Unoprostone对猴睫状肌组织胶原Ⅲ、Ⅳ及MP—1影响的免疫组化研究

目的：探讨PGF2α类抗青光眼药Unoprostone对猴的降眼压作用是否与眼状肌组织中细胞外基质（Extracellular matrix,ECM)及基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase,MMP)的表达有关。方法：1．采用免疫组织化学方法观察正常猴睫状肌，小梁网，睫状突及虹膜组织中胶原I，Ⅲ，Ⅳ及MMP－1的分布。2．比较Unoprostone对7只猴点眼两周前后睫状肌前部纵行肌部分胶原，Ⅲ，Ⅳ及MMP－1免疫染色变化。结果：1．正常猴睫状肌，小梁网，睫状突及虹膜组织中胶源，I，Ⅲ，Ⅳ及MMP－1的分布各自具有不同特点。2．Unoprostone点眼两周后实验眼眼压均下降4mmHg以上，同时睫状肌前部纵行肌部分胶原Ⅲ染色减弱（7只动物中5只减弱），胶原Ⅳ染色减弱（7只动物中6只减弱），MMP－1染色增强（7只动物中7只增强），胶原I未见明显染色。结论：Unoprostone对猴的降眼压作用与睫状肌组织MMP表达增强，引起ECM降解加强，从而葡萄膜巩膜房水流出增加有关。     

Latanoprost及Unoprostone对兔及猴葡萄膜MMP-2表达影响的研究

目的：研究PGF2α类抗青光眼药Latanoprost和Unoprostone对兔及猴的降眼压途径有否不同。方法：1．用0．005Latanoprost、0．12％Unoprostone分别对12只兔、8只猴发10天,测量点眼前后兔及猴眼压,兔眼前房水蛋白浓度。2．采用Zymography技术对兔、猴点眼后葡萄膜中MMP－2活性进行定量分析。结果：①Latanoprost及Unoprostone都可有效降低兔及猴眼压,并且对兔眼前房水蛋白浓度无明显影响。②两种药物点眼后,猴葡萄膜中MMP－2活性增强,却对兔葡萄膜中MMP－2活性均无明显影响。结论：Latanoprost及Unoprostone对猴的降眼压作用机制在于影响了葡萄膜巩膜房水流出,而对兔眼的降压效果可能存在其他途径。     

电针干预对透镜诱导型近视豚鼠睫状肌中MMP-3、TIMP-3及Col3α1表达的影响

目的 探讨电针干预对透镜诱导型近视豚鼠睫状肌中基质金属蛋白酶(MMP)-3、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-3和III型胶原α1(Col3α1)表达的影响.方法 2周龄三色豚鼠90只随机分为正常对照(NC)组、透镜诱导型近视(LIM)组以及LIM+电针干预(LIM+EA)组;其中,NC组豚鼠不作任何干预,LIM组和L...     

体外培养猴眼小梁细胞及睫状肌细胞中组织金属蛋白酶抑制剂的表达

目的：观察体外培养的正常猴眼小梁细胞及睫状肌细胞中组织金属蛋白酶抑制剂（tissue inhibitors of metalloproteinase,TIMP)的表达,探讨生理状态下基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP)及TIMP在小梁网房水流出及葡萄膜－巩膜房水流出的通道中的作用。方法：采用Reverse-zymography技术,检测猴眼小梁细胞及睫状肌细胞中TIMP及MMP的表达。结果;猴眼小梁细胞及睫状肌细胞培养液中均可见TMIP－1、TIMP－2及TIMP－3表达,小梁细胞中MMP／TIMP比值明显高于睫状肌细胞。结论：正常状态下小梁细胞外基质的降解能力明显高于睫状肌细胞,可能是由于传统的小梁网房水流出通道作用强于葡萄膜－巩膜房水流出通道 的作用。     

MMP-1、TIMP-1及TIMP-2在正常人眼前段组织的表达

目的观察正常人眼前段组织中基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)和TIMP-2的表达,探讨正常生理状态下MMP及TIMP在小梁网房水流出及葡萄膜巩膜房水流出通道中的作用。方法应用酶免疫组织化学技术,检测正常人眼前段组织中MMP-1、TIMP-1和TIMP-2的定位。阳性结果应用图像分析系统进行定量分析。结果免疫组织化学结果显示MMP-1和TIMP-2广泛分布于人眼的虹膜、睫状体(包括睫状突上皮细胞和睫状肌)、小梁网、视网膜色素上皮(RPE)层、脉络膜及巩膜,TIMP-1分布于除小梁网外的其余组织。结论MMP-1、TIMP-2广泛分布于人眼小梁网及葡萄膜巩膜房水流出通道、RPE、脉络膜,TIMP-1广泛分布于人眼葡萄膜巩膜房水流出通道及RPE、脉络膜,对维持人眼正常房水流出及维持RPE、脉络膜功能可能具有一定作用。     

MMP-1、MMP-3、TIMP-1对外伤性PVR的影响研究

目的:观察外伤性PVR大鼠和外伤后应用人工合成基质金属蛋白酶抑制剂(GM6001)中大鼠视网膜组织MMP-1、MMP-3及TIMP-1在不同病程中的表达变化。方法:将180只SD大鼠随机分为正常对照组、外伤性PVR组和外伤后应用GM6001组。应用免疫组化法在不同时间对各组大鼠视网膜组织MMP-1、MMP-3及TIMP-1的表达进行定性、定位、半定量检测。结果:1)MMP-1、MMP-3、TIMP-1主要表达于视网膜组织的视锥视杆层、视网膜外网状层、视网膜内网状层、神经纤维层。2)各个亚组在正常对照组、外伤后应用GM6001组MMP-1、MMP-3微弱表达。3)MMP-3在外伤性PVR组1,3,7d显著表达,MMP-1在外伤性PVR组3,7,14d显著表达(P<0.05)。TIMP-1在外伤性PVR组与外伤后应用GM6001组的各个亚组均有明显表达(P<0.01)。MMP-3/TIMP-1的比率在外伤性PVR组1,3,7d增高(P<0.05)。MMP-1/TIMP-1的比率在外伤性PVR组3,7,14d增高(P<0.05)。结论:MMP-1、MMP-3与PVR形成的病理过程有关,TIMP-1与二者特异性结合抑制其活性。GM6001通过调节MMP-1/TIMP-1和MMP-3/TIMP-1达到平衡,能抑制PVR的发生和发展,干预PVR的发展进程。     

MMPs激动剂和抑制剂对人巩膜成纤维细胞MMP-1/2以及Ⅰ型胶原表达的作用研究

目的 研究基质金属蛋白酶(MMPs)家族MMP-1、MMP-2激动剂和抑制剂对人巩膜Ⅰ型胶原表达的作用,探讨MMP-1和MMP-2在人巩膜胶原代谢中的作用.方法 应用人巩膜成纤维细胞系作为研究模型,用荧光定量检测MMPs激动剂醋酸氨基苯汞(APMA)及抑制剂对人巩膜成纤维细胞MMP-1和MMP-2活性的影响;实时荧光定量反转录聚合酶链反应以及免疫印迹蛋白定量法检测比较激动剂组与抑制剂组对MMP-1/2以及Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的变化;最后用siRNA干扰敲除MMP-1、MMP-2或MMP-1/2后,检测巩膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白水平的变化.结果 MMPs激动剂引起MMP-1/2活性显著增加,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达下降,MMPs抑制剂引起MMP-1/2活性显著下降,相应的Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达增加(均P＜O.01).激动剂可引起MMP-1 mRNA表达增加(P＜0.01),对MMP-2 mRNA表达无明显影响(P＞0.05),而抑制剂能引起MMP-2 mRNA表达下降(P＜0.01),但对MMP-1 mRNA表达无显著影响(P＞0.05).应用siRNA干扰方法敲除MMP-1、MMP-2或两者同时被敲除后,MMP-1蛋白表达均显著降低(均P＜0.01),MMP-2除在MMP-1 siRNA干扰敲除组无明显变化外(P＞0.05),其余各组均显著下降(均P＜O.01);Ⅰ型胶原的表达在各敲除组中显著增加,当MMP-1和MMP-2均干扰敲除时,Ⅰ型胶原的表达增加最为显著(均P＜0.01).结论 在人巩膜成纤维细胞系中,MMP-1/2激动剂和抑制剂均能引起MMP-1/2活性改变及相应的MMP-1/2蛋白表达变化,并最终导致Ⅰ型胶原表达的变化;MMP-1和MMP-2是调控人巩膜Ⅰ型胶原重塑的关键因子.     

MMPs激动剂和抑制剂对人巩膜成纤维细胞MMP-1／2以及I型胶原表达的作用研究

目的研究基质金属蛋白酶（MMPs）家族MMP-1、MMP-2激动剂和抑制剂对人巩膜I型胶原表达的作用,探讨MMP-1和MMP-2在人巩膜胶原代谢中的作用。方法应用人巩膜成纤维细胞系作为研究模型,用荧光定量检测MMPs激动剂醋酸氨基苯汞（APMA）及抑制剂对人巩膜成纤维细胞MMP-1和MMP-2活性的影响;实时荧光定量反转录聚合酶链反应以及免疫印迹蛋白定量法检测比较激动剂组与抑制剂组对MMP-1／2以及I型胶原mRNA和蛋白表达的变化;最后用siRNA干扰敲除MMP-1、MMP．2或MMP-1／2后,检测巩膜成纤维细胞I型胶原蛋白水平的变化。结果MMPs激动剂引起MMP．1／2活性显著增加,I型胶原mRNA和蛋白表达下降,MMPs抑制剂引起MMP．1／2活性显著下降,相应的I型胶原mRNA和蛋白表达增加（均P〈0．01）。激动剂可引起MMP．1mRNA表达增加（P〈0．01）,对MMP-2mRNA表达无明显影响（P〉0．05）,而抑制剂能引起MMP．2mRNA表达下降（P〈0．01）,但对MMP．1mRNA表达无显著影响（P〉0．05）。应用siRNA干扰方法敲除MMP-1、MMP-2或两者同时被敲除后,MMP-1蛋白表达均显著降低（均P〈0．01）,MMP-2除在MMP-1siRNA干扰敲除组无明显变化外（P〉0．05）,其余各组均显著下降（均P〈0．01）;I型胶原的表达在各敲除组中显著增加,当MMP-1和MMP．2均干扰敲除时,I型胶原的表达增加最为显著（均P〈0．01）。结论在人巩膜成纤维细胞系中,MMP-1／2激动剂和抑制剂均能引起MMP-1／2活性改变及相应的MMP-1／2蛋白表达变化,并最终导致I型胶原表达的变化;MMP．1和MMP-2是调控人巩膜I型胶原重塑的关键因子。     

MMP-9及TIMP-1在碱烧伤小鼠角膜中的表达

目的探讨角膜烧伤后基质金属蛋白酶9(MMP9)及其组织型抑制剂(tissueinhibitorofmetallopoteinase1,TIMP1)在小鼠角膜中的表达及意义。方法采用1mol·L-1氢氧化钠溶液烧伤昆明小鼠角膜,建立角膜碱烧伤动物模型;用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜烧伤后不同时间点MMP9及TIMP1在角膜中的分布及其积分吸光度(A)值。结果小鼠角膜碱烧伤后第2d炎性细胞增多,第7d炎症达到高峰,21d后基本消失。小鼠角膜上皮层、基底膜、以及基质层中大量炎性细胞和新生血管内皮细胞均有MMP及TIMP1表达。角膜中MMP9在第2d出现表达,第7d达高峰,以后逐渐降低;TIMP1开始表达不明显,第7d出现表达,14d达高峰,以后逐渐降低。结论小鼠碱烧伤模型炎症早期MMP9活性增高,继而TIMP1分泌增多,MMP9活性受抑,炎症减轻。提示MMP9可能是参与碱烧伤角膜溃疡形成、角膜融解及纤维化的重要调控因子,而TIMP1则在炎症的抑制过程中发挥了重要作用。     

房角关闭对兔眼小梁组织MMP-2、TIMP-2及AQP-1表达的影响

目的建立兔眼房角关闭模型,比较基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)、水通道蛋白-1(AQP-1)在对照组和模型组表达水平的变化,探讨房角关闭对小梁网功能变化的影响。方法实验研究。健康成年新西兰大白兔24只(48只眼)随机分为4组,每组6只(12只眼),每只随机选取一眼作为实验组,予玻璃体腔注入透明质酸钠联合前房放液,建立房角关闭模型,另一眼不作处理为对照组,应用免疫荧光和计算机图像分析技术分别于造模成功后1个周、1个月、2个月、4个月观察各组MMP-2、TIMP-2、AQP-1的表达情况。结果正常对照组和各实验组均有MMP-2、TIMP-2、AQP-1的表达。MMP-2在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05);TIMP-2在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05);MMP-2/TIMP-2比值在造模后1个周、1个月组与正常对照组相比无明显差异(P>0.05),而2个月组、4个月组与正常对照组相比差异明显(P<0.05);AQP-1在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05)。结论房角关闭早期,小梁网因代偿机制,仍存有部分功能,应尽早采取干预措施。     

雌激素对人角膜基质细胞MMP-2、TIMP-2及TGF-β1表达的影响

目的:在体外实验中探讨雌激素对人角膜基质细胞中基质金属蛋白酶MMP-2及其抑制剂TIMP-2和转化生长因子TGF-β1蛋白表达的影响.方法:用1.5ng/mL IL-1β模拟角膜基质细胞炎性环境,不同浓度雌激素(0,10-10,10-8,10-6,10-4mol/L的17-β雌二醇)体外作用于人角膜基质细胞,四甲基偶氮唑(MTT)比色法鉴定细胞活性.酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中MMP-2、TIMP-2及TGF-β1蛋白的表达量.结果:不同浓度雌激素(E2)对角膜基质细胞的活性没有影响.E2处理组的MMP-2、TIMP-2及TGF-β1表达量与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).E2处理组与对照组相比,雌激素处理使MMP-2及TGF-β1的表达明显减少,而TIMP-2的表达则显著增多.结论:雌激素能一定程度抑制MMP-2及TGF-β1的表达,同时促进TIMP-2的表达,这可能对正常人角膜起保护作用.     

氧化应激对泪液中MMP-3及TIMP-1表达的影响

目的 研究高温、高强度和阳光中紫外线照射下对士兵泪液中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响.方法 选择训练士兵共30人,分别于训练前、后收集泪液和抽取外周血.采用酶联免疫吸附测定法检测训练前、后士兵泪液中MMP-3和TIMP-1蛋白水平的表达;以及检测外周血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)、去甲肾上腺素(NE)、活性氧(ROS)一氧化氮(NO)、丙二醇(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达水平;采用非接触眼压计对士兵进行训练前、后的眼压测量.结果 士兵训练前、后的眼压比较无统计学意义(P>0.05);士兵训练前、后泪液中MMP-3和TIMP-1表达水平分别为(0.068±0.016)、(1.105±0.169)、(0.055±0.006)、(1.277±0.102)ng,两组训练前、后比较均有统计学意义(P<0.05);士兵训练前、后血清中ACTH,NE,ROS,NO,SOD表达水平分别为0.223±0.088,0.100±0.032,0.231±0.072,0.106±0.012,0.111 ±0.015;0.393±0.099,0.172±0.057,0.331±0.117,0.116±0.017,0.121 ±0.013,训练前、后比较均有统计学意义(P<0.05),士兵训练前、后血清中MDA表达水平比较无统计学意义(P>0.05).结论 高温、高强度和阳光中紫外线辐射下训练会对机体产生明显影响,机体产生自由基增多,使机体处于慢性氧化应激状态,泪液中MMP-3表达下降,TIMP-1表达升高.

Abstract：

Objective To investigate the changes and the role of matrix metalloproteinase (MMP)-3and tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP)-1 in soldier tears drill under high temperature, intensive exercitation and UV radiation of sunlight.Methods The numbers of subject were 30 drilled soldiers.Tears and blood from peripheral vein were obtained and tested before and after drill.Fifteen microliters of tears was collected by microcapillary tubes from each eye.MMP-3, TIMP-1, adrenocorticotropic hormone (ACTH), norepinephrine (NE), reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO), malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) were detected by Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA).Intraocular pressure (IOP)was measured by non-contact tonometer (NCT) before and after drill.Results No statistical differences in IOP were noted between before and after drill (P >0.05); MMP-3 and TIMP-1 in tears was 0.068± 0.016,1.105± 0.169; before a drill and 0.055± 0.006, 1.277± 0.102 after a drill, the differences of MMP-3 and TIMP-1 in tears between before and after drill were statistical significantly (P <0.05); The serum level of ACTH, NE, ROS, NO and SOD was 0.223± 0.088, 0.100± 0.032, 0.231± 0.072, 0.106± 0.012, and 0.111± 0.015 respectively before a drill and 0.393± 0.099, 0.172+ 0.057, 0.331± 0.117, 0.116± 0.017, and 0.121± 0.013 respectively after a drill, the serum level of ACTH, NE, ROS, NO and SOD after a drill were significantly higher than those before a drill (P <0.05); No significant difference were detected in the serum level of MDA between before and after drill (P >0.05).Conclusions Organism could be affected, and produce more free radical and turn to stress state due to drill under high temperature, intensive exercitation and UV radiation of sunlight.Oxidative stress leads to MMP-3 reduce and TIMP-1 rose in tears.     

MMP-2、TIMP-1、TIMP-2在SD大鼠眼前段组织的表达

目的观察不同年龄段正常SD大鼠眼前段组织中MMP-2、TI MP-1和TI MP-2的表达,探讨正常生理状态下MMP及TI MP在小梁网房水流出及葡萄膜巩膜房水流出通道中的作用。方法应用酶免疫组化技术,检测不同年龄段正常SD大鼠眼前段组织中MMP-2、TI MP-1和TI MP-2的定位。阳性结果应用图像分析系统进行定量分析。结果免疫组化结果显示MMP-2、TI MP-1及TI MP-2分布于SD大鼠眼前段的虹膜、睫状体及小梁网。MMP-2在眼组织各部位的阳性反应强于TI MP-1及TI MP-2。随着年龄增长,MMP-2、TI MP-1及TI MP-2表达量逐渐增加,在出生后2~3月(成年期)达最高值,以后(中老年期)出现下降。结论MMP-2、TI MP-1和TI MP-2广泛分布于不同年龄段SD大鼠的小梁网房水流出及葡萄膜巩膜房水流出通道,且随着年龄变化而改变,对维持正常房水流出具有重要作用。     

PDGF对人RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达的影响

背景研究表明血小板源性生长因子（PDGF）能调节多种细胞中基质金属蛋白酶／基质金属蛋白酶组织抑制剂（MMP／TIMP）的表达和平衡,但视网膜色素上皮（RPE）细胞中MMP／TIMP的表达与PDGF作用剂量和作用时间的关系尚不明确。目的观察PDGF对RPE细胞中MIP-2、MMP-9和TIMP-1表达的影响。方法体外培养人RPE细胞系ARPE-19,将达到70％～80％融合的细胞分为5个组。分别将0、0．1、1、10、50mg／LPDGF加入RPE细胞培养基作用36h,分别采用逆转录PCR（RT—RCR）法和Western blot法检测各组RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA及其蛋白的表达。PDGF组采用10mg／LPDGF组PDGF分别刺激RPE细胞24、36和48h,对照组用不含PDGF的培养液培养,采用逆转录PCR（RT—RCR法和Western blot法分别检测RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA及蛋白的表达。结果随着PDGF质量浓度的增加和刺激时间的延长,RPE细胞生长速度加快,细胞增生明显。PDGF刺激RPE细胞36h,随着PDGF质量浓度的增加,MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA在RPE细胞中表达相对值逐渐增加,各组间差异均有统计学意义（MMP-2 mRNA：F=79．304,P=0．000;MMP-9 mRNA：F=8．465,P=0．003）,其中1、10、50mg／LPDGF组RPE细胞中MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达相对值明显高于0mg／L PDGF组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值随着PDGF质量浓度的增加而逐渐增加,各组间差异均有统计学意义（MMP-2：F=26．550,P=0．000;MMP-9：F=80．993,P=0．000）,其中1、10、50mg／LPDGF组RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值明显高于0mg／L PDGF组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。各质量浓度PDGF组RPE细胞中TIMP-1 mRNA和蛋白表达相对值差异均无统计学意义（F=0．143,P=0．962;F=1．955,P=0．178）。随着10mg／L PDGF刺激RPE细胞时间的延长,RPE细胞中MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达逐渐增加,差异均有统计学意义（MMP-2 mRNA：F时间=83．250,P=0．002;MMP-9 mRNA：F时间=6．785,P=0．019）;各时间点RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值明显增加,差异均有统计学意义（MMP-2：F时间=11．185,P=0．041;MMP-9：F时间=968．413,P=0．000）。PDGF作用不同时间点对照组与PDGF组间MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白在RPE细胞中的表达差异均有统计学意义（分组：均P=0．000,时间点：P〈0．05）,而各时间点2个组间RPE细胞中TIMP-1表达相对值的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论PDGF上调PRE细胞中MMP-2和MMP-9的表达,其作用呈剂量和时间依赖性,但对PRE细胞中TIMP-1的表达无明显影响。PDGF导致RPE细胞中MMP／TIMP的平衡失调,从而导致细胞外基质的破坏,促进RPE细胞的迁移。     

Lat-B对家兔巩膜胶原重塑的影响

目的研究latrunculin-B（Lat-B）对兔巩膜通透性的影响,为细胞骨架因子在青光眼治疗中的应用及眼后节疾病的药物传递研究提供新的思路和理论依据。方法 36只家兔随机分为平衡盐液（BSS）组、二甲基亚砜（DMSO）组及Lat-B组,每组12只,分别用BSS、DMSO和Lat-B局部点眼,于用药前1h及用药后1、2、3、4、5、6、24h分别测量眼压,于24h后处死动物并获取部分巩膜组织,自制巩膜滤过装置测试巩膜通透性的变化,部分巩膜组织行免疫组织化学染色以检测前部巩膜组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和组织金属蛋白酶-2抑制剂（TIMP-2）的表达。光学显微镜下观察实验兔眼部各组织结构的形态学变化。结果 Lat-B组、BSS组与DMSO组点眼前后各时间点眼压的总体变化差异有统计学意义（F=25.76,P〈0.01）,Lat-B点眼后不同时间点与点眼前比较眼压呈下降趋势,差异有统计学意义（Ftime=4.50,P〈0.01）,点眼后1h即可引起眼压降低,降眼压作用可持续24h;BSS组与DMSO组点眼前后各时间点眼压变化的差异无统计学意义（P〉0.05）;Lat-B点眼后的前部巩膜对BSS的滤过较BSS组和DMSO组明显增加,3组的总体比较差异有统计学意义（F=47.50,P〈0.01）;Lat-B组、BSS组和DMSO组MMP-2及TIMP-2表达的吸光度（A）值的总体比较差异均有统计学意义（F=28.70,F=22.30,P〈0.01）。MMP-2、TIMP-2的表达Lat-B组与BSS组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,与DMSO组比较二者的表达均降低,差异均有统计学意义（P〈0.01）;BSS组和DMSO组间MMP-2及TIMP-2比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 Lat-B能够有效降低眼压,明显提高巩膜的房水流出易度,并可通过上调MMP-2、TIMP-2的表达导致巩膜胶原重塑。     

NF-κB对人眼小梁细胞MMP-3及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的研究NF-κB对人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3，MMP-3）及组织金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteihase-1，TIMP-1）mRNA表达的影响。方法采用原代培养的人眼小梁细胞，通过脂质体转染的方法，将P65表达质粒转染小梁细胞，24h后通过RT-PCR方法检测MMP-3及TIMP—1 mRNA的表达。结果P65转染后MMP-3 mRNA的表达明显增高，与正常对照组相比差异有显著性（P〈0．05），TIMP—1 mRNA的表达与正常对照组相比无明显改变（P〉0．05）。结论NF—κB的活化可激活MMP-3的表达，提示NF-κB信号通路参与了小梁网外引流通道的调控。     

MMP-9及TIMP-1在内毒素诱导性葡萄膜炎大鼠中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织型抑制剂(tissue inhitor of metallopoteinase-1，TIMP—1)在内毒素诱导性葡萄膜炎(endotoxin induced uveitis,EIU)模型中的表达及意义。方法 200μg伤寒杆菌内毒素注射于SD大鼠双后足垫。建立EIU模型。在内毒素注射后的不同时间点处死大鼠。采用免疫组织化学方法和计算机图像分析系统检测MMP-9和TIMP-1在不同时间点的表达及其积分吸光度(A)值。结果内毒素注射6h开始出现炎症，以后炎症加重。于24h达到炎症高峰，以后炎症减轻。7d时基本消退。虹膜上皮细胞，睫状体上皮细胞和渗出的炎症细胞表达MMP-9和TIMP-1。MMP-9在6h出现表达，18～24h达高峰，以后逐渐下降，7d消失。TIMP—1于24h出现表达，72h达高峰，以后逐渐下降。结论 大鼠EIU模型炎症早期MMP-9活性增高，继而TIMP-1分泌增多，MMP-9活性受抑，炎症减轻。提示MMP-9可能是参与EIU的重要调控因子，而TIMP-1则在炎症的抑制过程中发挥了重要作用。     

外源性视黄酸对人巩膜成纤维细胞MMP-2及TIMP-2 mRNA水平的影响

目的 研究外源性视黄酸（RA）对人巩膜成纤维细胞（HSF）生长的调控,以及对基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶2组织抑制剂（TIMP-2）mRNA水平的影响.方法 体外培养HSF,取第5～7代细胞,经10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol/L浓度的RA作用6 d后,进行细胞计数,观察RA对HSF生长的调控情况;用Real-time PCR检测RA作用后HSF中MMP-2、TIMP-2的mRNA水平.对不同浓度组问比较采用单因素方差分析,两两比较采用t检验.结果 RA作用HSF 6 d后,浓度≥10^-9 mol/L RA组对细胞的生长抑制作用差异均有统计学意义（P〈0.05）,随着RA浓度增高,细胞数量逐渐减少,抑制作用呈剂量效应.RA作用6 d后,RA≥10^-8 mol/L时,HSF中MMP-2 mRNA水平有升高趋势,但各组差异无统计学意义（P〉0.05）;RA≥10^-9 mol/L时,TIMP-2 mRNA水平下降（P〈0.05）.结论 RA能够抑制HSF的生长,并可能通过调控TIMP-2的mRNA水平,使巩膜主动重塑.     

不同浓度重组Canstatin蛋白对碱烧伤后角膜MMP-2及TIMP-2表达的影响

目的：探讨不同浓度重组Canstatin蛋白对碱烧伤后小鼠角膜基质金属蛋白酶－2（ matrix metalloproteinase－2,MMP－2）及其组织抑制剂－2（ tissue inhibitor of metalloproteinase－2, TIMP－2）表达的影响及其调节作用。方法：BALB／c小鼠60只随机分为实验组A、实验B及对照组C,每组20只。采用1mol／L氢氧化钠溶液烧伤小鼠右眼角膜,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型,分别予以A组、B 组重组 Canstatin 蛋白3μg／mL、5μg／mL 点右眼,4次／d,对照组C组予以生理眼水点右眼。在碱烧伤后第1、3、7、14d以形态学分析评价角膜上皮损伤面积及新生血管生长的情况,并于碱烧伤后第1、3、7、14 d 应用Western－blot检测角膜MMP－2和TIMP－2的表达,增强化学发光法（ ECL）对结果进行分析。结果：形态学分析显示,A组和B组小鼠在碱烧伤后第3d起各时间点角膜上皮缺损面积均小于对照组（P＜0．01）,角膜新生血管均得到抑制,CNV面积明显小于对照组（ P＜0．01）。 Western－blot结果显示,碱烧伤后各时间点MMP－2的表达,A组和B组均明显低于对照组（P＜0．01）,TIMP－2的表达高于对照组（P＜0．01）,且A组和B组间MMP－2的表达在第14d比较差异有统计学意义（P＜0．05）,TIMP－2的表达在第7d及第14d比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：重组Canstatin蛋白可通过抑制角膜细胞及浸润的炎性细胞产生MMP－2,促进TIMP－2表达,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展,对碱烧伤后角膜的重塑起着重要作用。