脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响.方法:采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达.结果:NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol/L的NDGA处理后G0/G1期细胞减少(P＜0.05)、S期细胞增多(P＜0.05),G2/M期细胞无明显变化;细胞经100μmol/L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调(P＜0.01)、bax蛋白与对照组相比表达上调(P＜0.01).结论:NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关.     

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡及其机制探讨

目的:探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂NS-398对人肝癌BEL-7402细胞凋亡及凋亡抑制蛋白survivin、XIAP和c-IAP1表达的调节作用.方法:用不同浓度的NS-398作用BEL-7402细胞后,MTT法测定细胞增殖抑制情况,FCM法和TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫细胞化学法检测COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达情况.结果:NS-398 可以显著抑制BEL-7402细胞的增殖,诱导其凋亡.免疫细胞化学法检测结果显示,与未处理组相比,NS-398作用可使BEL-7402细胞中COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达明显下调(P<0.01).结论:NS-398对人肝癌细胞株BEL-7402有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与通过下调survivin、XIAP和c-IAP1的表达有关.     

苏木精对人类膀胱癌T24细胞的杀伤及诱导凋亡作用

目的观察苏木精对人类膀胱癌T24细胞的杀伤及诱导凋亡的作用，探讨其对靶细胞杀伤的作用机制。方法将靶细胞培养于含药量分别为0、12．5、25、50、100、200μg／ml的RPMI1640培养基中，培养24h，倒置显微镜下观察细胞的形态学变化，收集靶细胞，采用锥虫蓝拒染法测定药物对靶细胞的杀伤作用。采用流式细胞术（FCM）检测不同药物质量浓度对靶细胞凋亡的影响。结果随着药物质量浓度的逐步增加，细胞发生形态学变化，且细胞死亡率逐步增加，对照组细胞死亡率为（2．63±0．29）％，各组细胞死亡率分别为（10．00±4．82）％、（21．88±3．42）％、（76．41±4．82）％、（92．27±7．62）％和（96．34±8．78）％。对照组细胞凋亡的自然发生率为0．47％；含药量为50μg／ml时，细胞凋亡率显著增高，达到43．18％，死细胞率为48．47％，活细胞率为8.35％；随着药物质量浓度的增大，细胞凋亡率逐渐降低。而死细胞率则逐渐上升。结论苏木精可通过诱导细胞凋亡和直接杀伤作用于靶细胞，在较低浓度下，可诱导靶细胞发生凋亡，药物浓度超过100μg／ml时，则能直接杀死靶细胞。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响

目的：探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响。方法：采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果：NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol／L的NDGA处理后G0／G1期细胞减少（P〈0．05）、S期细胞增多（P〈0．05）,G2／M期细胞无明显变化;细胞经100μmol／L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调（P〈0．01）、bax蛋白与对照组相比表达上调（P〈0．01）。结论：NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关。     

环氧合酶-2抑制剂塞来昔布诱导人肝癌细胞凋亡及其机制

目的：探讨环氧合酶2（cyclooxygenase2,COX2）抑制剂塞来昔布（celecoxib）诱导人肝癌细胞系SMMC7721凋亡的作用及其可能机制。方法：以10、25、50、75、100 μmol/L的塞来昔布处理SMMC7721细胞,MTT法检测肿瘤细胞增殖,Hoechst 33342/PI 双染法检测细胞凋亡的形态特征,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期变化。RTPCR法检测Fas和Bcl2mRNA的表达,Western blotting检测细胞Fas和Bcl2 蛋白的表达。结果：塞来昔布以剂量依赖的方式抑制SMMC7721细胞增殖。塞来昔布作用后,SMMC7721细胞出现核染色质凝集、核膜破裂等凋亡细胞典型的形态特征。25、50和100 μmol /L塞来昔布诱导SMMC7721细胞的凋亡率分别为(16.32±2.32)%、(38.05±2.47)%、(71.17±3.19)%,并使细胞阻滞于G0/G1期。塞来昔布处理后,SMMC7721细胞Fas mRNA及蛋白表达明显增强（P<0.01）;Bcl2 mRNA表达无明显变化（P>005）,高浓度塞来昔布可下调Bcl2蛋白表达（P<0.01）。结论：塞来昔布能够抑制SMMC7721细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与影响凋亡相关基因表达有关。     

环氧化酶-2 抑制剂Nimesulide对膀胱癌T24细胞体外生长的抑制作用

 目的 观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂Nimesulide（NIM）对人膀胱癌T24细胞株体外生长的影响，并探讨其作用机制。方法 采用细胞形态学、MTT法、流式细胞术、吖啶橙-溴化乙啶双染法（AO-EB）等技术检测NIM对体外培养的人膀胱癌细胞株T24生长的抑制效应。结果 细胞形态学观察可见NIM对T24细胞生长具有明显的细胞毒作用；MTT法、流式细胞术分析显示NIM能明显抑制T24细胞的增殖，且呈剂量、时间依赖关系；细胞周期分析表明，NIM能使T24细胞G0／G1期细胞比例升高，S期和G2／M期细胞比例下降；流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”，细胞凋亡率与NIM作用时间和剂量相关；荧光显微镜检查显示NIM处理的T24细胞AO-EB双染色后，细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光，典型细胞可见新月形改变，固缩或片段化的核。结论 COX-2抑制剂NIM对T24细胞生长具有明显的抑制作用，其作用机制可能与阻断细胞周期、诱导细胞凋亡等有关。     

环氧合酶-2与肿瘤的侵袭和转移

环氧合酶-2是花生四稀酸转化为前列腺素过程的关键限速酶，近几年的研究表明，它在肿瘤组织中均有表达。其与肿瘤的侵袭和转移的关系受到越来越多的关注。本文从NCBI检索文献，查阅相关的资料对COX-2与肿瘤的侵袭和转移的关系进行了综述。主要从细胞凋亡、肿瘤的血管生成、肿瘤细胞的侵袭性及细胞外机制四方面进行了综述。发现COX-2的表达可抑制细胞的凋亡、促进肿瘤的血管生成而促进肿瘤细胞的生长。COX-2的表达可直接促进肿瘤细胞的侵袭。COX-2的表达与细胞外机制的改变也有明显的相关关系。COX-2的表达可上调MMP-2及MMP-9，给予COX-2抑制剂可抑制基质金属蛋白酶的表达。COX-2的表达还可影响黏附分子的表达，促进内皮细胞的伸展。COX-2的这些作用可被COX-2的抑制剂，尤其是选择性抑制剂所抑制．这就为将C0X-2抑制剂用于肿瘤的抗转移治疗和化学预防提供了广阔的前景。     

环氧合酶-2特异抑制剂诱导胃癌细胞凋亡的机制研究

目的　探讨环氧合酶 - 2 (COX -2 )特异抑制剂SC2 36诱导胃癌细胞凋亡的机制。方法SC2 36处理AGS细胞后 ,吖嘧橙染色观察细胞凋亡 ,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白、细胞色素C水平。caspase- 3的激活通过免疫印迹法检测其活性片段、其底物多聚 (ADP 核糖 )聚合酶 (PARP)的裂解和比色法检测其催化活性来确定。结果　SC2 36处理AGS细胞可明显提高前凋亡蛋白Bak的水平 ,促使细胞色素C从线粒体进入胞浆 ,并激活caspase 3。caspase 3的特异抑制剂z DEVD fmk可以抑制SC2 36诱导的凋亡 ,细胞凋亡率由 (33.4± 3.2 ) %下降到 (16 .1± 1.5 ) %。结论　SC2 36至少部分通过上调Bak、促进细胞色素C的释放以及激活caspase 3的途径诱导胃癌细胞凋亡。     

5-脂氧合酶抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的：研究5-脂氧合酶（5-lipoxygenase,5-Lox）在人肝癌细胞株HepG2中的表达,以及5-Lox抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响。方法：应用免疫细胞化学染色及RT-PCR分别检测5-Lox的蛋白和mRNA在人肝癌细胞株HepG2中的表达,采用MTT法及流式细胞术检测5-Lox抑制剂齐留通（Zileuton）对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响。结果：5-Lox蛋白表达于肝癌细胞浆,局灶细胞核膜亦见阳性染色,RT-PCR可检测到肝癌细胞5-Lox的mRNA的表达。人肝癌细胞株HepG2给予不同浓度的齐留通处理24小时后,细胞存活率呈剂量依赖性下降;流式细胞术检测可见细胞凋亡率呈剂量依赖性升高。结论：人肝癌细胞株HepG2存在5-Lox的表达,5-Lox抑制剂齐留通可抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导细胞凋亡。     

5-脂氧合酶抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的:研究5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-Lox)在人肝癌细胞株HepG2中的表达,以及5-Lox抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响。方法:应用免疫细胞化学染色及RT-PCR分别检测5-Lox的蛋白和mRNA在人肝癌细胞株HepG2中的表达,采用MTT法及流式细胞术检测5-Lox抑制剂齐留通(Zileuton)对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响。结果:5-Lox蛋白表达于肝癌细胞浆,局灶细胞核膜亦见阳性染色,RT-PCR可检测到肝癌细胞5-Lox的mRNA的表达。人肝癌细胞株HepG2给予不同浓度的齐留通处理24小时后,细胞存活率呈剂量依赖性下降;流式细胞术检测可见细胞凋亡率呈剂量依赖性升高。结论:人肝癌细胞株HepG2存在5-Lox的表达,5-Lox抑制剂齐留通可抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导细胞凋亡。     

选择性COX2抑制剂对胃癌细胞增殖的影响

背景与目的：越来越多证据表明非甾体类抗炎药（NSAIDs)可以减少消化道肿瘤的危险,其化学预防作用在于抑制了环氧全酶－2（COX－2）,但选择性COX－2抑制剂对胃癌细胞生长的影响及机制目前3仍不十分清楚。本研究目的是观察选择性COX－2抑制剂尼美舒利对SGC7901胃腺癌细胞PGE2释放及增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT比色法和放射免疫分析法观察尼美舒利对SGC7901细胞增殖及前列腺素E（PGE2）释放的影响,采用透射电镜及流式细胞仪观察尼美舒利对SGC7901细胞诱导凋亡的作用及细胞周期的影响。结果：尼美舒利呈时间,剂量依赖性方式抑制SGC7901细胞增殖,减少PGE2释放;改变细胞周期的分布,增加G0／G1期细胞比例,呈剂量依赖性非线型方式诱导其凋亡。结论：尼美舒利可能通过减少PGE2释放,影响细胞周期分布和诱导细胞凋亡,从而抑制SGC7901胃腺癌细胞的增殖,选择性抑制COX－2发挥其抑制人胃癌细胞恶性增殖和诱导凋亡的作用。     

环氧化酶-2抑制剂对肺癌细胞的增殖抑制和放射增敏的实验研究

目的研究环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及其对A549细胞的放射增敏作用.方法噻唑蓝(MTT)比色法检测塞来昔布对肺癌A549细胞存活的影响;流式细胞分析法(FCM)检测对A549细胞周期时相影响及凋亡的作用;体外培养克隆形成率的方法检测塞来昔布对A549细胞的放射增敏作用.结果塞来昔布对肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,这种抑制作用有时间和剂量依赖性,50μmol/L处理24和72 h的抑制率分别为(4.27±1.33)%、(10.63±2.23)%,100μmol/L处理分别为(33.47±8.02)%、(61.97±7.32)%,主要是抑制增殖,使细胞聚集在G0/G1期,100μmol/L处理72 h还有细胞死亡.塞来昔布无凋亡诱导作用,也不增加放射诱导的凋亡.体外培养克隆存活曲线分析显示,100μmol/L塞来昔布处理24和72 h降低了各个照射剂量点的存活分数(72 h比24 h作用强),但在照射高剂量区更明显.对照、100μmol/L处理24、72 h在2 Gy剂量点的存活分数(SF2)分别为(0.53±0.06)、(0.52±0.11)和(0.46±0.05),处理24和72 h的放射增敏比为1.27和1.7(D0值比).结论塞来昔布对肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性,使细胞聚集在G0/G1期,但无诱导凋亡作用.塞来昔布对肺癌A549细胞有放射增敏作用,在高照射剂量区增敏作用更为明显.     

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系BIU87增殖及侵袭活性的影响

背景与目的:PTEN(phosphataseandtensinhomologuedeletedfromchromosome10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关。本实验研究外源性PTEN转染后,人膀胱癌细胞系BIU87增殖和侵袭活性的改变。方法:将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-PTEN体外转染BIU87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测PTEN基因转染前、后BIU87细胞增殖和侵袭活性的变化。结果:pBp-PTEN的酶切鉴定证实含有目的基因PTEN;pBp-PTEN-BIU87细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT发现,pBp-PTEN-BIU87细胞在第2、3和4天的吸光度(A值)明显低于两对照组(P<0.05),以正常BIU87细胞为对照,PTEN基因在第1、2、3、4天的细胞生长抑制率分别为4.27%、18.92%、19.54%、17.69%。细胞侵袭试验显示,各组细胞浸润穿透ECM膜的数目:pBp-PTEN-BIU8为39.3±7.7,BIU87和pBp-BIU87分别为48.1±13.2和48.9±11.0,pBp-PTEN-BIU87细胞明显少于两对照组(P<0.05)。结论:抑癌基因PTEN转染能降低膀胱癌细胞的增殖和侵袭活性。     

人膀胱癌组织中环氧化酶2的表达

背景与目的：环氧化酶（cyclooxygenase,COX)是人体内合成前列腺素的限速酶。最近研究表明,环氧化酶2（COX－2）与肿瘤的生成有关。本研究通过检测COX－1和COX－2在人膀胱癌组织、正常膀胱粘膜以及膀胱炎症组织中的表达,探讨COX在膀胱癌发生发展中的作用。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）和免疫组化法（Envision二步法）,检测膀胱移行细胞癌和癌旁组织、正常膀胱粘膜以及膀胱炎症组织中COX－1和COX－2 mRNA和蛋白的表达,并分析癌组织中COX的表达强度与肿瘤对应的各项病理参数之间的关系。结果：RT－PCR检测15例新鲜膀胱癌组织COX－2 mRNA均阳性表达,5例肉眼所见的癌旁正常组织中仅1例阳性,两者差异有显著性;而COX－1 mRNA在所有新鲜癌组织标本中均有结构性表达。免疫组织化学研究结果与RT－PCR结果相似,COX－2蛋白主要集中在肿瘤细胞浆内,阳性表达率为50％,正常膀胱粘膜（n=4)和膀胱慢性炎症组织（n=5)中没有表达;反之,COX－1蛋白主要表达在正常或炎症组织的平滑肌细胞上,肿瘤组织中为阴性表达。在40例膀胱移行细胞癌石蜡切片标本中,COX－2蛋白的表达强度与肿瘤的分级和分期有关,恶性度较高的Ⅲ级癌的表达水平高于I级和Ⅱ级癌,浸润性癌（T2－4）也高于浅表性癌（Ta-1)。结论：COX－2 mRNA和蛋白在人膀胱癌组织中表达增高,并与肿瘤的恶性率相关,说明COX－2可能在膀胱癌的发生发展中起着重要作用。     

ＮＳ-３９８对乳腺癌细胞ＭＣＦ-７增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的　探讨环氧合酶-２（ＣＯＸ-２）选择性抑制剂ＮＳ-３９８对乳腺癌细胞ＭＣＦ-７增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法　用不同浓度ＮＳ-３９８作用ＭＣＦ-７细胞后,采用四甲基唑蓝法（ＭＴＴ）检测ＮＳ-３９８对ＭＣＦ-７细胞增殖的抑制率;流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞周期、细胞凋亡以及ＣＯＸ-２、Ｂｃｌ-２和Ｂａｘ蛋白的表达;用放射免疫分析（ＲＩＡ）检测培养液上清中前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）含量。结果　ＮＳ-３９８可显著抑制ＭＣＦ-７细胞的生长,并随药物的浓度升高、时间延长其抑制作用增强。ＮＳ-３９８使ＭＣＦ-７Ｇ_０／Ｇ_１期细胞显著增多（Ｐ＜０.０１）,Ｓ期及Ｇ_２／Ｍ期细胞显著减少（Ｐ＜０.０１）,并引起显著的细胞凋亡。ＮＳ-３９８使ＭＣＦ-７细胞ＣＯＸ-２和Ｂｃｌ-２表达显著降低（Ｐ＜０.０１）,而Ｂａｘ表达显著增高（Ｐ＜０.０１）,并使ＭＣＦ-７细胞产生的ＰＧＥ２显著降低（Ｐ＜０.０１）。结论　ＮＳ-３９８可抑制乳腺癌细胞ＭＣＦ-７的增殖并可诱导其凋亡,其作用机制可能通过抑制ＣＯＸ-２活性,使ＰＧＥ_２产量降低,从而下调Ｂｃｌ-２表达及激活Ｂａｘ表达。     

细胞黏附分子CD44v6对膀胱癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探讨细胞黏附分子CD44v6对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响.方法:免疫细胞化学法检测正常膀胱移行上皮细胞和膀胱癌T24细胞中CD44v6蛋白的表达.用不同浓度的抗CD44v6单克隆抗体封闭细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞的生长抑制率.FCM检测封闭前后细胞凋亡率,并通过免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平的变化;Transwell小室检测细胞迁移特性的变化.结果:膀胱癌T24细胞表达CD44v6蛋白,而正常膀胱移行上皮细胞几乎不表达.MTT法检测结果显示,抗CD44v6单克隆抗体可抑制T24细胞的生长(P＜0.01).抗CD44v6单克隆抗体能增加T24细胞的凋亡率(P＜0.01),并且Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加(P＜0.01).抗CD44v6单克隆抗体封闭后T24细胞的迁移能力受到抑制,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:抗CD44v6单克隆抗体封闭可以抑制膀胱癌细胞的增殖及迁移能力,同时诱导膀胱癌细胞凋亡,其机制可能与Bcl-2和Bax基因表达水平变化有关.     

Apoptosis of bladder transitional cell carcinoma T24 cells induced by adenovirus-mediated inducible nitric oxide synthase gene transfection

Objectives：To investigate the effects of adenovirus-mediated inducible nitric oxide synthase gene transfection on bladder transitional cell carcinoma T24 cells,and to provide novel insights and approaches to clinical therapies against bladder transitional cell carcinoma.Methods：Firstly,construct recombinant adenovirus vector pAd-iNOS of iNOS,followed by transfection of pAd-iNOS into HECK293 packaging cells.Thirdly,harvest recombinant adenovirus rAd-iNOS after amplification and purification procedures.Finally,transfect the recombinant adenovirus rAd-iNOS into human bladder carcinoma T24 cells and examine the effect of rAd-iNOS transfection on apoptosis of T24 and possible mechanism.Results：As shown by this study,the recombinant adenovirus rAd-iNOS was constructed successfully.The virus titer was 5.8×108 PFU/mL and recombinant was verified by PCR analysis.Transfection of adenovirus rAd-iNOS into T24 cells could induce secretion of high NO concentration,P53 protein expression upregulation,as well as promotion ofT24 cell apoptosis.Conclusions：The transfection of human bladder carcinoma T24 cells from recombinant adenovirus rAdiNOS was confirmed to induce intracellular iNOS over-expression,high production of NO,up-regulation of intracellular P53 expression and promotion of cell apoptosis.     

RNA干扰REG1A基因抑制人膀胱癌T24细胞增殖

目的:观察小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默REG1A (regenerating islet-derived 1 alpha)基因的表达对人膀胱癌T24细胞增殖及细胞周期的影响.方法:化学合成针对REG1A基因的3对siRNA,使用脂质体将其转染至T24细胞中.应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测REG1A siRNA转染后T24细胞REG1A mRNA和蛋白的表达,CCK-8(cell counting kit-8)法检测转染后的细胞增殖情况,FCM检测转染后细胞周期的变化.结果:与空白对照组比较,REG1A siRNA转染T24细胞后,REG1A mRNA和蛋白表达分别下降了(83.10±0.06)％和(55.81±0.16)％,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞增殖受到抑制(P＜0.05),G0/G1期细胞百分比明显增加(P＜0.05),细胞增殖指数下降(P＜0.05).结论:REG1A siRNA能有效抑制膀胱癌T24细胞REG1A mRNA和蛋白的表达,并抑制细胞增殖.     

Survivin小分子干扰RNA对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响

背景与目的:膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,通常与体内某些基因突变导致细胞周期改变和抗凋亡机制有关。凋亡抑制蛋白家族(IAPs)的新成员Survivin,通过诱导细胞增殖和抑制细胞凋亡参与了人类多种肿瘤的发生,其中包括膀胱癌。本研究探讨转染靶向survivin的小分子干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)对膀胱癌生物学行为的影响。方法:设计、合成一对survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染T24膀胱癌细胞,分成不同的浓度组(50～200nmol/L);鼠异位膀胱肿瘤模型中瘤内注射不同剂量的siRNA(5!g和50!g)。分别于体外和体内观察siRNA对膀胱癌生物学行为的影响。结果:survivin编码基因序列特异性siRNA能有效下调survivin基因表达水平,最大效应浓度为100nmol/L,此时survivin表达水平下调了75.91%,并显著的抑制了细胞增殖,抑制率达55.29%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。同时,细胞凋亡率亦由2.8%增加至45.70%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。裸鼠移植瘤内重复多次注射50!g survivin-siRNA能够明显抑制肿瘤生长,与对照相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:survivin-siRNA能显著下调膀胱癌细胞survivin基因表达水平,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

慢病毒介导NDRG2基因过表达抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭和迁移

目的： 观察N-Myc下游调节基因-2（N-Myc downstream-regulated gene 2, NDRG2）过表达对人膀胱癌T24细胞体外侵袭和迁移的影响。 方法： 采用携带NDRG2基因的慢病毒Lenti-NDRG2感染T24细胞,构建稳定过表达NDRG2的细胞株。Western blotting检测T24细胞中NDRG2、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2和MMP-9的表达,Transwell体外迁移和侵袭实验观察过表达NDRG2对T24细胞体外迁移和侵袭的影响。 结果： 建立了稳定过表达NDRG2的T24细胞株。与Lenti-Lacz组和空白对照组相比,Lenti-NDRG2组NDRG2蛋白的表达\[(30.1±1.27) vs (9.9±1.24)、(8.2±1.28), P<001\]明显提高;Lenti-NDRG2组MMP-2 \[(13.5±1.32) vs (30.7±1.29)、(28.8±1.30), 均P<0.01\]和MMP-9 \[(11.7±127) vs (25.2±1.28)、(26.4±1.31), 均P<0.01\]的表达明显降低;Lenti-NDRG2组T24细胞的侵袭细胞数\[(18.1±3.4) vs (88.5±4.2)、(90.2±4.1)个,均P<0.01\]和迁移细胞数\[(20.1±3.5) vs (109.4±5.6)、(113.0±4.9)个,均P<0.01\]明显减少。 结论： 慢病毒介导的NDRG2基因过表达可能通过降低MMP-2和MMP-9的表达而抑制人膀胱癌T24细胞的转移与侵袭。