生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞的抑制作用

目的研究生存素(Survivin)反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌细胞系HS746T的抑制作用。方法应用SurvivinASODN转染胃癌细胞,设空白、脂质体和正义链对照组,100、200和400nmol/L反义链组。电镜下观察细胞超微结构,流质细胞术、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)及Westernblot法检测转染后2～48h细胞凋亡指数(AI),生长抑制率(IR),SurvivinmRNA和蛋白表达的变化。结果转染后反义链组均能够下调SurvivinmRNA含量和蛋白表达,凋亡细胞增多。转染后24h100、200和400nmol/L反义链组AI为14.8%、19.4%及53.8%;IR(%)为45.98±2.99、50.96±3.38、72.79±2.48,反义链组高于其他对照组。结论Survivin反义寡核苷酸能够抑制胃癌细胞增殖。     

ets-1反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901侵袭力的影响

目的　研究ets 1反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC 790 1侵袭力的影响。方法　应用ets 1反义、正义寡核苷酸转染SGC 790 1细胞 ,并设磷酸盐缓冲液 (PBS)对照组。转染后应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测ets 1mRNA的变化 ,应用Transwell小室检测体外侵袭力的变化 ,并应用裸鼠胃癌皮下转移模型检测对体内侵袭力的影响。结果　转染ets 1反义寡核苷酸后 ,ets 1mRNA表达降低 (0 .42 3± 0 .0 86vs 0 .815± 0 .176、0 .80 7± 0 .169,P <0 .0 1) ,侵过小室滤膜细胞数目减少 (97.1± 11.1vs 198.7± 18.3、2 0 5 .8± 2 2 .2 ,P <0 .0 1) ,裸鼠胃癌生长明显受到抑制 (1.2 8±0 .13vs 1.18± 0 .11、0 .60± 0 .11,P <0 .0 1)。结论　ets 1反义寡核苷酸能够抑制胃癌细胞株SGC 790 1的侵袭力     

整合素连接激酶反义寡核苷酸对胃癌细胞的作用

目的探讨全硫代修饰整合素连接激酶(integrin-linkedkinase,ILK)反义寡核苷酸(antisenseoligonucletide,ASODN)导入胃癌细胞株SGC-7901后对胃癌细胞的作用。方法(1)应用脂质体将ILK的ASODN导入胃癌细胞系SGC-7901,以RT-PCR及Western印迹方法检测作用后胃癌细胞ILK的mRNA和蛋白水平的变化;(2)应用MTS法及流式细胞术评价ILK的ASODN导入细胞后对其体外增殖和凋亡的影响。结果(1)转染后胃癌细胞ILK的蛋白表达水平明显下降,但mRNA水平无明显变化;(2)胃癌细胞生长受到明显抑制,抑制效应具有浓度依赖性,并可明显诱导细胞产生凋亡。结论ILK反义寡核苷酸导入胃癌细胞株SGC-7901后可以降低细胞内ILK的蛋白表达水平,并可体外抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡。     

生存素反义寡核苷酸联合 P53基因抑制胃癌细胞的生长作用

目的 研究生存素（survivin）反义寡核苷酸联合抑癌基因P53对人胃癌细胞系HS-746T的抑制作用及机制。方法 用P53基因和设计合成的survivin反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞系HS-746T进行处理，分空白对照组、反义survivin转染组，P53基因组，反义survivin加P53共转染组。采用细胞计数和四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力及细胞生长速度，用RT-PCR技术和Western印迹法分析survivin mRNA及蛋白质的表达情况，末端原位标记染色法（TUNEL）分析细胞凋亡指数。结果 不同时间反义survivin转染组、P53基因组和共转染组均对胃癌细胞的生长有抑制作用，且能够下凋胃癌细胞survivin mRNA和蛋白质的表达，共转染组较单独用药组效应明显增强，共转染组胃癌细胞凋亡指数高于另外两组。结论 Survivin反义寡核苷酸联合P53基因抑制人胃癌细胞的生长及诱导凋亡的作用大于单独应用一种药物。     

脂质体介导c-myc基因反义寡核苷酸对人肝癌细胞的生物学影响

目的 探讨应用脂质体（ＬＲ）介导ｃ－ｍｙｃ基因反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１（７７２１细胞）的生物学影响。方法 利用１ｍｇ／Ｌ ＬＲ包裹２μｍｏｌ／Ｌ ｃ－ｍｙｃ ＡＳＯＤＮ转染于培养的人肝癌细胞,观察其对瘤细胞的作用。结果 四唑盐比色实验（ＭＴＴ）法测定ＬＲ－ＡＳＯＤＮ组作用４８ｈ对瘤细胞生长抑制率（５５％）较无ＬＲ的ＡＳＯＤＮ组的生长抑制率（１５％）显著提高（Ｐ〈０．     

反义寡核苷酸在胃癌治疗研究中的现状

反义核酸技术是肿瘤基因治疗的策略之一,其基本原理是根据碱基互补原则,用人工合成或生物体表达的特定互补的DNA或RNA片断(反义核酸),以抑制或封闭专一靶基因表达的技术。反义核酸的来源总体上有3条途径:第一是人工合成RNA表达载体的构建;第二是利用诱导剂诱生反义核酸;第三是人工合成反义寡核苷酸,其中反义寡核苷酸因制备容易而得到广泛应用。一、反义寡核苷酸作用机制及如何保证其充分的细胞内浓度反义寡核苷酸分子与细胞内某一特定的基因核苷酸序列互补,可在一定条件下与DNA模板、mRNA模板链以碱基配对方式结合。反义寡核苷酸分子…     

E-cadherin反义寡核苷酸对肿瘤细胞浸润能力影响的研究

目的 了解上皮型钙黏附分子（E—cadherin）下调对肿瘤细胞浸润能力的影响。方法 选用人胰腺癌细胞株JHP-1，经E—cadherin反义寡核苷酸（ASODN）作用，应用免疫细胞化学染色、Westernblot法检测细胞E—cadhefin蛋白表达情况，细胞浸润MTT比色法检测该细胞对基底膜的浸润能力。结果 经E—cadherinASODN作用后，JHP-1细胞膜E—cadherin表达减弱，E—cadherin蛋白含量与对照组相比明显降低；JHP-1细胞对基底膜浸润能力明显高于对照组（P〈0．001）。结论 E—cadherin与肿瘤细胞的浸润能力有关。     

同源盒基因B2反义寡核苷酸对内皮细胞的影响

目的：探讨同源盒基因B2（HOXB2）反义硫代寡核苷酸对脐静脉内皮细胞增殖,表达的影响。方法：以脂质代介导将硫代磷酸修饰的同源盒基因HOXB2反义寡核苷酸转染入脐静脉内皮细胞,采用MTT和RT－PCR观察不同浓度反义寡核苷酸对内皮细胞增殖及HOXB2 mRNA表达水平的影响,结果：经质体介导的HOXB2反义寡核苷酸转染,内皮细胞增殖受到抑制并呈剂量依赖效应,同时HOXB2 mRNA表达水平显著下降。结论：HOB2在内皮细胞的增殖中起重要作用,提示对HOXB2的研究有可能为创面修复提供新的思路。     

反义寡核苷酸对丙型肝炎病毒转染胆管癌细胞的抑制作用

目的　探讨反义寡核苷酸 (ODNs)对丙型肝炎病毒 (HCV)转染胆管癌细胞中HCV的抑制作用。方法　通过半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测HCVmRNA表达的变化 ,观察不同浓度 (0～ 6 .0 μmol/L)的HCV核心区ODNs对体外丙肝病毒感染胆管癌细胞 (QBC939)的抑制作用 ;同时以裸鼠为研究对象进一步观察ODNs对HCV的体内抑制作用。结果　ODNs可有效地进入靶细胞在体外与HCV核心基因杂交结合 ,使HCVmRNA的表达明显降低 ,终浓度为 6μmol/L的ODNs作用下无HCVmRNA表达。动物实验观察ODNs组在裸鼠中的瘤体平均直径小于对照组、PBK HCVC转染组 (P <0 .0 1 ) ,成瘤率 2 5 % (5/ 2 0 )低于PBK HCVC转染组 65 % (1 3/2 0 ) (P <0 .0 5) ,成瘤时间 1 5 .3d较对照组 1 2 .0d、PBK HCVC转染组 1 0 .1d延迟 (P <0 .0 1 )。结论　反义寡核苷酸不失为治疗丙肝病毒感染胆管癌新的途径     

ets-1基因的反义寡核苷酸对胃癌体外血管生成拟态的影响

目的：研究eta-1基因的反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901体外血管生成拟态的影响。方法：将培养的SGC-7901细胞分为正义、反义和对照组；应用逆转录聚合酶链式反应检测eta-1 mRNA的变化，克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化，Transwell小室检测癌细胞体外侵袭力的变化，体外管状形成实验检测管道形成能力的变化。结果：转染ets-1反义寡核苷酸后，ets-1 mRNA表达降低。ets-1基因的反义寡核苷酸对SGC-7901细胞增殖有明显抑制作用，可以显著降低SGC-7901细胞的体外侵袭能力，抑制体外管道形成。结论：eta-1基因的反义寡核苷酸能够抑制SGC-7901细胞的体外血管生成拟态形成。     

脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸在人膀胱癌EJ细胞中的转染率及稳定性

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸（asODN）在脂质体介导下在入膀胱癌EJ细胞中的转染率、分布特点及稳定性。方法合成针对端粒酶RNA模板区的asODN，并行全硫代修饰或不修饰，5-FITC标记，脂质体介导转染人膀胱癌EJ细胞后分别于15、30min、1h以及以后每小时，在电镜下观察asODN在细胞中的表达，分布特点及稳定性。结果在脂质体介导下，未修饰型asODN转染细胞后15min开始表达，1～3h稳定表达于细胞中，表达率15％～20％，4h减退；修饰型asODN 15min开始表达，8h有56％～80％的高表达，12h开始消散。结论脂质体是一种有前途的膀胱癌非病毒基因治疗载体。     

细胞间粘附分子-1的反义寡核苷酸在小鼠心脏移植中的作用

目的 探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的反义寡核苷酸(ICAM-1-ASO)在小鼠心脏移植中对ICAM-1表达以及在排斥反应中的作用.方法 以BALB/c小鼠为供者,C57小鼠为受者,建立颈部异位心脏移植模型,移植后将受者随机分为3组,每组10只.分别为单纯移植组、对照寡核苷酸组(对照ODN)和ICAM-1-ASO组.各组移植后24 h开始经受者静脉分别注射双蒸水0.3 ml、对照ODN 10 mg/kg和ICAM-1-ASO 10 mg/kg,每天1次,连续5 d.移植后第8天各组随机取5只受者切取移植心,进行病理学检查;采用免疫组织化学方法对移植心组织中ICAM-1的表达进行观察;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对ICAM-1mRNA表达进行定量分析.每组中余下的小鼠继续观察直至移植心停跳,记录各组移植心的存活时间.结果 单纯移植组心脏移植后第8天可观察到明显的排斥反应,移植心心跳减慢、心律不齐、心律紊乱、搏动无力;病理学检查可见大量的淋巴细胞浸润,心肌间质水肿及大片心肌坏死;与移植前对比,内皮细胞和心肌细胞ICAM-1表达明显增强;ICAM-1mRNA表达也明显增加;移植心存活时间平均为(9.8±1.48)d.对照ODN组与单纯移植组差异无统计学意义.而ICAM-1-ASO组与单纯移植组相比,移植心ICAM-1的表达明显减弱,淋巴细胞浸润明显减少,排斥反应程度减轻;移植后第9天心律基本规整,偶有心律不齐,心跳力度较单纯移植组增强;移植心存活时间明显延长至(14.6±1.14)d.结论 ICAM-1-ASO抑制移植心组织中ICAM-1的表达和淋巴细胞的浸润,抑制移植后排斥反应的发生和发展,改善移植物的功能,延长移植物的存活时间,其作用具有序列特异性.     

细胞间粘附分子-1的反义寡核苷酸在异种心脏移植中的作用

目的探讨细胞间粘附分子1的反义寡核苷酸(ICAM1ASO)在小鼠→大鼠的异种心脏移植中对ICAM1表达以及排斥反应的作用。方法BALB/c小鼠和Lewis大鼠分别作为供者和受者,随机配对建立小鼠→大鼠的异种心脏移植模型。按照供者术前处理不同分为双蒸馏水对照组、寡核苷酸对照组和ICAM1ASO组。各组供者术前6h分别从右颈外静脉注射双蒸馏水、寡核苷酸和ICAM1ASO。术后48h各组取5只受者切取供心进行病理学检查;采用免疫组织化学方法对供心组织ICAM1的表达进行观察;半定量逆转录聚合酶链(RTPCR)法对ICAM1mRNA的表达进行定量分析。每组中余下5只受者继续观察直至供心停跳,记录供心存活时间。结果双蒸馏水对照组和寡核苷酸对照组在移植后48h可观察到供心心跳减慢,出现不同程度的心律不齐、心律紊乱,供心搏动无力;供心病理学检查显示心脏组织中广泛间质充血、水肿、出血及血栓形成,部分心肌髓样变性及溶解并伴有炎性细胞浸润;与移植前BALB/c小鼠心脏对比,内皮细胞和心肌细胞ICAM1表达明显增强;ICAM1mRNA表达也明显增加;供心存活时间分别为(53.6±3.58)h和(55.0±3.16)h。ICAM1ASO组供心ICAM1在蛋白水平和mRNA水平的表达均减弱;排斥反应程度也明显减轻;供心存活时间为(66.4±2.61)h;与寡核苷酸对照组和双蒸馏水对照组比较,差异有统计学意义。结论ICAM1ASO能明显抑制异种移植中供心ICAM1的表达,抑制异种移植后排斥反应的发生和发展,延长移植物的存活时间,其作用具有高度序列特异性。     

存活素反义寡核苷酸诱导肾癌细胞凋亡及机制的实验研究

目的观察存活素反义寡核苷酸封闭存活素的表达对肾癌细胞凋亡的影响。方法采用脂质体介导的存活素反义寡核苷酸技术转染肾癌细胞786-0。电镜观察细胞超微结构,免疫组织化学、Western blot及RT-PCR方法检测存活素蛋白及mRNA表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐比色法检测癌细胞抑制率。酶标免疫测定caspase-3活性。结果存活素反义寡核苷酸能显著降低存活素蛋白和mRNA的表达,并呈浓度和时间依赖效应。转染后的肾癌细胞出现了大量凋亡小体。400、600、800 ng／ml反义寡核苷酸细胞凋亡率分别为（10．54±0．72）％,（12．80±0．38）％,（22．30±1．23）％,较空白对照组[（6．05±0．48）％]和正义对照组[（5．70±0．41）％]显著增加（P〈0．05）。反义寡核苷酸各组caspase-3的相对活性分别为0．052±0．009,0．078±0．004和0．092±0．002,与空白对照组（0．027±0．008）和正义对照组（0．028±0．001）相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论存活素反义寡核苷酸能显著下调存活素基因表达,明显促进肾癌细胞786-0凋亡并抑制其增殖;可能是通过上调caspase-3表达来促进凋亡。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制肝癌的血管形成

目的 研究血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸（ODN）是否可以抑制人肝癌细胞系VEGF的蛋白表达,进而抑制肝癌的血管形成,探讨肝癌基因治疗的新方法。方法 人肝癌细胞系7721能表达VEGF,其培养上清液对牛主动脉内皮细胞（BAEC）的生长有促进作用。采用人工合成反义、正义ODN分别加入7721细胞培养液,比较7721细胞VEGF的表达以及各上清液刺激内皮细胞生长的受抑情况,即可了解ODN通过抑制VEGF的表达抑制肝癌的血管形成情况。结果 VEGF反义ODN明显抑制了人肝癌细胞VEGF的表达（灰度值：反义组122．6,正义组101．3,对照组106．3,P＜0．01）,且抑制率与剂量呈性关系（当剂量为1、2、5、10μmol/L时抑制率分别为：63．2％、82．4％、210．0％、287．5％）。结论 VEGF反义ODN能够抑制肝癌的血管形成,其有望成为抗肝癌的新一代基因治疗手段。     

端粒酶反义寡核苷酸对乳腺癌端粒酶活性及细胞生长的影响

目的　探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞端粒酶活性的影响及抑制端粒酶活性以控制乳腺癌细胞生长的可能性。方法　采用 10 μmol/L与端粒酶催化亚基 (hTRT )mRNA互补的反义寡核苷酸处理乳腺癌细胞 ;于处理后 2 4、72h用端粒重复序列扩增及酶联免疫吸附方法检测细胞端粒酶活性 ;于处理后 72h以流式细胞术测定细胞周期 ;于处理后 12 0h采用原位末端标记法检测细胞凋亡。结果　经hTRT反义寡核苷酸作用后 ,细胞端粒酶活性明显受到抑制 ,至作用后 72h ,端粒酶活性较对照组降低 65 .6% (P <0 .0 5 ) ;细胞生长明显受到抑制 ;细胞周期发生显著变化 :G0 /G1期细胞数增多 ,S期及G2 /M期细胞数则减少 ;细胞增殖指数由 0 .46降低至 0 .2 5 ;并可观察到凋亡细胞的出现 ,凋亡发生率为 12 .5 % ;而无义组及空白对照组以上各指标均无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论　端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性 ,抑制细胞生长和增殖 ,诱导细胞凋亡 ;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌具有广阔的前景。     

In vitro prompt killing by chlorhexidine of human colorectal carcinoma cell lines

Cell lines of human colorectal carcinoma were used to test the prompt killing effect of chlorhexidine in several concentrations of normal saline or distilled water 0.25g/L 5-fluorouracil in normal saline was used as positive control. Normal saline was used as negative control. It was found that chlorhexidine were more effective than 5-fluorouracil as shown by the proliferation of cells, the mitotic index and the morphology of cells. New passages of cells failed to proliferate and died in 19 days after chlorhexidine treatment. The authors came to the conclusion that 0.2g/L chlorhexidine in distilled water can be used for irrigation of the peritoneal and pelvic cavities on the end of colorectal carcinoma resection to prevent implantation metastasis and infection.     

Chemosensitization of breast carcinoma cells with the use of bcl-2 antisense oligodeoxynucleotide

This study was designed to observe whether the rates of apoptosis induced in the breast cancer cell line MCF-7 by 5-fluorouracil (5-FU) could be enhanced by transfecting bcl-2 antisense oligonucleotide (ASODN). In our experiment, bcl-2 ASODNs and control ODNs including untreated control, sense ODN and scrambled ODN, were transfected into MCF-7 cells. Changes in expression of the bcl-2 gene were examined by Western blot; cell growths were detected by MTT assay, and apoptosis rates were detected by flow cytometry (FCM). Expression of bcl-2 protein after transfection of bcl-2 ASODN was significantly lower than control ODNs. Moreover, incubation of MCF-7 with bcl-2 ASODN prior to 5-FU treatment caused remarkable loss of viable cells compared with all other control ODNs (P < 0.01). FCM showed the apoptosis rates for ASODN, untreated control, sense ODN and scrambled ODN (29.8 +/- 7.4)%, (8.0 +/- 2.3)%, (15.0 +/- 5.1)% and (16.5 +/- 7.1)%, respectively. Compared with control ODNs, ASODN achieved the strongest effect in terms of enhancing apoptosis (P < 0.01). These results suggest that combining bcl-2 ASODN with 5-FU led to synergistic cytotoxicity.     

125I偶联Ki-67反义核酸对人肾癌细胞生长及凋亡的调控作用

目的　探讨12 5I偶联Ki 67基因反义寡核苷酸 (12 5I ASODN)对人肾癌细胞生长及凋亡的调控作用。方法　采用氯胺 T法将 10 μmol/L浓度的Ki 67反义寡核苷酸 (ASODN)与12 5I偶联 ,12 5I ASODN放射浓度为 2 .5 9MBq/L ,脂质体包装后转导肾癌 786 0细胞系。采用免疫组织化学、Western印迹技术检测Ki 67表达 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测细胞增殖 ,免疫组织化学脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)法检测细胞凋亡。结果　12 5I ASODN处理组肾癌细胞Ki 67表达阳性率 (2 1.5± 1.2 ) %降低 ,Ki 67蛋白 (4 9.9± 4.5 ) %降低 ,与ASODN处理组(2 9.9± 0 .4) %、(82 .1± 1.9) %比较差异有非常显著性 (P均 <0 .0 1)。细胞增殖抑制率12 5I A SODN处理组 (4 7.9± 3 .6) %与ASODN处理组 (2 1.8± 2 .5 ) %比较差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。凋亡细胞阳性率12 5I ASODN处理组 (2 8.9± 1.3 ) %与ASODN处理组 (15 .7± 0 .5 ) %比较差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。结论　12 5I ASODN较之ASODN具有更强的抑制肾癌细胞增殖、促进凋亡作用。