糖皮质激素对机械通气大鼠肺组织iNOS、NO表达的影响

目的通过观察糖皮质激素对机械通气大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及一氧化氮(NO)表达的影响,探讨糖皮质激素对呼吸机所致肺损伤(ventilator induced lung injury,VILI)的干预作用。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、机械通气组、地塞米松(DXM)干预组。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织iNOS mRNA表达,用免疫组织化学染色法检测肺组织iNOS蛋白表达,用硝酸还原酶法测定肺组织和血浆NO含量。结果机械通气组和DXM干预组大鼠肺组织iNOS mRNA及其蛋白表达水平,以及血浆和肺组织NO含量均明显高于对照组(P<0.01);DXM干预组上述指标与机械通气组比较均明显降低(P<0.01)。结论糖皮质激素可通过抑制肺组织iNOS的表达,减少NO的生成,对机械通气大鼠肺组织具有保护作用。     

还原型谷胱甘肽对大鼠不同潮气量机械通气NF-κB、TNF-α蛋白表达影响

目的探讨还原型谷胱甘肽对大鼠不同潮气量机械通气对NF-κB、TNF-α表达影响。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分成对照组（A组）、正常通气组（B组）、过度通气组（C组）、正常通气组＋还原型谷胱甘肽组（D组）、过度通气组＋还原型谷胱甘肽组（E组），D、E组在机械通气前5min阴茎背静脉注射还原型谷胱甘肽。各组大鼠通气时间均为4h。观察各组肺组织的病理改变，用干／湿重比值来比较肺水肿的程度，用免疫组织化学技术检测肺组织核转录因子NF-KB的表达，ELISA法检测肺匀浆中肿瘤坏死因子TNF-α变化。结果病理学改变C组与A、B、D，E组比较的肺组织有更多白细胞浸润和肺泡壁结构的破坏。C组肺组织中TNF-α含量与D、E组比较明显增加，C组肺组织NF-KB的表达与D、E组比较明显增加。结论还原型谷胱甘肽能减少大鼠不同潮气量机械通气中NF-κB、TNF-α表达，在一定程度上减少肺损伤。     

不同潮气量机械通气对大鼠支气管和肺组织细胞凋亡的影响

OBJECTIVE: To investigate the changes in bronchial and alveolar epithelial cell apoptosis after mechanical ventilation with different tidal volumes and explore the mechanism and significance of cell apoptosis in ventilation-induced lung injury. METHODS: Thirty healthy male Sprague-Dawley rats were randomly divided into groups A, B and C to receive tracheotomy under anesthesia for ventilation with different tidal volumes (VT) for 4 h (VT of 10 ml/kg in group A, 20 ml/kg in group B and 40 ml/kg in group C). Lung histopathology was assessed after the ventilation and compared between the 3 groups. The severity of lung injury and bronchial epithelial edema was evaluated, and the extent and location of cell apoptosis in the bronchus and lung tissues were studied by transferase d-UTP end-labeling (TUNEL) assay and immunohistochemistry. RESULTS: After mechanical ventilation for 4 h, lung injury and bronchial epithelial edema increased with the increment of VT. By TUNEL assay, the apoptosis index of both alveolar and bronchial epithelial cells was found to increase with VT. Immunohistochemical study identified enhanced caspase-3 expression in the cytoplasm and nuclei of airway and alveolar epithelial cells and vascular endothelial cells in rats with high VT ventilation, and the enhancement was especially obvious in the bronchial epithelial cells. CONCLUSION: Mechanical ventilation with different VTs causes consistent changes in histopathology, cell apoptosis and caspase-3 expression in rats, which support the presumption that cell apoptosis plays an important role in the pathogenesis of high VT ventilation-induced lung injury.     

不同潮气量机械通气对大鼠支气管和肺组织细胞凋亡的影响

目的 研究不同潮气量机械通气对大鼠支气管和肺组织细胞凋亡的影响,初步探讨细胞凋亡在机械通气所致肺损伤中的作用机制及其意义.方法 将30只健康雄性SD大鼠随机分成A、B、C 3组,气管切开、插管后,分别给予不同潮气量(VT)机械通气4h(A组:VT=10 ml/kg;B组:VT=20 ml/kg;C组:VT=40 ml/kg),采用光镜和电镜观察3组大鼠肺组织的病理和超微结构改变,用湿干重比值来比较肺水肿的程度,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的末端标记法检测损伤的肺组织中细胞凋亡的发生程度,用免疫组织化学技术检测肺组织caspase-3酶的表达及组织分布.结果 依次给予A、B、C 3组以小、中、大3种不同的潮气量机械通气后,3组动物大体和病理改变依次加重,肺湿干重比值依次增高,支气管和肺组织细胞凋亡明显增加(P<0.01);在细胞凋亡执行阶段起中心作用的caspase-3酶在肺泡上皮细胞、血管内皮细胞的胞浆和核中的表达也明显增强,尤其以在支气管上皮caspase-3酶的表达增强更为显著.结论 给予3组动物3种不同潮气量机械通气后,动物病理改变和细胞凋亡数量及凋亡效应酶caspase-3的变化趋势基本一致,推测细胞凋亡在大潮气量机械通气引起的肺损伤中起重要作用.     

氯胺酮对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺组织 iNOS活性及NO含量的影响

目的探讨氯胺酮对内毒素性急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性及一氧化氮(NO)含量的影响.方法采用大鼠腹腔注射1.0 mg·kg-1内毒素(LPS),16 h后在机械通气下气管内滴注3.0 mg·kg-1 LPS的方法建立ARDS模型.雄性SD大鼠34只,随机分为4组内毒素组(L组),生理盐水组(C组),内毒素加氯胺酮组(L+K组)及氯胺酮对照组(K组).观察各组气管内滴注前(基础值),达到ARDS时,ARDS后1 h、2 h、3 h各时间点氧合指数(PaO2/FiO2)、平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)的变化.于ARDS后3h处死动物,取右肺上叶行肺形态学观察,左肺测定肺湿重/干重比(W/D),并测定肺组织匀浆中iNOS活性和NO含量的变化.结果L组和L+K组气管内滴注LPS后PaO2/FiO2逐渐下降,在ARDS时及ARDS后1 h、2 h、3 h较基础值显著降低(P＜0.01).L组W/D、iNOS活性及NO含量较C组显著升高(P＜0.01);与L组相比,L+K组W/D、iNOS活性及NO含量则显著降低(P＜0.01,P＜0.05).肺病理可见给予氯胺酮后,内毒素性ARDS大鼠肺组织损伤明显减轻.结论氯胺酮明显减轻大鼠内毒素性ARDS,其机制可能与通过抑制iNOS活性、降低NO含量有关.     

不同潮气量的机械通气对老年肺癌病人术后的影响

目的:探索不同潮气量的机械通气对老年肺癌病人手术后的影响。方法:选择老年肺癌手术病人100例,根据病人采用机械通气潮气量的不同分为6 mL/kg组（A组）、8 mL/kg组（B组）和10 mL/kg（C组）,分析比较3组病人术后血气分析指标、相关炎症因子及呼吸指标的变化和术后并发症的发生情况。结果:在T₁、T₂、T₃时间点,呼气末二氧化碳分压（P_ETCO₂）指标B组和C组均低于A组（P<0.05）,C组均显著低于B组（P<0.01）;气道峰压指标C组均显著高于A组和B组（P<0.01）。A组和B组病人在T₁、T₂、T₃时间点的P_ETCO₂组内比较差异均无统计学意义（P>0.05）;C组病人在T₁、T₂、T₃时间点的P_ETCO₂差异均有统计学意义（P<0.01）,T₂、T₃时间点均显著低于T₁时间点（P<0.01）;3组病人在T₁、T₂、T₃时间点的气道峰压指标组内比较差异均有统计学意义（P<0.01）,A组和B 组T₃时间点均高于T₁、T₂时间点（P<0.01）,C组T₂、T₃时间点均显著高于T₁时间点（P<0.01）。白细胞介素-1β在T₂时间点3组差异均有统计学意义（P<0.01）,B组和C组均低于A组（P<0.05）;白细胞介素-6在T₂、T₃时间点3组差异均有统计学意义（P<0.01）,T₂、T₃时间点B组低于A组（P<0.05）,T₃时间点C组高于A组（P<0.05）;肺顺应性指标在T₁、T₂、T₃时间点3组差异均有统计学意义（P<0.01）,B组和C组均显著低于A组（P<0.01）,在T₂、T₃时间点C组均显著高于B组（P<0.01）。3组总体并发症发生情况的差异具有统计学意义（P<0.05）,且B组总体并发症发生率明显降低（P<0.05）。结论:术中选择8 mL/kg潮气量机械通气对老年肺癌病人术后血气指标、炎症因子影响小,不影响病人肺换气功能,且并发症发生率低,是较为合理的机械通气潮气量。     

单肺通气时不同潮气量对血液氧合及肺内分流的影响

目的研究单肺通气（OLV）时不同潮气量对血液氧合及肺内分流的影响。方法选择20例择期中、下段食道癌患者,ASAⅠ～Ⅱ级,全麻后,双肺通气（TLV）潮气量（VT）均采用10ml／kg,呼吸频率（f）12次/min,OLV期间在保持分钟通气量不变的情况下所有病人均在开胸后行OLV。依次采用OLV1（VT=15ml／kg,f=8次／min）,通气25min;OLV2（VT=10ml／kg,f=12次／min）,通气25min;OLV3（VT=8ml／kg,f=15次／min）,通气25min;OLV4（VT=6ml／kg,f=20次／min）,通气25min。在OLV前以及每组通气25min后分别进行动脉血及混合静脉血血气分析。同时监测气道吸气压力（Paw）及计算出肺内分流率（Qs／Qt）。结果TLV与OLV比较：OLVPaO2均下降（P〈0．01）,Qs／Q增加及Paw均增高（P〈0．01）。OLV时,PaO2在OLV4时有明显增高（P〈0．01）,PaO2在OLV1时增加（P〈0．05或P〈0、01）,Qs／Qt在OLV1时比较OLV2、OLV3增加（P〈0．05）。结论单肺通气时采用OLV2（VT=10ml／kg,f=10;K／min）,OLV3（VT=8ml／kg,f=15次／min）,对氧合及肺内分流影响较其他两组小,是比较理想的通气方式。     

还原型谷胱甘肽在不同潮气量机械通气对大鼠肺细胞凋亡的影响

目的探讨还原型谷胱甘肽对不同潮气量机械通气大鼠肺细胞凋亡的影响。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分成对照组（A组,n=6）、正常通气组（B组,n=6）、过度通气组（C组,n=6）、正常通气组＋还原型谷胱甘肽（D组,n=6）及过度通气组＋还原型谷胱甘肽（E组,n=6）五组,D、E组在机械通气前5min阴茎背静脉注射还原型谷胱甘肽,各组大鼠通气时间均为4h。凋亡细胞的检测使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术,用免疫组织化学技术检测肺组织核转录因子-κB（NF—KB）的表达。ELISA法检测肺匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）变化。结果C组肺组织中TNF-α含量与D、E比较明显增加,C组肺组织NF-κB的表达组与D、E组比较明显增加。C组肺组织中细胞凋亡明显高于D、E组。结论还原型谷胱甘肽能减少机械通气损伤中引起的肺组织的细胞凋亡。     

不同潮气量和手术持续时间对机械通气性肺损伤的影响

目的 探讨全麻中不同潮气量(VT)和手术持续时间对机械通气性肺损伤的影响.方法 择期全麻下行腹部手术患者40例,ASAⅠ～Ⅱ级,年龄40～60岁,随机分为四组,每组10例,长时程手术大VT组(Ⅰ组,VT :10～12ml/kg,T≥3h);长时程手术小VT组(Ⅱ组,VT :6～8ml/kg,T≥3h);短时程手术大VT组(Ⅲ组,VT :10～12ml/kg,T＜3h);短时程手术小VT组(Ⅳ组,VT :6～8ml/kg,T＜3h).各组拔管后予鼻导管吸氧,分别于拔管后10min行动脉血气分析,记录动脉血氧饱和度(SaO2)、动脉血氧分压(PaO2)、二氧化碳分压(PaCO2),并计算氧合指数(PaO2/Fi O2,Fi O2=21+氧流量×4).结果 拔管后10min,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组患者的SaO2、PaO2、PaCO2、PaO2/FiO2差异无统计学意义(P＞0.05),相比较于前三组,Ⅰ组患者则表现为PaCO2明显增加(P＜0.05),SaO2、PaO2、PaO2/Fi O2明显降低(P＜0.05).结论长时间的大VT通气可能导致机械通气相关性肺损伤.     

慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭小潮气量机械通气治疗

目的 探讨小潮气量肺保护性机械通气治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并Ⅱ型呼吸衰竭的疗效和并发症.方法 将114例COPD合并呼吸衰竭患者在综合治疗的基础上分别给予小潮气量(57例)和常规潮气量通气(57例),观察两组患者机械通气期前后动脉血气分析pH、PaO2、PaCO2、SaO2及上机过程中出现的并发症.结果 两组患者在存活率方面差异无统计学意义,小潮气量组气压伤发生率、机械通气时间、住院时间明显少于常规通气组.结论 对于COPD合并呼吸衰竭患者,选用小潮气量进行机械通气,可以减轻机械通气相关性肺损伤,缩短机械通气时间和住院时间.     

诱生型一氧化氮合酶及一氧化氮对心脏的作用

目的介绍诱生型一氧化氮合酶(iNOs)介导的一氧化氮在心脏中的作用的研究进展。方法采用文献回顾的方式对国内外相关文献进行分析整理,对一氧化氮合酶的结构功能、一氧化氮在心脏中的作用的方式进行综述。结果iNOs介导的一氧化氮在心脏中的表达是导致心脏功能障碍的重要原因,iNOs的表达对心脏功能有保护和损伤两个方面的争论。结论iNOs在心脏中保护和损伤双重作用主要取决于分泌方式、一氧化氮浓度以及信号传导方式。     

特发性脊柱侧凸竖脊肌组织中神经元型和诱导型一氧化氮合酶的表达

目的通过比较脊柱侧凸患者胸弯顶点处凸侧、凹侧竖脊肌的神经元型一氧化氮合酶(nNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,探讨竖脊肌在脊柱侧凸中的可能的机制.方法选取2001年8～12月间我院收治的胸椎侧凸畸形患者10例,于术中取顶椎凸侧、凹侧竖脊肌组织各一块,另有2例胸腰椎爆裂骨折行后路固定融合的患者作为正常对照,于T10处取正常竖脊肌组织,采用免疫组织化学和Western印迹检测竖脊肌组织中nNOS、iNOS的表达和定位.结果脊柱侧凸患者脊柱凸侧竖脊肌组织与凹侧竖脊肌组织和正常对照相比,10例患者中9例nNOS的表达明显下调,8例iNOS的表达也有所下调,但iNOS表达总量较低.结论脊柱侧凸患者双侧竖脊肌nNOS、iNOS蛋白表达不均衡,可能对特发性脊柱侧凸发生起促进作用.     

非洛地平对自发性高血压大鼠一氧化氮及诱导性一氧化氮合酶的影响

目的　观察非洛地平 (Felodipine)对自发性高血压大鼠一氧化氮 (NO)及诱导性一氧化氮合酶 (iNOS)的影响。方法　取自发性高血压大鼠 2 2只 ,随机分为生理盐水组、Felodipine正常剂量组及其低剂量组 ,每天灌胃一次 ,连续 15天 ,末次给药后摘眼球取血以及取动物脏器 ,分别测定血清NO和iNOS的含量。结果　灌胃 15天后 ,Felodipine正常剂量组的NO含量为 (12 7± 7 5 ) μmol/L ,与生理盐水组 (10 2 3± 4 6 ) μmol/L相比 ,差异有明显显著性 (P <0 0 1) ;Felodipine低剂量组NO含量为 (119± 8 3) μmol/L ,与生理盐水组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,Felodipine正常剂量组的组织iNOS活性降低 ,为 1 17± 0 2 3,与生理盐水组 (2 2 5± 0 94 )相比 ,差异显著 (P <0 0 5 ) ,与Felodipine低剂量组 (1 76± 0 5 7)相比 ,差异亦显著 (P <0 0 5 )。结论　Felodipine组可有效地在降低血压的同时 ,提高血清NO的含量 ,并且对抗血压增高所造成的iNOS的活性增强 (或二者互为因果 )。     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中NO生成及iNOS表达的变化

目的探讨重症急性胰腺炎（SAP）时胰腺组织一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的变化。方法 36只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为2组。SAP组（n=18）以逆行胰胆管内加压注射5%牛磺胆酸钠的方法建立SAP模型;对照组（n=18）以同法注射等剂量生理盐水。造模后6、12、24 h每组随机处死大鼠6只,检测血淀粉酶、胰腺组织病理组织学改变、胰腺组织NO水平及iNOS活性以及腺腺组织iNOS mRNA表达的变化。结果与对照组相比,SAP组在6 h时间点上,胰腺组织中NO水平、iNOS活性明显升高（P〈0.01）,免疫组化和RT-PCR结果也显示iNOS蛋白及iNOS mRNA表达增高（P〈0.01）;随时间延长,在12 h和24 h各指标到达高峰,24 h仍维持在较高水平（P〈0.01）。结论在SAP时,随着时间的延长,iNOS表达增高,从而产生高浓度的NO,加重胰腺组织的损伤。     

诱导型一氧化氮合酶在血管瘤组织中定位与表达的研究

目的:探讨不同时期婴幼儿血管瘤的生物学行为与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)之间的关系.方法:根据Mulliken的病理生物学特征分为血管瘤增殖期、消退期以及血管畸形.采用免疫组化的染色方法进行检测.结果:血管瘤各不同时期的iNOS显色程度不同,血管瘤增殖早期与其它各期比较有差异(P＜0.05),所有血管病变的组织中均有iNOS阳性显色,血管瘤比血管畸形显色程度深,两者比较有显著性差异(P＜0.01).结论:不同时期血管瘤、血管畸形与iNOS的表达有相关性.不同时期血管瘤的病变不仅与肿瘤组织内NO/iNOS浓度有关,而且与作用时间有关.     

兔放射性肺纤维化形成过程中一氧化氮含量变化及诱导型一氧化氮合成酶的表达

目的:观察兔放射性肺纤维化形成过程中一氧化氮(NO)含量变化及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达。方法:实验兔20只,采用6mVX线对左全肺进行照射,25Gy,1次。分别于照射前、照射后1,3,6个月各处死5只动物,处死前进行左肺肺泡灌洗。采用铜-镉还原法检测灌洗液中的NO含量,免疫组化法检测肺组织中iNOS的表达。结果:NO含量在照射后1个月明显升高,照射后3～6个月显著降低;在照射前及照射后3～6个月,肺间质细胞内几乎未见iNOS阳性表达;在照射后1个月,肺间质中iNOS表达阳性细胞明显增多。结论:NO可能是放射性肺纤维化形成过程中的一个独立影响因素,其含量的变化可能与iNOS蛋白活性改变有关。     

诱导型一氧化氮合酶基因在3T3成纤维细胞中的转染和意义

目的观察人诱导型一氧化氮合酶基因(iNOS)转染3T3成纤维细胞的可能性.方法用阳性脂质体将含人诱导型一氧化氮的真核表达载体pcDNA3.0-iNOS转染至3T3细胞,用G418筛选,通过RT-PCR、免疫组化的方法鉴定.结果 pcDNA3.0-iNOS基因转染的3T3细胞有人iNOS基因mRNA的表达,细胞中有iNOS蛋白的表达,空载体和对照组没有表达.结论人iNOS基因能够在3T3成纤维细胞得到稳定转染和表达.     

功能失调性子宫出血患者宫内膜诱导型一氧化氮合酶和基质金属蛋白酶-9的表达及其意义

目的 探讨诱导型一氧化氮合酶（INOS）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9，又称明胶酶B）与功能失调性子宫出血（功血）的关系。方法 分为病例组（30例）和对照组（10例），病例组标本来源为功血患者的子宫内膜组织，其中单纯性增生20例、复杂性增生10例。对照组标本为月经周期正常的子宫肌瘤患者行子宫切除术所取的子宫内膜组织。用RT—PCR技术检测各标本中诱导型一氧化氮合酶（INOS）及MMP-9的mRNA表达量。结果 功血复杂性、单纯性增生组子宫内膜组织中INOS和MMP-9mRNA的表达量均显著高于正常对照组，（P〈0．01）。结论 INOS和MMP-9对功血的发生有联合作用，INOS及MMP-9的增高可证实功血与子宫内膜局部微环境的改变有关。     

诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体的构建

目的 构建含有人诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体pcDNA3-iNOS。方法 采用分子生物学技术，以Hind Ⅲ和XbI I双酶切pSPORT-iNOS，电泳回收3．96kb编码人iNOS cDNA序列．克隆入真核表达栽体pcDNA3的Hind Ⅲ和XbI I位点。结果 重组真核表达载体pcDNA3-iNOS经酶切鉴定证明iNOS基因正向插入真核表达载体中，用人iNOS基因特异性引物，PCR分析重组质粒和进行碱基序列的测定均证明重组质粒中含有人iNOS基因序列。结论 构建的真核表达栽体携有人iNOS cDNA序列，并且含有巨细胞病毒强启动子、ploy(A)加接信号和neo标志基因，具有转染多种哺乳类细胞通用性，可用于iNOS基因的真核表达及调控的研究。