人胰岛细胞瘤cDNA文库的构建

采用一种简单高效的互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ）克隆技术制备人胰岛细胞瘤的ｃＤＮＡ文库。方法的主要过程如下：以人胰岛细胞瘤的Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋－ＲＮＡ为模板，以含ＮｏｔＩ切点的ｏｌｉｇｏ－（ｄＴ）１５为引物，在反转录酶作用下合成第一股单链ｃＤＮＡ；用Ｅ．ｃｏｌｉ ＲＮａｓｅＨ除去Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋－ＲＮＡ，并以Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ＩＥ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ Ｌｉｇａｓｅ和Ｔ４ＤＮ     

脑缺血与DNA损伤

脑缺血再灌注时 ,细胞内氧自由基大量增加 ,直接参与神经元损伤 ,其机制与氧化DNA损伤有关。氧化DNA损伤主要包括DNA单链损伤和双链损伤。DNA单链损伤可造成多二磷酸腺苷 核糖多聚酶 (PARP)过度激活 ,并引起辅酶I(NAD )衰竭 ,使细胞能量代谢障碍 ,最终导致细胞死亡。研究氧化DNA损伤的分子机制及寻找抑制DNA损伤的特异性药物 ,对于缺血性脑损伤的防治具有极其重要的意义。     

氧化修饰低密度脂蛋白和血管内皮损伤

血管内皮功能障碍是许多心血管疾病共同的病理生理改变，尤其在动脉粥样硬化（ＡＳ）、心肌缺血及缺血再灌注损伤过程中发挥着重要作用，因此对内皮功能损伤的原因及其发生机制的研究具有理论与实践双重意义。引起内皮功能损伤的因素是多方面的，近年来，愈来愈多的研究提示氧化修饰低密度脂蛋白（ｏｘ－ＬＤＬ）诱发的内皮功能障碍加速了ＡＳ的形成，增加了心肌缺血再灌注损伤和急性心肌梗塞，成为目前心血管领域的一个研究热点。一、氧化修饰低密度脂蛋白的生成及理化、生物学特性体外细胞培养显示，在ＡＳ斑块内的所有细胞均能氧化修饰低…     

诱导分化促进DNA损伤的肺癌细胞凋亡

本试验的目的是探讨诱导分化剂和ＤＮＡ损伤性化疗药对肺腺癌细胞凋亡的影响。材料与方法（１）材料：人肺腺癌细胞Ａ５４９购自武汉大学典型培养物保藏中心,常规培养传代。诱导分化剂全反式维甲酸（ＲＡ）和ＤＮＡ荧光染料ｈｏｅｃｈｅｓｔ３３２５８购自美国Ｓｉｇｍａ...     

单抗MGb1的噬菌体呈现型ScFv片段的制备

目的 制备胃癌单抗ＭＧｂ１的噬菌体呈现型单链可变区片段（ＳｃＦｖ）,为获得用于胃癌体内诊疗研究的靶向载体分子奠定基础。方法 从杂交瘤细胞分离ｍＲＮＡ,扩增抗体重,轻链可变区（ＶＨ和ＶＬ）ｃＤＮＡ,经ｌｉｎｋｅｒＤＮＡ连接形成ＳｃＦｖ ＤＮＡ。将ＳｃＦｖＤＮＡ与ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ的连接产物转化于大肠杆菌ＴＧ１,经Ｍ１３ＫＯ７感染后,获得重组噬菌体抗体ＳｃＦｖ。经亲和筛选和ＥＬＩＳＡ检测获得呈现ＭＧｂ     

一氧化氮在白介素—1β诱导的离体大鼠胰岛细胞损伤机制中的作用

目的 观察一氧化氮（ＮＯ）在白介素－１β（ＩＬ－１β）诱导的胰岛细胞损伤机制中的作用。方法 应用体外单层培养的大鼠胰岛细胞,分别检测ＩＬ－１β、一氧化氮合酶抑制剂Ｎ＾Ｇ－单甲基－Ｌ精氨酸（Ｌ－ＮＭＭＡ）（１ｍｍｏｌ／Ｌ）、胰岛细胞保护剂尼克酰胺（ＮＡ）（１０．２０ｍｍｏｌ／Ｌ）及ＩＬ－１β诱导,胰岛细胞亚硝酸盐生成量显著增加,同时胰岛素基础细胞内ＤＮＡ、胰岛素含量和细胞活性的影响。结果 以ＩＬ－６     

H2O2致小鼠淋巴细胞DNA的损伤及修复

目的 应用单细胞电泳检测（ＳＣＧＥ）过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）致小鼠淋巴细胞ＤＮＡ损伤及其修复。方法 标准ＳＣＧＥ条件下荧光显微镜观察。结果 Ｈ２Ｏ２不同浓度８０、１６０和３２０ｕｍｏｌ／Ｌ，３个组Ｈ２Ｏ２浓度均可致小鼠淋巴细胞ＤＮＡ损伤，较低剂量即可造成细胞拖尾，可逆性损伤在６０ｍｉｎ内可获得明显修复。结论 单细胞电泳可快速灵敏地检测氧化损伤，也可能用于流行病学研究。     

刺五加叶皂甙诱导胃癌细胞凋亡的探讨

目的　探讨刺五加叶皂甙（ＡＳＳ）在体外对胃癌细胞凋亡的诱导作用。方法　用琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察ＡＳＳ对体外培养ＳＧＣ ７９０１ 胃癌细胞凋亡的ＤＮＡ 电泳和形态学改变，维甲酸（ＲＡ）作为对照药物。结果　ＡＳＳ作用的胃癌细胞ＤＮＡ 出现典型梯状改变，高浓度ＲＡ作用胃癌细胞ＤＮＡ 有模糊梯状改变。电镜观察ＡＳＳ及ＲＡ作用胃癌细胞，出现异染色体边集，线粒体肿胀等凋亡改变。结论　ＡＳＳ促进体外培养胃癌细胞凋亡的作用明显强于ＲＡ，且随着时间的增加和剂量加大，诱发凋亡程度增高。     

MNNG诱导人胃粘膜上皮细胞的损伤作用

目的探讨甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对胃粘膜上皮细胞的损伤作用．方法对ＭＮＮＧ在诱发体外培养的人胎胃粘膜上皮细胞的非程序ＤＮＡ合成、脂质过氧化和ｒａｓＰ２１蛋白进行观察．结果ＭＮＮＧ处理组各时相胃粘膜上皮细胞的增殖速率，非程序ＤＮＡ合成水平（１８３８ｃｐｍ±２０５ｃｐｍｖｓ７０５ｃｐｍ±１２５ｃｐｍ，Ｐ＜００１），质脂过氧化物（第２０天，７．４２ｎｍｏｌ／ｍｇ±０．６８ｎｍｄ／ｍｇｖｓ３．６２ｎｍｏｌ／ｍｇ±０．５４ｎｍｏｌ／ｍｇ蛋白Ｐ＜０．０１）和ｒａｓＰ２１蛋白含量（第４０天，１２１Ａ±０１２Ａｖｓ０５１Ａ±００７Ａ，Ｐ＜００１）．结论ＭＮＮＧ可诱发胃粘膜上皮细胞恶性转化，其作用机制可能是通过损伤细胞ＤＮＡ，诱发质脂过氧化或导致ｒａｓＰ２１异常表达所致．     

钙通道阻滞剂对环孢素A所致内皮细胞损伤的保护作用

目的：研究钙通道阻滞剂异搏定对环孢素Ａ（ＣｓＡ）所致内皮细胞（ＥＣ）所致内皮细胞（ＥＣ）损伤的保护作用。 方法：在培养的ＥＣ中加入ＣｓＡ１００μｇ／Ｌ的同时加入异搏定１００μｇ／Ｌ作用２４ｈ，以直接计数粘附细胞数观察细胞分离；光镜、电镜观察细胞形态；Ｈ＾３－ＴｄＲ掺入法及流式细胞仪观察ＤＮＡ抑制；Ｆｕｒａ－２ＡＭ荧光负载法检测细胞内游离钙（［Ｃａ＾２＋］ｉ）；放射免疫法检测细胞上清中内皮素（ＥＴ）     

磷脂酰胆碱拮抗自由基致小鼠微核作用的研究

应用小鼠外周血正染红细胞（ＮＣＥ）微核实验，评价臭氧产生的自由基对细胞遗传毒理效应及其磷脂酰胆碱对其遗传损伤的保护作用。实验结果显示：臭氧可使小鼠ＮＣＥ微核率明显增高（Ｐ＜０．０１），而磷脂酰胆碱对自由基诱导微核作用有明显的抑制。提示磷脂酰胆碱具有拮抗自由基造成的ＤＮＡ氧化损伤作用。     

大骨节病组织早期老化与早期化骨的病因发病学研究

软骨细胞坏死，早期化骨是大骨节病（ＫＢＤ）病因发病机制的核心。对ＫＢＤ病儿红细胞及软骨细胞膜组成的分析表明：膜磷脂（ＰＬ）尤其胆碱磷脂（ＰＣ）减少，鞘磷脂（ＳＭ）增加，代表细胞膜老化指数的Ｃｈ（胆固醇）／ＰＬ，ＳＭ／ＰＣ分子比增高，膜的脆性增加，细胞ＤＮＡ含量降低。结合其硒水平与ＧＳＨ－Ｐｘ活性低，组织抗氧化能力下降和膜的早期老化、氧化损伤、细胞坏死，膜破溃小泡化（基质小泡）与ＫＢＤ早期化骨的机制     

氧化修饰低密度脂蛋白对血管内皮细胞DNA合成的影响

目的 探讨氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）对血管内皮细胞损伤的机制。方法 在人脐静脉内皮细胞体外培养的基础上,通过采用＾３Ｈ－胸腺啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入ＤＮＡ技术和硫代巴比妥酸比色法,分别分析了ＯＸ－ＬＤＬ对内皮细胞ＤＮＡ合成及脂质过氧化物（ＬＰＯ）的代谢产物丙二醛（ＭＤＡ）含量的影响。结果 当内皮细胞暴露于ＯＸ－ＬＤＬ（５０～２００ｕｇ／ｍｌ）２４ｈ后,其＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入明显减少,但     

氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

为研究氧化型低密度脂蛋白引起血管平滑肌细胞凋亡及其凋亡的机制,采用细胞形态学ＤＮＡ末标记法,流式细胞仪,Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｔｔｉｎｇ观察氧化型低密度脂蛋白诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。结果发现,在氧化型低密度脂蛋白作用下,血管平滑肌细胞阻滞在分裂期的中期,并发生凋亡,ＤＮＡ末端标记法和流式细胞仪检测发现氧化型低密度脂蛋白引起细胞凋亡明显高于天然低密度脂蛋白（前者是后者的１０倍）。电镜下凋亡细胞     

伤寒杆菌耐喹诺酮类机制分子生物学基础研究

目的 研究伤寒杆菌ＤＮＡ旋转酶Ａ亚单位基因（ｇｙｒＡ）变异与其耐喹诺酮类的关系。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测、限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）及序列测定,对伤寒杆菌Ｓ２７５（临床分离敏感菌株）及其自发耐药突变株ＲＧ１,ＤＮＡ ｇｙｒＡ喹诺酮类耐药决定区进行了研究。结果 伤寒杆菌Ｓ２７５ ｇｙｒＡ第１２８～４２６位碱基与大肠杆菌ＫＬ－１６高度同源,仅７．４９％     

宫颈癌细胞对以低密度脂蛋白为载体的阿克拉霉素复合物摄取比较的研究

采用保温交换法制备阿克拉霉素（ＡＣＭ－Ａ）低密度脂蛋白（ＬＤＬ）复合物，荧光光度法测定细胞内ＡＣＭ－Ａ含量，研究宫颈癌Ｈｅｌａ细胞对ＡＣＭ－Ａ－ＬＤＬ复合物及游离ＡＣＭ－Ａ的摄取、细胞对复合物的摄取与ＬＤＬ受体（ＬＤＬＲ）活性的关系及该复合物对Ｈｅｌａ细胞ＤＮＡ及ＲＮＡ合成的抑制作用。结果：①在相同作用时间下，宫颈癌Ｈｅｌａ细胞对ＡＣＭ－Ａ－ＬＤＬ复合物的摄取显著高于游离ＡＣＭ－Ａ的摄取；②细胞对复合物的摄取受ＬＤＬＲ饱和度的限制；③ＡＣＭ－Ａ－ＬＤＬ复合物对宫颈癌细胞ＤＮＡ及ＲＮＡ的合成具有较强地抑制作用。     

积雪草提取物对胃粘膜的保护作用及其机制探讨

目的观察积雪草提取物（ＴＣＡ）对胃粘膜损伤的防治作用及其可能的机制。方法采用大鼠胃损伤模型,测定损伤指数、髓过氧化物酶（ＭＰＯ）、丙二醛（ＭＤＡ）、细胞因子、胃粘膜细胞存活率等。结果（１）ＴＣＡ对乙醇胃粘膜损伤具有预防作用;（２）对乙酸胃溃疡具有治疗作用;（３）可以降低ＭＰＯ、ＭＤＡ、ＩＬ８的产生;（４）可以增加胃粘膜细胞的存活率。结论（１）ＴＣＡ对胃粘膜损伤有防治作用;（２）ＴＣＡ降低血管的通透性及减少ＭＰＯ、ＭＤＡ、ＩＬ８;（３）对胃粘膜细胞的直接保护作用可能是其作用机制之一。     

氧化低密度脂蛋白和血管内皮损伤

血管内皮功能障碍是发生多种心血管疾病共同的病理生理改变,尤其在动脉粥样硬化（ＡＳ）、心肌缺血及缺血再灌注损伤过程中发挥着重要作用,因此对内皮功能障碍的原因及其发生机制的研究具有重要的理论与实践意义。引起内皮功能损伤的因素很多,近年来,愈来愈多的研究提示氧化低密度脂蛋白（ｏｘ－ＬＤＬ）诱发的内皮功能障碍加速ＡＳ的形成,增加了心肌缺血再灌注损伤和急性心肌梗塞,成为目前心血管领域的一个研究热点。１　氧化低密度脂蛋白的生成及理化、生物学特性体外细胞培养显示,在ＡＳ斑块内的所有细胞均能氧化修饰低密度脂蛋白…     

抗氧化维生素减轻高脂饮食兔动脉粥样硬化及保护DNA甲基化的作用

目的探讨抗氧化维生素对高脂饮食兔动脉粥样硬化（ＡＳ）及ＤＮＡ甲基化水平的影响。方法用显微镜比较兔高脂饮食组，高脂抗氧化维生素组主动脉ＡＳ的程度并用高效液相色谱层析（ＨＰＬＣ）方法分析脾脏ＤＮＡ的甲基化水平。结果高脂抗氧化维生素组较高脂饮食组兔动脉平滑肌细胞及泡沫细胞的增生明显减少，ＡＳ明显减轻，而且脾脏ＤＮＡ的甲基化水平明显增高。结论抗氧化维生素有保护ＤＮＡ甲基化的作用，并可能通过此作用而影响基因转录，减轻ＡＳ。可能是抗氧化维生素减轻ＡＳ的另一种因素     

醛糖还原酶cDNA转染的CHO细胞株的建立及其基因表达与？…

目的 建立一内含人醛糖还原酶（ｈＡＲ）ｃＤＮＡ的细胞株，并研究其在高葡萄糖环境中的基因表达及生化特性。方法 将全长ｈＡＲ ｃＤＮＡ基因插入质粒载体ｐｃＤＮＡｎｅｏ中，并将ＡＲ正义、反义构建以及ｐｃＤＮＡｎｅｏ载体本身分别转染至中华仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞中。用放免法测定这些细胞株在高糖环境中的山梨醇水平。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测其ｍＲＮＡ表达，并用分光光度法检测ＡＲ活性。结果 有四株ＡＲ正义构建的