胆管上皮细胞株抑制共培养的肝癌HepG2细胞株增殖

目的通过体外共培养肝内胆管上皮细胞株(mIBEC)与肝癌细胞株HepG2,探讨mIBEC对HepG2细胞株的可能作用。方法体外共培养HepG2与mIBEC,采用CellTiter 96○R AQueous One Solution Cell Proliferation Assay分别测定并比较HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后增殖的情况;实时定量PCR法分别测定HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后其Ki67及caspase3 mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法分别测定HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后其caspase3蛋白表达水平。结果与mIBEC共培养后24～72 h,HepG2细胞增殖水平低于其单独培养时的水平(P<0.01),且伴有Ki67 mRNA表达的下调(P<0.05);与mIBEC共培养后,HepG2细胞caspase3 mRNA及蛋白表达水平较其单独培养时均上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 mIBEC可抑制共培养的HepG2细胞增殖;caspase3激活表达上调可能是mIBEC抑制共培养的HepG2细胞增殖的机制之一。     

姜黄素对人肝癌细胞株HepG2凋亡和细胞周期的影响

目的 本实验拟研究姜黄素对人肝癌细胞株HepG2凋亡与细胞周期的影响.方法 不同浓度姜黄素DMEM稀释液培养HepG2细胞,分别作用24、48、72h后,流式细胞术检测凋亡和细胞周期分布变化,并以正常培养细胞作为对照.结果 对照组正常生长HepG2细胞24、72h凋亡率分别为3.1%、4.2%、5.2%,加入姜黄素后凋亡率明显增加,并呈现时间和剂量依赖性.10μmol/L浓度组24、48、72h凋亡率分别为13.6%、22.9%、41.1%.细胞周期分布测定中.姜黄素药物组HepG2细胞出现明显的G2/M期阻滞,相比对照组有统计学意义(P<0.05).结论 姜黄素能抑制HipG2细胞生长,并且诱导其凋亡,阻滞细胞周期于G2/M期,其抗肿瘤活性具有广阔的应用前景,值得进一步研究.     

乙肝病毒X基因对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响

目的 探讨乙肝病毒X基因(hepatitis B virus,HBX)对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响.方法 采用脂质体转染法将HBX真核表达载体pcDNA3.1-X转人人肝癌细胞HepG2中,建立表达HBX的HepG2/HBX细胞模型;以转染空载体pcDNA3.1的HepG2/pcDNA3.1细胞为对照,于转染后24、48、72、96 h收集细胞标本,行流式细胞术分析肝细胞凋亡率变化情况,RT-PCR、Western blot分别检测肝癌细胞内HBX和凋亡相关基因Fas、FasL表达以及JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平情况.结果 转染24 h后HepG2/HBX细胞中即检测出HBX表达,且其表达量随时间延长而逐渐增高(P＜0.05);对照组细胞中各时间点均无HBX的表达.转染后各时间点,HepG2/HBX细胞与对照组细胞相比,细胞凋亡率均升高(P＜0.05),Fas、FasL表达量和JNK、c-Jan蛋白磷酸化水平亦均增高(P＜0.05);且HBX mRNA表达量与细胞凋亡率、Fas和FasL表达量以及JNK、c-Jun的磷酸化水平均呈正相关(P＜0.05).结论 HBx可通过上调JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平而促进FasL蛋白的表达,从而诱导HepG2细胞凋亡.     

T-2毒素对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用

目的：探讨T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用。方法：选取对数生长期的人肝癌HepG2细胞,分为对照组（未给予T-2毒素）和实验组（给予0.25、2.50、25.00、250.00和2 500.00 μg·L^-1T-2毒素）。24 h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechest 33258染色法观察HepG2细胞凋亡形态表现,检测各组HepG2细胞中caspase-3的活性。结果：T-2毒素作用HepG2细胞24 h后,倒置显微镜下观察,与对照组比较,实验组细胞数量明显减少,细胞皱缩变形。MTT法检测,与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率升高（P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,实验组SubG₁期细胞比例明显升高,细胞凋亡率明显升高。Hoechest 33258染色法检测,实验组细胞出现染色质固缩,细胞核呈致密浓染色的凋亡形态。实验组细胞中caspase-3活性明显高于对照组（P<0.01）。结论：T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,并能促进细胞凋亡。     

胡桃醌对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的:探讨胡桃醌对肝癌HepG2细胞增殖的影响,阐明其可能的作用机制。方法:选取处于对数生长期的肝癌细胞株HepG2分为空白对照组和不同剂量(40、80、120、160和200μmol·L1)胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对HepG2细胞的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;在光学显微镜下观察细胞形态学变化;免疫化学法检测HepG2细胞中Caspase-3蛋白的表达;流式细胞术测定120μmol·L1胡桃醌对HepG2细胞凋亡周期的影响。结果:胡桃醌的IC50为139.8881μmol·L1。与空白对照组比较,各剂量胡桃醌组HepG2细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性。形态学观察,胡桃醌组细胞体积缩小,连接消失。120μmol·L1胡桃醌组HepG2细胞的生长周期发生变化,出现明显的G2/M期阻滞。免疫细胞化学染色,与空白对照组比较,120μmol·L1胡桃醌组HepG2细胞中Caspase-3蛋白表达明显增加。结论:胡桃醌能诱导HepG2细胞发生凋亡,其机制可能与Caspase通路相关。     

长链非编码RNA-H19调控人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡

目的探讨长链非编码RNA-H19(lncRNA-H19)能否调控人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡。方法以人肝癌细胞株HepG2作为转染对象,分别设空白对照组(人肝癌细胞HepG2+培养基)、阴性对照组(人肝癌细胞HepG2+培养基+空载体)和沉默组(人肝癌细胞HepG2+培养基+慢病毒);采用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基,培养人肝癌细胞HepG2,使用慢病毒转染技术沉默人肝癌细胞HepG2的lncRNA-H19表达,荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人肝癌细胞HepG2的lncRNA-H19表达;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测人肝癌细胞HepG2增殖能力;流式细胞术检测人肝癌细胞HepG2凋亡率。结果 qRT-PCR检测lncRNA-H19的相对表达量,三组比较差异具有统计学意义(F=383.961,P<0.01);沉默lncRNA-H19后,用MTT法分别于24h、48h和72h检测人肝癌细胞HepG2吸光度的表达量,三组比较差异具有统计学意义(F=266.198,P<0.05),其抑制作用72h>48h>24h,表现为时间依赖;沉默lncRNA-H19后,3次流式细胞术检测细胞凋亡率均数,三组比较差异具有统计学意义(F=68.823,P<0.001)。表明沉默lncRNA-H19可促进肝癌细胞HepG2细胞增殖,抑制细胞凋亡。结论Ln-cRNA-H19可以调控人肝癌HepG2细胞的生长,能抑制肝癌细胞HepG2的增殖,其抑制作用呈时间依赖,促进HepG2细胞凋亡。     

胡桃醌对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨胡桃醌对肝癌HepG2细胞增殖的影响,阐明其可能的作用机制。方法：选取处于对数生长期的肝癌细胞株HepG2分为空白对照组和不同剂量（40、80、120、160和200 μmol/L）胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对HepG2细胞的抑制作用,并计算出半数抑制浓度（IC50）,依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;在光学显微镜下观察细胞形态学变化;免疫化学法检测HepG2细胞中Caspase-3蛋白的表达;流式细胞术测定120 μmol/L胡桃醌对HepG2细胞凋亡周期的影响。结果：胡桃醌的IC50为139.888 1 μmol/L。与空白对照组比较,各剂量胡桃醌组HepG2细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性。形态学观察,胡桃醌组细胞体积缩小,连接消失。120 μmol/L胡桃醌组HepG2细胞的生长周期发生变化,出现明显的G2/M期阻滞。免疫细胞化学染色,与空白对照组比较,120 μmol/L胡桃醌组HepG2细胞中Caspase-3蛋白表达明显增加。结论：胡桃醌能诱导HepG2细胞发生凋亡,其机制可能与Caspase通路相关。     

蛋白激酶C活性与电离辐射诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的关系

目的探讨蛋白激酶C(PKC)活性与X线电离辐射诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的关系.方法PKC调节剂PMA和SP预处理HepG2细胞,分辐射组、PMA0.5h组、PMA24h组、SP组;32P掺入法检测细胞的PKC活性,Varian2100直线加速器辐射细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果6Gy X线辐射诱导HepG2细胞凋亡率是21.9%,辐射后细胞PKC活性是辐射前的2.79倍.辐射组、PMA0.5h组、PMA24h组、SP组的PKC活性分别为1.07、3.86、051、0.48 pmol/(min·μg),细胞凋亡率分别为21.9%、5.73%、31.70%和32.83%.结论辐射可以引起HepG2细胞凋亡,PKC活性增加/降低对辐射诱导的凋亡起抑制/促进作用,提示PKC可能参与了细胞凋亡保护机制.     

褐藻糖胶抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制

目的:探讨褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的相关机制。方法:采用MTT法测定不同浓度褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率;将0、10、100、500 μg/ml的褐藻糖胶作用于HepG2细胞,48 h后光镜观察细胞形态改变,用Hoechst染色法和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot检测cyclinD1和拓扑异构酶IIα(topoisomerase IIα,TopoIIα)表达的改变。结果:褐藻糖胶具有抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用,呈剂量依赖性。不同浓度褐藻糖胶作用HepG2细胞后,500 μg/ml组较其他浓度组光镜下和Hoechst 33258染色均呈现较明显细胞形态改变,100 μg/ml和500 μg/ml组均检测出DNA梯形条带。褐藻糖胶也能降低细胞增殖生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα的蛋白表达。结论:褐藻糖胶抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与褐藻糖胶抑制细胞增殖的生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα表达有关。     

和厚朴酚对人肝癌HepG2细胞增殖及NF-kB mRNA表达的影响

目的探讨和厚朴酚对体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用及其对NF-kB基因mRNA水平的影响。方法采用MTT法检测和厚朴酚对HepG2细胞增殖的影响。以RT-PCR方法研究和厚朴酚对NF-kB基因mRNA表达的影响。结果和厚朴酚使人HepG2细胞增殖率明显下降,且呈剂量依赖效应;NF-kB基因mRNA水平随和厚朴酚浓度升高而降低。结论和厚朴酚对人HepG2细胞增殖有抑制作用,并能下调NF-kB的表达,从而起到抗肿瘤的治疗作用。     

Effect and mechanism of Honokiol on proliferation of human liver cancer cell line HepG2

目的 探讨和厚朴酚对体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用及其对NF-kB基因mRNA水平的影响.方法 采用MTT法检测和厚朴酚对HepG2细胞增殖的影响.以RT-PCR方法研究和厚朴酚对NF-kB基因mRNA表达的影响.结果 和厚朴酚使人HepG2细胞增殖率明显下降,且呈剂量依赖效应;NF-kB基因mRNA水平随和厚朴酚浓度升高而降低.结论 和厚朴酚对人HepG2细胞增殖有抑制作用,并能下调NF-kB的表达,从而起到抗肿瘤的治疗作用.     

苦参碱对HepG2细胞系增殖能力的影响

苦参是传统中药,广泛应用于临床各科,特别是它的抗肿瘤活性,近年来受到极大关注,我们曾发现苦参提取液可诱导K562细胞向红系和粒系分化[1,2].研究发现苦参纯成份--苦参碱(Matrine)是抗肿瘤的活性成份[3].我们以人肝癌细胞株HepG2作为细胞模型,观察不同浓度苦参碱作用不同时间后,对该细胞增殖能力的影响.     

Src蛋白在肝癌HepG2细胞增殖凋亡中作用的初步研究

目的研究Src蛋白在人肝癌细胞株HepG2细胞增殖凋亡过程中的作用。方法应用Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂PP2不同浓度处理HepG2细胞前后,使用免疫组化、流式细胞术、MTT法检测Src蛋白的表达以及HepG2细胞增殖和凋亡情况。结果Src蛋白在HepG2细胞中高表达,用不同浓度PP2处理HepG2细胞后,能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,增加凋亡。结论Src蛋白在人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖凋亡过程中起着重要作用。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3)对肝癌细胞的增殖抑制作用 .方法　应用台盼蓝拒染法、MTT比色法及细胞克隆形成试验 ,研究 As2 O3对肝癌 Hep G2细胞的增殖抑制和细胞毒作用 .结果　 As2 O3 能显著抑制肝癌细胞的生长 ,5μmol· L- 1 As2 O3 抑制程度明显强于 1μmol· L- 1 . 5和 1μmol· L- 1 As2 O3 作用后细胞克隆形成率分别为 (1.5±1.2 ) %和 (12 .3± 2 .2 ) % ,明显低于对照组的 (30 .0± 4.2 ) %(P<0 .0 1) .As2 O3对肝癌细胞有较强的细胞毒作用 ,且呈明显剂量和时间依赖性 ,其对肝癌细胞的杀伤率高于 5 -氟脲嘧啶 (5 - FU )和丝裂霉素 (MMC) ,但无显著性差异 ,As2 O3与 5 -FU及 MMC存在协同效应 ,联合应用杀伤率明显升高 .结论　 As2 O3具有明显的抑制肝癌细胞增殖作用 ,有必要进一步探讨其对肝癌的治疗价值     

微小RNA-200a在肝癌中的表达及其功能

目的观察miR-200a在肝癌细胞HepG2和正常肝细胞QSG-7701中的表达,以及对肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡、周期和侵袭能力的影响。方法运用荧光定量PCR检测肝癌细胞HepG2和正常肝细胞QSG-7701中的miR-200a的表达量。运用MTT法、流式细胞仪和Transwell试验分析miR-200a对细胞增殖、周期、凋亡和侵袭能力的影响。结果肝癌细胞HepG2中miR-200a表达水平为正常肝细胞4.79倍,癌细胞中miR-200a表达明显高于正常细胞(P<0.01)。在72 h浓度为150 nmol/L时,miR-200a对肝癌细胞增殖的促进作用最明显,促进率为38.40%。与空对照组和负对照组比较,G0/G1期细胞未见明显增多(57.13±0.02)%,S期无明显减少(26.55±0.8)%,早期凋亡细胞比例未见明显升高(0.5±0.06)%(P>0.05)。Transw ell实验结果显示100 nmol/L miR-200a mimics实验组相对穿出小室膜肿瘤细胞数为(0.348+0.005 657),与空对照组(0.296±0.006 364),负对照组(0.287±0.005 364)差异明显(P<0.05)。结论 miR-200a在肝癌细胞株中异常表达,癌细胞中的表达明显高于正常细胞,miR-200a对肝癌细胞株的增殖和侵袭能力有着明显的促进作用,其在肿瘤发生发展中可能担任着原癌基因的角色。     

原花青素对前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究原花青素对人雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外培养的LNCaP细胞株与100、200、300 μg/ml的原花青素共孵育,分别在24、48和72 h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况.结果 原花青素可引起LNCaP细胞形态较明显改变.不同浓度(100、200、300 μg/ml)原花青素对LNCaP细胞作用的细胞增殖抑制率分别为27.1%、72.1%和86.4%.流式细胞术检测表明原花青素可诱导LNCaP细胞凋亡,300μg/ml原花青素处理72 h引起36.5%的凋亡率.这3种作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强.结论 原花青素可在体外抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,并促进其凋亡.     

HCV核心蛋白对HepG2细胞增殖的影响

目的 利用腺病毒表达系统,研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心蛋白对HepG2细胞增殖、Wnt1以及microRNA152(miR-152)表达水平的影响.方法 通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-EGFP和Ad-HCV core,分别感染HepG2细胞后,通过RT-PCR和Western blot证实HCV核心蛋白在HepG2细胞中高效表达.MTT法、细胞周期测定和克隆形成实验检测HCV核心蛋白对HepG2细胞增殖的影响.SYBR探针荧光定量PCR和Western blot检测的HepG2-HCV core细胞中Wnt1和miR-152表达的变化.用miR-152 inhibitor转染HepG2细胞后,SYBR探针荧光定量PCR、Western blot检测HepG2细胞中Wnt1 mRNA和蛋白表达水平变化.结果 Ad-GFP和Ad-HCV core腺病毒经HEK293扩增后滴度分别为1.5×109 pfu/mL和1.6×1010pfu/mL.Ad-HCV core腺病毒感染HepG2细胞后,HCV核心蛋白高效表达.感染48 h后,与HepG2-Mock细胞相比,Ad-HCV core可显著促进HepG2细胞增殖(P＜0.05),加快G1/S细胞周期进展(P＜0.05),并促进细胞克隆形成(P＜0.05).Ad-HCV core腺病毒感染可在显著上调HepG2细胞中Wnt1 mRNA和蛋白表达量(P＜0.05)的同时下调miR-152表达水平.同时,miR-152 inhibitor可显著上调Wnt1 mRNA和蛋白水平.进一步生物信息学分析显示,Wnt1基因mRNA 3'-UTR含有miR-152结合位点.结论 HCV核心蛋白可能通过抑制miR-152而减弱其对Wnt1 mRNA的降解及翻译阻碍作用,进而达到上调Wnt1致Wnt信号通路激活,促进肝癌细胞增殖的效应.     

白头翁皂苷B4体外抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导其凋亡

目的筛查中药白头翁抗肝癌有效成分,探索其抗癌机制。方法分离白头翁皂苷成分,以人肝癌细胞HepG2为作用靶细胞,MTT法测定其对细胞增殖的抑制,流式细胞术检测细胞周期阻滞,DNA片断化方法检测细胞凋亡情况,检测半胱氨酸蛋白酶3酶活性,从信号通路的角度探寻其诱导凋亡的机制。结果白头翁药材含量较高的成分白头翁皂苷B4对HepG2具有显著的抑制作用,最大抑制率达到71.5%;通过细胞周期分布分析,发现最多有83.2%的细胞被阻滞在G2期;用流式细胞仪研究其凋亡情况发现,在40 mg/mL药物浓度作用下,细胞凋亡与孵育时间呈现依赖关系,随着时间从0到48 h,初期凋亡比例从接近于零最高增长到14.3%,并且发生了DNA片段化;进一步研究发现,白头翁皂苷B4处理后的HepG2细胞半胱氨酸蛋白酶3活性显著升高。结论白头翁皂苷B4调控肝癌细胞周期,阻滞G2/M期更替,诱导细胞凋亡,是肝癌治疗的潜在候选分子,奠定了白头翁药材用于肝癌治疗的理论基础。