胃肠道恶性肿瘤患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及意义

目的探讨胃肠道恶性肿瘤患者外周血及病理组织调节性T细胞(Tregs)的表达及临床意义。方法采用流式细胞仪对60例胃肠道恶性肿瘤患者及20例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Tregs/CD4+T)的比率进行检测,采用免疫组化法检测相应患者病理组织中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达水平。结果胃癌、结直肠癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs/CD4+T细胞的比率分别为(7.46±0.85)%和(7.79±1.19)%,与对照组(6.65±0.79)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌、结直肠癌病理组织中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达平均阳性细胞绝对数为(53.52±16.31)和(58.15±14.86),与癌旁组织(6.53±2.68)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论胃癌、结直肠癌患者外周血及病理组织中Tregs的高表达可能具有肿瘤免疫的抑制作用,并与肿瘤的发生、发展密切相关。     

Expression and clinical significance of CD4+CD25+ Tregs in patients with gastrointestinal malignancy

目的 探讨胃肠道恶性肿瘤患者外周血及病理组织调节性T细胞(Tregs)的表达及临床意义.方法 采用流式细胞仪对60例胃肠道恶性肿瘤患者及20例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Tregs/CD4+T)的比率进行检测,采用免疫组化法检测相应患者病理组织中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达水平.结果 胃癌、结直肠癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs/CD4+T细胞的比率分别为(7.46±0.85)%和(7.79±1.19)%,与对照组(6.65±0.79)%比较,差异有统计学意义(P<0.01).胃癌、结直肠癌病理组织中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的表达平均阳性细胞绝对数为(53.52±16.31)和(58.15±14.86),与癌旁组织(6.53±2.68)比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 胃癌、结直肠癌患者外周血及病理组织中Tregs的高表达可能具有肿瘤免疫的抑制作用,并与肿瘤的发生、发展密切相关.     

慢性乙型肝炎中CD4+ CD25+ T调节细胞水平的判定

目的:了解慢性乙型肝炎(CHB)患者CD4 CD25 T调节细胞(Tregs)的真实水平. 方法: 采用细胞内外三色荧光标记、流式细胞仪测定、RT-PCR等方法检测CHB患者外周血中Tregs的主要标志CD4 CD25 ,CD4 CD25h,CD4 CD25 Foxp3 细胞和Foxp3 mRNA水平,并观察其与患者肝功能、乙肝病毒复制标志的相关性. 结果: CHB外周血中CD4 CD25 细胞水平与正常无明显差异,CD4 CD25h/PBMC(外周血单个核细胞)则较正常对照组升高[(0.5±0.3) vs (1.1±0.6), P＜0.05],而CD25 Foxp3 /CD4 T细胞比值及Foxp3 mRNA水平则较正常明显降低[(4.5±2.7) vs (7.1±2.3)]. RT-PCR结果: △CT:13.98 vs 12.86, △△CT: 1.12 vs 0, 2-△△CT: 0.46 vs 1, P＜0.05. 外周血中CD25h T细胞水平与谷丙转氨酶呈正相关(r=0.5,P＜0.05),T细胞中CD25(包括高表达)阳性比例与Foxp3阳性的符合率明显低于正常人[(30.5±16.7) vs (54.6±11.1);(57.9±15.9 ) vs (87.8±13.5), P＜0.01]. 结论: CHB患者存在着Tregs细胞水平的异常,CD25h的阳性率易受炎症时非调节性T细胞激活而过多表达CD25分子影响,Foxp3作为Tregs判定指标较为可靠.     

Foxp3基因及调节性T细胞在重症肌无力被动转移幼鼠发病中的作用机制

目的探讨Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3mRNA在重症肌无力被动转移模型(passive transferred myasthenia gravis,PTMG)发病中的作用机制。方法将16只幼年雌性C57BL/6小鼠随机分为2组:模型组和对照组,模型组经腹腔注射含1.0mg/kgmAb35的Ringer's液0.2ml建立PTMG模型,正常对照组注射不含mAb35的Ringer's液0.2ml。采用流式细胞技术检测小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞及Foxp3+CD4+CD25+Tregs含量,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)分析2组小鼠脾细胞中Foxp3mRNA的表达,ELISA法检测2组小鼠血清白介素-2和干扰素-γ的水平。结果①模型组小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞与CD4+T细胞含量的比例与对照组比较有统计学差异[(8.82±0.74)%vs(9.89±0.88)%,P<0.05];模型组Foxp3+CD4+CD25+Tregs与CD4+CD25+T细胞含量的比例与对照组比较显著降低[(6.83±1.18)%vs(8.38±0.76)%,P<0.01];脾细胞...     

肾综合征出血热患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞检测及其意义

目的 研究CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在肾综合征出血热(HRFS)患者外周血中的比例改变并探讨其在疾病进程中的意义.方法 选取27例HRFS患者,外周血用细胞内染色的流式细胞术及荧光定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测Foxp3+表达,并与肾活检结果及肾功能进行相关分析.同时取19名正常健康体检者作为正常对照组.结果 HRFS患者各期CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例明显均低于正常对照组(低血压休克期:5.0%±1.2%,少尿期:3.1%±0.8%,多尿期:4.2%±0.9%,恢复期:5.0%±1.1%,正常对照组:6.5%±2.1%,均P<0.01);各期间CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例差异亦有统计学意义,以少尿期为最少(P<0.01).CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例与肾组织损害指数显著相关(r=0.51,P<0.01),但与蛋白尿程度及肾功能损害无显著相关(r=0.11,0.18;均P>0.05).HRFS患者少尿期外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平(503±64)明显低于正常对照组(3102±409)和其他期(低血压休克期:1805±291;多尿期:1869±320;恢复期:2697±420,均P<0.01).结论 HRFS患者CD4+CD25+Foxp3+T细胞明显减少,这群调节性T细胞可能参与了HRFS的病理进程.     

1,25-二羟维生素D3处理的树突细胞在变应性气道炎症中的免疫调节作用

目的 探讨1,25-二羟维生素D,[1,25(OH)2D3]处理的树突细胞(DC)在变应性气道炎症中的免疫调节作用及其机制.方法 小鼠骨髓来源DC分2组,分别用1,25(OH):D,和磷酸盐缓冲液(PBS)处理,RT-PCR和蛋白质印迹法检测2组Dc Notch配体Mrna和蛋白表达.将2组DC和Notch配体中和抗体封闭的1,25(OH)2D3处理DC分别与小鼠脾脏来源CIM+T细胞共培养,流式细胞仪检测CD4+T细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比.将卵清蛋白(OVA)致敏小鼠分2组,每组5只,分别过继转移1,25(OH)2D3组DC[1,25(OH)2D3-DC组]和PBS组DC(PBS-DC组),以OVA激发气道炎症后行肺脏病理、支气管肺泡灌洗液(BALF)中自细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13和干扰素γ(IFN-γ)水平以及脾脏CD4+T细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比检查.结果 1,25(OH)2D3组DC Notch配体Jaggedl和Jagged2 Mrna表达(0.376±0.029、0.564±0.018)和蛋白表达(0.786±0.034、0.632±0.026)均明显高于PBS组(分别为0.146±0.032、0.267±0.012和0.124±0.025、0.098±0.012,均P＜0.01).与CIM+T细胞共培养后,1,25(OH)2D3组CD4+T细胞中CD4+C1)25+Foxp3+T细胞百分比(22.49%±0.56%)明显高于PBS组(6.67%±0.60%,P＜0.01);经Jagged2中和抗体封闭组CIM4CD25+Foxp3+T细胞百分比(6.56%±1.89%)明显低于未封闭组(20.37%±1.64%,P＜0.01),1,25(OH)2D3-DC组小鼠气道炎症明显轻于PBS-DC组;BALF中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ水平(pg/ml)分别为33±5、134±23、91±11和未检测到(＜12.5),均明显低于PBS-DC组(分别为55±7、332±49、152±19、23±6,均P＜0.01);脾脏CD4+T细胞中CIM+CD25+Foxp3+T细胞百分比(14.69%±1.14%)明显高于PBS-DC组(2.38%±0.14%,P＜0.01).结论 1,25(OH)2D3处理DC对变应性气道炎症有抑制作用,这种作用可能与1,25(OH)2D3处理DC通过Jaggect2介导的Notch信号途径诱导CD4+CD25+Foxp3+T细胞生成有关.     

哈萨克族食管癌外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与TGF-β1、IL-10的相关性研究

目的探讨哈萨克族食管癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+regulatory Tcells,Treg)的变化,及与转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)表达水平的相关性。方法采用流式细胞术检测40例食管癌患者及26例健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例;采用ELISA法检测血清中TGF-β1、IL-10表达水平。结果哈萨克族食管癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例、TGF-β1和IL-10表达水平分别为(7.50±1.94)%、(46.41±11.12)μg/ml、(48.10±13.49)pg/ml,高于对照组(5.04±0.92)%、(35.21±7.46)μg/ml、(33.78±7.31)pg/ml(P<0.05)。TNM分期Ⅰ~Ⅱ期者与Ⅲ~Ⅳ期者Treg细胞比例及TGF-β1、IL-10表达水平差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1、IL-10表达水平与CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例明显相关(P<0.01)。结论检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比例对于判断食管癌的病期有一定价值。TGF-β1、IL-10的表达水平明显升高,可能参与Treg细胞对机体的免疫负调节机制。     

寻常型天疱疮患者外周血调节性T淋巴细胞数量及Foxp3基因表达

目的 研究寻常型天疱疮(PV)患者外周血调节性T淋巴细胞(Treg),即CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞的数量及其Foxp3mRNA的表达水平,探讨其在PV发病机制中的作用.方法 收集15例PV患者(PV组)和15名健康人(对照组)外周抗凝静脉血,分离外周血单个核细胞.分别用FITC标记抗CIM单抗,APC标记抗CD25单抗,PE标记抗Foxp3单抗,流式细胞仪检测分析PV患者外周血Treg在CD4+ T细胞中的百分率及CD4+ T细胞在淋巴细胞中的百分率;荧光定量PCR检测外周血单个核细胞Foxp3 mRNA表达情况.结果 PV组外周血Treg在CD4+ T细胞中百分率为(6.99±1.86)%,CD4+ T细胞在淋巴细胞中的百分率为(32.78±8.33)%,对照组分别为(7.95±1.68)%和(33.45±7.32)%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);荧光定量PCR检测结果显示,PV组与对照组Foxp3 mRNA相对表达量分别为8.80±5.53和8.47±5.46,两组比较无显著差异(P＞0.05).结论 调节性T细胞可能不直接参与PV的发生.     

TSLP与调节性T淋巴细胞在慢性鼻窦炎中的表达

目的观察胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Tregs)在单纯慢性鼻窦炎中的表达,探讨二者在慢性鼻窦炎发生发展过程中可能的作用机制。方法收集25例慢性鼻窦炎患者的鼻窦黏膜为实验组,28例鼻中隔偏曲患者的下鼻甲黏膜为对照组,采用Q-RT-PCR和免疫组化技术检测各组鼻腔黏膜中调节性T细胞、Foxp3 mRNA和TSLP mRNA的表达,并分析TSLP与调节性T细胞、Foxp3 mRNA的相关关系。结果 1TSLP mRNA、Foxp3 mRNA、调节性T细胞在慢性鼻窦炎中的表达明显高于对照组(P<0.05),TSLP与Foxp3 mRNA的表达在慢性鼻窦炎中呈正相关(r=0.977 3,P<0.000 1);2根据免疫组化结果计数Tregs数量,TSLP与调节性T细胞在慢性鼻窦炎中的表达也呈正相关关系(r=0.864 6,P<0.000 1)。结论 TSLP可通过诱导调节性T细胞的发育和增殖,维持免疫自稳,参与慢性鼻窦炎的发生发展过程,其具体的机制有待进一步研究。     

Graves病患者外周血CD4^＋、CD25^＋调节性T细胞的定量及功能分析

目的：检测Graves病患者外周血CD4^＋、CD25^＋免疫调节性T细胞（Tregulatory cells,Tregs）数量并对其进行免疫抑制功能分析,探讨Tregs细胞在其发病机制中的作用。方法：利用不同荧光标记的鼠抗人CD3、CD4、CD25单克隆抗体标记患者及对照组外周血淋巴细胞,流式细胞仪定量检测Tregs细胞占CD4^＋T细胞的百分比。用CD4细胞阴性选择磁珠分离CD4细胞,用抗CD25的磁珠分选CD25^＋Tregs和CD25-Tregs的效应性T细胞（T responder cells,Treps）,用体外细胞培养和3H-thymidine掺入法测定Tregs细胞对Treps细胞的免疫抑制功能。结果：36例Graves病患者与20例健康对照组外周血CD4^＋T细胞中Tregs细胞分别为（6.96±1.98）%及（8.22±2.78）%,两者差异无统计学意义（P〉0.01）。Graves病患者的Tregs细胞可以抑制自身Treps细胞的体外增殖,1∶1、1∶2、1∶4、0∶1比例平均抑制率分别为（48.2±4.9）%、（29.6±7.1）%、（17.7±5.6）%、0,健康对照组的平均抑制率分别为（73.1±5.3）%、（51.5±5.8）%、（29.6±6.3）%、0。Graves病组与健康对照组相比平均抑制率降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：Graves病患者外周血中Tregs细胞的数量与对照组没有差异,但其免疫抑制功能明显降低,提示Tregs细胞功能的降低与Graves病的致病机制存在关联。     

毛细支气管炎CD4+ CD25+调节性T细胞和Foxp3 mRNA表达与激素调控

目的 探讨毛细支气管炎(简称毛支)的发病机制与激素治疗.方法 对呼吸道合胞病毒(RSV)阳性的毛支患儿,根据血清总IgE是否增高以及有无湿疹、皮炎等过敏病史,分为特应体质和非特应体质2组,各50例,另选健康对照组25名.毛支患儿按临床评分分为轻、中、重度(18、62、20例);再随机分成激素组(49例)和非激素组(51例).流式细胞仪检测外周血CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)的比例;反转录(RT)-PCR检测Foxp3 mRNA的表达量.结果 CD4+ CD25+ Treg的数量和Foxp3 mRNA表达量:健康对照组、非特应体质组、特应体质组分别为(10.5±1.6)%和0.34±0.11、(8.8±2.2)%和0.26±0.08、(7.6±1.8)%和0.21±0.09,差异均有统计学意义(均P<0.05);轻、中、重组分别为(9.7±1.6)%和0.28±0.08、(7.8±2.1)%和0.24±0.06、(6.7±1.3)%和0.20±0.07(均P<0.05).CD4+ CD25+ Treg数量、Foxp3 mRNA的表达量与临床评分均呈显著负相关(r=-0.62、-0.71,均P<0.01);激素治疗后两者均升高[(9.5±2.1)%和0.33±0.10分别比(8.5±1.8)%和0.27±0.12,P<0.05和<0.01].结论 CD4+ CD25+ Treg和Foxp3 mRNA与RSV毛支气道炎症关系密切,可反映毛支的病情严重程度.激素可促进CD4+ CD25+ Treg的发育和功能.     

fas介导系统性红斑狼疮患者Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞凋亡的研究

目的 探讨fas凋亡信号传导途径在系统性红斑狼疮(SLE)患者Foxp3+CD4+CD25+Treg凋亡异常中的作用.方法 选取活动期SLE患者25例、缓解期SLE患者20例及健康对照25名为研究对象,检测所有研究对象外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg表面fas的表达,同时分析CD4+CD25+T细胞Foxp3表达.并分别将fas表达率及Foxp3表达率与病情活动性(SLEDAI评分)进行相关分析.结果 (1)外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg上fas的表达:活动期SLE组为(23.72±2.35)%,缓解期SLE组为(14.0±2.1)%,对照组为(10.1±1.2)%,在活动期SLE组明显高于缓解期SLE组(P＜0.01)和对照组(P＜0.01),而缓解期SLE组与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),fas在Foxp3+CD4+CD25+Treg上的表达与SLEDAI评分呈正相关(r=0.336,P＜0.05).(2)外周血CD4+CD25+T细胞Foxp3的表达:活动期SLE组为(2.83±0.30)%,缓解期SLE组为(5.38±0.63)%,对照组为(8.12-±0.70)%.活动期SLE组外周血 CD4+CD25+T细胞Foxp3表达明显低于缓解期SLE组(P＜0.01)和对照组(P＜0.01);而缓解期SLE组亦低于对照组(P＜0.05).外周血Foxp3表达与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.581,P＜0.01).(3)Foxp3与fas的表达呈负相关(r=-0.349,P＜0.01).结论 SLE患者中存在由fas介导的Foxp3+CD4+CD25+Treg的过度凋亡,这可能是导致SLE病情活动的机制之一.

Abstract：

Objective To explore the role of fas apoptosis signal transduction pathway in the abnormal apoptosis of Foxp3 + CD4 + CD25 + Treg in patients with systemic lupus erythematosus ( SLE ).Methods Twenty-five active SLE patients, 20 remission SLE patients and 25 controls were selected. The level of fas expression on peripheral blood Foxp3 + CD4 + CD25 + Treg surface was detected in SLE patients.And analyzed the expression rate of Foxp3 on CD4 + CD25 + T cells was analyzed to explore the relationship between the expression rate and disease activity. Results ( 1 ) The expression rate of fas on Foxp3 + CD4 +CD25 + Treg was (23.72 ± 2. 35 )% , ( 14. 0 ± 2. 1 )% in active and remission SLE groups respectively versus ( 10. 1 ± 1.2)% in control group. The fas expression rate of active SLE group was significantly higher than those of remission SLE group( P ＜ 0. 01 ) and control group ( P ＜ 0. 01 ). And the remission SLE and control groups were not statistically significant ( P ＞0. 05 ). The expression rate of fas on the Foxp3 + CD4 +CD25 + Treg was positively correlated with the SLEDAI ( SLE disease activity index ) score ( r = 0. 336, P ＜0.05). (2) The expression rate of Foxp3 on CD4 +CD25 +T cells was (2.83 ±0.30)%, (5.38 ±0. 63 ) % in active and remission SLE groups respectively versus ( 8. 12 ± 0. 70 ) % in control group. The expression rate of Foxp3 was significantly lower in active SLE group than that in remission SLE group ( P ＜0. 01 )and control group( P ＜0. 01 ). And the Foxp3 expression rate of remission group was also lower than that of control group ( P ＜ 0.05 ). The expression rate of Foxp3 was negatively correlated with the SLEDAI score (r = -0. 581, P ＜ 0. 01 ). (3) The expression rate of Foxp3 was negatively correlated with fas (r=- 0. 349, P ＜ 0. 01 ). Conclusion The abnormal apoptosis of Foxp3 + CD4 + CD25 + Treg mediated by the fas apoptosis signal transduction pathway may be one of the pathogenic mechanisms of disease activity in SLE patients.     

终止香烟烟雾暴露后大鼠Th1/Tc1介导气道炎症及调节性T细胞的变化

目的 观察香烟烟雾暴露和终止香烟烟雾暴露后大鼠Th1/Tc1介导气道炎症及支气管肺泡灌洗液(BALF)中调节性T细胞(Treg)的变化.方法 将50只健康清洁级雄性Wistar大鼠随机分为5组:12周正常对照组(简称12周对照组)、24周正常对照组(简称24周对照组)、12周香烟烟雾暴露组(简称12周暴露组)、24周香烟烟雾暴露组(简称24周暴露组)、终止香烟烟雾暴露组(简称终止暴露组).烟熏法复制大鼠气道炎症的动物模型.12周后,12周对照组、12周暴露组处置取材,24周暴露组继续烟熏12周,终止暴露组终止烟雾暴露12周,将后2组及24周对照组处置取材.HE染色观察小气道病理改变,进行气道评分;收集BALF进行细胞学计数和分类计数;酶联免疫吸附法(ELISA)法测BALF中4种细胞因子:Th1/Th2型细胞因子干扰素(IFN)γ、白细胞介素(IL)4及促炎因子IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)α的浓度;流式细胞术检测各组大鼠BALF中Treg细胞的比例,RT-PCR检测各组大鼠BALF中Foxp3 mRNA的表达.结果 (1)12周暴露组、24周暴露组、终止暴露组气道炎症评分较12周对照组、24周对照组明显高(均P＜0.01).24周暴露组、终止暴露组气道炎症评分均较12周暴露组高(均P＜0.01).(2)与12周对照组、24周对照组相比,12周暴露组、24周暴露组、终止暴露组BALF中IFN-γ、TNF-α和IL-8高,IL-4低(均P＜0.01).与12周暴露组相比,终止暴露组IFN-γ、IL-4、TNF-α差异均无统计学意义(均P＞0.05),IL-8较高(P＜0.01),24周暴露组IFN-γ、TNF-α和IL-8明显高(均P＜0.01).(3)BALF中Treg细胞比例,12周暴露组(7.4%±0.8%)、24周暴露组(7.8%±1.7%)、终止暴露组(7.0%±1.4%)较12周对照组(4.8%±1.2%)、24周对照组(4.7%±1.2%)高(均P＜0.01),前3组之间BALF中Treg细胞比例差异均无统计学意义(均P＞0.05).(4)12周暴露组(0.22±0.02)、24周暴露组(0.23±0.03)、终止暴露组(0.20±0.04)BALF中Foxp3 mRNA表达较12周暴露组(0.13±0.01)、24周暴露组(0.11±0.02)高(均P＜0.01).前3者之间BALF中Foxp3 mRNA表达差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 香烟暴露致大鼠气道Th1/Tc1介导炎症伴Treg细胞表达增高,终止香烟烟雾暴露后其炎症及Treg细胞高表达仍持续存在,提示该免疫失衡可能是导致终止香烟暴露后Th1/Tc1气道炎症仍持续进展的原因之一.     

类风湿关节炎患者Treg细胞变化及与病情活动度的关系

目的探讨Treg细胞在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的变化及与病情活动度、RA相关抗体的关系。方法流式细胞仪技术检测40例RA患者和40例健康对照者外周血Treg占CD4+T细胞的百分率,酶联免疫吸附试验检测血清IL-10及TGF-β1,实时荧光定量PCR法检测Foxp3 mRNA,分析Treg细胞百分率与病情活动度及RA相关抗体的相关性。结果 RA患者外周血中Treg细胞(CD4+CD25+FOXP3+T细胞)的百分率显著低于健康对照组[(5.36±1.55)%vs(7.49±1.46)%,P<0.01],Foxp3mRNA表达也较对照组显著减少(P<0.01);RA组IL-10水平低于健康对照组(P=0.000),而TGF-β1则显著高于健康对照组(P=0.000);相关性分析显示IL-10水平与Treg细胞百分率及Foxp3 mRNA相对表达量正相关;RA患者外周血中Treg细胞百分率与关节压痛数、关节肿胀数、患者疼痛模拟视觉评分、健康评估问卷、DAS28评分、红细胞沉降率、C反应蛋白等临床和实验室病情活动指标无明显相关性(P>0.05),与RF、抗CCP抗体滴度也无相关性(P>0.05)。结论 RA患者中Treg细胞数量减少并存在功能异常,疾病活动度越高的患者可能Treg细胞数量减少越明显。     

梅毒血清固定患者外周血中Th17/Treg细胞、Foxp3和ROR-γt的表达水平及相关性研究

目的 通过检测梅毒血清固定患者外周血Th 17/Treg细胞比例及其特异性转录因子叉头状转录因子3(Foxp3)和维甲酸相关核孤儿受体(ROR-γt)的mRNA表达水平以及相关的细胞因子水平,探讨其与梅毒血清固定免疫机制的关系.方法 采集60例梅毒血清固定患者(观察组)和60例健康对照者(对照组)的外周血,分离单一核细胞(PBMCs),采用流式细胞仪检测Th17和Treg细胞比例;提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)法检测Foxp3和ROR-γt的mRNA表达水平;采用ELISA法测定PBMCs上清液中IL-17和转化生长因子-β(TGF-β)水平.结果 观察组外周血中的Treg细胞比例[(9.68±1.54)％]、Foxp3的mRNA[(2.85±0.16)％]和TGF-3[(275.15±20.89) pg/ml]的表达水平明显高于对照组[(5.96±1.27)％、(1.96±0.14)％、(156.33 ±41.49) pg/ml];观察组中的Thl7细胞比例[(1.13±0.31)％]、ROR-γt的mRNA[(0.98±0.16)％]和IL-17的表达水平[(12.21 ±4.73) pg/ml]明显低于对照组[(1.98±0.17)％、(1.85±0.15)％、(18.98±6.89) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 外周血中Treg和Th17细胞比例的变化、Foxp3和ROR-γtmRNA表达水平的异常与梅毒血清固定的免疫机制相关,梅毒血清固定患者可能存在Treg/Th17的失衡,且向Treg细胞漂移.     

氨甲蝶呤调控调节性T细胞数量及Foxp3表达在银屑病治疗中的作用

目的：探讨氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)对调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)细胞数量及关键转录因子 Foxp3 mRNA的影响。方法：1)收集初诊的寻常型银屑病患者、健康对照者和经MTX治疗8周后疗效显著的寻常型银屑 病患者入组,抽取外周抗凝静脉血并分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用流式细胞 术(fl ow cytometry, FCM)检测Treg细胞数量,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测PBMC 中Foxp3 mRNA表达水平;2)将咪喹莫特(imiquimod,IMQ)连续外用在BALB/c小鼠背部,观察6 d,每天拍照记录小鼠 皮损变化,根据银屑病面积和严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)进行评分,将小鼠皮损进行HE染色 观察其病理改变;3)在IMQ诱导中期(第3天)使用不同剂量MTX(38.5和77.0 nmol/L)进行小鼠腹腔内注射1次,同时设 置PBS组和阴性对照组,肉眼观察各组皮损外观并用HE染色方法观察皮损组织病理改变,观察6 d;随后采用FCM检 测小鼠脾淋巴细胞中Treg细胞数量,qRT-PCR法检测脾淋巴细胞Foxp3 mRNA表达水平。结果：1)在银屑病患者外周血 PBMC中Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达水平比健康对照者明显降低(P<0.05);用MTX治疗8周后疗效显著的寻常型银 屑病患者外周血Treg细胞的数量显著高于治疗前水平(P<0.05),Foxp3 mRNA表达水平显著升高(P<0.01);2)由IMQ诱 导的BALB/c小鼠表现出银屑病样的皮损外观及组织病理学改变,其脾淋巴细胞中Treg细胞数量下降(P<0.01),Foxp3 mRNA表达水平降低(P<0.05);3)使用不同剂量MTX于BALB/c小鼠腹腔内注射可有效缓解其银屑病样皮炎的皮损外 观、逆转病理改变,小鼠脾淋巴细胞Treg细胞数量部分逆转,Foxp3 mRNA表达水平增高(P<0.05)。结论：MTX可以通 过调控Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达水平来治疗银屑病。     

急性冠脉综合征患者内皮细胞微粒与CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞的关系

目的：探讨急性冠脉综合征（ACS）患者外周血内皮细胞微粒（EMPs）水平与CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）及其细胞因子水平的关系,阐明EMPs通过影响Treg细胞分化和功能参与ACS发病过程的机制。方法：选取稳定性心绞痛患者23例（SAP组）,ACS患者52例（ACS组）;以冠状动脉造影检查正常的住院患者20例作为对照组。采用流式细胞术检测各组患者外周血EMPs水平和Treg细胞百分率,实时定量PCR法检测转录因子Foxp3mRNA表达,酶联免疫吸附法检测血浆TGF-β₁水平。对EMPs与Treg细胞、Foxp3 mRNA表达水平和TGF-β1水平进行直线相关分析。结果：与对照组和SAP组比较,ACS组患者外周血中EMPs水平明显升高（P<0.01）,CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg百分率、Foxp3 mRNA表达水平和血浆TGF-β₁水平明显降低（P<0.01）。EMPs与CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg、Foxp3 mRNA表达水平和TGF-β₁水平呈负相关关系（r=-0.452,P=0.001;r=-0.466,P=0.001;r=-0.555,P=0.000）。结论：EMPs可能通过调控CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg的分化和功能,参与冠状动脉粥样硬化的发生发展及斑块不稳定的过程。     

CD4+CD25+、CD4+CD25hig调节性T细胞和Foxp3 mRNA在婴幼儿喘息中的表达及意义

目的探讨婴幼儿喘息CD4+CD25+、CD4+CD25hig调节性T细胞(Treg)和叉头/翼状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达及意义。方法采用流式细胞术检测51例首次喘息婴幼儿外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25hig Treg的比例,RT-PCR检测Foxp3mRNA的表达量,酶联免疫吸附法(ELASA)检测总IgE水平,并与正常婴幼儿对照。结果喘息婴幼儿外周血CD4+CD25+Treg、CD4+CD25higTreg占CD4+T细胞的百分比分别为(6.31+2.96)%和(3.52+1.46)%,均明显低于健康对照组(P<0.01);特应征喘息组CD4+CD25+Treg、CD4+CD25higTreg及Foxp3mRNA表达均低于非特应征喘息组(P<0.05)。喘息患儿CD4+CD25higTreg百分率及Foxp3mRNA表达与血清总IgE之间呈显著负相关(r=-0.75,r=-0.61,P<0.01),而CD4+CD25+Treg百分比与血清总IgE存在正相关(r=0.36,P<0.05)。结论 CD4+CD25+Treg、CD4+CD25hig Treg及Foxp3mRNA在婴幼儿喘息的发病中起重要作用。     

成人微小病变肾病患者外周血CD4~＋Foxp3~＋调节性T细胞的研究

目的研究CD4＋Foxp3＋调节性T细胞（CD4＋Foxp3＋Treg）及亚群在成人微小病变肾病（MCD）患者外周血CD4＋T细胞中的分布,探讨CD4＋Foxp3＋Treg参与MCD发病的可能机制。方法以27例经肾穿刺活检确诊为MCD的初发成人患者作为研究对象,采用Foxp3-FITC/CD45RA-PE/CD3-ECD/CD4-PC7抗体组合经流式细胞仪检测外周血单个核细胞（PBMCs）中CD4＋Foxp3＋Treg及亚群占CD4＋T细胞的百分比。Real-Time PCR检测PBMCs中Foxp3、Th17转录因子RORc以及细胞因子TGF-β1、IL-6、IL-17A、IL-23mRNA表达。设立正常对照。结果流式细胞检测显示CD4＋Foxp3＋Treg分成3个细胞群体,分别为CD45RA＋Foxp3low（Ⅰ区,静息期Treg）、CD45RA-Foxp3high（Ⅱ区,活化Treg）和CD45RA-Foxp3low（Ⅲ区）。MCD组Ⅰ区＋Ⅱ区细胞和Ⅱ区细胞占CD4＋T细胞的百分比显著低于对照组（P〈0.01）。MCD组PBMCs中Foxp3mRNA表达较对照组下调（P〈0.05）,RORcmRNA表达较对照组上调（P〈0.05）,IL-6、IL-17A、IL-23mRNA表达均显著高于对照组（P〈0.05和P〈0.01）。相关性分析显示,MCD组IL-17A mRNA表达与Ⅱ区细胞占CD4＋T细胞的百分比呈显著负相关（r=-0.81,P〈0.05）。结论成人MCD患者外周血Treg及其活化功能亚群减少,同时伴有Th17转录基因及其相关细胞因子表达的异常升高。提示Treg Foxp3 mRNA表达下调及Treg/Th17细胞比例失衡可能与MCD的发病有关。     

哮喘患者外周血调节性T细胞和Th17细胞数量及其转录因子的变化

[摘要] 目的： 观察哮喘患者外周血CD4+CD25+Foxp3+、CD4+IL-17+细胞的百分比和Foxp3、白介素-17(IL-17)、RORγt mRNA的表达水平的变化与哮喘发病的关系。方法： 分别取23例哮喘缓解期患者、25例哮喘急性发作期患者和20例健康人（对照组）的外周血单个核细胞（PBMC）,免疫磁珠阴选CD4+T细胞,采用Foxp3、IL-17胞内染色的方法,通过流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+以及CD4+IL-17+细胞的百分比,应用RT-PCR检测Foxp3、IL-17、RORγt mRNA水平。结果： 免疫磁珠阴选CD4+T细胞纯度达90％以上。急性发作组患者外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞百分比以及Foxp3 mRNA水平较对照组和缓解组明显降低（P＜0.01）,而缓解组和对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;急性发作组CD4+IL-17+细胞比例以及IL-17、RORγt mRNA表达较对照组和缓解组明显增高（P＜0.01）,而缓解组亦明显高于对照组（P＜0.05）。结论： Treg/Th17失衡可能和哮喘发病密切相关。