SLE病人外周血Bcl—2／JH基因重排检测的意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测３１例ＳＬＥ病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排现象和流式细胞仪间接双标记法分析其Ｔ（ＣＤ３）、Ｂ（ＣＤ１９）细胞Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果显示，ＳＬＥ病人Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于正常人（４２．９５％±２８．４７％对比９．９４％±４．９６％，Ｐ＝０．０００４），尤其以活动期ＳＬＥ病人为明显，而Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达与正常人之间并无统计学差异（７９．２１％±１０．６９％对比８１．９６％±６．９７％；Ｐ＝０．４６０２）。７例ＳＬＥ病人具有典型的Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排（占２２．５８％），且均为ＳＬＥ活动期病人，其Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于无基因重排的ＳＬＥ病人，其Ｂ细胞Ｂｃｌ－２表达并无差异（Ｐ＞０．３９０５）。说明Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排现象可见于ＳＬＥ，并与Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白高表达有关，表明细胞凋亡抑制基因Ｂｃｌ－２在ＳＬＥ发病机制中具有重要作用。     

系统性红斑狼疮病人血T,B淋巴细胞Bcl—2的表达

目的：探讨Ｂｃｌ－２在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）发病机制中作用。方法：采用流式细胞仪双标记法检测３１例ＳＬＥ病人外周血Ｔ、Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达。结果：发现活动期ＳＬＥ病人活动期ＳＬＤ病人ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于非活动期ＳＬＥ病人、其他疾病组和正常对照组。ＣＤ１９＾＋Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达在各组之间并无统计学差异。ＣＤ３＾＋Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达的平均     

细胞凋亡调控因素有关基因的研究

抑制细胞凋亡的基因主要是Ｂｃｌ－２基因和Ｂｃｌ－２相关基因（Ｂｃｌ－ＸＬ，ＭＣＬ－１），其编码的蛋白质能抑制细胞凋亡和延长细胞寿命，其抑细胞凋亡作用以Ｂｃｌ－２最为重要。促进细胞凋亡基因或因素较多，主要有Ｂｃｌ－２相关基因（Ｂａｘ，Ｂｃｌ－Ｘｓ）、ｐ５３肿瘤抑制基因、ｃ－ｍｙｃ原癌基因、ＴＧＦ－β、Ｆａｓ抗原及其配体，其中Ｂａｘ基因、ｐ５３基因与Ｂｃｌ－２基因在细胞凋亡的调控作用方面密切相关     

降钙素基因相关肽单克隆抗体的研制及初步鉴定

以人工合成的降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）－牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联物（ＣＧＲＰ－ＢＳＡ）为免疫原，用微量脾内免疫法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取其免疫脾细胞与小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ法筛选、３次克隆化后，获得３株能稳定分泌抗ＣＧＲＰ单克隆抗体的杂交瘤细胞３Ｂ４、７Ｅ１１和８Ｆ２。用琼脂双扩散法鉴定，３Ｂ４为ＩｇＧｌ亚类，７Ｅ１１和８Ｆ２均为ＩｇＭ类。杂交瘤细胞的染色体条数在９２￣     

体外培养的人胸腺上皮细胞与胸腺细胞的相互作用

人胸腺上皮细胞（ＴＥｃ）的体外培养和传代，使研究人ＴＥｃ的特性和功能成为可能。人ＴＥｃ体外培养成功的关键是抑制成纤维细胞的生长。体外培养的人ＴＥｃ除表达角蛋白外，还表达ＨＬＡ－Ｉ类抗原、ＬＦＡ－３，ＩＣＡＭ－１和ＣＤ４０等表面抗原；可分泌ＩＬ－１，ＩＬ－６，ＩＬ－８，ＧＭ－ＣＳＦ，Ｇ－ＣＳＦ和Ｍ－ＣＳＦ等多种细胞因子和胸腺素；静息的胸腺细胞与ＴＥＳ的结合由ＣＤ２／ＬＦＡ－３介导，激活的胸腺细胞与ＴＥＣ的结合由ＣＤ２／ＬＦＡ－３和ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１共同介导；ＴＥＣ对成熟的胸腺细胞有辅助增殖的作用，对不成熟的胸腺细胞有直接激活作用：胸腺细胞可通过直接作用和分泌细胞因子的间接作用来调节ＴＥＣ的细胞因子分泌和表面抗原表达。     

高糖、肿瘤坏死因子促进血管内皮细胞表面整合素（α_vβ_3）表达

本文采用ＥＬＩＳＡ方法检测培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）表面玻璃连接蛋白受体（ＶｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒＶｎＲ即整合素家庭的α＿ｖβ＿３）的表达改变；用（５１）Ｃｒ－标记血小板（（５１）Ｃｒ－ｐｌａｔｅｌｅｔｅ，（５１）Ｃｒ－ｐＬ）检测ＨＵｖＥｃ的粘附功能；Ｆｕｒａ－２／Ａｍ负载ＥＣ，测定ＨＵＶＥＣ胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ（２＋）］），观察了高糖、肿瘤坏死因子－α（Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）对ＥＣ粘附功能的影响。结果表明：①高糖（３０ｍｍｏｌ／Ｌ）可明显促进ＥＣ与ＰＬ的粘附（ＣＰＭ值：３６１±２ｌ．９３ＶＳ２ｌ９．６７±１６．２６，ｎ＝６Ｐ＜０．０１），抗β３亚单位单抗（β３ＭｃＡｂ）可部分阻断ＥＣ与ＰＬ粘附。ＴＮＦ－α（１０００μ／ｍ１）也有相同作用（ＣＰＭ值：４ｌ０．７±１７．６ＶＳ２１９．６７±１６．２６１ｎ＝６Ｐ＜０．０１），β３ＭｃＡｂ也部分阻断ＴＮＦ－α诱导的ＥＣ－ＰＬ间的粘附。②不同浓度高糖和ＴＮＦ－α不同时间可影响ＥＣ表面的α＿ｖβ＿３表达，并且在一定范围内有浓度和时间依赖性。③高糖和ＴＮＦ－α可明显增加ＥＣ的［Ｃａ（２＋）］ｉ，上述资料提示?     

抗细菌核心糖脂域McAb对LPS体外诱导细胞释放TNF－α和IL－6及其mRNA表达的影响

用细胞因子活性检测，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，在体外研究了抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）对ＬＰＳ诱导人外周血单核细胞（ｈＰＢＭＣ）释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６及其ｍＲＮＡ表达水平的影响。结果表明，ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４在体外有抑制ＬＰＳ诱导细胞释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６的作用；Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果证实，这３株ＭｃＡｂ能分别降低细胞ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达的水平；提示抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ可能通过与ＬＰＳ的结合而中和ＬＰＳ，从而降低或阻碍了效应细胞炎性细胞因子ｍＲＮＡ的表达，达到降低相应细胞因子的作用。     

促肝细胞生长素诱导人肝癌细胞（BEL－7402）凋亡

本文从细胞学、ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞术三方面研究促肝细胞生长素（ｐＨＧＦ）在体外对肝癌细胞增殖活性的影响。结果表明：ｐＨＧＦ对肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞增殖有抑制作用，并存在剂量和时间相关性。其４８ｈ的半数抑制浓度（ＩＤ５０）为０．３７ｍｇ／ｍｌ±０．０４ｍｇ／ｍｌ。而３７℃灭活的ｐＨＧＦ对ＢＥＬ－７４０２细胞增殖在１５ｈ无抑制作用，在２４和４８ｈ抑制作用很弱（ＩＤ５０＞１．５ｍｇ／ｍｌ）。ＤＮＡ凝胶电泳结果表明，ｐＨＧＦ可诱导ＢＥＬ７４０２细胞产生细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）。流式细胞术（ＦＣＭ）结果显示：ｐＨＧＦ抑制ＢＥＬ－７４０２细胞增殖过程是先使细胞停留在Ｇ０／Ｇ１期，继而诱导细胞产生凋亡。后两项结果均显示ｐＨＧＦ对人肝癌细胞凋亡的诱导里时间和剂量相关性。     

促肝细胞生长素诱导人肝癌细胞（BEL－7402）凋亡

本文从细胞学、ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞术三方面研究促肝细胞生长素（ｐＨＧＦ）在体外对肝癌细胞增殖活性的影响。结果表明：ｐＨＧＦ对肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞增殖有抑制作用，并存在剂量和时间相关性。其４８ｈ的半数抑制浓度（ＩＤ５０）为０．３７ｍｇ／ｍｌ±０．０４ｍｇ／ｍｌ。而３７℃灭活的ｐＨＧＦ对ＢＥＬ－７４０２细胞增殖在１５ｈ无抑制作用，在２４和４８ｈ抑制作用很弱（ＩＤ５０＞１．５ｍｇ／ｍｌ）。ＤＮＡ凝胶电泳结果表明，ｐＨＧＦ可诱导ＢＥＬ７４０２细胞产生细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）。流式细胞术（ＦＣＭ）结果显示：ｐＨＧＦ抑制ＢＥＬ－７４０２细胞增殖过程是先使细胞停留在Ｇ０／Ｇ１期，继而诱导细胞产生凋亡。后两项结果均显示ｐＨＧＦ对人肝癌细胞凋亡的诱导里时间和剂量相关性。     

鼻咽癌组织中bcl—2,bax和p53的表达及其与瘤细胞？…

目的;了解鼻咽癌细胞中瘤细胞ｂｃｌ－２、ｂａｘ和ｐ５３的表达及其与瘤细胞凋亡指数的关系。方法：对３８例未经治疗的鼻咽癌组织,应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测瘤ｂｃｌ－２、ｂａｘ和ｐ５３的表达;末端标记细胞死亡检测法（ＴＵＮＥＬ）计算癌细胞的凋亡指数。结果：（１）３７例（９７．４％）中有９０％左右的瘤细胞呈ｂｃｌ－２过表达;（２）３８例（１００％）中有７０％左右的瘤细胞过表达ｂａｘ;（３）２９例（７６．３     

p16INK4A和 p15INK4B对人肝癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的　为探讨抑癌基因 p16 INK4 A和 p15 INK4 B对 Rb基因状态不同的人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法　在分析细胞系遗传背景鉴定基础上采用脂质体将构建的 p XJ- p16、p XJ- p15重组质粒转染人肝癌细胞系 BEL74 0 2 (p16 / p15 Rb )和 SMMC772 1(p16 / p15 / Rb- )。应用 PCR、RNA斑点印迹、MTT、集落形成、流式细胞仪等技术检测外源性 p16和 p15基因、m RNA表达及其对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。结果　经转染的 BEL74 0 2 - p16 ,BEL74 0 2 - p15细胞 ,分别存在外源性 p16、p15基因 ,在含外源基因细胞中相应的 m RNA表达增强 ;BEL74 0 2 - p15细胞生长速度、集落形成率显著低于对照细胞 BEL 74 0 2 (P<0 .0 1) ;细胞周期分析观察到与亲本细胞比较 ,BEL 74 0 2 - p15的 G1期细胞由 37.7%增高到 4 3.6 % ,S期细胞由 2 2 %下降到 13% (P<0 .0 5 ) ,并出现 G1亚峰 (凋亡峰 )。与此相反 ,BEL74 0 2 - p16细胞增殖未见抑制 ,细胞周期分布无明显差异 ,集落形成率也未见减少。此外 ,SMMC772 1- p16细胞增殖也无抑制。结论　外源性 p15 INK4 B具有抑制人肝癌细胞生长 ,诱导细胞凋亡的作用 ,其作用不受内源性p15影响。而 p16 INK4 A对肝癌细胞生长抑制的作用可能依赖于 RB途径的完整性。     

抗CD28单抗对T细胞体外抗瘤作用的影响

采用健康人外周血T淋巴细胞分别与BEL 740 2人肝癌细胞和抗CD2 8混合培养 ,检测淋巴细胞活化增殖能力、CTL细胞的杀伤活性、培养上清IFN γ和TNF α的水平。结果发现 ,在BEL 740 2刺激细胞存在时 ,抗CD2 8促进增殖的最佳浓度为 6 μg/ml,而单一抗CD2 8不能刺激T细胞增殖。BEL 740 2细胞和抗CD2 8共刺激后IFN γ和TNF α分泌均比单纯BEL 740 2高 ,同时其诱生的CTL细胞杀伤BEL 740 2的能力也强于对照组 ,其差异均具有显著性 (P <0 0 1)。上述结果提示 ,抗CD2 8单抗共刺激诱导CD4+ 和CD8+ T细胞参与抗肿瘤免疫 ,使IFN γ、TNF α的分泌增多 ,增强了体外T细胞抗瘤作用。     

Induction of tumor cell apoptosis via Fas/DR5

The apoptosis inducing effects on tumor cell lines MGC803, BEL7402 and HL60 by Fas ligand and anti-human DR5 monoclonal antibodies （anti-DR5 mAb） and the underlying mechanism was studied. Fas/DR5 mRNA was detected by RT-PCR. Cytotoxicity exerted by FasL/anti-DR5 mAb on tumor cell lines was measured by MTT assay and the induced apoptosis was determined by agarose gel electrophoresis. Flow cytometry was employed to analyze the mode of cell death. The mRNA expression of DR5 in MGC803 and BEL7402 cells after giving anti-DR5 mAb was up-regulated compared with control group, while it was down-regulated in HL60 cells in the same condition. The mRNA expression of Fas in HL60 was higher after giving FasL compared with control group, while it was lower in MGC803 and BEL7402. MGC803 and BEL7402 were sensitive to anti-DR5 mAb but partially to FasL, and HL60 was sensitive to FasL but less sensitive to anti-DR5 mAb. Apoptosis induced by Fas ligand and anti-DR5 mAb vary among tumor cell lines. The underlying mechanism may be relevant to Fas/DR5 mRNA expression, which was presented as the release of caspase-8 and Bcl-2.     

P53融合蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

目的 为研制出能特异与Ｐ＾５３结合的单克隆抗体,使对Ｐ＾５３的检测得到更为广泛的应用。方法 用ＰＣＲ技术扩增编码人Ｐ＾５３Ｎ－端１８０个氨基酸的ＤＮＡ片段并将其克隆在谷胱苷肽转移酶（ＧＳＴ）表达质粒Ｐ＾ＧＥＸ－２Ｔ中。用该重组质粒转化大肠杆菌ＪＭ１０９,并经异丙基β－Ｄ硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导产生Ｐ＾５３－ＧＳＴ融合蛋白。用Ｐ＾５３－ＧＳＴ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。常规细胞融合,间接酶联免疫吸附试     

乳猪肝提取物和阿霉素对裸小鼠肾包膜下移植肝癌细胞增殖、分化和凋亡影响的实验研究

目的:探讨乳猪肝提取物(LE)和阿霉素(doxorubicin, DXR)对裸小鼠肾包膜下移植BEL-7402肝癌细胞增殖、分化和凋亡的影响。方法:应用裸小鼠肾包膜下移植肝癌细胞,形态学观察,有丝分裂计数,超微结构观察和原位DNA末端标记技术。结果:LE组和DXR组均能明显抑制移植肝癌细胞的生长和促进凋亡。LE对肝癌细胞有丝分裂影响不明显,而DXR能抑制其有丝分裂。电镜观察表明:LE能促进细胞凋亡超微结构的变化,表现为细胞固缩、微绒毛消失、核染色质边集固缩和凋亡小体形成,而对细胞分化影响不明显。DXR组除有凋亡待征的超微结构变化外,还具有促进肝癌细胞分化的作用。结论:LE能诱发移植于裸小鼠BEL-7402肝癌细胞凋亡,而对其分化和增殖影响不明显。DXR能促进裸小鼠肝癌细胞凋亡和分化,抑制其增殖。     

抗CD28＋B7．1单抗共刺激T细胞诱导肝癌细胞凋亡的第二信使系统研究

目的：探讨T淋巴细胞活化、增殖、诱导肝癌细胞凋亡过程中第二信使系统的调控机制。方法：用CD28＋B7．1（CD80）单克隆抗体共刺激T淋巴细胞诱导肝癌细胞（BLE－7402）凋亡,测定不同诱导时间T细胞内cAMP,cGMP和Ca^2 的浓度改变及肝癌细胞凋亡情况。结果：活化的T淋巴细胞中,cAMP浓度在初期短暂升高,继而快速下降,作用于肝癌细胞后逐步回升至1－2倍,而细胞内cGMP的浓度急剧升高6－7倍,Ca^2 浓度也显著增加2－3倍,且均在第4天达最高值,与癌细胞的凋亡呈正相关,结论：T淋巴细胞内第二信使系统cAMP、cGMP和Ca^2 的水平与细胞的活化增殖、杀伤效应密切相关。     

HAP纳米粒子进入癌细胞的体外实验研究

目的 验证羟基磷灰石（HAP）纳米粒子与癌细胞共同孵育后，细胞质内发现的大量颗粒物质，是HAP纳米粒子，以证实HAP纳米粒子能以纳米粒子形式进入癌细胞。为进一步深入探讨HAP纳米粒子在癌细胞内的代谢过程提供实验依据。方法 将BEL7402肝癌细胞与HAP纳米粒子共同孵育8h后，应用透射电子显微镜观察，并进行了能谱检测和电子衍射图谱分析。结果 透射电镜观察到癌细胞内外均有片状的颗粒物质；能谱显示这些颗粒状物质为含Ca、P的粒子；电子衍射图谱测试表明其d值符合HAP晶体的特征。结论 进入到肝癌细胞内的颗粒物质即为HAP纳米粒子，说明HAP纳米粒子能以纳米颗粒的形式进入肝癌细胞。     

The performance of docetaxel-loaded solid lipid nanoparticles targeted to hepatocellular carcinoma

Human hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the major causes of death worldwide. Targeted uptake of therapeutic agent in the cell-, tissue- or disease-specific manner represents a potential technology for the treatment of HCC. A new docetaxel-loaded hepatoma-targeted solid lipid nanoparticle (tSLN) was designed and prepared with galactosylated dioleoylphosphatidyl ethanolamine. The cellular cytotoxicity, cellular uptake, subcellular localization, in vivo toxicity, therapeutic effect, biodistribution and histology of tSLNs were investigated. The tSLNs showed the particle size about 120nm with encapsulation efficiency >90%, a low burst effect within the first day and a sustained release for the next 29 days in vitro. Cytotoxicity of tSLNs against hepatocellular carcinoma cell line BEL7402 was superior to Taxotere and non-targeted SLNs (nSLNs). The tSLNs also showed better tolerant and antitumor efficacy in murine model bearing hepatoma compared with Taxotere or nSLNs. The studies on cellular uptake and biodistribution indicated that the better antitumor efficacy of tSLNs was attributed to both the increased accumulation of drug in tumor and more cellular uptake by hepatoma cells. The histology demonstrated that tSLNs had no detrimental effect on both healthy liver and liver with fibrosis. These results implied that this targeted nanocarrier of docetaxel could enhance its antitumor effect in vivo with low systemic toxicity for the treatment of locally advanced and metastatic HCC.     

DC-CIK细胞协同索拉菲尼对肝癌细胞的杀伤作用

目的:观察DC-CIK共培养细胞(DC-CIK)联合索拉菲尼( sorafenib)对肝癌细胞BEL-7402的体外杀伤效应.方法:取健康人外周血单个核细胞,加入不同细胞因子促进DC及CIK细胞成熟后混合共培养.MTT法检测用药后BEL-7402细胞增殖的情况CCK8试剂盒检测DC-CIK共培养细胞联合索拉菲尼对BEL...     

siRNA表达载体介导靶向NADH-细胞色素b5还原酶基因的RNA干扰实验研究

目的探索经载体介导的RNA干扰抑制人NADH-细胞色素b5还原酶（bSR）基因表达的可行性。方法应用网络在线软件设计并合成两条针对b5R mRNA的RNA干扰的DNA模板片段，分别将其克隆至经过改建、带有neo基因的pSilencer1．0-U6载体上，构建成siRNA真核表达载体；脂质体转染法将上述重组质粒转入人肺成纤维细胞和BEL-7402肝癌细胞株。通过半定量RT-PCR和荧光定量RT—PCR分析，检测所构建的重组siRNA真核表达载体对b5R基因表达的干扰效应。结果获得两个能在细胞内生成靶向b5R基因siRNA的重组载体pSib5R-1和pSib5R-2；其中pSib5R-2对成纤维细胞b5R mRNA的抑制率达81.7％，对BEL-7402细胞b5R mRNA的抑制率达60％。结论两种细胞b5R基因的表达均可被载体介导的RNA干扰有效抑制；成功构建了针对b5R基因的siRNA表达载体，为建立稳定表达siRNA的、b5R酶缺陷的细胞模型提供了实验基础。