低氧诱导因子1αmRNA表达与神经细胞缺氧复氧损伤的关系

目的：探讨低氧诱导因子1α（HIF－1α）与神经细胞缺氧复氧损伤的关系。方法：氯化钴处理PC12细胞模拟缺氧，去除氯化钴模拟复氧，用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒和RT－PCR技术检测缺氧0，1，2，4，8，12，16h以及复氧4，8，12h LDH漏出与HIF－1α mRNA水平。结果：（1）氯化钴处理细胞后，LDH漏出逐渐增加，8h达高峰，随后逐渐下降；HIF－1α mRNA水平逐渐增加，4h达高峰，随后逐渐下降；（2）氯化钴处理4h,去除氯化钴后，LDH漏出于8h明显增加，HIF－1α mRNA表达于4h明显减少，8，12h略有升高。结论：HIF－1α对神经细胞缺氧复氧损伤具有保护作用。     

低氧促进C2C12细胞增殖及相关机制探讨

目的：探讨低氧对小鼠骨骼肌成肌细胞系C2Cl2细胞增殖的影响及其增殖的可能相关机制。方法：采用血细胞计数板法和流式细胞仪观察低氧（10％O2）对C2Cl2细胞数量和增殖指数的影响；用RT—PCR和Western blot方法检测低氧诱导因子-1α（HIF—1α）mRNA和蛋白水平的表达。结果：低氧组细胞较常氧组细胞数量和增殖指数增加（P〈0．01）；HIF—1αmRNA和蛋白水平变化在常氧组和低氧组细胞中无显著差异。结论：低氧可促进C2Cl2细胞的增殖，其增殖机制可能不是直接通过HIF—1αmRNA和（或）蛋白水平量的多少来调控。     

自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的：探讨自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞株（HK-2）凋亡中的作用。方法：培养HK-2细胞,根据培养环境氧浓度不同分为对照组（21%O2）和低氧组（1%O2）;根据低氧培养时间不同,低氧处理细胞进一步分为：低氧6 h亚组、低氧12 h亚组、低氧18 h亚组和低氧24 h亚组。Western blot检测HK-2细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和凋亡相关蛋白活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cleaved-caspase3）表达水平,流式细胞仪检测HK-2细胞凋亡情况;采用低氧诱导稳定表达GFP-LC3的HK-2细胞18 h,在荧光显微镜下观察GFP-LC3自噬小体的变化;进一步采用低氧联合自噬诱导剂雷帕霉素（ra－pamycin,RP）或自噬抑制剂巴弗洛霉素A1（bafilomycin A1,BAfA1）处理HK-2细胞,细胞分为常氧对照组、常氧+雷帕霉素/或巴弗洛霉素组、低氧对照组、低氧+雷帕霉素/或巴弗洛霉素组。Western blot检测Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和cleaved-caspase3表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：与对照组（0.161±0.043）相比较,低氧12 h[（0.315±0.060）,P=0.019]、18 h[（0.586±0.063）,P=0.000]、24 h[（0.698±0.085）,P=0.000]亚组HK-2细胞cleaved-caspase3蛋白表达明显增多;低氧12 h、18 h、24 h亚组HK-2细胞凋亡率分别为（23.633±5.346）%、（25.200±4.782）%、（38.567±8.046）%,较对照组（11.800±3.966）%明显增多（P=0.036,P=0.021,P=0.000）。同时,低氧18 h、24 h亚组HK-2细胞表达Beclin1蛋白[（0.557±0.071）,（0.897±0.074）[较对照组（0.249±0.040）明显上调（P=0.001,P=0.000）;低氧6 h、12 h、18 h、24 h亚组细胞表达LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白[（1.795±0.143）,（2.873±0.078）,（3.029±0.089）,（3.735±0.059）]较对照组（1.322±0.191）明显上调（P=0.036,P=0.000,P=0.000,P=0.000）;细胞表达自噬底物P62蛋白[（0.776±0.061）,（0.602±0.119）,（0.419±0.117）,（0.384±0.068）]较对照组（0.957±0.035）明显下调（P=0.028,P=0.001,P=0.000,P=0.000）;低氧组细胞GFP-LC3斑点计数相对值为（40.667±6.028）,较对照组（18.667±5.508）明显增加（P=0.010）。雷帕霉素增加自噬后,低氧诱导的HK-2细胞凋亡（26.433±3.402）及cleaved-caspase3蛋白表达（0.265±0.066）较低氧对照组[（36.133±5.856）,（0.358±0.060）]明显减少（P=0.012,P=0.000）;巴弗洛霉素A1抑制自噬后,低氧诱导的HK-2细胞凋亡增多（49.233±3.412）及cleaved-caspase3蛋白表达（1.242±0.110）较低氧对照组[（25.933±3.650）,（0.659 ± 0.060）]明显增加（P=0.000,P=0.000）。结论：自噬在低氧诱导的HK-2细胞凋亡中起保护作用。     

低氧微环境与宫颈癌耐药的关系

目的：通过检测低氧诱导因子－1α（ HIF－1α）、多耐药基因1（ MDR1）在人宫颈癌组织、HeLa细胞中的表达及两者间的关系,探讨低氧微环境与宫颈癌耐药的关系。方法应用免疫组化法检测78例中、晚期宫颈癌组织微阵列芯片组织标本中HIF－1α、MDR1的表达;以二氯化钴（ CoCl2）处理HeLa细胞模拟细胞低氧微环境,设置低氧组、常氧组。细胞免疫荧光法检测HIF－1α、MDR1蛋白在HeLa细胞中表达。结果 HIF －1α、MDR1在宫颈癌组织中的阳性表达率分别为69.2％、85.6％,且表达呈正相关（r＝0.348,P＜0.05）。低氧组HeLa细胞HIF－1α、MDR1表达分别为34.76±7.09、57.61±57.61,显著高于常氧组的19.46±3.57、29.57±12.85（P＜0.05）,低氧组HIF－1α与MDR1表达呈正相关（r＝0.315,P＜0.05）。结论低氧微环境与宫颈癌耐药发生有关,可能的机制是HIF－1α促进MDR1的表达从而导致耐药的发生。     

二甲双胍逆转低氧诱导的胰腺癌细胞铁死亡抵抗及潜在的作用机制

目的: 探讨二甲双胍是否能够逆转低氧诱导胰腺癌细胞对铁死亡诱导剂的抵抗,并进一步明确其作用机制。方法: 人胰腺癌Patu8988细胞分别在常氧和低氧下培养不同时间（0、12、24、48 h）,CCK-8法检测细胞增殖,免疫印迹法检测缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF 1α）蛋白表达;用不同浓度铁死亡诱导剂Erastin分别处理常氧和低氧培养的Patu8988细胞,CCK-8法检测细胞活性;低氧培养的Patu8988细胞分别给予以下处理：对照组、二甲双胍、Erastin、二甲双胍联合Erastin,用CCK 8法检测细胞活性,免疫印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4,GPX4）蛋白表达;用不同浓度二甲双胍处理低氧培养的Patu8988细胞,免疫印迹法分别检测腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase, AMPK）,雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin, mTOR）,HIF-1α等蛋白表达。结果： 与常氧组相比,低氧抑制细胞增殖,且呈时间依赖性,在48 h差异最显著（P<0.05）;Erastin浓度为10 μmol/L时,低氧组细胞活性明显低于常氧组（P<0.05）,为最佳实验浓度;低氧条件下,与单药处理组相比,二甲双胍联合Erastin可以显著抑制细胞活性,降低GPX4蛋白表达水平（P均<0.05）;二甲双胍能够激活AMPK,抑制mTOR磷酸化以及HIF-1α蛋白水平（P均<0.05）。结论： 二甲双胍能够通过AMPK mTOR轴减少HIF 1α表达,从而逆转低氧诱导的胰腺癌细胞铁死亡抵抗。     

常氧下低氧诱导因子1α在传代培养LoVo细胞中的表达

[目的]探讨常氧下低氧诱导因子1α（HIF-1α）在传代培养LoVo细胞中的表达。[方法]在常氧下传代培养LoVo细胞,MTT法检测细胞增殖,绘制生长曲线,Western blot检测传代后不同时间点HIF-1α蛋白表达。[结果]细胞生长曲线示LoVo细胞在传代后24h逐渐增加,72h后迅速增加。Westernblot示HIF-1R蛋白表达在传代后24h最高,随时间延长,表达量逐渐降低。[结论]常氧下HIF-1α在LoVo细胞中可低水平表达,传代可引起HIF-1α表达增高,HIF-1α 在促进细胞损伤的修复和细胞增殖中起重要作用。     

缺氧对人牙周膜细胞增殖、迁移能力及IGF-1表达的影响

目的：探讨缺氧对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）生物学活性的影响。方法：选择第5代hPDLCs,在严重缺氧（1% O2）、轻度缺氧（5% O2）和常氧（21% O2）3种环境下培养,用MTT法评价细胞增殖率,用倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞划痕试验评价细胞迁移能力,用免疫荧光染色染色研究细胞中低氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1,HIF-1）的表达及分布情况,用RT-PCR及Western blot检测HIF和IGF-1在不同氧浓度环境下的mRNA及蛋白表达水平。结果：①与正常hPDLCs相比,在1% O2浓度下,hPDLCs的数量在一个显微镜视野下明显减少,排列稀疏,结构发生改变。②hPDLCs的增长速率随着氧浓度的下降而减少,氧气浓度越低,增殖速率越慢。③在划痕处理后72 h,在3组不同氧浓度下,hPDLCs均向划痕区域迁移,但严重缺氧组的移动速率明显小于轻度缺氧和常氧组（划痕72 h：1% O2组0.917±0.023,5% O2组0.742±0.046,21% O2组0.453±0.039,F=530.237,P=0.002）。④HIF/DAPI染色结果显示在常氧条件下,HIF-1主要表达在细胞质中,随着氧气浓度降低,HIF逐渐转移至细胞核内。结论：缺氧能够抑制人牙周膜细胞的增殖和迁移能力,改变hPDLCs的形态。在缺氧条件下,HIF从细胞质转移到细胞核中,HIF和IGF-1的表达增加,提示缺氧微环境对人牙周膜细胞的生物学活性有一定影响。     

舒肝明目汤含药血清调节HIF1α-VEGF-Notch1通路活性影响脉络膜血管新生作用的研究

[目的] 探讨舒肝明目汤含药血清对大鼠脉络膜血管内皮细胞（CECs）增殖的影响及与HIF1α-VEGF-Notch1通路相关的调节机制。[方法] CECs细胞在常氧和低氧条件下进行培养,检测低氧条件下舒肝明目汤含药血清对CECs增殖移行能力的影响;并采用实时荧光定量PCR法（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）技术检测细胞中低氧诱导因子1α（HIF1α）、血管内皮生长因子（VEGF）和Notch1 mRNA和蛋白表达的水平。[结果] 与正常组相比,低氧组CECs的增殖移行能力明显提高（P<0.01）,CECs中HIF1α、VEGF和Notch1 mRNA及蛋白表达明显增多（P<0.01）.经含药血清处理后,CECs增殖移行能力较低氧组显着下降（P<0.01）,同时HIF1α和VEGF mRNA及蛋白表达降低（P<0.01,P<0.05）,而Notch1表达进一步增高（P<0.01）.[结论] 舒肝明目汤含药血清通过上调Notch1表达及下调HIF1α-VEGF通路活性抑制CECs增殖迁移,从而减少脉络膜新生血管生成。     

低氧对人结肠癌细胞HT-29体外侵袭转移潜能的影响

目的 探讨低氧与人结肠癌细胞HT-29恶性转化的关系,检测骨桥蛋白（osteopontin,OPN）、细胞核内核转录因子（NF—κB／p65）表达和MMP-2、MMP-9活性变化,以探索其恶性转化的潜在机制。方法 参照体内肿瘤的氧分压,建立低氧模型。MTT比色试验测定HT-29细胞的异质性黏附能力,Transwell侵袭试验判定其侵袭游走能力;将HT-29细胞低氧处理0、6、12、24、48h,明胶酶谱分析检测分泌的MMP-2、MMP-9活性变化,RT—PCR和Western blot检测OPN mRNA和蛋白表达,提取细胞核蛋白,Western blot检测细胞核内NF—κB／065蛋白表达。结果 低氧诱导24h后,HT-29细胞的异质性黏附能力、侵袭游走能力显著增加。低氧下6h,MMP-2、MMP-9活性无明显变化,随着低氧时间的延长,其活性逐渐显著上调,24h达顶峰,48h与24h无显著性差异。HT-29细胞在低氧的诱导下,其OPN mRNA和蛋白以及细胞核内NF—κB／065蛋白的表达趋势与MMP-2、MMP-9活性变化趋势类同。结论 低氧能诱导HT-29细胞异质性黏附能力、侵袭游走能力显著增加,MMP-2、MMPO活性上调而促使其向恶性表型转化。OPN—NF—κB可能是低氧下继HIF-1之外的另一重要调节途径,该途径与低氧诱导的恶性表型有密切关系。     

Dichloroacetate与肺动脉平滑肌细胞增殖及凋亡关系的研究

目的探讨Dichloroacetate（DCA）对低氧导致的肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖和凋亡的影响及其机制。方法原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞并传代纯化，实验用第3～8代细胞，实验共分3组：①对照组：不加特殊试剂，不作低氧处理；②低氧组：低氧处理24 h，不加特殊试剂；③低氧＋DCA组：低氧处理24 h，在进行低氧处理之前加入终浓度为0.1 mol/L的DCA。每组各6孔细胞。用免疫组化的方法检测并比较3组细胞的增殖和凋亡情况。结果低氧组增殖细胞核抗原（PCNA）的平均光度值是对照组的2.7倍，而低氧＋DCA组仅是对照组的1.7倍，Caspase-3在低氧组的表达最低，是对照组的1/4，低氧＋DCA组Caspase-3表达较对照组减低，但较低氧组明显增加，是低氧组的2倍。TUNEL法同样提示凋亡在低氧组最低，对照组最高，低氧＋DCA组居中。结论DCA可抑制PASMC增殖并促进其凋亡，可能对阻止肺动脉高压血管重构起一定作用。     

低氧对卵巢癌A2780细胞周期阻滞的影响

目的　探讨低氧及其诱导产生的低氧诱导因子 1α(HIF -1α) 对卵巢癌细胞周期阻滞的影响。方法　低氧培养复制人卵巢癌A2780细胞低氧模型。“诱骗法” (decoy) 阻断 HIF 1α的功能。A2780 细胞分成 8 组, A1: 常氧组, A2: 常氧+decoy, B1: 5% O2 低氧组, B2: 5% O2 低氧+ decoy, C1: 3% O2 低氧, C2: 3% O2 低氧+ decoy,D1: 1% O2低氧组, D2: 1% O2低氧+decoy。免疫细胞化学及Western blot、RT- PCR和流式细胞术分别检测各组细胞HIF- 1α蛋白, mRNA表达水平和分析细胞周期。结果　免疫细胞化学染色发现 HIF- 1α蛋白在低氧培养 A2780 细胞核中表达呈阳性; Western blot 检测发现低氧明显增加 HIF 1α蛋白的表达水平且随低氧程度加重而增加 (P<0 .05), decoy对其蛋白表达无明显影响; RT PCR检测发现低氧明显增加HIF 1αmRNA的表达水平, 但随低氧程度加重, 其mRNA表达水平无明显变化 (P>0. 05), decoy对其 mRNA表达无明显影响; 流式细胞术检测发现低氧时卵巢癌A2780细胞G0/G1期比率显著增加 (P<0 .05), G0/G1期比率随着低氧程度加重而增加 (P<0 .05), decoy能明显降低 G0/G1期细胞比率 (P<0 .05)。结论　低氧能明显诱导卵巢癌 A2780 细胞 G0/G1 期阻滞和 HIF -1α的表达,HIF -1α在     

NLRX1对低氧诱导的小胶质细胞极化的影响

背景 研究表明急进海拔4000 m以上高原低氧地区脑水肿发生率明显增加,小胶质细胞极化介导许多中枢神经系统炎性反应过程,NOD样受体家族X1(NOD-like receptor family X1,NLRX1)蛋白是一种炎症反应的负性调控因子;目前,低氧及NLRX1对小胶质细胞极化的调节作用尚不清楚.目的 分析低氧对小胶质细胞极化和NLRX1蛋白表达的影响,探讨NLRX1是否参与了小胶质细胞极化.方法 将小鼠小胶质细胞BV-2按处理条件分为3组:对照组(21％O2,5％CO2,37℃),实验组(1％O2,5％CO2,37℃处理6 h、12 h、24 h、48 h),M1型极化阳性对照组(LPS 1μg/mL处理24 h).干扰NLRX1基因的BV-2细胞分为3组:BV-2 sh-Control常氧组(21％O2,5％CO2,37℃),BV-2 sh-Control低氧组(1％O2,5％CO237℃处理6 h、24 h、48 h),BV-2 sh-NLRX1组(1％O2,5％CO237℃处理6 h、24 h、48 h).相差显微镜观察细胞形态变化;CCK-8测定细胞活力;流式细胞术检测小胶质细胞极化分型;RT-PCR分析TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10及TGF-β的mRNA水平;蛋白免疫印迹测定NLRX1蛋白水平.结果 低氧培养及LPS处理可见细胞突起变多变短,阿米巴样形态细胞增多;细胞活力在低氧2 h和6 h组增加,而在低氧12 h、24 h、48 h及LPS组降低(F=459.1,P<0.05);与对照组相比,低氧培养48 h后,CD11b++CD86+M1型小胶质细胞百分比下降,CD11b++CD86++CD206+M1和M2混合型细胞百分比升高,CD11b++CD206+M2型小胶质细胞比例均无明显变化;随低氧时间延长,促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β基因的mRNA水平逐渐降低(P<0.05)并在24 h达到最低,而抗炎因子IL-10基因的mRNA水平升高(F=11.38,P<0.05);NLRX1蛋白水平随低氧时间延长而升高;与sh-Control常氧组相比,sh-Control低氧组IL-1βmRNA水平下降(P<0.05),IL-10 mRNA水平低氧处理6 h和48 h均上升;与sh-Control低氧组相比,sh-NLRX1组低氧处理后IL-1βmRNA水平在24 h和48 h下降(P<0.05),IL-10 mRNA水平低氧处理后均下降(P<0.05).结论 低氧可上调NLRX1蛋白水平并减少小胶质细胞M1型极化,该过程可能通过NLRX1下调抗炎因子介导.     

低氧对大鼠海马神经干细胞增殖的影响

目的观察和分析不同低氧浓度对海马神经千细胞（NSCs）增殖的影响。方法在体积分数4％O2、1％O2及常氧环境下培养新生SD大鼠海马神经干细胞,观察低氧对神经球数量和直径的影响。结果（1）对海马神经干细胞增殖效率的影响：体积分数1％低氧组神经球数量明显低于常氧对照组,具有显著性差异（P〈0．05）;体积分数4％低氧组神经球数量有高于对照组的趋势,但不具有显著性差异。（2）对海马神经干细胞增殖速度的影响。在培养24h、36h和48h后,体积分数1％低氧组神经球的直径都小于对照组,且在24h和36h时具有显著性差异（P〈0．05）,在48h具有极显著性差异（P〈0．01）;在培养24h、36h和48h后,体积分数4％低氧组神经球的直径都大于对照组,在36h时具有显著性差异（P〈0．05）,在48h时具有极显著性差异（P〈0．01）。结论体积分数4％低氧浓度环境既提高海马神经干细胞的增殖效率也提高海马神经千细胞的增殖速麾体积分数1％低氧浓度环境则既抑制海马神经干细胞的增殖效率也抑制海马神经干细胞的增殖速度。提示中度低氧有利于海马神经干细胞的增殖：过度低氧不利于海马神经千细胞的增殖。     

肿瘤相关成纤维细胞通过分泌IL-6促进非小细胞肺癌的生长

目的 探究肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)生长的影响及可能机制.方法 分离NSCLC患者CAF及对照正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NF),体外观察CAF和NF对肿瘤细胞生长的影响,检测其分泌的细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)的变化,MTT法检测IL-6对肿瘤细胞生长的影响;裸鼠接种人肺腺癌PC9细胞,同时接种CAF或NF,观察成纤维细胞对肿瘤生长具有影响.结果 CAF能够在体外明显促进PC9细胞的增殖,CAF上清中IL-6表达明显增高,IL-6可促进肿瘤细胞的增殖;移植瘤模型进一步证实CAF对肿瘤生长的促进作用.结论 CAF可通过高分泌IL-6促进NSCLC的增殖.     

低氧对LLC-PK1细胞增殖及去分化的影响

目的：研究低氧对近端肾小管细胞株(LLC-PK1)细胞增殖和去分化的作用。方法：LLC-PK1细胞分别置于低氧（3％ O2）和正常氧（18％ O2）孵箱中培养,用3H-胸腺嘧啶掺入法和细胞计数,观察细胞增殖情况;以钠依赖葡萄糖和氨基异丁酸(AIB)转运为指标,观察细胞分化程度;用放射核素法测定蛋白激酶C(PKC)活性。结果：与正常氧培养比较,低氧培养16 h,3H-胸腺嘧啶掺入显著增加;培养24 h,细胞数显著增加;培养72 h,细胞摄取α-甲基糖甙和AIB显著降低。细胞低氧培养4 h,细胞膜与细胞质PKC活性比率增高,随后降至原先水平;但继续培养至24 h,PKC活性再次增高,直至72 h,表明PKC呈急性和持续双相激活。PKC抑制剂可显著抑制低氧诱导的3H-胸腺嘧啶掺入,并显著增加α-甲基糖甙和AIB转运。结论：慢性低氧可诱导LLC-PK1细胞的增殖和去分化,这些作用部分由PKC持续激活介导。     

缺氧时猪肺动脉平滑肌细胞中环氧合酶和血栓素合酶基因表达变化研究

应用培养的猪肺动脉平滑肌细胞经分子杂交和放射免疫检测发现:缺氧可使环氧合酶（COX）基因表达增加，缺氧6、24、48h，环氧合酶-2（COX-2）和环氧合酶-1（COX-1）mRNA水平分别是常氧组的3、1、1倍和1、2、2.7倍。并在不同时间缺氧（6、24、48h），平滑肌细胞条件培养基中6-酮-前列腺素Flα含量也显著高于相应对照组（P＜0.05），但缺氧对血栓素合酶（TXS）基因表达及血栓素入生成无明显影响。结果表明:缺氧可使平滑肌细胞COX基因表达及前列环素（PGI2）自分泌增加，它可能在平滑肌细胞缺氧收缩及增生反应中起调节作用。并且从缺氧时COX和PGI2生成的动态变化说明，缺氧时PGI2生成的迅速增多主要与COX-2mRNA表达增加有关。     

抑制低氧诱导因子-1α对PC12细胞存活的影响

目的通过抑制低氧诱导因子-1α转录活性,研究低氧诱导因子-1α在低氧诱导的细胞死亡中的作用。方法①将PC12细胞接种于12孔板,在20%常氧和3%低氧环境中培养24 h,在光镜下拍照并应用计数方法记录PC12细胞的生长情况。②将PC12细胞接种于96孔板,在常氧和低氧环境中培养24 h后,用细胞活力检测剂(a novel tetrazolium compound,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium inner salt,MTS)检测PC12细胞的生长情况。③在常氧和低氧条件下分别用5 nmol/L、50 nmol/L、500 nmol/L的低氧诱导因子-1α抑制剂棘霉素处理PC12细胞24 h和48 h后,用MTS法检测细胞活力。结果①细胞计数和MTS法检测细胞活力的结果均显示3%的低氧条件可明显诱导PC12细胞死亡。②不同浓度的低氧诱导因子-1α抑制剂棘霉素处理PC12细胞24 h之后,低氧和常氧的细胞活力没有显著区别。③不同浓度的低氧诱导因子-1α抑制剂棘霉素处理PC12细胞48 h之后,低氧不再促进细胞死亡,相反,低氧条件处理的细胞活力明显好于常氧。结论低氧会促使PC12细胞死亡,棘霉素抑制HIF-1α的转录活性24 h后,低氧对PC12细胞的促死亡作用减弱;48 h后,低氧组的细胞活力还可超过常氧组。这表明,低氧下过量的HIF-1α转录激活对细胞是有害的。     

低氧环境下三氧化二砷对人肺癌细胞增殖和凋亡的作用

目的：观察常氧和低氧环境下不同浓度的三氧化二砷（arsenic trioxide．As2O3）对人肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。 方法：在常氧（21％O2）和低氧（5％O2）环境下对人肺腺癌细胞A5-19进行体外培养，采用0、1、2、4μmol/L As2O3分别作用A549细胞12、24和48h，甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测A519细胞增殖抑制率；膜连蛋白V（Annexin V）／碘化丙啶（propidium iodide．PI）双标记法检测细胞凋亡。 结果：常氧和低氯环境下．1、2、4μmol／L As2O3均能显著抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡，且会随As2O3浓度的升高和作用时间的延长而增强；该作用在两种环境下的差异无统计学意义。结论：As2O3可抑制A549细胞增殖和促进细胞凋亡；在低氧环境和常氧环境下对A549细胞具有同样的细胞毒性作用。     

低氧对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞自噬水平及凋亡的影响

目的 比较裸鼹鼠成纤维细胞常氧与低氧条件下自噬与凋亡水平.方法 分别采用低氧（3％O2）与常氧（20％ O2）培养裸鼹鼠皮肤成纤维细胞,采用Western blotting、RT-PCR等方法检测自噬相关基因Beclin1、LC3的表达,并用流式细胞术检测低氧与常氧条件下裸鼹鼠成纤维细胞凋亡水平.结果 裸鼹鼠皮肤成纤维细胞在低氧与常氧处理24 h时,LC3 Ⅱ蛋白的表达量并无明显差异,而低氧处理48 h后LC3 Ⅱ蛋白的表达量显著高于常氧组,并且裸鼹鼠成纤维细胞随着低氧培养时间的延长,LC3 Ⅱ蛋白表达升高.流式细胞术结果显现低氧处理组裸鼹鼠皮肤成纤维细胞凋亡率显著低于常氧组.结论 裸鼹鼠皮肤成纤维细胞可以通过提高自噬水平适应低氧环境,这为今后深入研究裸鼹鼠耐低氧机制提供了参考.     

低氧诱导因子-1与其靶基因

低氧诱导因子 1(hypoxia induciblefactor 1,HIF 1)首先是1992年Semenza对经缺氧处理的Hep3B和HepG2 细胞株的核提取物进行电泳位移分析时发现的[1] 。HIF 1是细胞在缺氧条件产生的核蛋白 ,它与靶基因结合 ,促进其转录 ,使机体产生一系列缺氧适应反应。1　HIF 1的结构HIF 1以异