国产HBV DNA荧光定量PCR试剂检测准确性的初步分析

目的 评价国产HBV DNA荧光定量PCR试剂检测结果的准确性.方法 美国Roche公司COBAS TaqMan HBV Test对标本的HBV DNA定量为标准,评价国产HBV荧光定量PCR试剂(PG)对不同滴度的标本的检测准确性.结果 在病毒载量分别为10~1、10~2、10~3、10~4、10~5、10~6、10~7(IU/mL)范围内的标本中,国产试剂检测结果与Roche定量结果的相关性分别为:-0.08011、-0.05056、0.105642、0.312181、0.908046、0.866175、-0.23295;结果为阴性(低于检测范围)的比例分别为:60%、30%、33.3%、8.3%、0、0、0.对于病毒载量高于10~7(IU/ml)的标本,国产试剂检测结果全部低于美国Roche定量结果,至少低一个数量级.结论 国产HBV荧光定量PCR试剂线性范围较窄,仅对病毒载量在10~5～10~6(IU/ml)范围的标本检测结果准确,对于低病毒载量,尤其是低于10~3(IU/ml)的标本,结果不可靠,假阴性率较高.而对于病毒载量高于10~7(IU/ml)的标本检测结果也欠准确.因此,建议对病毒载量低于10~4(IU/ml)的标本采用美国Roche试剂检测,对于高于10~7(IU/ml)建议稀释标本后重新检测.     

HBV-DNA定量与HBV-M检测的联合应用

HBV在患者体内的复制量、机体的免疫状态及治疗效果等 ,一直是医生和患者都十分关注的问题。HBV DNA定量检测解决了相关问题 ,为了解该手段与其他检验方法的关系 ,我们对 2 85份乙型肝炎 (乙肝 )病毒核酸 (HBV DNA)定量阳性的血清标本同时采用酶联免疫方法检测了乙肝血清免疫标志物 (HBV M)。标本来自哈尔滨医科大学第一临床医学院临床确诊的乙肝患者 ;FQ PCR诊断试剂盒由达安基因有限公司生产 ,仪器为美国PE公司生产的PE5 70 0型FQ PCR仪。ELISA诊断试剂盒由上海科华实业有限公司生产。每次实验均设系列阳性标准品、阴性对…     

两种检测乙型肝炎病毒DNA定量方法的比较与评价

目的：评价两种检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA方法的特点。方法用美国DIGENE公司生产的Hybrid Capture-I HBV DNA试剂(HC-I )和深圳匹基生物工程股份有限公司生产的HBV DNA定量荧光PCR检测试剂(PG),定量检测HBsAg阳性的慢性乙肝患者血清中的HBV DNA。结果 HC-I 试剂的HBV DNA检测阳性率达98.6豫,PG试剂达到94.6豫,两者的符合率为93.2豫。用系列稀释的患者血清,测定两种定量检测方法的灵敏度,PG试剂略高于GC-I 试剂。HC-I 在HBV DNA浓度较高时的定量关系精度较好,而在HBV DNA低滴度时,两者的定量误差均加大。用两种方法检测HBV DNA定量监测抗病毒药物治疗慢性乙型肝炎的疗效,所测定的HBV DNA滴度呈相同变化趋势。结论两种HBV DNA定量检测方法均较高的灵敏度,在抗病毒药物疗效观察方面有较高的应用价值。     

452例乙肝血清学标志物阳性孕妇母乳乙型肝炎病毒(HBV)DNA分析

目的采用敏感、特异的实时荧光多聚酶链反应(PCR)检测母乳乙型肝炎病毒(HBV)DNA,以探讨PCR在指导母乳喂养中的价值。方法应用PCR荧光定量检测方法检测母乳中乙型肝炎病毒(HBV)DNA复制情况。结果母血HBsAg,HBeAg及HBcAb阳性者其初乳排毒率为88.1%,HBsAg,HBeAb及HBcAb阳性者其初乳排毒率为41.1%,仅HBeAb与HBcAb阳性者其初乳排毒率为14.3%。结论产妇体内HBV复制活跃、乳汁排毒率高,母婴垂直传播的危险性大。母乳乙型肝炎病毒(HBV)DNA阳性率:大三阳(88.1%)>小三阳(41.1%)>双抗阳性(14.3%)。     

高灵敏度乙肝核酸定量与乙肝血清标志物的相关性分析

目的 探讨高灵敏度的荧光定量PCR检测的乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)与乙肝血清免疫标志物(HBV M)之间的相关性及临床意义.方法 选取234例患者标本,同时检测HBV DNA载量和HBV M.根据HBV M模式将结果分为五组,并对HBV DNA载量和HBV M之间的关系进行分析.选取177例乙肝患者,分析HBV DNA载量水平与HBeAg之间的关系.结果 Ⅰ组HBV DNA阳性率为77.4％;Ⅱ组HBV DNA阳性率为70.4％,两者之间差异无统计学意义(χ2=0.617,P ＞0.05).HBeAg表达水平与HBV DNA载量之间存在正相关关系(γ=0.812,P＜0.01).结论 高灵敏度HBVDNA与经典化学发光法的检测结果之间有很好的相关性.提高HBV DNA的检测灵敏度对于乙型肝炎患者,尤其对小三阳患者的病情和疗效评估具有重要的临床意义.     

慢性乙型肝炎患者HBV cccDNA定量方法的建立及应用

目的 建立慢性乙型肝炎患者HBV cccDNA荧光定量检测方法 ,并检测慢性乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA含量.方法 根据HBV DNA结构特点,于HBV cicada缺口两侧高度保守区域设计巢式PCR引物和探针,并优化PCR反应条件;选取175例慢性乙型肝炎患者,提取抗病毒治疗前后血清DNA,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切,进行rcDNA定量检测;分析影响血清HBV cccDNA检出率的相关因素,探讨血清HBV cccDNA载量与慢性乙型肝炎患者临床特征的关系.结果 慢性乙型肝炎患者血清中可检测到HBV cccDNA.血清HBV cccDNA检出率与血清HBV DNA载量相关.HBeAg阳性慢性乙肝患者血清HBV cccDNA载量高于HBeAg阴性慢性乙肝患者.结论 本方法 具有较好的敏感性,可用于HBV cccDNA的检测.     

一种国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂不同检测平台上的验证情况分析

目的 将圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)在不同荧光定量PCR系统进行性能验证,以给出该试剂盒在不同检测平台上的性能评价.方法 依据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)颁布的EP系列文件和《医学实验室质量和能力认可准则》相关文件,应用Roche LightCycler(R)480 Ⅱ实时荧光定量PCR系统及美国ABI 7500型实时荧光定量PCR系统对圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行临床样本精密度、正确度、可报告范围和检测下限的性能验证实验.结果 LightCycler(R)480 Ⅱ实时荧光定量PCR系统:2×106 IU/mL浓度水平批内精密度为1.38％,批间精密度为0.25％;2×104IU/mL浓度水平批内精密度为0.35％,批间精密度为0.79％.正确度验证可溯源标准品,偏倚均小于7.5％,符合厂家说明及文件要求.HBV DNA定量结果在2.1×102IU/mL至2.1×107IU/mL浓度水平范围内线性关系良好(R2=0.9994),临床可报告范围为2.1×102IU/mL～2.1×108IU/mL.该系统检测下限为148 IU/mL.ABI 7500型实时荧光定量PCR系统:2×106IU/mL浓度水平批内精密度为0.70％,批间精密度为1.34％.2.5×104IU/mL浓度水平批内精密度为1.18％,批间精密度为3.01％.正确度验证可溯源标准品,偏倚均小于7.5％,符合厂家说明及文件要求.HBV DNA定量结果在2×102IU/mL至2×10sIU/mL浓度水平范围内线性关系良好(R2 =0.9991),临床可报告范围为2×102IU/mL ～2×109IU/mL.该系统检测下限为203 IU/mL.结论 圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)在Roche LightCycler(R)480 Ⅱ实时荧光定量PCR系统及美国ABI 7500型实时荧光定量PCR系统上的性能验证结果均符合试剂说明书性能范围,检测结果无明显差异,均可准确快捷的对HBV DNA定量检测,为后续超敏定量工作奠定基础.     

荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA的意义

目的　研究HBV DNA与HBV M、乙型肝炎临床类型的相关性 (意义 )。方法　用荧光定量聚合酶联反应 (FQ PCR)检测 10 5例乙型肝炎患者HBV DNA含量 ,分析其在乙型肝炎 5项指标(HBV M)中的检出率 ,在乙型肝炎不同类型中的分布。结果　HBV DNA与HBV M对比 ,HBsAg( )、HBeAg( )、HBcAb( )患者的检出率为 97% ,HBsAg( )、HBeAb( )、HBcAb( )患者的检出率为75 % ,HBsAg( )、HBcAb( )患者的检出率为 6 0 % ,HBsAg( )患者的检出率为 4 0 % ,HBsAb( )、HBeAb( )、HBcAb( )的 (或HBsAb阳性、HBcAb阳性 )病例未检测到HBV DNA。表明HBV DNA与HBV M的抗原呈正相关 ,组间差异有非常显著意义 (P <0 0 5 )。急性乙型肝炎血清HBV DNA检出率为 72 2 % ,慢性乙型肝炎检出率为 75 % ,肝硬化检出率为 70 %。血清HBV DNA与乙型肝炎不同临床类型差异无显著意义 (P >0 0 5 )。结论　HBV DNA的复制状态与不同乙型肝炎临床类型无明显相关性。与乙型肝炎抗原呈正相关。     

高灵敏度乙肝HBV DNA检测在乙肝诊疗中的应用及临床意义

目的探讨高灵敏度乙肝HBV DNA检测在乙肝诊疗中的应用及临床意义。方法收集23例普通荧光定量PCR(常规)检测HBV DNA为阴性患者的血清,采用高灵敏度乙肝HBV DNA检测,将检测数据进行整理,与其临床实验室资料相结合,进行综合分析,归纳总结。结果23例国产乙肝荧光定量 PCR检测均为阴性患者,使用高灵敏度乙肝HBV DNA检测结果为13例阳性（最低检测限20IU/mL）,阴性10例,阳性检出率为56.52%,显然高灵敏度乙肝 HBV DNA检测的灵敏度高于常规检测方法。结论高灵敏度乙肝HBV DNA检测,其检测敏感性远高于常规检测方法,能检测到体内低水平的 HBV DNA,结合患者其他实验室资料及用药史综合分析,对乙型肝炎诊断和治疗具有重要的指导意义。     

不同类型肝炎妊娠期妇女中HBV DNA与PreS1Ag表达关系的研究

目的 探讨妊娠期妇女血清中乙肝病毒(HBV DNA)与前S1抗原(PreS1 Ag)表达的相关性.方法 以2013年1月至2014年1月在本院进行乙肝病毒(HBV DNA)检测的558例妊娠期妇女为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术检测血清中HBV DNA表达载量,酶联免疫法检测血清中PreS1 Ag的表达.结果 221例HBV DNA阳性标本中,PreS1 Ag的阳性率为88.6％(196/221),阴性率为11.4％ (25/221);337例HBV DNA阴性标本中,PreS1 Ag的阳性率为56.9％(192/337),阴性率为43.1％ (145/337),其差异有统计学意义(P＜0.05);在HBV DNA阳性的标本中,随着病毒载量递增,PreS1Ag阳性率并未升高(P＞0.05).结论 HBV DNA的表达与PreS1Ag阳性率具有一定的相关性,但病毒载量与PreS1 Ag阳性率不相关,HBsAg/HBeAg/HBc三项阳性(俗称“大三阳”)模式中HBV DNA与PreS1 Ag表达具有相关性.HBsAg/抗HBe/抗HBc三项阳性(俗称“小三阳”)模式中HBV DNA与PreS1 Ag表达无相关性.提示对于小三阳的妊娠期女性HBV DNA监测更具临床意义.     

HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测分析

目的 探讨血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)检测在HBeAg阴性慢性乙型肝炎中的诊断价值和临床意义.方法 分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和实时荧光定量PCR法检测306份慢性乙型肝炎患者血清中HBV.M、HBV-LP和HBV.DNA.结果 (1)在未经过抗病毒治疗的患者中,HBV-LP阳性率和HBV DNA无明显差异,而且HBV-LP的吸光度(A值)和HBV DNA拷贝数呈正相关性;(2)在经过抗病毒治疗的患者中HBV-LP的阳性率明显高于HBV DNA.结论 血清中乙型肝炎病毒大蛋白水平能反映HBV感染者体内HBV复制程度,对于判断HBeAg阴性患者体内复制具有重要的临床意义.     

探讨携带乙型肝炎病毒产妇母乳喂养安全性检测评价指标

目的 探讨乙肝产妇母乳喂养的安全性检测评价指标.方法 荧光定量PCR检测252例乙肝产妇的血清及乳汁HBV DNA.结果 乙肝产妇血清与乳汁的HBV DNA总阳性率无统计学差异(P＞0.05),双阳乙肝产妇血清及乳汁HBV DNA阳性率明显高于单阳乙肝产妇(P＜0.01).结论 同时检测HBeAg、血清及乳汁的HBV DNA对指导乙肝产妇母乳喂养有重要意义.     

AmpliSenSOr-PCR定量检测血清乙型肝炎病毒

聚合酶链反应(PCR)技术应用于乙肝病毒的诊断具有特异性强、敏感度高、早期诊断等特点,但只能对HBV DNA做定性检测,且易产生交叉污染和假阳性等问题.我们应用AmpliSensor-PCR检测方法,杜绝了常规PCR所存在的缺点,直接由患者血清中检测HBV DNA的精确含量,探讨不同组别乙肝患者血清标志物的拷贝数在临床上的意义.     

套叠式（Nested） PCR检测乳汁中HBV—DNA

本文应用Nested—PCR技术．检测752例血清HBV—DNA阳性(PCR检测)产妇和15例血清HBV-DNA阴性(PCR检测)产妇乳汁中的HBV—DNA。结果表明：52例阳性产妇乳汁中HBV-DNA经第一次扩增后．12例HBV—DNA阳性。经第二次扩增后，40例阳性(阳性率76．9％)；15例阴性产妇乳汁中HBV-DNA经两次扩增后均为阴性。作者认为，Nested—PCR技术是检测血清HBV-DNA阳性产妇乳汁是否排泌HBv的简便、灵敏、特异的方法。乳汁中含有HBV应停止哺乳。     

血清中乙肝病毒全长cccDNA的检测及其临床意义

共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)是乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)的复制中间体.HBV复制活跃时,cccDNA可从损伤的肝细胞释放入血.因此,血清中出现cccDNA是肝细胞受损的早期标志~([1]).本研究用长链PCR方法从血清中扩增HBV cccDNA全序列,结合血清中HBV PreS1抗原、HBV标志物和丙氨酸转氨酶(ALT)的检测结果,分析血清中cccDNA检出率与HBV PreS1抗原表达及肝细胞损伤的相关性.     

运用FQ-PCR技术检测HBV母婴传播

荧光定量PCR(FQ-PCR)技术是近年来发展较快的基因检测技术,用于检测乙型肝炎病毒(HBV)可从分子生物学水平直接测定HBV遗传物质DNA,是检测病毒存在,复制的最直接的指标,我们将该项技术运用于检测HBV母婴传播,取得良好效果,报告如下.     

乙肝母婴阻断"成功"儿童外周血中检出HBV DNA

目的 检测乙型肝炎母婴阻断成功儿童血清HBV DNA,提出应该完善母婴阻断效果评价指标的建议.方法 采集乙肝疫苗母婴阻断后HBsAg阴性的儿童血清标本,经试剂盒提取HBVDNA,采用巢式PCR方法 扩增HBV DNA S区基因片段后纯化测序.结果 140例儿童血标本中,12例HBV DNA阳性,阳性率8.6%;S基因测序检测未发现突变株.结论 鉴于血清学检测方法 敏感性低于PCR扩增方法 .在评价乙型肝炎母婴阻断效果时,加入HBV DNA指标,可使其更完善.     

尿液中乙肝病毒DNA对HBV相关肾炎患者的诊断效果

目的 了解尿液中乙肝病毒DNA对HBV相关肾炎患者的诊断效果,为更好的诊断HBV相关肾炎(HBV-GN)提供依据.方法 选取于2013年10月～2014年10月在我院肾内科就诊的HBsAg阳性或血清HBV-DNA阳性者60例作为Ⅰ组、HBsAg阴性且清HBV-DNA阴性者60例作为Ⅱ组、同期在我院健康体检中心体检的健康者60例作为Ⅲ组.采用PCR方法检测各组研究对象尿中HBV DNA水平.结果 Ⅰ组中有38例(63.33％)患者尿HBV DNA呈阳性,Ⅱ组、Ⅲ组中无患者尿HBV DNA呈阳性.尿HBV DNA、血HBsAg和血HBeAg联合检查诊断HBV-GN的灵敏度和特异度均是最高的,其次为尿HBV DNA检测.结论 联合检测尿HBV DNA、血HBsAg和血HBeAg诊断HBV-GN效率比较高,尿HBV DNA可能作为HBV-GN的一种简单、无创、患者容易接受的辅助诊断指标.     

阿德福韦治疗慢性乙型肝炎过程中HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶水平的变化

目的 研究新药阿德福韦(ADV)治疗慢性乙型肝炎过程中HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平的变化情况,从而指导临床用药. 方法 采集16例慢性乙型肝炎(CHB)患者用ADV治疗前血清,即基线(BL)血清,以及持续服药12、16、28、40、48、52、68、80、92周共10个时段的系列血清.用荧光定量PCR法检测其HBV DNA的水平.用全自动生化仪检测其ALT的水平. 结果 从BL到48周时段,HBV DNA中位数显著下降;在52周,HBV DNA中位数出现反弹;从52至92周时段,HBVDNA中位数再次下降.16例不同时段血清ALIT中位数的变化与HBV DNA中位数变化一致.ADV治疗12周时,HBV DNA中位数较基线下降了2.34 lg拷贝/ml,无HBV DNA阴转、HBeAg血清学转换;治疗28周时,HBV DNA中位数较基线下降了2.91 lg拷贝/ml,有2例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换;治疗40、48周时,HBV DNA中位数较基线分别显著下降了3.83、3.95 kg拷贝/ml,有4例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换;治疗52周时,HBV DNA中位数较基线下降了2.90 lg拷贝/ml,出现反弹,但仍有4例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换;治疗68、80、92周时,HBV DNA中位数较基线显著下降了3.51、3.81、4.01 lg拷贝/ml,分别有4、6、6例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换.16例患者接受ADV治疗的两年中,有9例患者分别从16、28、40周开始HBV DNA的水平显著下降;7例患者HBV DNA的水平下降但不显著. 结论 阿德福韦治疗慢性乙型肝炎过程中,HBV DNA及ALT中位数的变化情况基本一致.52周时段HBV DNA水平出现反弹,提示52周可能是抗病毒的关键时段.     

荧光定量聚合酶链反应检测血清中HBV-DNA

目的 :研究荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测HBV DNA对辨别病毒复制的临床意义。方法 :采用FQ PCR和ELISA方法 ,检测 79例患者血清HBV DNA拷贝数和免疫学血清指标。结果 :2 6例HBsAg、HBeAg、抗 HBc均阳性的标本 ,HBV DNA也全部阳性 ,平均拷贝数为 2 .7× 10 5/mL。 8例HBsAg、HBeAg阳性的标本 ,HBV DNA也全部阳性 ,平均拷贝数为5 .2× 10 4/mL。 2 1例HBsAg、抗 HBe、抗 HBc均阳性的标本HBV DNA阳性率为 6 6 .7% ,平均拷贝数为 3.1× 10 4/mL。 9例HBsAg阳性的标本HBV DNA阳性率为 11%。平均拷贝数为1.4× 10 3 /mL。结论 :荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA可以更加准确地判断HBV的感染和复制情况。