首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到18条相似文献,搜索用时 62 毫秒
1.
肌腱细胞类胰岛素生长因子-1受体密度分析   总被引:4,自引:1,他引:3  
为了了解类胰岛素生长因子1(IGF1)受体在不同代次体外培养的肌腱细胞的分布,同时观察同一肌腱细胞周期中不同亚时相的IGF1受体数目的差别,采用免疫组化和流式细胞仪分析法,对体外培养的原代、第6代和第13代肌腱细胞的IGF1受体密度进行了分析,并以第6代肌腱细胞为对象,进行了同一细胞周期不同亚时相的IGF1受体数目差别分析。结果表明,IGF1受体在体外培养的原代、第6代和第13代肌腱细胞的密度大体相同,而在同一细胞周期中分裂前期及分裂期(G2M期)的受体数目比DNA合成前期(G1期)的受体数目多(P<0.01)。提示,在肌腱细胞培养的传代过程中和在同一细胞周期的不同亚时相,肌腱细胞均维持一个相对稳定的IGF1受体密度。为组织工程人工肌腱的构建和肌腱细胞生长的调控提供了理论基础  相似文献   

2.
类胰岛素生长因子—1及其受体mRNA在培养肌腱细胞内的表达   总被引:12,自引:2,他引:10  
为了进一步探讨类胰岛素生长因子-1(IGF-1)受体系统在培养肌腱细胞群体生命活动中的变化,采用地高辛标记的IGF-1及其受体基因的寡核苷酸探针,对原代、第6代及第13代肌腱细胞RNA进行杂交,探测IGF-1及其受体在上述细胞中的mRNA表达。结果发现,上述三种细胞均表达IGF-1受体mRNA;只有原代和第6代细胞表达IGF-1mRNA,而第13代细胞不表达IGF-1mRNA。提示,IGF-1mRNA不表达可能是导致第13代肌腱细胞增殖能力下降的原因之一。  相似文献   

3.
类胰岛素生长因子—1作用下肌腱细胞的周期改变   总被引:20,自引:3,他引:17  
为了明确类胰岛素生长因子-1(IGF-1)促进肌腱细胞生长的作用机制,以便进一步探索调控肌腱细胞生长的手段,采用体外培养的第6代肌腱细胞,加入IGF-1共同培养后,与对照组一起,用流式细胞技术进行细胞周期亚时相的定量分析。结果表明,实验组的DNA合成前期(G1期)时间、DNA合成期(S期)时间和分裂前期及分裂期(G2M期)时间分别为11.8,21.4和6.8小时;而对照组的时间分别为25.6,22.6和21.8小时。IGF-1使肌腱细胞的G1期和G2M期所需要的时间大大缩短。说明IGF-1对肌腱细胞生长的促进作用是通过加快G1期和G2M期的进程实现的  相似文献   

4.
目的 探讨外源性胰岛素样生长因子 1(IGF 1)基因转染对离体培养的肌腱细胞分裂增殖的促进作用。方法 用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)和酶联免疫吸附试验 (ELISA )检测转染 48h后细胞IGF 1mRNA和活性蛋白的表达 ;3 H TdR掺入法检测转染后 2 4、48、72h肌腱细胞DNA的合成情况 ;并用激光共聚焦显微镜对转染 48h后细胞Ⅰ型胶原的免疫荧光染色行定量分析。结果 IGF 1mRNA和活性蛋白在转染细胞内正确表达 ;实验组每分钟闪烁值 (CPM )为2 3 5 5 .75± 5 41.98,而对照组CPM值为 114 9.0 0± 485 .3 0 ,两者差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;转染组Ⅰ型胶原荧光强度较对照组明显增强 (转染组 76.2 0± 3 2 .2 3 ,对照组 3 8.84± 11.10 ,P <0 .0 1)。结论 外源性IGF 1基因转染能够促进肌腱细胞的分裂增殖和Ⅰ型胶原的分泌。  相似文献   

5.
胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长影响的实验研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
目的探讨胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长增殖的影响.方法采用酶消化法获取兔骨膜成骨细胞,取第三代成骨细胞与0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml的胰岛素样生长因子-1共同体外培养,在第1~7d观察细胞的形态、生长特点,MTT法测定细胞增殖情况,并通过细胞计数绘制细胞生长曲线.结果不同浓度的胰岛素样生长因子-1对成骨细胞的生长增殖与对照组比较均有显著性差异(P<0.01),各浓度之间对成骨细胞的生长增殖亦存在显著性差异(P<0.05).结论胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长增殖具有促进作用,在0.1~10ng/ml范围内此种作用与浓度呈正相关.  相似文献   

6.
目的:探讨胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长增殖的影响.方法:采用酶消化法获取兔骨膜成骨细胞,取第三代成骨细胞与0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml的胰岛素样生长因子-1共同体外培养,在第1~7d观察细胞的形态、生长特点,MTT法测定细胞增殖情况,并通过细胞计数绘制细胞生长曲线.结果:不同浓度的胰岛素样生长因子-1对成骨细胞的生长增殖与对照组比较均有显著性差异(P<0.01),各浓度之间对成骨细胞的生长增殖亦存在显著性差异(P<0.05).结论:胰岛素样生长因子-1对成骨细胞生长增殖具有促进作用,在0.1~10ng/ml范围内此种作用与浓度呈正相关.  相似文献   

7.
目的 应用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术建立稳定低表达胰岛素样生长因子1类受体(IGF1R)基因的人胰腺癌Panc-1细胞株,并观察其对吉西他滨化疗敏感性的影响.方法 设计并合成3条针对IGF1R基因特异性的RNA干扰靶点,构建慢病毒pFU-GW-RNAi载体,经包装后转染293T细胞,获得病毒上清并测定其相应滴度;感染Panc-1细胞,通过实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)鉴定RNA干扰效率;筛选出基因沉默效率最高的慢病毒感染人胰腺癌Panc-1细胞,获得稳定转染细胞株.噻唑蓝(MTT)比色法检测干扰IGF1R后Panc-1细胞对吉西他滨敏感性的变化.裸鼠移植瘤模型检测干扰IGF1R前后体内成瘤能力及吉西他滨对移植瘤生长的抑制作用.结果 在Panc-1细胞中成功建立低表达IGF1R基因的细胞株,吉西他滨对Panc-1细胞的半数抑制剂量(IC50)从(0.774±0.001)mg/L下降到(0.330±0.003)mg/L,Panc-1细胞对吉西他滨的敏感性增加了2.35倍.裸鼠移植瘤模型中,干扰IGF1R基因后皮下种植瘤生长缓慢,联合应用吉西他滨后对肿瘤生长的抑制作用进一步增加.结论 慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默IGF1R基因,能显著增强胰腺癌细胞株Panc-1对吉西他滨的敏感性.
Abstract:
Objective To construct the lentiviral expression vector for RNA interference of insulin like growth factor-1 receptor (IGF1R) gene in human pancreatic cancer cells and to evaluate its effect on chemosensitivity to gemcitabine.Methods Three sequences of RNA interference targeting IGF1R gene were designed, synthesized and cloned into the pFU-GW-RNAi vector. After transfection of 293T cells with lentiviral vector, the lentivirus was produced and the titer of virus was tested. Panc-1 cells were infected with the lentivirus and the expression of IGF1R mRNA in Panc-1 cells was detected by real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR). The changes of gemcitabine sensitivity after RNA interference were examined by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay. In vivo nude mice tumorigenicity model was used to determine the effect of RNA interference targeting IGF1R gene combined with or without gemcitabine on growth inhibition of xenograft tumors.Results A recombinant lentiviral vector expressing shRNA against IGF1R gene was obtained. After RNA interference, the median inhibition concentration (IC50) of gemcitabine against Panc-1 cells was reduced from (0.774±0.001) mg/L to (0.330±0.003) mg/L, indicating that the sensitivity to gemcitabine was increased by 2.35 times after interference. In vivo xenograft formation assay resulted in a significant growth-inhibiting effect by IGF1R RNA interference. Furthermore, the RNA interference targeting IGF1R gene enhanced the antiproliferative effect of gemcitabine on nude mice xenografts.Conclusion The sensitivity of Panc-1 cells to gemcitabine could be enhanced by RNA interference targeting IGF1R gene.  相似文献   

8.
评述了应用色谱法对胰岛素样生长因子-1(IGF-1)进行理论研究、分析方法、分离、纯化和制备技术研究的新进展.  相似文献   

9.
目的 探讨类胰岛素生长因子(IGF1) 和转化生长因子(TGFβ1) 在调节前列腺间质细胞IGF结合蛋白———类胰岛素生长因子结合蛋白3(IGFBP3) 中的作用。方法 前列腺增生组织原代培养分离间质细胞。分别用TGFβ1(5 μg/L)、IGF1(500 μg/L) 及TGFβ1+ IGF1 处理间质细胞。Western blot检测间质细胞内的IGFBP3 水平。结果 间质细胞用TGFβ1 处理2 小时后,IGFBP3 比对照组增加132 % ,4 小时后比对照组高出251% ,8 小时后接近原来水平。IGF1 可以明显逆转TGFβ1 诱导增加的IGFBP3,而单纯IGF1 则对间质细胞的IGFBP3 水平没有明显的影响。结论 IGF1 有抑制TGFβ1 诱导前列腺间质细胞IGFBP3 表达的作用。  相似文献   

10.
目的研究卵巢癌中胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-1,IGF-1)及其受体IGF-1R表达与临床病理特征、手术预后的相关性。方法采用免疫组化检测卵巢癌、卵巢交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤中IGF-1、IGF-1R的阳性表达率,分析IGF-1、IGF-1R与临床病理特征、手术预后的相关性。结果卵巢癌中IGF-1、IGF-1R的阳性表达量率分别为65.63%、70.31%,明显高于卵巢交界性肿瘤中IGF-1、IGF-1R的阳性表达量率22.22%、16.67%及卵巢良性肿瘤中IGF-1、IGF-1R的阳性表达量率5.00%、10.00%(χ^2/P=27.548/0.000、31.335/0.000),IGF-1、IGF-1R的mRNA表达量及蛋白表达量也明显高于卵巢交界性肿瘤及卵巢良性肿瘤(F/P=31.922/0.000、26.865/0.000、34.567/0.000、27.667/0.000);国际妇产科协会(federation international of gynecology and obstetrics,FIGO)III^IV期、组织分化程度G2~G3、CA125≥35 U/ml、Ki67阳性的卵巢癌中IGF-1、IGF-1R的阳性表达率明显高于FIGO I^II期、组织分化程度G1、CA125<35 U/ml、Ki67阴性的卵巢癌(IGF-1的χ^2/P=8.505/0.004、4.980/0.026、7.481/0.006、10.907/0.001;IGF-1R的χ^2/P=9.785/0.002、4.950/0.026、7.211/0.007、6.471/0.011);卵巢癌IGF-1阳性患者的总生存时间较IGF-1阴性患者缩短。结论IGF-1、IGF-1R在卵巢癌中高表达,且与病理特征及手术预后的恶化相关。  相似文献   

11.
目的 了解联合应用重组人生长激素(rhGH)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对烫伤大鼠创面愈合及蛋白质代谢的影响。方法 Wistar大鼠40只,深Ⅱ度烫伤,随机分成四组,分别接受rhGH(每天0.1 U/kg 称A组)、rhGH加IGF-1(每天rhGH 0.1U/kg 加IGF-1 2.0 m g/kg称C组)、IGF-1(每天2.0 m g/kg 称B组)和林格氏液(每天2 m l/kg 称D组)治疗2 周后,分析比较各组大鼠一般状况、创面愈合时间和蛋白质代谢情况。结果 治疗2 周后C、A 组体重开始增加,4 周后C组体重是A组的1.65 倍,而D组在4~5 周后才开始增加;C组创面愈合天数为(17.1±4.4)天,A组为(20.5±4.8)天,D组为(29.7±6.3)天,C组创面愈合时间明显短于D组,而B组则差异不明显;C组蛋白质升高比A 组和B组明显,有统计学意义(P< 0.01)。结论 联合应用rhGH和IGF-1 比单纯应用rhGH 或IGF-1 对缩短创面愈合时间、促进蛋白质合成均有明显的效果  相似文献   

12.
目的探讨体外培养成骨细胞在不同血清浓度条件下酒精干预后增殖和功能的改变,以及胰岛素样生长因子1(insulin—likegrowth factor1,IGF-1)的保护作用。方法体外分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,分6组在不同条件下进行培养,分别为正常血清浓度组(F15组,含15%新生牛血清)、正常血清浓度加酒精组(F15/EtOH组,酒精浓度为100mmol/L)、血清饥饿组(F2组,含2%新生牛血清)、血清饥饿加酒精组(F2/EtOH组)、血清饥饿加IGF-1组(F2/IGF-1组,IGF-1浓度为25ng/m1)和血清饥饿、IGF-1加酒精组(F2/IGF-1/EtOH组)。于培养24、48、72、96h检测细胞增殖、细胞内碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性和骨钙素(boneglaprotein,BGP)mRNA表达。结果各时间点F15/EtOH组成骨细胞吸光度(A)值及ALP活性、BGPmRNA表达较F。。组均下降,差异有统计学意义(P〈0.05)。F2组较F15组A值及ALP、BGPmRNA降低(P〈0.05),F2/EtOH组较F2组降低(P〈0.05),F2/IGF-1组较F2组增加(P〈0.05);F2/IGF-1/EtOH组较F2/IGF-1组除24h外A值无明显降低(P〉0.05),ALP、BGPmRNA均降低(P〈0.05),A值及ALP、BGPmRNA较F2/EtOH组增加(P〈0.05)。结论酒精能引起成骨细胞增殖和功能抑制,加重血清饥饿对成骨细胞的抑制作用,可能是酒精性骨损害的机制之一。IGF-1能改善血清饥饿引起的成骨抑制,并抵抗酒精抑制细胞增殖的作用,可能成为探索治疗酒精性骨损害的途径之一。  相似文献   

13.
目的研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor1,IGF-1)单独或联合作用于人胚半月板细胞,探讨半月板组织工程种子细胞大量扩增最佳作用组合及浓度。方法无菌条件下取健康妇女意外流产并自愿捐献的4个月人胚半月板,体外分离、培养半月板纤维软骨细胞,用Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和Aggrecan免疫荧光染色检测其性状。取第3代细胞贴壁后使用血清饥饿法同步化细胞,加入IGF-1(1、10、50、100μg/L)、TGF-β1(0.1、1.0、5.0、10.0、50.0μg/L)、bFGF(5、10、50、100、200μg/L)作用于半月板细胞,每样本设8个复孔和阴性对照组,分别于作用后48h和72h采用MTT法检测软骨细胞增殖情况,以确定各生长因子最佳效应浓度。同法设7个组,每组8个复孔,分别为:阴性对照组、bFGF最佳效应浓度组(50μg/L)、TGF-β1最佳效应浓度组(5μg/L)、IGF-1最佳效应浓度组(50μg/L)、bFGF和TGF-β1最佳效应浓度联用组、bFGF和IGF-1最佳效应浓度联用组、TGF-β1和IGF-1最佳效应浓度联用组,48h和72h用MTT比色法得出吸光度(A)值并分析软骨细胞的增殖效应。结果第3代半月板细胞扩增前后细胞均表达Ⅱ型胶原和Aggrecan蛋白。48h和72h50μg/L IGF-1,5μg/L TGF-β1及50μg/L bFGF浓度组与对照组相比均具有促细胞增殖作用,且差异有统计学意义(P〈0.05);此即为各生长因子最佳效应浓度。生长因子联用:bFGF50μg/L与IGF-150μg/L联用、IGF-150μg/L与TGF-β15μg/L联用具有协同效应,差异有统计学意义(P〈0.05);bFGF50μg/L与TGF-β15μg/L联用无协同效应,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论bFGF、TGF-β1、IGF-1单独使用均可体外扩增人胚半月板细胞,最佳效应浓度联用时bFGF/IGF-1、IGF-1/TGF-β1的扩增效果优于各自单独使用,可用于体外大量扩增种子细胞。  相似文献   

14.
IGF-1 促原代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖与分化的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的为更好地将成肌细胞应用于组织工程构建,探讨IGF-1对原代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖与分化的作用与机制。方法通过核素。H-TdR掺入法测定不同浓度IGF-1(1、2、4、8、16和32ng/mL)作用下成肌细胞的每分钟射线脉冲数(count per minute,CPM)值,根据浓度-CPM值量效曲线确定IGF-1促增殖的适宜浓度。在生长培养基中加入该浓度的IGF-1用于实验组细胞,对照组细胞仅接受生长培养基。分别观察实验组与对照组生长曲线,比较两组细胞增殖周期的变化。运用流式细胞技术及核素掺入法测定适宜浓度IGF-1作用下,成肌细胞增殖周期的变化。另选取不同浓度IGF-1(0、5、10、15、20、25、30ng/mL)作用于成肌细胞,观察4d后成肌细胞融合率,通过融合率.IGF-1浓度.量效曲线确定IGF-1促进成肌细胞融合的最佳浓度,并将其用于实验组,而未接受该浓度IGF-1的成肌细胞作为对照组,分别测定两组细胞融合率与磷酸肌酸激酶(creatinekinase,CK)含量并进行比较。结果5ng/mL的IGF-1为促成肌细胞增殖最佳浓度。对照组成肌细胞倍增时间为96h;实验组成肌细胞生长曲线左移,倍增时间缩短为60h。对照组DNA G1、S期与G2M期各亚周期所占时间分别是70.03、25.01与0.96h,实验组为22、66、16.47与20.87h。实验组与对照组成肌细胞CPM峰值出现的时间分别是48h与96h,与生长曲线流式细胞技术测定结果一致。IGF-1促进分化研究显示20ng/mL IGF-1为促成肌细胞分化最佳浓度。实验组成肌细胞融合率较对照组提高30%,CK合成量提高2000mU/mL。结论IGF-1对成肌细胞的增殖与分化均具有促进作用,是通过减少G1期成肌细胞数量,增加S期与G2M期细胞实现的。20ng/mLIGF-1能明显增加成肌细胞融合率CK合成。  相似文献   

15.
目的观察酸性成纤维细胞生长因子(acid fibroblast growth factor,aFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)以及复合因子对兔前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)和内侧副韧带(medial collateral ligament,MCL)的促增殖作用。方法分离传代培养10周龄新西兰大白兔骨关节韧带的ACL和MCL的成纤维细胞,接种96孔板,并加入浓度为0(对照组)、1、5、10、50、100ng/ml的aFGF或bFGF,浓度为0(对照组)、1.56、3.13、6.25、12.50、25、50ng/ml的EGF,单独或aFGF EGF两种因子联用与细胞(n=4)共同培养48h,以XTT方法测定其促细胞增殖作用。结果3种生长因子单独应用对ACL和MCL都有促进作用,aFGF对两种细胞均存在量效关系;bFGF 1ng/ml,EGF 5ng/ml对ACL作用最好,而对MCL则是bFGF和EGF均存在量效关系。浓度为5ng/ml的aFGF与50ng/ml的EGF联合1ng/ml aFGF与3.13ng/mlEGF作用于ACL或MCL均有协同作用。结论3种生长因子对ACL和MCL均有促进作用,单独应用aFGF或联用EGF优于单一因子促进兔ACL和MCL细胞的增殖,并且提示低浓度的aFGF联用EGF优于单一生长因子。  相似文献   

16.
目的 探讨胰岛素样生长因子 - (IGF- )对体外生长的关节软骨细胞分裂增殖及功能代谢的影响。方法 采用体外单层培养的方法 ,应用兔关节软骨细胞 ,对照组培养液为 10 %小牛血清 DMEM,实验组在培养液DMEM中加入 IGF- 使其终浓度分别为 3、10、30、10 0及 30 0 ng/ ml,作用细胞 2、4和 6天 ,检测细胞 DNA含量和基质中糖醛酸的含量。结果  IGF- 在 3~ 30 0 ng/ ml浓度范围能明显增加培养软骨细胞的 DNA及糖醛酸的含量 ,且以30~ 10 0 ng/ ml作用 4天刺激效果最明显 ,与对照组相比 ,有统计学意义 (P<0 .0 1)。结论  IGF- 对体外培养软骨细胞有刺激 ,并以剂量时间依赖性方式影响增殖及功能代谢。  相似文献   

17.
目的研究雌二醇(estradiol,E2)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在促进血管瘤血管内皮细胞(hemangioma vascular endothelial cell,HVEC)增殖中的作用和相互关系,以及他莫昔芬(tamoxifen,TAM)对其促进作用的影响。方法取2例皮肤增生期草莓状血管瘤标本进行HVEC培养。传至第3代时采用无雌激素培养液IMEM进行干预实验,实验分5组:1组为对照组,仅IMEM培养;2组加入17-β-E2;3组加入bFGF;4组加入17-β-E2和bFGF;5组加入17-β-E2、bFGF和4-羟基-他莫昔芬(4-OH—tamoxifen,4-OH—TAM)。药物浓度分别为:17-β-E2 100pg/ml,bFGF 10ng/ml,4-OH—TAM 1×10^-6mol/L。分别在培养第0、3、6和9天进行细胞计数(cell count,CC)和DNA增殖指数(proliferation index,PI)检测。结果2例血管瘤HVEC体外成功培养,细胞呈鹅卵石样,Ⅶ因子相关抗原(factor Ⅷ—relatedantigen,又称von Willebrand factor,vWF)染色阳性。例1在第9天,1组示HVEC增殖不明显,2组CC及PI为1组的1.4倍和1.6倍(P〈0.05);3组CC及PI为1组的2.6倍和2.3倍(P〈0.01);4组CC及PI为1组的3.7倍和2.9倍(P〈0.01);5组的CC和PI与1组相似(P〉0.05)。例2的实验结果与例1相似。结论体外实验显示,bFGF可显著促进血管瘤增殖;而雌激素和bFGF的共同存在对血管瘤的促增殖作用更加明显,二者存在协同作用;TAM则能明显抑制其协同促增殖作用。  相似文献   

18.
EXPERIMENTAL STUDIES INTO THE EFFECT OF NITROUS OXIDE ON TUMOUR CELL GROWTH   总被引:1,自引:0,他引:1  
The effect of nitrous oxide on the growth of two types of ascitestumour in mice was investigated. The mice in the first two trialswere injected with tumour cells, divided into three groups andexposed to one of the following atmospheres: (1) air; (2) 25%nitrous oxide; (3) 40% nitrous oxide. After treatment, the volumeof ascites fluid and the concentration of cells were measured.It was found that nitrous oxide treatment significantly loweredthe number of cells grown in the case of Ehrlich ascites tumourbut had no effect on the growth of 2146 tumour. Two furtherstudies were made in which treatment with nitrous oxide precededinjection of tumour cells; these failed to reveal any effecton tumour growth. Possible applications of nitrous oxide inthe treatment of cancer are discussed.  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号