3-异丁基-1-甲基黄嘌呤对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的Ca~(2 )/cAMP不依赖性保护作用

目的　观察 3 异丁基 1 甲基黄嘌呤 ( 3 Isobutyl 1 methylxanthine ,IBMX)对 5mmol·L-1KCl诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用并探讨其与 [cAMP]i和Ca2 的关系。方法　建立KCl 5mmol·L-1诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡模型 ,用荧光二酯素法分析神经元存活 ,Hoechest332 5 8核染色和DNA琼脂糖凝胶电泳分析凋亡 ,放射免疫法测定cAMP浓度。结果　IBMX呈浓度依赖性拮抗 5mmol·L-1KCl诱导的神经元死亡 ,并明显减少核形态异常的神经元 ,使DNA电泳梯带变浅或完全消失 ;IBMX( 1.0mmol·L-1)可持续升高神经元 [cAMP]i,福司可林 2 .0 μmol·L-1升高 [cAMP]i作用与IBMX类似 ,但不能模拟IBMX的作用 ;此外 ,IBMX的拮抗作用不被cAMP竞争性抑制剂Rp cAMP和PKA的特异阻断药H 89阻断 ;单用或联用钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ的特异抑制剂KN 93和磷酯酰肌醇 3位羟基激酶的特异性抑制剂LY2 940 0 2也不能阻断。结论IBMX抗低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡作用不依赖cAMP和Ca2 。     

GABA及其受体拮抗剂对脑缺血大鼠海马CA3区诱发电位的影响

 目的 探讨γ-aminobutyric acid(GABA)及其受体拮抗剂对正常及脑缺血大鼠海马CA3区神经元突触传递功能的影响。方法在体记录正常大鼠海马CA3区诱发的群峰电(population spike,PS);结扎大鼠双侧颈总动脉,造成急性不完全性全脑缺血,观察PS幅度变化;采用局部微量给药,观察药物对PS幅度的影响。结果①GABA 100,200 mmol·L^-1局部注入后,PS的幅度显著降低.bicuculline 1 mmol·L^-1能明显拮抗GABA200 mmol·L^-1对PS幅度降低的作用。②Glu 10 mmol·L^-1注入后,PS的幅度较注药前显著增加。而Glu 50 mmol·L^-1注入后,PS的幅度则较注药前显著降低。③GABA 200 mmol·L^-1能显著降低Glu10 mmol·L^-1所导致的PS幅度增加,并能减弱Glu 50 mmol·L^-1对PS幅度的降低作用。④急性不完全性全脑缺血(结扎双侧颈总动脉)后,PS的幅度显著降低。GABA 200 mmol·L^-1能减轻脑缺血所致的PS幅度的降低。结论 GABA对正常大鼠海马神经元突触传递的兴奋性具有一定抑制作用。并能明显改善较大剂量谷氨酸和急性脑缺血对海马CA3区神经元突触传递的影响。     

扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3

 目的从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38 MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(poly-peptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68mmol·L^-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69mmol·L^-1PCF组、UVA+2.84mmol·L^-1 PCF组、UVA+1.42mmol·L^-1 PCF组。以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK及磷酸化p38MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性。结果PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42～5.69mmol·L^-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化。结论PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK通路和caspase-3活性有关。     

NMDA受体对乙醇、乙醛调控大脑皮质神经元神经甾体水平的影响

 目的研究乙醇、乙醛对原代培养大鼠大脑皮质神经元神经甾体水平的影响以及与N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体调控的相关性。方法应用不同浓度乙醇或乙醛处理神经元,同时应用地佐环平(dizocilpine,MK801)阻断NMDA受体,收集细胞培养上清,采用HPLC-MS/APCI法分离测定游离型神经甾体孕烯醇酮(PREG)、脱氢表雄酮(DHEA)、别孕烯醇酮(AP)及结合型神经甾体脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)、孕烯醇酮硫酸酯(PREGS)的含量,观察乙醇、乙醛对原代培养神经元神经甾体水平的影响以及与NMDA受体调控的相关性。结果与PBS对照组相比,25,50,100mmol·L^-1的乙醇均可显著升高神经元培养液中PREGS的水平(P<0.05);25和50mmol·L^-1的乙醇均可显著升高神经元培养液中AP的水平(P<0.05);50mmol·L^-1的乙醇还可显著升高神经元培养液中PREG的水平(P<0.05)。与PBS对照组相比,12.5,25,50mmol·L^-1的乙醛可显著升高神经元培养液中DHEA的水平(P<0.05,P₅₀<0.01);25,50mmol·L^-1的乙醛可显著升高神经元培养液中PREG和DHEAS的水平(P<0.05),12.5mmol·L^-1的乙醛显著降低神经元培养液中DHEAS的水平(P<0.05)、显著升高其AP的水平(P<0.05),50mmol·L^-1的乙醛却显著降低其AP的水平(P<0.05);25mmol·L^-1乙醛还可使神经元培养液中PREGS的水平显著升高(P<0.05)。MK801反转了50mmol·L^-1乙醇升高PREGS水平的作用(P<0.01)以及25mmol·L^-1乙醛升高PREG和DHEAS水平的作用(P<0.01)。结论乙醇、乙醛对神经元神经甾体水平的影响存在着一定的量效关系且对游离型和结合型神经甾体的影响各不相同;NMDA受体阻断了乙醇上调PREGS以及乙醛上调PREG和DHEAS的作用。     

红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH-SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P<0.01)和 4 .94 % (P<0.01)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.46nmol·L^-1(PP<0.01)和 16 .5 9% (P<0.01) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L^-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH-SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度有关。     

蚓激酶对活化血小板[Ca2+]i、JNK1和P-选择素表达的影响

 目的 研究蚓激酶(lumbrokinase, LK对大鼠血小板内钙离子浓度（intracellular calcium concentration, [Ca²⁺]_i、c-Jun氨基末端激酶-1 (c-Jun N-terminal kinase-1, JNK1以及人血小板P-选择素(P-selection, Ps表达水平的影响,阐明LK抗血小板活化的部分机制。方法 用荧光分光光度计测定LK对大鼠血小板活化过程中胞浆[Ca²⁺]_i的影响;免疫蛋白印记方法检测LK对大鼠血小板JNK1磷酸化水平的影响;流式细胞仪测定LK对人血小板活化过程中Ps表达水平的影响。结果 LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1大鼠血小板[Ca²⁺]_i分别为（425.49±37.4 nmol·L^-1和（509.65±35.67 nmol·L^-1,与诱导组血小板[Ca²⁺]_i （555.59±39.71 nmol·L^-1相比显著降低（P<0.01,P<0.05;LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1大鼠血小板JNK1磷酸化水平分别为（0.60±0.069和（0.79±0.048,与诱导组血小板JNK1磷酸化水平（0.87±0.037相比显著降低（P<0.01,P<0.05;LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1人血小板Ps水平为（42.99±2.69和（44.72±2.09,与诱导组（49.99±3.81相比显著降低（P<0.01,P<0.05。结论 体外实验表明LK能够抑制大鼠血小板胞浆[Ca²⁺]_i升高和JNK1的磷酸化,同时也能抑制人血小板Ps的表达水平的升高,从而起到抗血小板活化作用。     

白藜芦醇对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用

目的:观察白藜芦醇(resveratrol,RVL)对大鼠离体胸主动脉血管的舒张作用并探讨其机制。方法:采用离体血管环灌流方法,观察RVL在含Ca²⁺或无Ca²⁺ Krebs液孵育条件下对去甲肾上腺素(NA)引起的血管平滑肌收缩的影响;同法观察RVL对30,80mmol·L^-1的KCl引起的血管平滑肌收缩的影响;RVL对NA引起的依赖于细胞内钙和细胞外钙收缩反应的影响,以及加入N-G-硝基-L-精氨酸(L-NNA)和优降糖后RVL舒张大鼠离体主动脉环效应的变化。结果:RVL呈浓度依赖性舒张NA引起的血管收缩;无Ca²⁺ 组RVL抑制NA所致血管平滑肌收缩效应大于含Ca²⁺ 组;RVL能够拮抗NA诱发的依内钙的收缩反应,而对外钙收缩无抑制。RVL对80,30mmol·L^-1 的KCl引起的血管平滑肌收缩均有抑制作用,且前者量效曲线明显上移。L-NNA使RVL舒血管效应降低(26.0±4.6)%;优降糖组的血管舒张受抑程度与对照组无显著差别(P>0.05)。结论:RVL可呈内皮依赖性舒张血管平滑肌,其作用机制可能与该药促进NO合成释放,开放钙激活的钾通道以及抑制血管平滑肌细胞外钙内流和内钙释放有关。     

芦丁对离体大鼠主动脉环的舒张作用及相关机制

 目的研究芦丁对离体大鼠胸主动脉环收缩张力的作用及其可能作用途径。方法采用累积加药法,检测芦丁对去氧肾上腺素(PE)预收缩的胸主动脉环收缩张力的影响,研究芦丁对血管张力的影响及其机制。结果芦丁(10～160μmol·L^-1)对内皮完整的离体大鼠胸主动脉环具有浓度依赖性舒张作用。芦丁对内皮完整的胸主动脉环的最大舒张反应(R_max)为(44.28±7.48)%。用一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME,0.1 mmol·L^-1)、鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(10μmol·L^-1)和环氧合酶抑制剂吲哚美辛(10 mmol·L^-1)预处理后,均可明显减弱芦丁诱导的舒张血管作用;用β受体阻断剂普萘洛尔(10μmol·L^-1)预处理后,芦丁的血管舒张作用不能被阻断。结论芦丁可能是通过NO-鸟苷酸环化酶途径和前列腺素介导机制产生内皮依赖性的血管舒张作用。     

氧化苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞胞浆[Ca2+]i的影响

 目的 观察氧化苦参碱对急性分离的豚鼠单个心室肌细胞内游离钙离子浓度([Ca²⁺]_i)的影响。方法 采用酶解法分离豚鼠单个心肌细胞,用钙敏感的荧光指示剂Fluo-3/AM染色,以荧光强度(FI)来代表[Ca²⁺]_i,应用激光扫描共聚焦显微技术动态监测FI的变化。结果 在静息状态下,10μmol·L^-1氧化苦参碱对[Ca²⁺]_i无明显影响;但10μmol·L^-1氧化苦参碱对60mmol·L^-1KCl介导的外钙内流却有明显抑制作用(P<0.05)。结论 氧化苦参碱对电压依赖性钙通道(VDC)具有明显抑制作用,这可能是其抗心律失常作用机制之一。     

三七总皂苷对脑细胞内游离钙浓度的影响

 目的：研究三七总皂苷(saponins of Panax notoginseng,PNS)对不同状态下脑细胞内游离钙离子浓度(［Ca2+］i)的影响。方法：采用Fura-2作为荧光指示剂,测定新生大鼠脑细胞中荧光强度的变化。结果：PNS 100,400 mg·L^-1对高钾(50 mmol·L^-1)、谷氨酸(100 μmol·L^-1)诱导的以及缺氧引起的［Ca2+］i增高均有明显的抑制作用。结论：PNS是钙离子拮抗剂。     

茯苓水提液对叠氮钠致原代培养的新生大鼠海马神经细胞线粒体损伤的影响

 目的 从生化和形态学的角度观察茯苓水提液对叠氮钠致原代培养的新生大鼠海马神经细胞线粒体损伤的影响。方法 新生大鼠海马神经细胞原代培养至第11天,吸弃培养液,加入MTT(o.4mg· mL^-1)温育4h,用自动酶标仪在550 nm处检测被神经细胞线粒体酶还原的MTT,的量,以此作为评价细胞活力的指标。通过间接免疫荧光(一杭为鼠抗a-hibulin抗体)的方法,利用激光扫描共聚焦显微镜观察来评价神经细胞骨架改变。结果 叠氮钠与培养细胞孵育能剂量依赖性地损伤细胞,64mmol ·L^{-1孵育4h时,细胞的线粒体酶还原MTT,的能力为对照组的(60.73±5.13)%,微管结构模糊、紊乱。茯苓水提液(10~20 mg·mL-1)与细胞预孵育24 h,能明显抵杭叠氮钠引起的神经细胞线粒体还原MTT的能力下降,微管结构紊乱。结论 茯苓对维持神经细胞线粒体的功能及微管结构方面有重要作用,对防治某些神经退行性疾病如老年性痴呆、血管性痴呆及帕金森氏病等,可能具有一定的应用前景。}     

生理溶液中硝普钠释放一氧化氮巯基通路的动力学研究

 目的探索台氏液中一氧化氮供体硝普钠(SNP)在含活性巯基化合物催化下释放一氧化氮(NO)的动力学特征，为体外NO药理作用定量研究提供实验依据。方法在37℃恒温避光条件下，对NO特异氧化产物NO₂^-以Griess试剂还原显色，采用分光光度法，比较分别有半胱氨酸(CYS)、谷胱甘肽(GSH)、巯基乙醇、青霉胺(PCA)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)等5种巯基化合物存在的台氏液中，SNP释放NO的情况(n=3)。结果240 min内，在分别含有25 mmol·L^-1各种巯基试剂的测试系统中，有CYS存在时，SNP释放NO呈一级动力学，速率常数K=0.166 3 min^-1(r=0.926 3)，稳态浓度为1.02 mmol·L^-1；有GSH存在时，NO释放呈多相性，25 min达峰值，为0.53 mmol·L^-1,180 min后渐成0.36 mmol·L^-1的稳态；有巯基乙醇存在时，NO释放呈多相反应，60 min达峰值，为0.11 mmol·L^-1，120 min后渐成0.09 mmol·L^-1的稳态；有PCA存在时，NO的释放成线性，释放公式为：C_tPCA=0.074 2+0.000 2t(r=0.997 9)；在有NAC存在的测试系统中，未测出有NO释放。结论恒温避光台氏液中，SNP通过巯基通路释放NO的动力学特征受到巯基化合物自身的化学结构及空间位置的影响；240 min内SNP在含各巯基试剂的测试系统中释放NO量依次为：CYS＞GSH＞巯基乙醇＞PCA＞NAC。     

钙调素拮抗剂E6对缺血性损伤神经细胞的保护作用

 目的:观察具有较强钙调素拮抗活性的双苄基异喹啉类化合物E6对缺血性神经细胞损伤的保护作用?方法:采用NaCN加缺糖引起肾上腺髓质瘤细胞(PC12细胞株)损伤和谷氨酸(glutamate,Glu)引起乳大鼠脑皮质神经细胞损伤模型?结果:E6对NaCN加缺糖损伤的PC12细胞保护作用较弱,而对Glu损伤的原代皮质细胞有较强的保护作用,并降低培养液中一氧化氮(NO)的含量?NO合成前体L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)可减弱E6的保护作用?E6对硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)损伤的原代神经细胞无保护作用?结论:E6可能是作用于Glu引起神经元损伤途径中NO生成之前的环节,从而表现出对缺血样损伤神经细胞的保护作用?     

黄芩苷对小鼠脑片和大鼠皮质神经元缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用

 目的在离体水平,探讨黄芩苷对缺氧缺糖/再灌注(OGD/RP)诱导的脑片及神经元损伤的保护作用及机制。方法小鼠离体脑片OGD/RP模型中,以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物白评价脑片活性;原代培养大鼠皮层神经元OGD/RP模型中,以噻唑蓝(MTT)还原和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定神经元活性变化,用2,7-二氯荧光素二乙酸盐(DCF-DA)测定细胞内自由基水平。观察不同时间给予黄芩苷对损伤的保护作用。结果在脑片,全程给药和OGD时给予黄芩苷0.01～1μmol·L^-1,再灌注时给予黄芩苷0.1～1μmol·L^-1,可显著减轻损伤。在神经元,全程给予黄芩苷0.1～1μmol·L^-1可减轻神经元损伤,并降低神经元内自由基水平升高。结论黄芩苷对OGD/RP损伤有浓度依赖性保护作用,再灌注时给药亦有效,其作用至少部分与抗自由基有关。