鱼藤酮对PC12细胞Caspase-3, Fas和Fasl的作用及与凋亡的关系

目的: 探讨鱼藤酮对PC12细胞Caspase-3, Fas和Fasl的作用及与凋亡的关系. 方法: 应用流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测不同浓度鱼藤酮对体外培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞株凋亡率的影响,并检测1.0 μmol/L鱼藤酮干预不同时段对Caspase-3、Fas/Fasl蛋白表达的影响,透射电镜观察凋亡形态学的改变. 结果: 对照组凋亡率为0.0199±0.0020,经0.1, 1.0, 2.0和3.0 μmol/L不同浓度鱼藤酮干预2 d,凋亡率明显增加其变换值分别为: 0.0305±0.0030, 0.0486±0.0073, 0.0313±0.0041和0.0285±0.0031,与对照组比较有显著差别(P<0.02),实验组中以1.0 μmol/L作用最显著(P<0.01),当鱼藤酮浓度大于1.0 μmol/L时,其作用呈剂量依赖性递减. 对照组Caspase-3, Fas和Fasl FI值分别为1.0±0.03, 1.0±0.02和1.0±0.04;经鱼藤酮干预3, 6, 12, 24和48 h,各组均有Caspase-3, Fas和Fasl表达,其中以鱼藤酮干预6 h时Fas/ Fasl表达最明显(P<0.01),而12 h 时Caspase-3表达最明显(P<0.01). 电镜下观察到细胞膜不光滑,细胞突起减少,核质比小,细胞质空间增大,核周隙增大、不规则,异染色质增多、边集. 结论: 鱼藤酮可通过激活Caspase-3, Fas/ Fasl凋亡途径损伤PC12细胞.     

雷公藤甲素对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究

探讨雷公藤甲素对β- 淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）诱导PC12 细胞损伤的保护作用及其机制。方法通过噻唑蓝（MTT）法确立Aβ25-35诱导PC12 细胞损伤模型的工作浓度;同时利用MTT 法检测1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L雷公藤甲素对细胞活性的影响,以及雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞后对细胞活性的影响。PC12细胞随机分为3组：对照组、Aβ25-35处理组、Aβ25-35和雷公藤甲素处理组。细胞处理24 h后,利用免疫荧光法检测细胞中活化Caspase-3的表达,同时采用逆转录聚合酶链反应检测凋亡相关基因-2 和的表达水平。结果Aβ25-35在10 μmol/L工作浓度下可诱导PC12 细胞复制阿尔茨海默病体外细胞损伤模型,其细胞存活率为（58±6）%;单纯雷公藤甲素在1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L浓度下处理细胞对细胞活性无显著影响。Aβ25-35处理细胞后,细胞活性降低,活化Caspase-3在细胞中表达升高,同时Bax mRNA表达升高,而Bcl-2 mRNA 的表达下降。然而,雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞时,前者能够降低Aβ25-35对PC12 细胞的毒性损伤,且细胞活性随雷公藤甲素浓度的增加而升高;同时活化Caspase-3在细胞中的表达,Bcl-2 和Bax mRNA 表达水平也受抑制。结论雷公藤甲素可能通过调节-3、及-2 基因的表达以抑制细胞凋亡,从而对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤发挥保护作用。     

丹酚酸B及欧芹素乙对溶血磷脂酰胆碱刺激牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究溶血磷脂酰胆碱 (L PC)对牛主动脉平滑肌细胞 (BASMC)增殖的影响及丹酚酸 B和欧芹素乙的抑制作用。方法　体外培养 BASMC,用 MTT法测定细胞增殖。结果　 L PC在 2 .5× 10 - 9～ 2 .5× 10 - 6 g/ L 剂量依赖性地促进 BASMC增殖 ;丹酚酸 B(1× 10 - 9～ 1× 10 - 6 mol/ L)和欧芹素乙 (1× 10 - 7～ 1× 10 - 3m ol/ L)浓度依赖性地抑制 L PC的作用。结论　 L PC可促进 BASMC增殖 ,丹酚酸 B和欧芹素乙可抑制 L PC的作用     

丙氨瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1A作用的研究

目的 :研究丙氨瑞林对子宫内膜癌直接作用的可能性。方法 :以不同浓度丙氨瑞林 (浓度为 10 - 9～ 10 - 5 mol/ L)与人子宫内膜癌细胞株 HEC-1A(中分化子宫内膜腺癌 )一起进行培养 72 h,观察各浓度下癌细胞的抑制情况。结果 :当丙氨瑞林浓度为10 - 9mol/ L时 ,癌细胞生长即受到抑制 ,抑制率为 3 7.0± 2 6.2 %;随着丙氨瑞林浓度的增大 ,抑制率渐高。结论 :丙氨瑞林在体外对HEC-1A细胞可能有直接抑制作用 ,且呈剂量依赖关系。     

Fas/FasL信号通路在铅暴露致PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨Fas/Fas L信号在铅诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)发生细胞凋亡中的作用。方法 醋酸铅的暴露剂量设为0、0.1、1.0与10.0μmol/L,暴露时间为48 h。免疫荧光技术观察细胞内Fas蛋白的表达,Westernblot法检测Fas与Fas L蛋白表达水平,比色法测定细胞内caspase-8与caspase-3的活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 免疫荧光技术与Western blot法均表明,与对照组比较,1.0与10.0μmol/L醋酸铅暴露可致PC12细胞内Fas表达明显增加(P0.05),10.0μmol/L醋酸铅可诱导Fas L蛋白表达显著增加(P0.01)。此外,与对照组相比,caspase-8活性在10.0μmol/L醋酸铅暴露后显著升高(P0.01),而caspase-3活性在1.0与10.0μmol/L醋酸铅染毒后均显著上升(P0.05)。流式细胞术结果显示,0.1、1.0与10.0μmol/L醋酸铅染毒均增加PC12细胞凋亡率(P0.05),与对照组比较,差异有统计学意义。结论 铅暴露可诱导PC12细胞凋亡,其机制可能与死亡受体途径的激活有关。     

肾上腺髓质素抑制内皮素1、血管紧张素Ⅱ刺激的肺动脉平滑肌细胞增殖

目的:研究肾上腺髓质素(AM)对内皮素1(ET-1)、血管紧张素(Ang)促肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:体外培养兔肺动脉平滑肌细胞,采用3H-TdR掺入法观察不同剂量AM对ET-1,Ang促肺动脉平滑肌细胞蛋白质合成的影响。结果:1×10-9mol/L的ET-1,1×10-8mol/L的Ang明显增加培养的平滑肌细胞3H-TdR掺入量。1×10-7～2×10-8mol/L浓度的AM明显抑制1×10-9mol/L的ET-1引起的平滑肌细胞3H-TdR掺入量的增加;1×10-7～5×10-8mol/L浓度的AM明显抑制1×10-8mol/L的Ang引起的平滑肌细胞3H-TdR掺入量的增加。结论:AM能剂量依赖地抑制ET-1,Ang促肺动脉平滑肌增生,可能在肺血管病理变化中起一定作用。     

三氧化二砷对白血病NB4细胞PRAM蛋白的影响

目的 探讨在NB4细胞增殖过程中PRAM蛋白表达的情况，并且用三氧化二砷（As2O3）进行干扰，探讨其对PRAM蛋白的影响。方法 (1)细胞增殖抑制实验：体外培养NB4细胞共5 d，用MTT法筛选As2O3有效干预浓度后，选取As2O3（1×10-6mol/L）为目的干预浓度。(2) Western blot: As2O3（1×10-6mol/L）持续干扰NB4细胞1、2、3 d后检测PRAM蛋白的相对表达量。结果 (1)与对照组比较，5×10-6mol/L，1×10-6mol/L 及5×10-7mol/L As2O3组细胞分别于培养过程第1天，第2天，第3天开始被抑制，1×10-7mol/L As2O3组细胞于第3天稍微被抑制后细胞生长良好。(2) 1×10-6mol/L As2O3干扰NB4细胞共3 d，对照组及As2O3 组PRAM蛋白的表达在时间上有规律性：第2天表达最强烈，第3天表达略降低。(3) 1×10-6mol/L As2O3使PRAM蛋白在各时间点的相对表达均较对照组低（P＜0.05）。(4) 1×10-6mol/l As2O3使NB4细胞PRAM蛋白在第2天出现最大表达量，同时该组细胞出现生长抑制。结论 As2O3是能通过PRAM位点来达到抑制APL增殖分化的目的。     

促性腺激素释放激素激动剂对大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD的表达影响

目的：探讨阿拉瑞林（GnRHa）对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V（annexin5）和3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）的表达的影响。方法：建立体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养技术,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,同时用不同终浓度的GnRHa（分别为1×10^,1×10^-6,1×10^-1moL／L）作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexig 5和3β-HSD的表达变化情况．结果：间质细胞经GnRHa处理后,Western Blot结果显示,与对照组相比,当GnRHa终浓度为1×10^-5 moL／L时,anenxin5的表达量显著升高了69．2％（P〈0．01）,3B—HSD的表达量也升高了25．2％（P〈0．05）;当GnRHa的终浓度为1×10^-6mol／L和1×10mol／L时,anenxin5的表达量分别升高了61．5％（P〈0．05）和16．64％（P〉0．05）,3β-HSD的表达量则无显著性变化,分别升高了7．7％（P〉0．05）和2．22％（P〉0．05）．结论：GnRHa在原代培养的睾丸问质细胞中,对annexin5,3β-HSD的表达具有调节作用。     

三氮唑席夫碱衍生物对肝癌细胞裂亡的影响

目的:研究3-吡啶-3-基-4-[(4-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-38)对肝癌细胞BEL-7402裂亡的作用。方法:BEL-7402细胞常规培养于RPMI-1640培养液中,细胞生长至对数生长期加LH-38(终浓度分别为1×10-4mol/L和1×10-5mol/L),连续培养48 h或72 h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,荧光染料Hoechst33258和PI联染检测细胞死亡,免疫细胞化学法检测激活型Caspase-3表达。结果:LH-38抑制BEL-7402细胞增殖并呈浓度依赖关系,IC50为3.0×10-4mol/L;1×10-5mol/L浓度的LH-38处理细胞72 h,镜下可见多倍体细胞明显增多,可见微核或多核细胞染色体自发性的凝集,有丝分裂异常,存活或死亡的多核或单核巨细胞同时存在,存活细胞的激活型Caspase-3表达阴性;1×10-4mol/L浓度LH-38处理细胞48 h,可明显诱导细胞凋亡。结论:不同浓度LH-38可以引起人肝癌细胞BEL-7402细胞裂亡或细胞凋亡,即两种不同形式的细胞死亡。     

褪黑素对人黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

目的　观察褪黑素 (Mel)对人黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响 ,并通过检测黑色素瘤细胞是否存在褪黑素受体 (MR)来探讨其作用机制。方法　不同浓度的Mel与黑色素瘤细胞系SBQ共同培养 ,采用 3 ( 4 ,5 ) 双甲基 2 噻唑 ( 2 ,5 ) 二苯基溴化四氮唑蓝 (MTT)法检测Mel对SBQ增殖的作用 ,采用流式细胞仪检测Mel对SBQ凋亡的影响 ,采用逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)法检测MR及其亚型。结果　Mel的浓度超过 1×10 -9mol/L时对黑色素瘤细胞的增殖有抑制作用 ,且Mel浓度为 1× 10 -9mol/L时的抑制作用最强 ;Mel浓度超过 1× 10 -11mol/L时有促进黑色素细胞凋亡的作用 ,且在 1× 10 -11～ 1× 10 -9mol/L的生理浓度范围内作用最强 ;SBQ细胞存在MR亚型MT2 。结论　Mel有抑制黑色素瘤细胞增殖 ,并促进黑色素瘤细胞凋亡的作用 ,且与浓度有关 ,作用强度为生理浓度 >药理浓度 >亚生理浓度 ;Mel的作用可能通过MR亚型MT2 介导。