吲哚美辛对刀豆蛋白A诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

吲哚美辛（消炎痛）预处理能诱导大鼠对四氯化碳性和半乳糖胺性肝损伤及能诱导小鼠对醋氨酚性肝损伤产生明显的保护作用。本实验观察了吲哚美辛是否对刀豆蛋白A（ConA）诱导的肝损伤也有保护作用。用Balb／c雄性小白鼠24只，随机分为3组，实验前16h开始禁食，自由饮水。吲哚美辛浓度0．5mg／1ml，在肝损伤模型制备前12h皮下注射一次（10mg／kg），而急性肝损伤动物模型的制备采用ConA尾静脉注射20mg／kg，0．3ml／只；以无菌磷酸盐缓冲液0．3ml／只同法注射为正常对照。在小鼠注射ConA或磷酸盐缓冲液后Zh各组随机抽取2只鼠按常规方法制…     

EGCG对ConA诱导的肝损伤小鼠NF-κB和ICAM-1表达的影响

目的通过观察表没食：于儿茶素没食子酸酯（EGCG）对ConA诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中NF-κB及ICAM-1表达的影响,来探讨EGCG对小鼠的肝保护机制。方法C57BL／6小鼠分成4组：对照组、EGCG对照组、ConA模型组．EGCG＋ConA组。EGCG对照组及EGCG＋ConA组小鼠给予EGCGEl服（5mg／kg）10d后,予模型组小鼠静脉注射ConA（15mg／kg）建造肝损伤模型。采血及留取肝组织,HE法检测肝组织病理变化,ELISA法检测NF-KB及ICAM-1的表达。结果ConA模型组小鼠肝损伤明显,NF-κB及ICAM-1的表达明显增多,与对照组比较有显著性差异（P〈0．05）;EGCG治疗组肝损伤减轻且伴NF-KB及ICAM-1的表达下降,与模型组比较差异明显（P〈0．05）。结论EGCG对ConA诱导的免疫性肝损伤小鼠有保护作用．其机制可能与调节NF-κB及ICAM-1的表达有关。     

脂肪因子对急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的作用

目的 探讨脂肪因子--脂联素和瘦素对急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的干预作用。方法 雄性BALB/c小鼠26只随机分为4组：刀豆蛋白A(ConA)组8只：静脉注射ConA；脂联素组5只：在静脉注射ConA前腹腔内注射脂联素；瘦素组5只：在静脉注射ConA前腹腔内注射瘦素；对照组8只：静脉注射生理盐水。注射ConA8h后处死小鼠，HE染色观察肝组织的炎症程度，TUNEL法和流式细胞术检测肝细胞凋亡率。结果 与ConA组比较，脂联素组肝组织炎症程度明显减轻，血清ALT水平和肝细胞凋亡率均降低（p<0.01），瘦素组肝细胞凋亡率升高（p<0.01），而肝组织炎症变化及血清ALT水平两组无差异。结论 脂联素可抑制肝细胞凋亡、减轻急性肝损伤，而瘦素则促进肝细胞凋亡，对炎症无明显影响。     

敲除Colgalt2基因加重小鼠急性肝损伤

目的：初步探讨Colgalt2基因介导的胶原Glcα1,2 Galβ1?糖基化修饰在急性肝损伤过程中的作用。方法取60只Colgalt2＋／＋小鼠和60只Colgalt2－／－小鼠进行急性肝损伤实验,雌雄各半。每组随机选取20只小鼠腹腔注射CCl4（CCl4∶橄榄油＝2∶7,20 ml／kg）。观察小鼠死亡情况,并绘制生存曲线。每组剩余40只小鼠随机分为0、4、8、12 h组,每组10只,腹腔注射CCl4（剂量同上）。分别于0、4及8 h各处死6只小鼠,之后将4及8 h组剩余的小鼠均纳入12 h组（ Colgalt2＋／＋小鼠, n＝14; Colgalt2－／－小鼠, n＝16）,并于12 h处死小鼠。 HE染色观察肝组织的病理学改变,取血清进行生化指标ALT、 AST测定。利用qRT?PCR和Western印迹技术检测小鼠Colgalt2在基因及蛋白水平的表达情况。结果Colgalt2基因在Col?galt2＋／＋小鼠肝组织内表达,而在Colgalt2－／－小鼠肝组织内不表达。注射CCl4后10 h, Colgalt2＋／＋小鼠死亡率为35％, Colgalt2－／－小鼠死亡率为70％,两组小鼠死亡率差异显著（P＜0．05）。注射CCl4后12 h, Colgalt2＋／＋小鼠死亡率达50％, Colgalt2－／－小鼠死亡率为70％,差异不显著（P＞0．05）。肝功检测及HE染色结果均提示,与Colgalt2＋／＋小鼠相比, Colgalt2－／－小鼠肝损伤较重。注射CCl4后,野生型小鼠Colgalt2在RNA水平和蛋白水平表达下调。结论 Colgalt2基因敲除在一定程度上可加重小鼠急性肝损伤。该观察结果提示, Colgalt2基因介导的胶原Glcα1,2 Galβ1?糖基化修饰可能与肝损伤的修复有关。     

刀豆素蛋白A诱导小鼠肝纤维化模型的建立

目的　建立小鼠的肝纤维化模型。方法　 2 0只Balb c小鼠随机分 2组。实验组 (E组 )小鼠经尾静脉注射12 .5mg kg剂量的 1mol L刀豆素蛋白A(ConA) ,每周 1次 ,连续 6周 ;而对照组 (N组 )正常小鼠则相应地经尾静脉注射 2 5 0 μLPBS。每次注射ConA或PBS 2 4h后 ,经小鼠尾静脉取血检测ALT和AST。第 6次注射ConA一周后处死小鼠 ,取肝组织做HE染色及MassonTrichrome染色 ,显微镜下观察肝脏组织形态改变及胶原沉积情况。结果　与对照组比较 ,实验组小鼠的ALT和AST均明显升高 ,肝体积明显增大 ,表面不光滑 ,布满增生小结节。光镜下见肝组织结构紊乱 ,肝细胞坏死明显 ,有较多的淋巴细胞浸润。MassonTrichrome染色胶原明显增多。结论　反复静脉注射ConA可成功诱导建立小鼠肝纤维化模型。     

两种脂肪因子对急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的作用

目的 探讨两种脂肪因子--脂联素和瘦素对急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的干预作用.方法 雄性BALB/c小鼠26只随机分为4组:刀豆蛋白A(ConA)组8只:静脉注射ConA;脂联素组5只:在静脉注射ConA前腹腔内注射脂联素;瘦素组5只:在静脉注射ConA前腹腔内注射瘦素;对照组8只:静脉注射生理盐水.注射ConA 8 h后处死小鼠,HE染色观察肝组织的炎症程度,TUNEL法和流式细胞术检测肝细胞凋亡率.结果 与ConA组比较,脂联素组肝组织炎症程度明显减轻,血清ALT水平和肝细胞凋亡率均降低(P<0.01),瘦素组肝细胞凋亡率升高(P<0.01),而肝组织炎症变化及血清ALT水平两组无差异.结论 脂联素可抑制肝细胞凋亡,减轻急性肝损伤;而瘦素则促进肝细胞凋亡,对炎症无明显影响.     

大麻素受体2缺失促进伴刀豆球蛋白A所致急性肝损伤小鼠肝巨噬细胞的增殖与活化

目的探讨大麻素受体2(CB2)缺失对伴刀豆球蛋白A(ConA)所致急性肝损伤小鼠肝巨噬细胞的影响。方法 20只8周龄野生型(WT)C57BL/6J雄性小鼠分为对照组、模型组; 20只CB2基因敲除(CB2~(-/-))C57BL/6J雄性小鼠随机分为CB2~(-/-)对照组、 CB2~(-/-)模型组。WT和CB2~(-/-)小鼠模型组尾静脉注射ConA(20 mg/kg)复制小鼠急性肝损伤模型,对照组注射等量PBS。造模9 h后,留取血清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT), HE染色观察各组肝损伤情况, Western blot法分别检测肝巨噬细胞相关CD68、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平,免疫组织化学染色法检测肝组织F4/80的表达。结果与两组对照组相比,两组模型组小鼠肝脏损伤程度严重,血清ALT明显增高,肝组织F4/80阳性表达及CD68、 TNF-α蛋白水平均明显增强;与WT模型组比较, CB2~(-/-)模型组小鼠肝损伤程度和损伤面积增加,血清ALT有所增高,肝组织F4/80阳性表达以及CD68和TNF-α蛋白水平均有所升高。结论 CB2基因缺失促进ConA所致急性肝损伤小鼠肝脏中巨噬细胞的增殖与活化。     

两种不同种属小鼠急性免疫性肝损伤模型的比较

目的 探讨刀豆蛋白A(ConA)引起两种不同种属小鼠急性免疫性肝损伤的剂量差异。方法 雄性BALB/C小鼠和雄性C57BL/6小鼠分别为36只和40只。BALB/C小鼠分为对照组和5个(5、10、15、20和25 mg/kg ConA)实验组,C57BL/6小鼠分为对照组和5个(5、7.5、10、12.5和15 mg/kg ConA)实验组,实验组尾静脉注射设定剂量ConA。禁食不禁水,16 h后摘眼球采血,并取肝、脾和胸腺组织称重计算脏器指数,病理学检测肝组织,比色法测定血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,ELISA检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,并结合各组动物死亡率,以确定最佳ConA剂量。结果 在BALB/C小鼠中,25 mg/kg剂量ConA死亡2只;AST、ALT活性和TNF-α含量与ConA呈剂量依赖性升高(P<0.05);肝脏指数与ConA的剂量呈现正相关(P<0.05);脾脏指数在5 mg/kg时高于10和15 mg/kg,表现出先升高再降低再升高的趋势。在C57BL/6小鼠中,ConA剂量在10、12.5和15 ...     

内毒素休克大鼠脑损伤的分子机制及人参二醇组皂苷的影响

目的：通过复制大鼠内毒素休克模型，探讨内毒素引起脑损伤的分子机制，同时对比观察了人参二醇组皂苷（PDs）与地塞米松（Dex）对其的影响。方法：大鼠随机分为实验对照（Control）组，内毒素休克（LPS）组，地塞米松（LPS＋Dex 2mg/kg）组，人参二醇组皂苷低剂量（LPS＋PDSL，22．5mg/kg）组，中剂量（LPS＋PDSM，45．0mg／kg）组和高剂量（LPS＋PDSH，90．0mg／kg）组，每组再分为休克后1h处理组和4h处理组。大鼠舌下静脉注射内毒素（4mg／kg）1h,4h后检测脑组织中内毒素信号转导途径的变化。     

谷胱甘肽对酵母多糖诱导的小鼠肝TNF-α基因表达的影响

在分子水平上研究谷胱甘肽对酵母多糖诱导的小鼠肝组织肿瘤坏死因子－α基因表达的影响。腹腔注射（ip)谷胱甘肽（20mg/kg)，然后ip酵母多糖（0.5g/kg)。RT－PCR检测肝组织TNF－αmRNA水平，放射免疫地检测TNF－α蛋白水平及DTNB显色法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px)活性。发现损伤组肝组织TNF－αmRNA，蛋白水平高于对照组（P＜0．05），谷胱甘肽组肝组织TNF－αmRNA，蛋白水平都低于损伤组。谷胱甘肽组肝组织谷胱甘须过氧化物酶活性高于其他各组（P＜0．05）。谷胱甘肽抑制了由酵母多糖诱导的小鼠肝组织TNF－αmRNA蛋白的表达。     

柔肝方通过抑制纤维化蛋白抗肝纤维化的机制研究

目的:柔肝方是上海市名中医王灵台教授治疗肝纤维化的临床有效验方,本研究旨在探讨柔肝方通过抑制纤维化蛋白(FBRS)抗肝纤维化的分子机制.方法:质谱法鉴定柔肝方的化学成分及其入血成分.BALB/c小鼠随机分对照组、模型组、柔肝方高剂量组、柔肝方中剂量组和柔肝方低剂量组.通过尾静脉注射ConA(12.5 mg/kg),每周...     

SBHL对小鼠免疫功能影响的实验研究

目的：探讨澳洲茄胺盐酸盐（SBHL）对环磷酰胺处理小鼠免疫功能的影响。方法：BALB/c小鼠用环磷酰胺造成免疫抑制模型,同时尾静脉注射SBHL 7天,观察小鼠免疫器官重量,脾细胞特异性抗体的产生、血清凝集素滴度、溶血素CH50值、ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及血清中肿瘤坏死因子α含量的变化。结果：SBHL（40 mg/kg）尾静脉注射7天,小鼠胸腺、脾脏重量增加,ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖明显,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能显著增强,给药组小鼠血凝素滴度、溶血素CH50值、TNF-α也高于对照组。结论：SBHL能明显的改善环磷酰胺抑制的小鼠免疫功能,这可能是澳洲茄胺盐酸盐抗肿瘤的另一作用机理。     

大环内酯类抗生素减轻大鼠油酸性急性肺损伤

目的：观察大鼠油酸性急性肺损伤过程中的肺组织病理改变，并比较大环内酯类抗生素干预前后油酸肺组织病理形态学的变化及肺组织和血清中TNF-α、IL-10含量的变化。方法：48只健康Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组：尾静脉注射生理盐水（0.15 mL/kg）；油酸（OA）模型组：尾静脉注射油酸（0.15 mL/kg）；红霉素预防组和阿奇霉素预防组：分别尾静脉注射红霉素针剂（75 mg/kg）和阿奇霉素针剂（15 mg/kg）后1 h时再选另1条尾静脉注射油酸（0.15 mL/kg）；红霉素治疗组和阿奇霉素治疗组：分别尾静脉注射油酸（0.15 mL/kg）后0.5 h时选另1条尾静脉分别注射红霉素针剂（75 mg/kg）和阿奇霉素针剂（15 mg/kg），注射油酸4 h后取材进行各组大鼠肺组织病理形态学评分，计算肺湿干重比，检测肺组织及大鼠血清TNF-α及IL-10含量。结果：油酸致大鼠急性肺损伤时肺组织病理形态学评分值明显高于对照组（P＜0.01），肺湿干重比值高于对照组（P＜0.01），肺组织及血清TNF-α、IL-10含量也明显高于正常对照组（P＜0.01），药物干预组与OA模型组比较，肺组织病理形态学评分值明显降低（P＜0.01），肺湿干重比值明显减小（P＜0.05），肺组织及血清TNF-α含量明显减少（P＜0.01），而肺组织及血清IL-10含量无显著差别（P＞0.05）。结论：大鼠静脉注射油酸可导致肺损伤和全身炎症反应；大环内酯类抗生素红霉素和阿奇霉素可以不同程度抑制TNF-α的产生并减轻油酸性急性肺损伤。     

急性髓系白血病干细胞NOD/SCID小鼠白血病模型的建立

目的探讨用非肥胖型糖尿病/严重联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠和经流式细胞仪分选出的KG1a中CD34＋CD38-的干细胞亚群建立白血病干细胞（LSCs）动物模型,为靶向治疗LSCs的药物筛选奠定体内实验基础。方法 18只雌性NOD/SCID小鼠,体质量18～20 g,鼠龄6～8周龄。实验组12只,应用流式细胞仪分选KG1a细胞中具有LSCs特性的CD34＋CD38-亚群,以2×106个/只尾静脉注射经全身X射线照射2Gy的NOD/SCID小鼠;正常对照组6只,只注射磷酸盐缓冲溶液。观察两组小鼠的一般情况和白血病发生情况,应用形态学、组织病理检查、流式细胞术、骨髓染色体检查等检测实验组小鼠的外周血、骨髓、肝脏、脾脏的白血病细胞标志。结果接种2周后实验组小鼠外周血可见白血病细胞,接种30 d实验组小鼠的白血病发病率为100%,无自发缓解;外周血、骨髓、肝、脾中均可发现大量的白血病细胞浸润;实验组小鼠骨髓细胞中CD13抗原阳性率15.47%～23.66%,并可见KG1a细胞的核型特征。结论尾静脉接种流式细胞仪分选后的CD34＋CD38-KG1a细胞于全身亚致死量X射线照射后的NOD/SCID小鼠,能成功建成全身播散的白血病模型,为进一步研究LSCs的靶向治疗药物奠定实验基础。     

利用CRISPR/Cas-9技术抑制热休克蛋白Gp96的表达对小鼠酒精性肝纤维化的影响

目的 探讨热休克蛋白Gp96对小鼠酒精性肝纤维化的影响。 方法 健康雄性C57BL/6 J小鼠220只,随机分为4组：正常对照组(n=10),生理盐水+酒精诱导纤维化组(n=70)。尾静脉注射CRISPR表达质粒Gp96-sgRNA3+酒精诱导肝纤维化组（n=70）,腹腔注射核因子κB（NF-κB）抑制剂PDTC+酒精诱导肝纤维化组（n=70）。于酒精诱导第8周眼球取血后处死各组小鼠,测定各组小鼠血清谷草转氨酶（AST）活性,HE染色检测各组小鼠肝脏病理变化,天狼猩红染色检测各组小鼠肝纤维化情况,过碘酸-雪夫(PAS)染色检测各组小鼠肝糖原变化情况;免疫印迹法检测小鼠肝脏Gp96和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达变化。 结果 与正常对照组相比,其余3组AST酶活性显著上升,肝纤维化加重,糖原显著减少（P<0.01）;与生理盐水+酒精组相比,注射质粒Gp96-sgRNA3+酒精组和注射NF-κB抑制剂+酒精组AST上升更为明显,肝纤维化更严重,糖原减少更多,Gp96表达显著下降,TGF-β1表达显著增加（P<0.01或 P<0.05）。 结论 尾静脉注射CRISPR表达质粒Gp96-sgRNA3显著抑制了小鼠肝脏Gp96的表达,促进了小鼠酒精性肝纤维化程度,NF-κB信号通路对Gp96的表达起到一定的调控作用。     

氯胺酮对内毒素休克小鼠存活率的影响

目的: 研究氯胺酮对内毒素休克小鼠72 h存活率的影响.方法: 实验小鼠随机分为阳性对照组( LPS组, n=23)、氯胺酮1组(K1组, n=22)、氯胺酮2组(K2组, n=23),各组小鼠均经尾静脉注射LPS(25 mg/kg),K1、K2组分别在LPS注射前30 min肌肉注射氯胺酮 (100 mg/kg),K2组还在LPS注射后1、4、7 h皮下注射氯胺酮(20 mg/kg),观察72 h存活率.结果: 3组小鼠的72 h存活率分别为21.74%、54.53%、69.57% ,K1、K2组值分别显著(P＜0.05)、非常显著(P＜0.01)地高于 LPS组.结论: 氯胺酮可提高内毒素休克小鼠的72 h存活率,此作用可能与其抑制LPS刺激后机体的炎症反应有关.     

p38MAPK在细胞内的定位及其对LPS刺激的反应

目的研究氯胺酮对内毒素休克小鼠72h存活率的影响.方法实验小鼠随机分为阳性对照组(LPS组,n=23)、氯胺酮1组(K1组,n=22)、氯胺酮2组(K2组,n=23),各组小鼠均经尾静脉注射LPS(25mg/kg),K1、K2组分别在LPS注射前30min肌肉注射氯胺酮(100mg/kg),K2组还在LPS注射后1、4、7h皮下注射氯胺酮(20mg/kg),观察72h存活率.结果3组小鼠的72h存活率分别为21.74%、54.53%、69.57%,K1、K2组值分别显著(P＜0.05)、非常显著(P＜0.01)地高于LPS组.结论氯胺酮可提高内毒素休克小鼠的72h存活率,此作用可能与其抑制LPS刺激后机体的炎症反应有关.     

微血栓大鼠循环内皮细胞,血浆内皮素和一氧化氮测定的结果分析

目的：对微血栓动物模型行普通肝素和低分子量肝素的治疗，通过内皮细胞计数（CEC）、内皮素（ET）、一氧化氮（NO）三项指标观察分析其血管内皮细胞损害及肝素的治疗效果。方法：对18只wistar大鼠行尾静脉注射高分子右旋糖苷（高右），制成微血栓动物模型。其中12只在高右基础上分别予普通肝素（普肝组，n＝6）和低分子量肝素（低肝组，n＝6）治疗。其余6只不治疗。另以5只wistar大鼠行尾静脉注射生理盐水为正常对照组（对照组，n＝5）。对上述各组作循环内皮细胞计数（CEC）、血浆内皮素（ET）及一氧化氮（NO）测定。结果：高右组CEC、ET高于对照组和治疗组（P＜0．05），NO则低于对照组和治疗组（P＜0．05）。治疗组的上述结果均有明显恢复至对照组的趋势。结论：微血栓大鼠有血管内皮损伤，普通肝素及低分子量肝素不仅能抗微血栓形成，且可促进血管内皮细胞功能恢复，其中以低分子量肝素为优。     

振动对小鼠体内尾静脉气栓模型影响的实验研究

本文在振动对管道气栓体外模拟实验研究的基础上［１］，对小鼠尾静脉按不同的Ｋ值（注入空气量／体重）注入空气，以形成气栓实验模型，观察Ｋ与存活率之间的关系，以及Ｋ＝５μＩ／ｇ、Ｋ＝－μＩ／ｇ时振动对小鼠尾静脉气栓的影响。结果表明：当Ｋ＝５μＩ／ｇ时，在振动频率为２０Ｈｚ、加速度为１．１ｇ的条件下，振动组的存活率显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）。这表明在上述条件下振切对小鼠体内尾静脉注入气体所形成的气栓有明显的消除作用。     

T-bet重组腺病毒对哮喘小鼠Thl/Th2免疫平衡的调节

目的探讨静脉应用T-bet重组腺病毒（AdT-bet）对哮喘模型小鼠过敏性气道炎症及Th1／Th2免疫失衡的影响。方法36只C57BL/6小鼠随机分为AdT-bet治疗组（A组）、模型对照组（B组）、正常组（C组）。以卵蛋白（OVA）、氢氧化铝免疫建立哮喘模型，A组激发前尾静脉注射100μL的AdT-bet（1×10^8 PFU/μL），各组激发后肺泡灌洗分析细胞组份，分离肺淋巴细胞测定细胞因子分泌水平，以流式细胞仪检测CD3^＋、CD4^＋ T细胞比例及表达IFNγ和IL-4的比例，比较各组肺组织学改变。结果静脉应用AdT-bet组与对照组相比：①可明显抑制抗原激发后气道内嗜酸性粒细胞的浸润（P〈0．01）；②明显抑制肺淋巴细胞产生IL-4、IL-5，增加了IFNγ的产生；③肺脏淋巴细胞CD4^＋ IFNγ百分比及IFNγ^＋/IL-4^＋明显升高（P〈0．01），而CD4^＋ IL-4^＋百分比则明显下降；④明显抑制哮喘鼠气道内及肺泡内的过敏性炎症反应。结论激发前静脉用AdT-bet对哮喘小鼠过敏性气道炎症有明显的防治作用，其机制可能与表达的T-bet上调Th1／Th2比值，从而调整了免疫平衡有关。