带状疱疹患儿外周血单个核细胞Toll样受体2.9mRNA的表达

目的 通过检测带状疱疹患儿外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体2.9(TLR2.9)mRNA的表达变化,探讨TLR2和 TLR9在儿童带状疱疹发病中的作用.方法 采用实时定量PCR方法检测带状疱疹患儿、成人各10例PBMCs上TLR2、9mRNA的表达水平,并与10例正常儿童作对照.结果 ①带状疱疹患儿PBMC上TLR2.9mRNA表达水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);②带状疱疹患儿PBMC上TLR2mRNA表达水平高于成人患者,差异有统计学意义(P＜0.05);带状疱疹患儿PBMC上TLR9mRNA表达水平与成人患者差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TLR2.9mRNA可能参与了患儿机体对水痘-带状疱疹病毒的的识别及抗病毒免疫,带状疱疹患儿TLR2mRNA的表达水平高于成人,可能是儿童带状疱疹发病低于成人的原因之一.     

Toll样受体4、9mRNA在带状疱疹患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的研究带状疱疹患者外周血单个核细胞中Toll样受体TLR4、TLR9mRNA的表达情况,并探讨其与带状疱疹的发病关系。方法采用实时荧光定量PCR方法检测30例带状疱疹患者和20例正常人的外周血单一核细胞中Toll受体TLR4、TLR9mRNA的表达水平。结果带状疱疹患者与正常人对照,其外周血单一核细胞中TLR4、TLR9mRNA的表达水平均明显升高,具有显著的统计学差异（P〈0.05）。结论带状疱疹患者外周血单一核细胞中TLR4、TLR9mRNA的表达水平均明显升高,说明在带状疱疹患者的发病过程中,TLR样受体4、9可能参与了水痘-带状疱疹病毒的识别及抗病毒免疫。     

寻常性银屑病患者外周血单个核细胞TLR4mRNA表达与TNF—α相关性

目的探讨寻常性银屑病患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体4（Toll-like receptor4,TLR4）的表达变化及其与血清中TNF—Q浓度的关系。方法采用荧光定量PCR技术检测寻常性银屑病患者外周血单个核细胞TLR4mRNA的表达,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清TNF—α的浓度。另取30例正常人作为对照组。结果寻常性银屑病患者外周血中PBMC的TLR4mRNA的表达较正常人对照组明显增高（P〈0．01）,TLRdmRNA表达与血清TNF-α浓度变化呈正相关（P〈0．05）。结论通过单核吞噬系统TLR4介导的,TNF-α大量产生,激活炎症级联反应可能是银屑病发病的重要病理机制之一。     

乙肝病毒携带者PBMC细胞中Toll样受体2表达水平与乙肝病毒增殖相关性研究

目的：探讨乙肝病毒（HBV）增殖与无症状乙肝病毒携带者（ASC）外周血中Toll样受体2（TLR2）表达水平的相关性。方法：分离乙肝病毒携带者和健康志愿者外周血单个核细胞,分别用免疫细胞化学染色方法检测TLR2在细胞表面的表达情况;用RT-PCR方法检测TLR2的mRNA水平;用ELISA法检测乙肝病毒携带者和健康志愿者血清中TLR2活化后产物TNF-α的表达水平。结果：HBV复制活跃组的外周血单个核细胞中TLR2在蛋白水平和mRNA水平表达明显低于HBV复制不活跃组和健康对照组;HBV复制活跃组血清中TNF-α水平显著低于HBV复制不活跃组。结论：乙肝病毒携带者外周血单个核细胞TLR2的表达及活化与乙肝病毒的增殖有相关性。     

尖锐湿疣患者外周血单个核细胞TLR2、4mRNA表达的研究

目的研究尖锐湿疣患者外周血单个核细胞Toll样受体2（TLR2）mRNA、TLR4mRNA的表达情况。方法运用SYBERGreenI实时定量PCR方法检测尖锐湿疣患者29例外周血单个核细胞TLR2、TLR4的mRNA表达水平,并与30例正常人作对照。结果与正常人相比,尖锐湿疣患者外周血单个核细胞TLR2mRNA的表达水平变化不明显（P〉0．05）,TLR4mRNA的表达水平有所降低,但差别无统计学意义（P〉0．05）。结论尖锐湿疣患者外周血单个核细胞中TLR2、TLR4的表达并未升高,甚至略有所降低,可能与CA患者免疫功能受到抑制有关。     

Toll样受体在卵巢癌发生发展中作用机制的初步探讨

目的:观察卵巢癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs) mRNA的表达水平,研究高表达TLRs在卵巢癌发病中的可能机制?方法:研究对象包括卵巢癌24例?妇科良性疾病22例及同期健康体检女性22例?采用密度梯度离心法分离PBMC后,提取总RNA,并逆转录为cDNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测TLR1~TLR9 mRNA的表达水平;选择mRNA高表达的TLRs的相应激动剂刺激PBMC,采用Real-time PCR检测PBMC中前炎症细胞因子白细胞介素(IL)-1β?IL-6?IL-12P40的mRNA表达水平?结果:各组PBMC中TLR1~TLR9均有表达;卵巢癌组PBMC 中TLR2?TLR6表达量显著高于健康对照组(TLR2:F = 3.27,P < 0.05;TLR6:F = 2.21,P < 0.05);卵巢癌组TLR2的表达量明显高于妇科良性疾病组(F = 3.24,P < 0.05);良性疾病组TLRs表达水平与健康对照组间无显著性差异;各组PBMC经TLR2的激动剂HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-1β?IL-6?IL-12P40 mRNA表达明显增强,分别为健康对照组的2.24?2.94?2.35倍(P < 0.05),为良性疾病组的2.02?2.50?2.85倍 (P < 0.05);良性疾病组与健康对照组比较无显著改变(F = 1.11,F = 1.18,F = 0.82,P > 0.05)?结论:卵巢癌患者PBMC中TLR2?TLR6表达水平显著增高,经其介导的炎症因子IL-1β?IL-6?IL-12P40 mRNA表达水平的改变可能在卵巢癌的发生发展中发挥作用?     

龙胆泻肝配方颗粒对生殖器疱疹患者外周血白细胞Toll样受体表达的影响

目的 探讨龙胆泻肝配方颗粒对生殖器疱疹患者外周血白细胞Toll样受体(TLRs)的作用,进一步研究其抗病毒感染免疫反应的机制.方法 采用荧光定量RT-PCR的方法 检测了50例湿热型生殖器疱疹患者龙胆泻肝配方颗粒治疗前后外周血白细胞TLR1～TLR9mRNA的表达情况,并以10例正常人作为对照.结果 治疗前患者外周血TLR1～TLR9mRNA的表达水平与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).其中TLR2、TLR3、TLR5较正常值高,TLR1、TLR4、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9较正常值低.治疗后,患者血清TLR1～TLR9mRNA的表达水平均较治疗前倾向于正常.结论 龙胆泻肝配方颗粒能调节生殖器疱疹患者外周血Toll样受体的表达水平,在启动抗病毒的固有免疫反应中起着重要作用.     

葡萄膜炎患者外周血单个核细胞TLR9、TLR7 mRNA的表达及意义

目的 观察葡萄膜炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体9(TLR9)、Toll样受体7(TLR7)mRNA的表达.方法 收集42例葡萄膜炎患者(其中发病与感染相关者12例,与感染无关者30例)和正常对照组(30例)外周血,采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离PBMCs,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMCs TLR9、TLR7 mRNA表达的相对含量.结果 与感染相关葡萄膜炎患者PBMCs TLR9、TLR7 mRNA相对含量显著高于与感染无关葡萄膜炎患者和正常对照组(P<0.01),与感染无关葡萄膜炎患者与正常对照组比较TLR9、TLR7 mRNA相对含量差异无统计学意义(P>0.05).结论 TLR9、TLR97的表达在与感染相关葡萄膜炎患者中显著升高,提示感染因素在葡萄膜炎中的作用可能通过TLR9、TLR7介导.     

Toll样受体在早发型重度子痫前期 患者外周血和胎盘组织中的表达及临床意义

目的 探讨子痫前期患者外周血及胎盘组织中Toll样受体4(TLR4)的表达及其临床意义.方法 选取2015年3月至2016年3月深圳市龙华人民医院产一科收治的早发型重度子痫前期患者47例为观察组,以及同期入院体检健康的正常孕妇47例为对照组.采用RT-PCR检测患者外周血单个核细胞TLR4 mRNA表达,采用免疫组织化学法检测患者胎盘组织TLR4蛋白的表达.结果 观察组和对照组外周血单个核细胞TLR4 mRNA的相对表达量分别为(0.69±0.14)和(0.27±0.05),观察组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组胎盘组织TLR4蛋白表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 早发型重度子痫前期患者血清和胎盘组织中TLR4的水平明显升高,提示TLR4可能参与了早发型重度子痫前期的发病.     

Toll样受体2、9mRNA在感染性早产患者外周血单个核细胞的表达及意义

目的探讨感染性早产患者外周血单个核细胞Toll样受体2、9mRNA的表达。方法收集31例早产患者部分胎盘胎膜组织行病理检查,根据病检分为早产感染组(17例)和早产非感染组(14例),门诊进行孕检的正常孕妇作为正常对照组(10例)。(1)采用酶联免疫吸附法测定血清中的IL-6水平;(2)应用实时定量PCR技术检测早产患者和正常对照组孕妇外周血单个核细胞TLR2、9的mRNA表达水平。结果（1）TLR2mRNA在早产感染组患者外周血单个核细胞的表达水平显著高于早产非感染组和正常对照组（P＜0.05）;而TLR9mRNA在早产感染组、早产非感染组和正常对照组外周血单个核细胞的表达水平无差异(P＞0.05);（2）早产感染组患者血清中IL-6水平明显高于早产非感染组和正常对照组,差异有显著性（P＜0.05）,但早产非感染组和正常对照组血清中IL-6水平比较,差异无显著性(P＞0.05);（3）感染性早产患者外周血TLR2mRNA的表达水平与血清中IL-6水平呈正相关(r=0.778, P<0.01）而TLR9mRNA的表达与IL-6不存在相关关系(r=0.0355,P=0.162)。结论感染性早产患者外周血单个核细胞表面TLR2mRNA表达增强,提示TLR2参与了感染性早产的发生发展过程,其与血清中IL-6水平成正相关,可作为早期预测早产宫内感染的指标。     

小儿分泌性中耳炎耳积液中CD44和TLR4表达与腺样体肥大的相关性

目的 检测小儿分泌性中耳炎患儿耳积液中分化簇44(CD44)和Toll样受体4(TLR4)表达水平,并分析二者与腺样体肥大的相关性。方法 选取纳入80例小儿分泌性中耳炎患儿为观察组,选取同期接受健康体检的100例健康儿童为对照组。检测观察组患儿及对照组儿童耳积液中CD44和TLR4表达水平,并分析二者与腺样体肥大的相关性。采用Pearson法分析耳积液中CD44与TLR4表达水平的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CD44、TLR4对腺样体肥大的诊断价值。结果 CD44、TLR4在观察组患儿外周血、耳积液中的表达水平相较于对照组儿童外周血中的表达水平显著升高(P<0.05);CD44、TLR4在观察组患儿耳积液中的表达水平相较于观察组患儿外周血中的表达水平显著升高(P<0.05);CD44、TLR4在观察组浆液性耳积液中的表达水平相较于黏液性耳积液中的表达水平显著降低(P<0.05);CD44、TLR4在观察组慢性中耳炎患儿耳积液中的表达水平相较于急性中耳炎耳积液中的表达水平显著降低(P<0.05);CD44、TLR4在腺样体肥大中耳炎患儿耳积液中的表...     

冠心病患者外周血单个核细胞Toll样受体4表达的测定及临床意义

目的:观察Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)在冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)的表达水平,并探讨其与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系.方法:流式细胞术检测50例冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者及40例健康对照者PBMCs TLR4的表达;生化常规测定所有入选者血脂水平;应用TaqMan荧光探针技术建立实时荧光定量RT-PCR方法,在GeneAmp 5700型检测仪上测定了入选对象PBMCs中TLR4 mRNA的含量.结果:PBMCs的阳性率为(29.5±7.9)%,显著高于健康对照组的阳性率[(23.4±7.7)%,P<0.01];冠心病组TLR4 mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组[(5.3±3.8)×106 vs (1.8±1.4)×106, P<0.01];而冠心病血脂正常组和血脂异常组的TLR4阳性率和mRNA平均拷贝数均无明显差异.结论:TLR4主要表达于外周血单个核细胞,在CAD患者中其阳性率升高;CAD患者TLR4 mRNA的含量显著高于健康对照组;TLR4的阳性率和mRNA含量高低与血脂无关;TLR4及其介导的天然免疫应答与动脉粥样硬化的发生发展存在一定的相关性.     

溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞TLR4的表达及其与TNF-α和IL-6的相关性

目的 分析溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达及其与血清TNF-α和IL-6浓度的相关性,初步探讨TLR4在溃疡性结肠炎发病中的作用.方法 采用实时荧光定量PCR方法检测60例溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞内TLR4 mRNA的水平,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清T...     

外周血TLR2及TLR4表达与血管性痴呆的相关性

目的探讨中国汉族人群Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)外周血表达水平及其与血管性痴呆(VaD)的相互关系。方法采用病例-对照研究的方法,选择性别、年龄等相关因素相匹配的中国汉族VaD病人和健康人(对照组)各200例,应用聚合酶链反应(PCR)技术和流式细胞仪定量检测外周血单核细胞表面TLR2和TLR4蛋白和mRNA的表达水平。结果 VaD组TLR2和TLR4的mRNA与蛋白表达水平均明显高于对照组(t=12.30~63.50,P<0.05)。多元线性回归分析显示,两组TLR2蛋白表达水平及TLR4的mRNA和蛋白表达水平与VaD之间存在显著相关(P<0.05)。结论外周血中TLR2和TLR4的表达水平与VaD的发病之间存在相关关系。     

阿托伐他汀对强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞体外干预后Toll样受体2、Toll样受体4的表达变化研究

目的：观察天然免疫分子Toll样受体2（TLR-2）、Toll样受体4（TLR-4）在强直性脊柱炎（ankylosing spondyli-tis,AS）患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）的mRNA水平表达,研究其与AS发病的相关性,并探讨阿托伐他汀是否对AS患者TLR-2、TLR-4的表达有影响。方法：研究对象包括AS活动期患者30例和健康志愿者30例,分别抽取外周静脉血分离单个核细胞,提取细胞mRNA。采用半定量的RT-PCR方法,检测AS患者和健康志愿者外周血单个核细胞中TLR-2、TLR-4的mRNA,通过灰度分析与β-actin相比得到目的基因相对表达水平。分离12例AS活动期患者静脉血外周血单个核细胞体外培养,并给予阿托伐他汀（终浓度为0.01 mmol/L）处理,以自身非处理细胞为对照,24 h后收获细胞,提取mRNA,采用RT-PCR方法,观察阿托伐他汀对细胞TLR-2、TLR-4的mRNA表达的影响。所有数据采用配对t检验。结果：AS患者TLR-2 mRNA的相对表达水平为（1.59±1.43）,较健康志愿者（0.06±0.039）高（P〈0.05）;AS患者TLR-4 mRNA的相对表达水平为（0.60±0.73）,较健康志愿者（0.06±0.039）高（P〈0.05）;阿托伐他汀干预组TLR-2和TLR-4的mRNA表达均低于不干预对照组（P〈0.05）。结论：AS患者PBMC的TLR-2、TLR-4的表达均较健康志愿者高,提示TLR-2和TLR-4可能参与了AS的发病。阿托伐他汀可下调AS患者PBMC的TLR-2和TLR-4的表达,可能是AS新的有价值的治疗靶点之一。     

刺血加艾灸疗法对急性痛风性关节炎大鼠外周血单个核细胞TLR2与TLR4 mRNA表达的影响

目的探究刺血加艾灸疗法治疗急性痛风性关节炎的作用机制。方法将40只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组、刺血艾灸组,每组10只,采用尿酸钠混悬液右后踝关节注射法复制痛风性关节炎大鼠模型。分别在模型复制时、模型复制后24h及灌胃治疗后3d测量右后足肿胀度;灌胃3d后,从腹主动脉取血,检测血清尿酸(uric acid,UA)含量及外周血单个核细胞中Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)mRNA的表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠足肿胀度,血清UA含量及TLR2、TLR4mRNA表达水平均显著上调(P0.01)。刺血艾灸组足肿胀度,血清UA含量,TLR2、TLR4mRNA表达水平较模型组均显著下调(P0.05,或P0.01),且显著低于秋水仙碱组(P0.05,或P0.01)。结论刺血加艾灸疗法能够降低痛风性关节炎大鼠的关节肿胀度及血清UA水平,其机制可能与外周血单个核细胞中TLR2与TLR4mRNA的表达水平下调有关。     

传染性单核细胞增多症患儿外周血淋巴细胞亚群、 细胞因子、TLRs 的表达变化及其临床意义

目的 检测Epstein-Barr 病毒（EBV）感染的传染性单核细胞增多症（IM）患儿外周血淋巴细胞亚群、 细胞因子及Toll 样受体7（TLR7）、TLR9 的表达变化及其临床意义。方法 选取2019 年1 月—2019 年 12 月杭州市儿童医院收治的98 例感染EBV 致IM 急性期患儿作为研究对象,另外选择50 例EBV 感染阴性 儿童作为对照组。采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验分别检测IM 患儿急性期、恢复期（病程满1 个月后 复查）外周血淋巴细胞亚群和细胞因子水平。另外分离外周全血单个核细胞（PBMC）,采用qRT-PCR 检测 TLR7 和TLR9 mRNA。结果 与对照组比较,IM 急性期患儿外周血CD3+、CD8+、白细胞介素-1β（IL- 1β）、IL-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ 干扰素（IFN-γ）、TLR7 和TLR9 mRNA 相 对表达量升高（P <0.05）;CD4+、CD19+、CD16+56+ 降低（P <0.05）。IM 急性期患儿EBV DNA 载量与血清 IL-1β、TLR9 mRNA 呈正相关（r s =0.247 和0.348,P <0.05）,与其他指标无关（P >0.05）。IM 患儿在恢复 期时,外周血CD3+、CD8+、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-γ、TLR7 和TLR9 mRNA 相对 表达量降低（P <0.05）;CD4+、CD19+、CD16+56+ 升高（P <0.05）。结论 监测IM 患儿外周血淋巴细胞亚群、 细胞因子及TLR7、TLR9 的表达变化,尤其是重点关注血清IL-1β 和TLR9 mRNA 的表达,有助于了解病 情进展和转归。     

Toll样受体在人眼角膜上皮和永生化人角膜上皮细胞系的表达及功能研究

目的探讨Toll样受体（TLR）1—9在人眼角膜上皮和上皮细胞系的表达及其功能性。方法以健康人外周血单个核细胞（PBMC）为阳性对照,收集20例健康青年人角膜上皮标本和培养永生化人角膜上皮细胞系（THCE）细胞,用半定量反转录聚合酶链反应检测TLR1～9mRNA表达;Western印迹检测TLR2、4的蛋白质表达;TLR3和TLR4的配体对THCE刺激后酶联免疫检测分泌IL-8的变化,结合抗体封闭实验,研究角膜上皮TLR的功能性。结果与PBMC比较,人角膜上皮强表达TLR1、2、3、5、6、9,弱表达TLR8,微弱表达TLR4;20例角膜上皮标本中发现1例TLR3、4、6、8阴性表达,1例TLR5微弱表达;人角膜上皮在蛋白质水平表达TLR2、4;THCE细胞与人角膜上皮有相似的TLR表达谱;LPS和PolyI：C刺激THCE1、4、8h后IL-8分泌增加,8h时分别达到对照组的10倍和7倍（均P〈0．05）,抗体封闭TLR4可以阻断LPS诱导的IL-8分泌。结论人角膜上皮表达TLR1—9,但不同TLRs表达水平有差异。THCE是研究人角膜上皮TLR表达和功能的良好细胞系。     

Toll样受体在介导危重型手足口病炎性反应中的作用

【摘要】 目的 研究Toll样受体在介导危重型手足口病（HFMD）炎性反应中的作用。方法 选择2016年07月~2017年03月收治的47例危重型手足口病患儿（危重型组）为研究对象，另选取同期感染科收治30例普通型HFMD作为疾病对照组，门诊健康体检30例儿童为健康对照组，采集外周静脉血，分离单个核细胞（PBMCs），测定TLR2、3、4、7、8、9水平及血清TNF α、IFN γ、IL 6水平。结果 三组受试者PBMCs中TLR3、TLR4、TLR7和TLR8 mRNA表达水平差异有统计学意义（P<005），TLR2和TLR9 mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞005）。其中危重型手足口病组PBMCs中TLR3、TLR4、TLR7和TLR8 mRNA表达水平显著高于其他两组，健康对照组最低（P<005）。三组受试者血清中TNF α、IFN γ、IL 6表达水平有显著性差异；危重型手足口病患儿血清中TNF α、IFN γ、IL 6表达水平显著高于其他两组，健康对照组最低（P<005）。Pearson相关性分析显示，PBMCs中TLR3、TLR4、TLR7和TLR8 mRNA水平与血清中TNF α、IFN γ、IL 6水平呈正相关（P<005）。结论 危重型手足口病TLR3、TLR4、TLR7和TLR8表达明显增高，进而激活相关信号通路，介导机体的炎性反应。     

冠心病患者外周血单个核细胞Toll样受体5mRNA表达及与冠心病危险因素的关系

将冠心病患者79例分为急性冠脉综合征（ACS）组63例和稳定型心绞痛（SAP）组16例,另选20名健康人为对照组。比较三组临床、生化指标及外周血单个核细胞Toll样受体5（TLR5）mRNA表达水平,分析其与冠心病危险因素的关系。结果显示,ACS组和SAP组患者外周血单个核细胞中TLR5mRNA的表达水平较正常对照组明显升高。ACS组显著高于SAP组和对照组（均P〈0．01）;冠心病患者TLR5mRNA表达量与LDL-C和血糖值呈正相关（r值分别为0．855、0．752,偏回归系数分别为3．625、1．244）,提示TLR5可能参与冠心病动脉粥样硬化的发生发展,LDL-C可能也会影响TLR5的表达。