用改良的盐洗法与酚-氯仿法提取基因组DNA效果比较

目的:探索更为安全可靠的基因组DNA提取方法.方法:采用改良盐洗法提取人外周血白细胞基因组DNA,与传统的酚-氯仿抽提法在提取效果、DNA纯度等方面加以比较.结果:通过对15份不同静脉血标本与酚-氯仿抽提法同步对比研究显示:改良盐洗法提取模板DNA无污染、无害,所提DNA质量好、纯度高,达到酚-氯仿抽提法所获DNA的水平;操作简单、快速,方法稳定可靠,无一例失败.结论:该方法提取的DNA可用于实验以及临床上DNA分型等研究.     

经典酚/氯仿抽提法和纯化试剂盒法提取全血基因组DNA的比较

目的 比较经典酚/氯仿法和纯化试剂盒法抽提全血基因组DNA的差异.方法 分别对两种方法抽提的全血DNA产物进行紫外分光光度仪、琼脂糖凝胶电泳和体外聚合酶链锁反应（PCR）扩增.结果 两种方法DNA的提取效率相似,TaKaBa试剂盒法提取的纯度[光密度（OD）260nm/280nm]较常规酚/氯仿法明显提高.结论 TaKaBa试剂盒法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备.     

"酚氯仿裂解法"提取质粒DNA

1 材料和方法 1.1 材料 含有人柯萨奇腺病毒受体(human Coxsackie and adenovirus receptor,hCAR)基因的真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-hCAR由本研究所构建;转化菌E.coli DH5a由本研究所保存;内切酶PstI购自TaKaRa公司.LB培养基(蛋白胨10 g,酵母提取物5 g,氯化钠10 g).Tris-饱和酚、氯仿按1:1体积比配制成混合液;无水乙醇;RTE溶液:10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0),1 mmol/L EDTA 20 mg/mL Rnase A(无Dnase).直径35 mm可反复使用针式小滤器及0.22 μm滤膜购自华美生物生物公司.     

不同PCR扩增试剂盒检验血样DNA的检验结果对比研究

目的:讨论研究Profiler PlusTM、IdentifilerTM以及Powerplex16扩增试剂盒用于检验血样DNA检验结果的差异,并研究其扩张不平衡和基因丢失现象的发生几率。方法:选取150例完全无血缘关系的个体作为研究对象并采集其血样,分别使用两种扩增试剂盒进行检验。对所得不同结果的同一对象再使用3种扩增试剂盒进行检验。将检验所得结果进行比较。结果:3种试剂盒检测的等位基因缺失率比较差异无统计学意义(P0.05)。Profiler PlusTM检测扩张不平衡率显著高于其余两种试剂盒(P0.05)。结论:使用PCR扩增试剂盒对血样DNA进行检测时,会出现不同位置的异常基因,可表现为基因缺失及扩增不平衡。但Profiler PlusTM检验扩增不平衡发生率显著高于其余两种试剂盒。在实际生活对血样DNA进行检测时,除需准备主要检测扩增试剂盒外,还需准备其他不同类备用试剂盒用于互相验证及对比,尽量降低基因等位缺失及扩张不平衡发生率。     

改良McMurray截骨术治疗陈旧性股骨颈骨折

目的:探讨陈旧性股骨颈骨折病人新的内固定治疗方法。方法:2002年以来,我院采用改良McMurray截骨叉状钢板内固定方法,治疗陈旧性股骨颈骨折病人21例。结果:随访1-5年,平均2.4年,临床评定:优6例,良11例,一般3例,优良率为85%。结论:改良McMurray截骨术治疗陈旧性股骨颈骨折,改变了髋关节的负重力线,增加了骨接触面积,保护了局部的血供,方法简单,疗效可靠,医疗费用低,保留了自身的股骨头,被多数患者所接受,有广泛的临床应用价值。     

改良的一步热酚法及Trizol试剂盒提取组织中RNA的比较

目的：比较改良的一步热酚法及Trizol试剂盒提取组织中RNA的差别。方法：应用两种方法分别提取20例兔肝脏的总RNA,对所提RNA的产率=纯度及完整性进行鉴定。结果：对比两种方法所提的RNA的产率、纯度及完整性,均无显著性差异,且RT-PCR产生均扩增出了β-actin的目的的条带。结论：采用改良一步热酚法较之Trizol试剂盒更具有简便经济的特点。特别适宜大量样品的处理。     

改良的一步热酚法及Trizol试剂盒提取组织中RNA的比较

目的 :比较改良的一步热酚法及Trizol试剂盒提取组织中RNA的差别。方法 :应用两种方法分别提取 2 0例兔肝脏的总RNA ,对所提RNA的产率、纯度及完整性进行鉴定。结果 :对比两种方法所提的RNA的产率、纯度及完整性 ,均无显著性差异 ,且RT_PCR产生均扩增出了 β_actin的目的条带。 结论 :采用改良一步热酚法较之Trizol试剂盒更具有简便经济的特点 ,特别适宜大量样品的处理     

改良尺骨截骨矫形术对陈旧性下尺桡关节脱位的疗效观察

目的：评估改良尺骨截骨矫形内固定术治疗陈旧性下尺桡关节脱位的临床疗效。方法：对收治的5例陈旧性下尺桡关节脱位的患者行改良尺骨截骨矫形内固定术,术后均获得随访,采用腕关节Mayo评分,评估术后症状和腕关节功能恢复情况。结果：Mayo评分：优4例,良1例。5例患者术后腕关节疼痛症状立即消失,随访发现腕关节功能活动基本恢复正常,其中4例握力恢复优,1例握力恢复良。结论：采用改良尺骨截骨矫形内固定术治疗陈旧性下尺桡关节脱位,操作简单易行,固定牢靠,复位满意,术后对腕关节屈伸无影响,疗效肯定,值得临床推广。     

不同截骨方式治疗陈旧性骨质疏松性脊柱骨折合并后凸畸形的临床效果

目的探讨不同截骨方式治疗陈旧性骨质疏松性脊柱骨折合并后凸畸形的临床效果。方法选取2017年8月至2018年8月大连市第二人民医院收治的40例陈旧性骨质疏松性脊柱骨折合并后凸畸形患者为研究对象,按照截骨方式不同分为多节段组和单节段组,每组20例。多节段组实施多节段Smith-Peterson截骨治疗,单节段组实施单节段经椎弓根楔形截骨治疗。比较两组患者的手术相关指标(手术时间、术中出血量、术后引流量、住院时间),手术前后后凸畸形Cobb角、矢状面平衡(SVA)、胸椎后凸角(TK)、腰椎前凸角(LL)、视觉模拟评分法(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)。结果多节段组手术时间、住院时间短于单节段组[(136±22) min比(157±24) min,(8.7±1.4) d比(9.8±1.5) d],术中出血量和术后引流量少于单节段组[(866±47) mL比(1 018±53) mL,(95±18) mL比(108±17) mL](P <0.05)。两组间Cobb角、SVA比较差异有统计学意义(P <0.001),术后Cobb角、SVA低于术前,TK、LL高于术前,不同时点间Cobb角、SVA、TK、LL比较差异有统计学意义(P <0.001); Cobb角、SVA组间与时点间交互作用差异有统计学意义(P <0.05)。术后VAS评分、ODI低于术前,不同时点间比较差异有统计学意义(P <0.001),组间与时点间交互作用差异无统计学意义(P> 0.05)。多节段组患者围术期发生脑脊液渗漏1例(5.0%),单节段组3例(15.0%),两组间比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论陈旧性骨质疏松性脊柱骨折合并后凸畸形患者采用多节段与单节段截骨方式治疗均有一定的疗效,在临床应用中应依据患者的实际情况选择合适的手术方式。     

自体骨与同种异体骨治疗伴骨缺损的四肢长骨陈旧性骨折临床对比研究

骨缺损是目前骨科难治病之一,严重的创伤、肿瘤、或感染是造成骨缺损的主要原因。目前治疗骨缺损的方法主要是植骨结合内、外固定术。植骨材料主要包括自体骨、同种异体骨以及异种骨,其中自体骨移植是目前骨移植术的“金标准”,然而,自体骨存在供区出血、感染、疼痛、瘢痕等并发症,并且受到取材数量及形状的限制,不能很好的满足临床需要。同种异体骨因来源广泛、可塑性强以及良好的生物活性等特点,已应用于临床治疗中。采用同种异体骨植骨术治疗伴骨缺损的四肢长骨陈旧性骨折患者86例,效果满意。报告如下。     

小鼠骨髓树突状细胞体外扩增方法的建立

目的建立小鼠骨髓树突状细胞(DC)体外大量扩增方法。方法应用粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素-4诱导培养小鼠骨髓细胞，应用相差显微镜观察形态学变化，’H-TdR掺入法检测细胞增殖能力，FACS检测细胞表面分了，ELISA检测细胞因子。结果体外诱导培养8天后可获得大量形态学典型的DC，具有强烈的激活同种异体或自体T细胞增殖反应能力。FACS检测表明，扩增的DC表达IaK^b、CDllc、CD80、CD86、ICAM-1分子。DC接受LPS刺激后，可以促使DC成熟，分泌IL-12(p70)、IL-6、TNF-a和IL-1β水平增强。结论小鼠骨髓细胞体外诱导培养，可生成大量功能成熟的DC，为进一步开展DC基础和临床研究打下基础。     

Modified vitrification method for cryopreservation of human ovarian tissues

Background Vitrification is a prospective technology in ovarian tissue cryopreservation, but it is still in an initial stage. This study was conducted to investigate a modified vitrification protocol for human ovarian tissue, which can be used as an alternative to preserve fertility for young women with cancer who have to undergo cytotoxic therapy and sterilization. Methods Ovarian tissue samples were collected from 15 patients and randomly allocated to groups of fresh, vitrification, and conventional slow freezing. A modified carrierless vitrification method was applied. The proportion of morphologically intact follicles in fresh ovarian tissues was compared with that in warmed/thawed tissues. The initial growth of the follicles and the concentrations of estradiol and progesterone were detected to determine the viability and endocrine function of the cryopreserved tissues. Results The proportion of morphologically intact primordial follicles in the fresh group （97.6%） was significantly higher than that in the other two groups （vitrification group 80.3% and slow-freezing group 72.6%, P〈0.001）. In both the vitrification and slow-freezing groups, estradiol and progesterone were secreted continuously during 2-week culture in vitro, the proportion of primary follicles were both significantly increased compared to the fresh group. No statistically significant differences existed between the two groups after cryopreservation in the proportion of both primordial and primary follicles, and the concentrations of estradiol and progesterone （P〉0.05）. Conclusion The modified vitrification method for cryopreservation of human ovarian tissues is effective, simple, and inexpensive.     

早孕绒毛滋养层细胞体外培养方法的改良

目的 建立一种重复性好、能快速简便获得高纯度滋养细胞的培养方法.方法 取孕6～8周正常绒毛组织40例,分别采用组织贴块法、酶消化法和改良联合法进行原代培养.结果 改良联合法培养的细胞生长迅速,接种6～8d即可传代,原代细胞生长时间明显缩短,细胞纯度达90%.结论 改良联合法综合了组织贴块法和酶消化法的优点,可快速获得实验所需的人绒毛膜滋养层细胞.     

成人胰岛细胞的分离纯化与应用

目的 探讨成人胰岛细胞分离纯化技术,为胰岛细胞移植治疗1型糖尿病提供大量高质量的胰岛细胞.方法 使用LiberaseHI复合胶原酶和改良的Recordi自动胰岛细胞分离技术分离胰岛,采用COBE2991细胞淘洗仪连续密度梯度离心纯化胰岛细胞,用DTZ和AO-PI染色显微镜下评价胰岛细胞的数量、纯度和活性.结果 该组研究共分离30例胰腺的胰岛,获得胰岛细胞数量平均为(316626±191972)IEQ,平均每克胰腺收获胰岛细胞3389 IEQ,收获的胰岛纯度平均为(74.70±7.84)%,活度平均为(94.10±2.19)%,胰岛细胞刺激指数平均为(3.68±0.58).在此基础上,成功实施7人12次的成人胰岛细胞移植.结论 成功建立了改良的Recordi自动胰岛分离技术,获得大量高纯度有活性的胰岛细胞,为开展胰岛细胞临床移植提供了保障.     

人脂肪间充质干细胞体外高效扩增新方法

目的 运用低强度脉冲场超声(LIPUS)刺激促进人脂肪间充质干细胞(hASCs)增殖,为临床干细胞体外高效增殖提供新方法.方法 通过LIPUS体外刺激hASCs细胞生长,采用Scepter 2.0手持细胞计数器进行细胞计数,运用荧光倒置显微镜观察细胞形态,运用流式细胞仪检测细胞表面标志物,并进行干细胞临床前质量检测.结果 刺激组50 mW/cm2和60 mW/cm2的LIPUS刺激强度均能促进细胞增殖,60 mW/cm2强度更显著,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞倍增时间比对照组缩短,差异具有统计学意义(P<0.05),刺激后刺激组细胞表面标志物无变化,增殖后干细胞质量检测符合标准要求.结论 LIPUS刺激可促进hASCs有效增殖,低强度脉冲场超声可作为干细胞体外扩增的新方法.     

不同厂家试剂盒检测血清胱抑素C的性能比较

目的探讨免疫透射比浊法试剂盒测定血清胱抑素C的性能比较和基质效应。方法选择迈克生物科技有限公司、金斯尔、四川新成生物科技有限公司3种胱抑素C试剂盒,比较他们的批间精密度、准确度,再以迈克生物有限公司试剂的测定结果为参照系统,评估金斯尔胱抑素C、四川新成生物科技有限公司2种试剂盒的测定结果和基质效应。结果 3种试剂盒及其与校准品组成的Aa、Bb、Cc 3个检测系统,批间精密度均〈6%,厂家提供的配套质控品检测结果良好,相对偏倚最大的为-4.58%,不同厂家配套质控品相对偏倚差异显著,Bb系统对Aa系统显示出良好的相关性。回归方程为Y=0.937 7X-0.057 6,R2=0.995 5。检测结果表明3种试剂盒检测血清胱抑素C的性能均符合说明书要求,满足临床检测要求。但是不同厂家检测结果缺乏可比性。结论 3种试剂盒的性能指标均完全符合试剂盒说明书要求,但是用不同厂家的试剂盒,必须使用配套质控品否则由于基质效应均值有时会超过质控品提供范围引起假失控,并且不同厂家检测结果偏差较大缺乏可比性,建议不同厂家的血清胱抑素C应有自己的参考值范围。     

人骨肉瘤中5个新基因片段在不同骨肿瘤中的差异表达

目的 筛选数个在人骨肉瘤中检出率高的差异表达基因片段并探讨其临床意义。方法 以筛选出5个新基因片段作为研究对象，采用RT－PCR技术检测37例骨肉瘤，68例其他骨肿瘤及19例截除肢体上的正常骨组织标本。结果 在37例骨肉瘤中，表达检出率高的5个片段依次为：ZOL03为92．6％，1C82为89．4％，1C74为73．9％，2G12为66．5％，2A21为53．7％；在23例骨软骨瘤中表达率依次为：ZOL03为6．5％，1C82为14．7％，1C74为8．3％，2G12为11．9％，2A21为12．2％；在29例骨巨细胞瘤中表达率依次为：ZOL为8．3％，1C82为15．6％，1C74为12．5％，2G12为13．8％，2A21为5．4％；在16例软骨肉瘤中表达率依次为：ZOL03为9．4％，1C82为14．3％，1C74为7．5％，2G12为6．8％，2A21为6．2％；在19例正常骨组织标本中表达率依次为：ZOL03为0，1C82为6．4％，1C74为0，2G12为4．8％，2A21为3．9％，这5个基因片段检出率在骨肉瘤与其他骨肿瘤中存在显著差异（P＜0．01）；其检出率与骨肉瘤与正常骨组织中存在显著差异（P＜0．01）。结论 ZOL03，1C82，1C74，2G12及2A21这5个基因片段可能与骨肉瘤的发生，发展有关，监测骨组织中此5个基因片段的表达水平的变化可能对骨肉瘤的早期发现更有意义。     

人骨髓基质干细胞在不同诱导环境下向软骨细胞的分化

目的：探索重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）诱导建系的人骨髓基质干细胞（hBMSC，专利名缩写为MSCxj）生成软骨的可行性、最佳剂量及适宜的诱导环境。方法：rhBMP-2分为六组：空白组、100ng／ml组、200ng／ml组、400ng／ml组、600ng／ml组和800ng／ml组。血清浓度分为三组：无血清组、2％血清组和5％血清组。根据rhBMP~和血清不同浓度间的组合，设计18种诱导模式。一部分Mscxj制成微球，模拟三维模式进行细胞爬片培养，另一部分MSCxj直接用96孔板培养，10d后，检测MSCxj的数量、总蛋白生成量和碱性磷酸酶生成量，并行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原mRNA检测，利用MPS60病理图像软件分析各组Ⅱ型胶原mRNA染色后的灰度，比较各组Ⅱ型胶原mRNA的生成量。结果：血清浓度越高细胞生成的数量越多，细胞合成的总蛋白无显著差异，rhBMP-2对细胞数量和总蛋白的合成无明显影响。2％的血清浓度比其他血清浓度更利于软骨生成。在该血清浓度下rhBMP-2为400ng／ml时，细胞特异性基质Ⅱ型胶原生成最多（F=19．56，P〈0．05）。结论：rhBMP-2能诱导Mscxi生成软骨，在血清浓度为2％、自身浓度为400ng／ml水平下诱导Mscxj生成软骨能力最强。     

Comparative assay of Hepatitis B and C virus infection markers by different assay kits

In order to compare sensitivity of EIA and RIA assay kits for hepatitis B and C virus(HBV and HCV,respectively)infection markers,100 serum samples in total wre collected form 50 adult women each in urban and rual areas in northeast China.The number of positive cases to the three infection markers on HBV(i.e..,HBsAg^ ,anti-HBs^ ,and anti-HBc^ )and the one on HVC (anti-HCV)were examined in two laboratories,i.e.,in Laboratory A with EIA kits produced in China and in Laboratory B with RIA kits.HCV infection positivity(anti-HCV^ )was examined by EIA kits in both laboratories,but from diffeent sources in and outside of China,respectively.The assay in Laboratory A gave 2 HBsAg^ cases out of the 100 cases examined,whereas there were 9 positive cases in Labortory B,In contrast,19 cases were positive to anti-HCV when examined in Laborator A,and there were 3 cases in Laboratory B.Thus,the kits used in Laboratory A gave fewer HBsAg^ and more anti-HCV^ cases than the kits used in Laboratory B.The prevlence of antiHBs^ or anti-HBc^ and cases did not differ when assayed in the two laboratories with EIA and RIA kts,respectively,The agreement of positive and negative findings between the two set of testing were 93%,93%,93%,86%and 82% for HBsAg,anti-HBs,anti-HBc,BHV(i.e.,either positive to anyone of the three markers or negative to all three markers),and anti-HCV,respectively.The implication of the observation on epidemiology on HBV and HCV infection prevalence was discussed.