活性、胶原吞噬能力等方面具有显著促进作用,但高浓度则具有抑制作用。此外,低浓度的槟榔碱还可增强OMFb细胞微丝骨架聚合,而高浓度槟榔碱则可以抑制OMFb细胞微丝骨架聚合,这可能是口腔黏膜下纤维性变的主要发病机制之一。     

青蒿琥酯对转化生长因子-β1诱导的原代肺成纤维细胞分化中Notch1信号通路的影响

目的 探讨青蒿琥酯在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的原代肺成纤维细胞分化过程中的作用及其可能机制.方法 采用酶消化法及组织贴块法提取原代肺成纤维细胞,免疫荧光检测Vimentin的表达鉴定细胞;CCK法检测青蒿琥酯半数抑制浓度(IC50),根据IC50选择药物干预浓度.无血清同步化培养细胞分为4组:对照组(无血清培养基);TGF-β1诱导组(TGF-β15 ng/mL);青蒿琥酯干预组(TGF-β1 5 ng/mL+青蒿琥酯8μg/mL);青蒿琥酯对照组(青蒿琥酯8μg/mL).培养24 h后,Masson染色检测细胞及胶原分泌情况,Western blot 检测各组Notch1、Jagged1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况.结果 青蒿琥酯作用于TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞24 h的IC50为8.56μg/mL;Masson染色示TGF-β1诱导组胶原的表达明显高于对照组,而青蒿琥酯干预组胶原的表达较TGF-β1诱导组明显减少.在TGF-β1诱导组,与对照组比较,Notch1、Jagged1、α-SMA的表达明显升高(P＜0.05);青蒿琥酯干预组Notch1、Jagged1、α-SMA表达较TGF-β1诱导组均明显减少(P＜0.05).结论 青蒿琥酯能抑制TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞分化过程,其机制可能为抑制Notch信号的表达.     

The combination of CQ and TPT produced synergic effect on inhibiting the proliferation of A549 cells

目的 观察氯喹(CQ)与拓扑替康(TPT)联用对A549肺癌细胞株的影响,为增敏化疗及氯喹在抗肿瘤方面的研究、开发和临床应用提供理论支持和实验依据.方法 MTT法检测细胞抑制率,取对数生长期的肺癌细胞A549种于96孔板内,6×103个/孔,200 μL /孔.实验分为对照组(注射用水)和实验组,实验组加入0.05～25.6 μg/mL的TPT,分别培养48 h和72 h;实验组加入不同浓度的单药或以固定比例(TPT:CQ＝1:10)联合药物,TPT/CQ为0.39/3.9、0.78/7.8、1.56/15.6、3.13/31.3和6.25/62.5 μg/mL;37℃放置4 h后,弃上清液,加入100 μL SO,摇床上摇匀使紫色结晶充分溶解.用酶标仪测定波长为570 nm处的吸光度(OD)值,计算细胞生长抑制率.细胞生长抑制率= (1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%.每组实验重复3次.结果 应用浓度为0～25 μg/mL TPT处理A549细胞48 h和72 h,通过MTT检测可发现TPT对A549细胞的生长抑制呈现时间及浓度依赖性,在72 h,IC50值为(1.769±0.288)μg/mL,CQ(0.39～6.25 μg/mL)与TPT(3.9～62.5 μg/mL)联用对A549细胞的增殖抑制作用,通过软件分析在上述浓度范围内,两药的联合指数(CI)均<1.结论 CQ能增强TPT对A549细胞的增殖抑制作用.     

VEGF单抗对人肺癌细胞A549生长及侵袭能力影响的体外研究

目的 研究VEGF单抗(血管内皮生长因子单克隆抗体,Bevacizumab)对人肺癌细胞(A549)生长及侵袭能力的直接影响,并探讨其可能的内在机制.方法 采用MTT法测定Bevacizumab对A549细胞生长活性的影响,Transwell小室法检测其对细胞侵袭的影响.结果 与空白对照组相比,10μg/mL及100μg/mL的Bevacizumab能够促进A549细胞增殖,10 μg/mL药物的促增殖作用持续到48 h,而100μg/mL药物的作用可持续到72 h(P＜0.05)；24 h内各浓度Bevacizumab均能抑制靶细胞侵袭,5μg/mL实验组抑制能力最强.＜5μg/mL时,随药物浓度增加抑制能力增强；＞5μg/mL时,随药物浓度增加抑制能力反而下降(P＜0.05).结论 较高浓度Bevacizumab能够促进肿瘤细胞增殖,但是各浓度Bevacizumab均具有抑制肿瘤细胞侵袭的作用,该药物抑制肿瘤细胞侵袭与影响其生长无关.     

壳聚糖体外促进兔膀胱黏膜上皮细胞的增殖

目的:观察壳聚糖对体外培养膀胱黏膜上皮细胞增殖的影响,探讨其治疗间质性膀胱炎的可行性.方法:获取新西兰兔膀胱黏膜,Dispase酶消化法收集上皮细胞,分不同浓度(0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 g/L)壳聚糖实验组与对照组进行细胞原代培养,免疫组织化学鉴定培养细胞.培养72 h后,光镜下观察细胞生长增殖情况,NAG酶反应比色法和细胞计数法测定壳聚糖对膀胱上皮细胞增殖的影响.结果:免疫组化鉴定培养细胞为膀胱黏膜上皮细胞.与对照组相比,壳聚糖在浓度》0.3 g/L时能促进兔膀胱黏膜上皮细胞的增殖, 促进作用在浓度为1.2 g/L时最明显(P＜0.01),2.4、4.8 g/L时渐降低,但仍高于对照组(P＜0.01).结论:壳聚糖体外可以促进兔膀胱黏膜上皮细胞增殖,值得进一步研究以用于治疗间质性膀胱炎.