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人胰岛细胞瘤cDNA文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
采用一种简单高效的互补脱氧核糖核酸(cDNA)克隆技术制备人胰岛细胞瘤的cDNA文库。方法的主要过程如下:以人胰岛细胞瘤的Poly(A)^+-RNA为模板,以含NotI切点的oligo-(dT)15为引物,在反转录酶作用下合成第一股单链cDNA;用E.coli RNaseH除去Poly(A)^+-RNA,并以E.coli DNA Polymerase IE.coli DNA Ligase和T4DN 相似文献
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氧化修饰低密度脂蛋白和血管内皮损伤 总被引:4,自引:0,他引:4
血管内皮功能障碍是许多心血管疾病共同的病理生理改变,尤其在动脉粥样硬化(AS)、心肌缺血及缺血再灌注损伤过程中发挥着重要作用,因此对内皮功能损伤的原因及其发生机制的研究具有理论与实践双重意义。引起内皮功能损伤的因素是多方面的,近年来,愈来愈多的研究提示氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)诱发的内皮功能障碍加速了AS的形成,增加了心肌缺血再灌注损伤和急性心肌梗塞,成为目前心血管领域的一个研究热点。一、氧化修饰低密度脂蛋白的生成及理化、生物学特性体外细胞培养显示,在AS斑块内的所有细胞均能氧化修饰低… 相似文献
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本试验的目的是探讨诱导分化剂和DNA损伤性化疗药对肺腺癌细胞凋亡的影响。材料与方法(1)材料:人肺腺癌细胞A549购自武汉大学典型培养物保藏中心,常规培养传代。诱导分化剂全反式维甲酸(RA)和DNA荧光染料hoechest33258购自美国Sigma... 相似文献
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目的 观察一氧化氮(NO)在白介素-1β(IL-1β)诱导的胰岛细胞损伤机制中的作用。方法 应用体外单层培养的大鼠胰岛细胞,分别检测IL-1β、一氧化氮合酶抑制剂N^G-单甲基-L精氨酸(L-NMMA)(1mmol/L)、胰岛细胞保护剂尼克酰胺(NA)(10.20mmol/L)及IL-1β诱导,胰岛细胞亚硝酸盐生成量显著增加,同时胰岛素基础细胞内DNA、胰岛素含量和细胞活性的影响。结果 以IL-6 相似文献
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目的 应用单细胞电泳检测(SCGE)过氧化氢(H2O2)致小鼠淋巴细胞DNA损伤及其修复。方法 标准SCGE条件下荧光显微镜观察。结果 H2O2不同浓度80、160和320umol/L,3个组H2O2浓度均可致小鼠淋巴细胞DNA损伤,较低剂量即可造成细胞拖尾,可逆性损伤在60min内可获得明显修复。结论 单细胞电泳可快速灵敏地检测氧化损伤,也可能用于流行病学研究。 相似文献
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刺五加叶皂甙诱导胃癌细胞凋亡的探讨 总被引:7,自引:0,他引:7
目的 探讨刺五加叶皂甙(ASS)在体外对胃癌细胞凋亡的诱导作用。方法 用琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察ASS对体外培养SGC 7901 胃癌细胞凋亡的DNA 电泳和形态学改变,维甲酸(RA)作为对照药物。结果 ASS作用的胃癌细胞DNA 出现典型梯状改变,高浓度RA作用胃癌细胞DNA 有模糊梯状改变。电镜观察ASS及RA作用胃癌细胞,出现异染色体边集,线粒体肿胀等凋亡改变。结论 ASS促进体外培养胃癌细胞凋亡的作用明显强于RA,且随着时间的增加和剂量加大,诱发凋亡程度增高。 相似文献
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目的探讨甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对胃粘膜上皮细胞的损伤作用.方法对MNNG在诱发体外培养的人胎胃粘膜上皮细胞的非程序DNA合成、脂质过氧化和rasP21蛋白进行观察.结果MNNG处理组各时相胃粘膜上皮细胞的增殖速率,非程序DNA合成水平(1838cpm±205cpmvs705cpm±125cpm,P<001),质脂过氧化物(第20天,7.42nmol/mg±0.68nmd/mgvs3.62nmol/mg±0.54nmol/mg蛋白P<0.01)和rasP21蛋白含量(第40天,121A±012Avs051A±007A,P<001).结论MNNG可诱发胃粘膜上皮细胞恶性转化,其作用机制可能是通过损伤细胞DNA,诱发质脂过氧化或导致rasP21异常表达所致. 相似文献
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钙通道阻滞剂对环孢素A所致内皮细胞损伤的保护作用 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:研究钙通道阻滞剂异搏定对环孢素A(CsA)所致内皮细胞(EC)所致内皮细胞(EC)损伤的保护作用。 方法:在培养的EC中加入CsA100μg/L的同时加入异搏定100μg/L作用24h,以直接计数粘附细胞数观察细胞分离;光镜、电镜观察细胞形态;H^3-TdR掺入法及流式细胞仪观察DNA抑制;Fura-2AM荧光负载法检测细胞内游离钙([Ca^2+]i);放射免疫法检测细胞上清中内皮素(ET) 相似文献
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磷脂酰胆碱拮抗自由基致小鼠微核作用的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用小鼠外周血正染红细胞(NCE)微核实验,评价臭氧产生的自由基对细胞遗传毒理效应及其磷脂酰胆碱对其遗传损伤的保护作用。实验结果显示:臭氧可使小鼠NCE微核率明显增高(P<0.01),而磷脂酰胆碱对自由基诱导微核作用有明显的抑制。提示磷脂酰胆碱具有拮抗自由基造成的DNA氧化损伤作用。 相似文献
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软骨细胞坏死,早期化骨是大骨节病(KBD)病因发病机制的核心。对KBD病儿红细胞及软骨细胞膜组成的分析表明:膜磷脂(PL)尤其胆碱磷脂(PC)减少,鞘磷脂(SM)增加,代表细胞膜老化指数的Ch(胆固醇)/PL,SM/PC分子比增高,膜的脆性增加,细胞DNA含量降低。结合其硒水平与GSH-Px活性低,组织抗氧化能力下降和膜的早期老化、氧化损伤、细胞坏死,膜破溃小泡化(基质小泡)与KBD早期化骨的机制 相似文献
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氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡 总被引:3,自引:3,他引:0
为研究氧化型低密度脂蛋白引起血管平滑肌细胞凋亡及其凋亡的机制,采用细胞形态学DNA末标记法,流式细胞仪,Westen bltting观察氧化型低密度脂蛋白诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。结果发现,在氧化型低密度脂蛋白作用下,血管平滑肌细胞阻滞在分裂期的中期,并发生凋亡,DNA末端标记法和流式细胞仪检测发现氧化型低密度脂蛋白引起细胞凋亡明显高于天然低密度脂蛋白(前者是后者的10倍)。电镜下凋亡细胞 相似文献
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伤寒杆菌耐喹诺酮类机制分子生物学基础研究 总被引:11,自引:0,他引:11
目的 研究伤寒杆菌DNA旋转酶A亚单位基因(gyrA)变异与其耐喹诺酮类的关系。方法 应用聚合酶链反应(PCR)检测、限制性片段长度多态性(RFLP)、单链构象多态性分析(SSCP)及序列测定,对伤寒杆菌S275(临床分离敏感菌株)及其自发耐药突变株RG1,DNA gyrA喹诺酮类耐药决定区进行了研究。结果 伤寒杆菌S275 gyrA第128~426位碱基与大肠杆菌KL-16高度同源,仅7.49% 相似文献
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宫颈癌细胞对以低密度脂蛋白为载体的阿克拉霉素复合物摄取比较的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用保温交换法制备阿克拉霉素(ACM-A)低密度脂蛋白(LDL)复合物,荧光光度法测定细胞内ACM-A含量,研究宫颈癌Hela细胞对ACM-A-LDL复合物及游离ACM-A的摄取、细胞对复合物的摄取与LDL受体(LDLR)活性的关系及该复合物对Hela细胞DNA及RNA合成的抑制作用。结果:①在相同作用时间下,宫颈癌Hela细胞对ACM-A-LDL复合物的摄取显著高于游离ACM-A的摄取;②细胞对复合物的摄取受LDLR饱和度的限制;③ACM-A-LDL复合物对宫颈癌细胞DNA及RNA的合成具有较强地抑制作用。 相似文献
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积雪草提取物对胃粘膜的保护作用及其机制探讨 总被引:12,自引:0,他引:12
目的观察积雪草提取物(TCA)对胃粘膜损伤的防治作用及其可能的机制。方法采用大鼠胃损伤模型,测定损伤指数、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、细胞因子、胃粘膜细胞存活率等。结果(1)TCA对乙醇胃粘膜损伤具有预防作用;(2)对乙酸胃溃疡具有治疗作用;(3)可以降低MPO、MDA、IL8的产生;(4)可以增加胃粘膜细胞的存活率。结论(1)TCA对胃粘膜损伤有防治作用;(2)TCA降低血管的通透性及减少MPO、MDA、IL8;(3)对胃粘膜细胞的直接保护作用可能是其作用机制之一。 相似文献
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氧化低密度脂蛋白和血管内皮损伤 总被引:26,自引:1,他引:26
血管内皮功能障碍是发生多种心血管疾病共同的病理生理改变,尤其在动脉粥样硬化(AS)、心肌缺血及缺血再灌注损伤过程中发挥着重要作用,因此对内皮功能障碍的原因及其发生机制的研究具有重要的理论与实践意义。引起内皮功能损伤的因素很多,近年来,愈来愈多的研究提示氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱发的内皮功能障碍加速AS的形成,增加了心肌缺血再灌注损伤和急性心肌梗塞,成为目前心血管领域的一个研究热点。1 氧化低密度脂蛋白的生成及理化、生物学特性体外细胞培养显示,在AS斑块内的所有细胞均能氧化修饰低密度脂蛋白… 相似文献
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抗氧化维生素减轻高脂饮食兔动脉粥样硬化及保护DNA甲基化的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨抗氧化维生素对高脂饮食兔动脉粥样硬化(AS)及DNA甲基化水平的影响。方法用显微镜比较兔高脂饮食组,高脂抗氧化维生素组主动脉AS的程度并用高效液相色谱层析(HPLC)方法分析脾脏DNA的甲基化水平。结果高脂抗氧化维生素组较高脂饮食组兔动脉平滑肌细胞及泡沫细胞的增生明显减少,AS明显减轻,而且脾脏DNA的甲基化水平明显增高。结论抗氧化维生素有保护DNA甲基化的作用,并可能通过此作用而影响基因转录,减轻AS。可能是抗氧化维生素减轻AS的另一种因素 相似文献
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醛糖还原酶cDNA转染的CHO细胞株的建立及其基因表达与?… 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 建立一内含人醛糖还原酶(hAR)cDNA的细胞株,并研究其在高葡萄糖环境中的基因表达及生化特性。方法 将全长hAR cDNA基因插入质粒载体pcDNAneo中,并将AR正义、反义构建以及pcDNAneo载体本身分别转染至中华仓鼠卵巢(CHO)细胞中。用放免法测定这些细胞株在高糖环境中的山梨醇水平。用Northern杂交检测其mRNA表达,并用分光光度法检测AR活性。结果 有四株AR正义构建的 相似文献