人重组转化生长因子β1促进牙髓干细胞的增殖和矿化

目的：研究人重组转化生长因子β1（recombinant human transforming growth factor β1, rhTGF-β1）对牙髓干细胞生物学性能的影响,包括确定促进牙髓干细胞增殖的最佳作用浓度和该浓度下对牙髓干细胞分化的作用。方法： 分离培养人健康第三磨牙牙髓干细胞,分别加入1 μg/L、6 μg/L、10 μg/L的rhTGF-β1,CCK 8（cell counting kit-8）法检测对牙髓干细胞增殖的影响,选择出最佳浓度在成骨/成牙本质诱导条件下连续培养,酶标仪检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）光密度值,二喹啉甲酸（bicinchoninic acid, BCA）蛋白质定量试剂盒计算总蛋白含量,两者比值作为ALP相对活性的指标。茜素红染色观察矿化结节形成能力,染色液洗脱后检测光密度值,比较rhTGF-β1对牙髓干细胞增殖和分化的作用。结果：牙髓干细胞具有体外形成矿化结节的能力,6 μg/L rhTGF-β1可促进牙髓干细胞增殖;连续培养7 d后,6 μg/L rhTGF-β1组细胞ALP的光密度值为0.31±0.03,显著高于对照组0.02±0.01(P<0.05);6 μg/L rhTGF-β1组总蛋白含量为（2 775.46±83.54） mg/L,对照组为（1 432.20±110.83） mg/L (P<0.05);ALP相对光密度值,6 μg/L rhTGF-β1组较对照组提高了6倍。茜素红染色下显示矿化结节形成增加,洗脱液光密度值6 μg/L rhTGF-β1组和对照组分别为0.83±0.02和0.55±0.05, P<0.05。结论： 6 μg/L rhTGF-β1具有促进牙髓干细胞增殖和促进体外成牙本质分化的作用。     

全反式维甲酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制

目的： 探讨全反式维甲酸(ATRA）对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,阐明其分子机制。方法：将处于对数生长期的SMMC-7721细胞分为空白对照组和10、20、40 μmol?L-1ATRA组。利用MTS／PMS法检测SMMC-7721细胞的增殖能力,划痕愈合和侵袭实验检测SMMC-7721细胞的迁移与侵袭能力,Real-time PCR和Western blotting法检测SMMC-7721细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,20和40 μmol?L-1ATRA组SMMC-7721细胞增殖率明显降低（P<0.01）。划痕实验,20和40 μmol?L-1ATRA组SMMC-7721细胞处理24 h 后划痕距离较空白对照组明显增加（P<0.05）;Transwell实验,与空白对照组比较,10、20和40 μmol?L-1ATRA组SMMC-7721细胞处理24 h后穿膜细胞数量明显减少（P<0.05）;Real-time PCR分析和Western blotting检测,与空白对照组比较,20和40 μmol?L-1ATRA组SMMC-7721细胞处理24 h后,MMP-9 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论： ATRA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移与侵袭能力,其机制可能与下调MMP-9有关。
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人结肠癌细胞中血管生成拟态与肿瘤细胞迁移和侵袭能力的关系

目的:观察人结肠癌细胞中血管生成拟态（VM）的形成及密度,阐明VM与细胞的迁移、侵袭能力之间的相关性,为结肠癌的临床治疗提供新的切入点和理论依据。方法:体外三维培养人结肠癌细胞株HCT8、HCT116、LS174T和HT29,在倒置显微镜下观察VM形成情况,计算VM密度;采用划痕实验观察4株细胞的迁移能力;Transwell小室法观察4株细胞的侵袭能力;直线相关分析法分析VM密度与肿瘤细胞迁移距离和穿膜细胞数之间的相关性。结果:HCT8和HCT116细胞在体外三维培养条件下均能够形成VM,其密度分别为（6.75±0.957）和（5.75±0.957）个/视野;LS174T和HT29细胞则不能形成VM。划痕实验,HCT8、HCT116和LS174T细胞在图片上的迁移距离分别为（3.833±0.831）、（3.967±0.975）和（0.817±0.333）cm,HT29细胞无迁移趋势。Transwell小室法,HCT8、HCT116、LS174T和HT29细胞在高倍视野下的穿膜细胞数分别为（71.6±4.506）、（22.4±1.517）、（0.6±0.894）和（0.2±0.447）个。VM密度与迁移距离呈正相关关系（r=0.934,P<0.05）,VM密度和Transwell侵袭实验中的穿膜细胞数亦呈正相关关系（r=0.853,P<0.05）。结论:人结肠癌细胞中存在VM现象,VM可能与结肠癌的迁移、侵袭能力有关联。     

COPD患者外周血中EPCs增殖、迁移、黏附及血管形成功能研究

目的：观察慢性阻塞性肺病（COPD）患者外周血中内皮祖细胞（EPCs）增殖、迁移、黏附及小管形成等功能。方法：体外培养分离COPD患者及对照组外周血中EPCs,采用MTT测定细胞不同时间段的OD值,观察EPCs增殖情况。应用Transwell测定细胞对基质细胞衍生因子-1（SDF-1）的迁移能力。通过对细胞HUVEC的黏附及late-EPCs小管形成实验判断COPD患者外周血中EPCs对血管内皮的修复能力,并用NOS/SCID下肢股动脉内皮损伤模型观察患者EPCs修复功能。结果：COPD患者的EPCs和对照组单个集落细胞数量分别是22.0±7.0、62.0±12.9（100倍,10个随机视野）,两者存在明显差异（P〈0.001）。细胞迁移实验中发现,COPD患者组early-EPCs对SDF-1迁移细胞数量明显少于对照组,两组迁移的细胞数量分别是0.425×104、0.775×104（P=0.039）,通过流式分析发现COPD患者组early-EPCs表达C-X-C家族趋化因子受体4（CXCR4）数量较对照组少,两者分别是（55.1±9.9）%、（91.5±6.7）%。Late-EPCs对HUVECs形成小管黏附实验中,两者有明显差异（P〈0.001）,分别是26.4±8.1、35.2±7.3/×10（10随机视野）。小管成形实验中,COPD患者的late-EPCs不能形成完整的小管;动物在体实验中发现,COPD患者组late-EPCs在受损血管处黏附较对照组少。结论：COPD患者外周血中EPCs增殖、迁移、黏附等功能降低,血管形成功能异常。     

Mus81对人乳腺癌SKBR3增殖、侵袭和迁移的影响

目的 研究Mus81过表达对人乳腺癌SKBR3增殖、侵袭和迁移能力的影响.方法 从相应甘油菌中抽提Mus81过表达质粒和阴性对照质粒,通过Lipofectamine@2000脂质体转染人乳腺癌SKBR3细胞.分别利用RT-PCR和Western blot法检测Mus81过表达效果,CCK-8增殖实验检测过表达前后细胞增殖能力变化,Transwell侵袭实验检测过表达前后细胞侵袭能力变化,Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测过表达前后细胞迁移能力变化.结果 RT-PCR和Western blot法表明Mus81基因过表达效果良好.Mus81过表达后,增殖实验结果显示实验组细胞增殖速度明显低于对照组（P＜0.05）.Transwell侵袭实验显示,实验组细胞每高倍视野平均穿膜个数低于对照组（P＜0.05）.Transwell迁移实验显示,实验组细胞每高倍视野平均穿膜个数同对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）.细胞划痕实验结果显示,实验组划痕愈合率同对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 Mus81过表达抑制了人乳腺癌SKBR3细胞的增殖,降低了细胞的侵袭能力,但对SKBR3细胞迁移能力没有明显影响.     

瞬时受体电位通道蛋白6在人乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的：探讨瞬时受体电位通道蛋白6（TRPC6）在人乳腺癌细胞中的表达,阐明TRPC6与乳腺癌细胞侵袭能力的关联性。方法：常规培养的不同侵袭能力乳腺癌细胞株分为MCF-7（低侵袭组）和MDA-MB-231（高侵袭组）,采用Western blotting法和RT-PCR法检测2组中TRPC6蛋白和mRNA的表达;将MDA-MB-231细胞分为空白对照组和SKF96365组,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）预处理MDA-MB-231细胞,阻滞TRPC6通道,采用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭能力。结果：Western blotting和RT-PCR法检测,高侵袭组MDA-MB-231细胞中TRPC6蛋白及mRNA表达水平均高于低侵袭组MCF-7细胞（P<0.05);划痕实验, 5、25和40　 μmol/LSKF96365组迁移细胞数(76.24±7.54、45.33±4.50和25.12±1.57)均少于空白对照组(130.48±9.55)（P<0.05);Transwell体外侵袭实验,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）组迁移细胞数明显低于对照组(P<0.05)。 结论：高侵袭乳腺癌细胞MDA-MB-231可通过上调TRPC6表达提高乳腺癌细胞的侵袭能力,提示TRPC6在乳腺癌转移中可能起作用。     

AZD9291通过抑制PI3K-AKT-mTOR通路抑制鼻咽癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨AZD9291对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响。方法 体外培养鼻咽癌HNE1和CNE2Z细胞,在HNE1细胞加入浓度分别为0、0.5、1、2、4、8 μmol/L 的AZD9291,CNE2Z细胞加入分别为0、1、2、4、8、16 μmol/L的AZD9291。采用CCK8法检测细胞存活率;集落克隆实验检测AZD9291对细胞的增殖抑制作用;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞修复和迁移能力;Western blot法检测EGFR相关信号通路蛋白及迁移相关蛋白的表达。结果 CCK8和集落克隆实验结果显示AZD9291可显著抑制HNE1和CNE2Z细胞增殖（P<0.01）;细胞划痕实验和Transwell实验结果显示AZD9291抑制HNE1和CNE2Z细胞迁移能力（P<0.01）;Western blot结果显示,随着浓度增加,AZD9291可通过调控EGFR下游PI3K-AKT-mTOR信号通路磷酸化蛋白的下调（P<0.01）,抑制HNE1和CNE2Z细胞迁移（P<0.01）。结论 AZD9291可通过抑制EGFR/PI3K/AKT/mTOR信号通路,抑制鼻咽癌HNE1和CNE2Z细胞的增殖并降低其修复和迁移能力,为后续AZD9291尝试用于鼻咽癌的治疗提供依据。     

二烯丙三硫对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭的抑制及对uPA系统的调节

目的 研究二烯丙三硫（DATS）对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭能力的影响及对尿激酶型纤溶酶激活物（uPA）系统的调节作用。方法 实时定量PCR法(real time PCR)检测乳腺癌细胞株uPA系统中uPA、uPA受体（uPAR）和uPA抑制物（PAI-1）的表达;使用不同浓度DATS处理乳腺癌细胞,MTS比色法测定细胞的增殖能力;Matrigel体外浸润实验检测DATS（20~60μmol/L） 对细胞浸润能力的影响;Transwell小室迁移实验和划痕试验评价60μmol/L DATS对细胞迁移能力的影响;RT-PCR和Western blot分别测定60μmol/L DATS作用后,乳腺癌细胞中uPA、uPAR和PAI-1 mRNA和蛋白表达的变化;ELISA法检测细胞培养液中PAI-1蛋白含量的变化。结果 20~80μmol/L DATS对高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。60μmol/L DATS明显抑制MDA-MB-231细胞的浸润和迁移能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达,但对uPA和uPAR的表达水平无显著影响。结论 DATS抑制MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达。     

生物活性玻璃和牙本质浸提蛋白对人牙髓细胞的作用

目的：明确生物活性玻璃（bioactive glass, BG）和牙本质浸提蛋白（extracted dentin proteins, EDP）对人牙髓细胞增殖、成牙本质向分化、矿化的作用。方法： 采用酶消化法培养牙髓细胞,传代至第4代用于实验。分别用含BG-EDP浸提液、BG浸提液、EDP浸提液的达尔伯克必需基本培养基（Dulbecco’s minimum essential medium,DMEM）培养牙髓细胞,对照组为DMEM培养组;通过细胞活性噻唑蓝比色法检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性检测及real-time PCR检测细胞成牙本质向分化能力,茜素红钙化结节染色及氯化十六烷基吡啶半定量分析检测细胞矿化能力。结果： BG-EDP组3、7、9 d时（光密度值1.36±0.06、2.52±0.20 、2.72±0.29）能够增强人牙髓细胞增殖活性,同BG组（光密度值1.20±0.26、2.33±0.26、2.50±0.30）、EDP组（光密度值1.13±0.15、2.10±0.13、2.38±0.22）和对照组（光密度值0.84±0.17、1.84±0.18、1.95±0.19）比较差异具有统计学意义（P<0.05）。7 d时,BG-EDP组ALP活性与EDP组、对照组差异无统计学意义,分化相关基因（DSPP、DMP-1）表达无明显升高。14 d时,BG-EDP组ALP活性升高（56.67±1.83）, 显著高于EDP组（41.98±9.71）及对照组（30.82±6.70）,P<0.05,但同BG组（56.29±6.20）相比差异无统计学意义（P>0.05）;BG EDP组DSPP表达量明显升高(5.79±1.94),显著高于BG组(2.62±0.46)、EDP组(2.66±1.06)及对照组(1.84±0.76),P<0.05;BG-EDP组DMP-1表达升高(3.87±1.87),略高于BG组(1.89±0.90)、EDP组(2.38±1.04)和对照组 (2.25±0.93),但差异无统计学意义（P>0.05）。诱导2周后,BG-EDP组形成较多矿化结节,氯化十六烷基吡啶半定量分析显示BG-EDP组钙化量最高（0.27±0.01）。结论： 同单纯的BG及EDP相比,BG-EDP复合后具有更强的促进人牙髓细胞的增殖、成牙本质向分化、矿化作用。     

胶原静电纺纳米纤维膜对人牙髓细胞生物学行为的影响

目的:比较人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)在胶原静电纺纳米纤维膜(collagen nanofibrous matrix,Col_NFM)与直接沉积胶原膜(collagen flat film,Col_FF)上的黏附、增殖和分化情况,探究胶原纳米纤维支架对hDPCs生物学行为的影响。方法:采用扫描电镜(scanning electron microscopy, SEM)观察两种胶原膜的表面形貌,并比较其表面接触角和溶胀性能。将hDPCs分别接种于两种胶原膜表面共培养,SEM和激光共聚焦显微镜(laser scanning microscope,LSM)观察hDPCs在支架表面的生长形态,并用CCK-8法测定hDPCs的增殖情况。在诱导14 d后,比较成牙本质分化相关基因的表达变化,茜素红染色观察矿化结节的形成情况。结果:SEM图可见Col_NFM组纤维直径为(884±159) nm,纤维之间存在大量三维连通的孔隙结构,而Col_FF组表面平坦,未见孔隙结构。Col_NFM组瞬间表面接触角为85.03°±4.45°,溶胀度为3,Col_FF组瞬间表面接触角为98.98°±5.81°,溶胀度为1,Col_NFM组的亲水性和溶胀性能更佳。SEM和LSM结果显示,Col_NFM组hDPCs表现为不规则多角形,呈三维生长,Col_FF组细胞在二维平面上呈纺锤形生长。CCK-8结果显示,hDPCs在Col_NFM支架上增殖活性更高。在诱导14 d后,Col_NFM组成牙本质分化相关基因表达水平较Col_FF组显著升高(P<0.05),茜素红染色也更深。结论:Col_NFM具有纳米尺度的微观结构,并具备良好的亲水性和溶胀性能,相较于Col_FF,hDPCs在Col_NFM表面表现出更好的黏附、增殖和分化性能。     

受体相互作用蛋白140对神经胶质细胞生物学行为的影响

目的 明确受体相互作用蛋白140 (RIP140)基因过表达对小鼠小胶质瘤细胞(BV-2)增殖、凋亡、侵袭及迁移行为的影响.方法 采用脂质体转染和G418筛选法构建RIPI40过表达的BV-2细胞模型,用实时定量PCR及Western印迹法鉴定过表达模型构建是否成功,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和Transwell小室检测RIP140过表达对BV-2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移行为的影响.结果 成功构建RIP140过表达模型BV-2-1,BV-2-1细胞RIPI40 mRNA与蛋白表达量均高于BV-2细胞(t＝49.794,P＜0.01).细胞增殖检测显示:BV-2细胞24、48、72 h吸光度(A)值分别为1.157±0.013、1.679±0.005、2.609±0.008,BV-2-1细胞3个时间点的A值分别为0.929±0.013、1.188±0.008、1.528±0.012,BV-2-1细胞48及72 h增殖率明显低于BV-2细胞(t＝6.058、9.245,均P＜0.01).凋亡检测显示:BV-2-1细胞凋亡率明显高于BV-2细胞[(5.35±0.23)％比(3.46±0.45)％,＝6.619、P＝0.003].侵袭检测显示:BV-2-1细胞侵袭平均数多于BV-2细胞[(166±43)个比( 93±32)个,t＝3.403,P＝0.007].迁移检测显示BV-2-1细胞迁移平均数高于BV-2细胞[ (202±50)个比(101±25)个,t＝4.104,P＝0.002].结论 RIP140过表达抑制BV-2细胞增殖,促进其凋亡;RIP140过表达促进BV-2细胞的侵袭和迁移能力.     

过表达趋化因子受体4的内皮祖细胞影响血管平滑肌细胞迁移、增殖

目的 研究过表达趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移、增殖的影响.方法 分离培养并鉴定大鼠骨髓来源EPCs.CXCR4的重组腺病毒感染EPCs后,流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测细胞膜CXCR4受体及mRNA表达,CCK-8法、Transwell法分别检测EPCs增殖活性、迁移能力.建立过表达CXCR4的EPCs与VSMCs非接触共培养模型,Transwell法、CCK-8法检测EPCs对VSMCs的迁移、细胞存活的影响.结果 CXCR4重组腺病毒感染EPCs 48 h后,EPCs细胞膜CXCR4受体和mRNA表达明显增高(P＜0.01),过表达CXCR4对EPCs增殖活性无明显影响,但可增强EPCs定向迁移能力(P＜0.01).共培养模型中,SDF-1α诱导下,CXCR4组VSMCs迁移、细胞存活率明显降低(P＜0.05),无SDF-1α诱导下空白对照组、GFP组及CXCR4组VSMCs的迁移、细胞存活率整体高于SDF-1α诱导下各组(P＜0.05).结论 过表达CXCR4可增强EPCs的迁移能力,在SDF-1/CXCR4调控轴中加强EPCs对VSMCs迁移和增殖的抑制作用,可用于防治血管再狭窄的细胞治疗.     

TNF-α对鼠根尖乳头干细胞增殖及多向分化能力的影响

目的 研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对鼠根尖乳头干细胞(SCAP)增殖及多向分化能力的影响.方法 采用酶消化法结合组织块法获得SCAP,将细胞分为实验组(TNF-α浓度为5、10、20、50 ng/mL)和对照组(TNF-α浓度为0 ng/mL),使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SCAP的增殖能力;采用茜素红染色及实时定量PCR(qRT-PCR)检测TNF-α对SCAP成骨/成牙本质能力的影响;油红O染色检测TNF-α对SCAP成脂能力的影响;qRT-PCR检测TNF-α对SCAP血管相关基因表达的影响.结果 体外培养SCAP符合间充质干细胞来源的特征且具有多向分化能力.MTT结果显示:与对照组相比,各浓度组均能促进SCAP增殖(P<0.05),其中10 ng/mL TNF-α的促进作用最为明显.茜素红染色结果显示:实验组随着TNF-α浓度的增加,矿化结节逐渐变小,形成数量也逐渐变少.qRT-PCR结果显示:3、7 d时,与对照组相比,实验组骨钙蛋白(OC)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白-1(DMP-1)表达量降低,3 d时两组OC、DMP-1比较差异有统计学意义(P<0.05);7 d时DMP-1比较差异有统计学意义(P<0.05);14 d时,实验组OC、DMP-1表达量明显降低(P<0.05).油红O染色结果显示:与对照组相比,实验组随着TNF-α浓度的增加,脂滴形成数量逐渐减少.qRT-PCR结果显示:3、7天时,与对照组相比,血管生成素1、血管内皮生长因子A、血小板内皮细胞黏附分子-1表达量明显降低(P<0.05).结论 炎性因子TNF-α对SCAP的增殖有明显促进作用但同时不同程度抑制SCAP多向分化能力.     

pEGFP-N1-DCN重组质粒抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖和侵袭

目的构建pEGFP-N1-DCN真核表达载体并转染胃癌细胞SGC-7901,观察其对细胞增殖、周期、迁移、侵袭的影响。方法将细胞分为3组,分别为空白对照组、pEGFP-N1组及pEGFP-N1-DCN组,质粒通过脂质体转染SGC-7901,RT-PCR及Western blot方法检测表皮生长因子受体(EGFR)及TGF-β1的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell检测核心蛋白聚糖(DCN)对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 RT-PCR及Western blot检测结果显示,DCN使EGFR及TGF-β1的表达均降低(P<0.05);MTT法检测发现72 h时空白对照组、pEGFP-N1组及pEGFP-N1-DCN组细胞D(490)值分别为(1.190±0.037)、(1.169±0.052)、(0.572±0.021),DCN使细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析细胞周期空白对照组、pEGFP-N1组及pEGFP-N1-DCN组细胞G0～G1的细胞数分别为(46.12±0.63)、(46.07±0.82)、(56.36±0.92),DCN使细胞阻滞在G0～G1(P<0.05);Transwell迁移、侵袭实验显示DCN使细胞迁移和侵袭能力均降低(P<0.05)。结论 DCN通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等起到抗肿瘤作用。     

生长停滞特异性蛋白6在人牙周膜细胞迁移及成骨分化中的作用

探讨AXL受体酪氨酸激酶配体——生长停滞特异性蛋白6(growth arrest-specific protein 6,Gas6)在人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)迁移及成骨诱导液培养下成骨分化中发挥的作用。方法: 在对hPDLCs进行体外培养的培养液中加入...