单纯疱疹病毒性角膜炎动物模型制备

单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)是由单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpessimplex virus type Ⅰ,HSV-1)感染引起的具有高复发率、高致盲率及难根治性特点的疾病,可导致角膜溶解、新生血管形成及溃疡穿孔,是目前角膜病中最常见的致盲眼病之一.本文参考目前国内外实验研究时使用的各种HSK动物模型建模方法来进行综述,如建立原发感染模型的划痕法、环钻法、外植体培养法以及潜伏感染模型和诱导复发模型的建立方法.力求探索如何建立一种可靠的HSK动物模型,在为研究人类HSK发病机制、药物治疗和对比以及角膜移植等方面均有重要意义.     

单纯疱疹病毒性角膜炎的发病机制

单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)是一种常见的眼部疾病,由单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)感染引起。人群中超过90%的人曾经感染过HSV。HSV可以在神经组织及角膜组织长期潜伏。在适宜的刺激下,如紫外线照射、发热、精神压力、高温、低温、手术等,病毒活化增殖导致HSK。HSV感染引起的免疫反应是造成角膜组织损害的主要机制。HSK的免疫反应主要是由CD4+细胞介导的,而CD8+细胞对病毒感染具有保护作用。     

单纯疱疹病毒性角膜炎小鼠模型的建立及鉴定

目的：探讨建立不同感染时期HSK小鼠动物模型,为HSK的深入研究建立基础。方法：Balb/c小鼠125只麻醉后在显微镜下用刀片背面尖端于角膜＂#＂字划痕,其中100只小鼠接种HSV-Ⅰ病毒,另25只小鼠不接种病毒作为正常对照组。术后每天用10g/L荧光素钠染色后裂隙灯显微镜下观察角膜病变发生情况,并取角膜表面泪液进行HEK293T细胞检测以确定裂隙灯显微镜下有无病毒复制。对潜伏感染期小鼠模型采用紫外线B光照射以诱导HSK复发。结果：接种HSV-Ⅰ病毒的小鼠模型眼于接种后3d内全部出现急性上皮性角膜炎表现。经阿昔洛韦滴眼液治疗1wk后角膜炎症消失,但角膜和三叉神经节中PCR检测病毒仍为阳性。潜伏感染期小鼠模型经紫外线B光照射后也都在1wk内复发,并表现为以基质型角膜炎为主要临床表现的角膜病变。结论：采用角膜划痕法对Balb/c小鼠接种HSV-Ⅰ病毒和紫外线B光照射可以成功地制作出原发感染期、潜伏感染期和复发感染期等不同感染时期的HSK模型,而且操作相对简单、方便易行。     

可溶性B、T淋巴细胞衰减因子及其配体在单纯疱疹性角膜基质炎小鼠体内的异常表达

目的 研究B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及其配体疱疹病毒侵入介体(herpes virus entry mediator,HVEM)在单纯疱疹性角膜基质炎(herpetic stromal keratitis,HSK)小鼠角膜组织中及外周血CD4+T细胞上的表达水平,探讨共抑制信号BTLA-HVEM是否参与了CD4+T细胞介导的HSK免疫病理反应.方法 将106 PFU的单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)KOS毒株接种于BALB/c鼠的角膜上建立HSK动物模型,分别于角膜接种病毒前(0 d),接种病毒后的第3、7、10、14、21天,用毛细管取小鼠的左眼眼眶静脉窦血1 mL,分离淋巴细胞,行荧光抗体染色,用流式细胞仪检测CD3+ CD4+ BTLA+T细胞和CD3+ CD4+ HVEM+T细胞阳性率;在裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜变化;免疫组织化学方法检测BTLA蛋白及HVEM蛋白在角膜组织中的表达.结果 BALB/c鼠的角膜接种HSV-1后的1～5d,角膜擦拭液中均检测出HSV-1复制,表明小鼠感染了单纯疱疹病毒.裂隙灯显微镜观察显示:角膜接种HSV-1后第3天,所有小鼠均患了急性上皮性角膜炎,并于感染后1周内痊愈,自病毒接种后第8天起,小鼠出现角膜基质炎的改变,表现为角膜基质呈灰白色混浊,角膜基质混浊于病毒接种后的第10天达到高峰,持续至第14天后逐渐减轻.流式细胞仪检测显示,小鼠外周血淋巴细胞中CD3+CD4+BTLA+T细胞和CD3+ CD4+ HVEM+T细胞的阳性率,在角膜接种病毒前(0 d)分别为(3.15±0.60)％和(9.84±1.06)％,在角膜接种病毒后第10天(HSK疾病程度最严重时)分别增加到(20.47±3.15)％和(45.18±3.90)％(与0d相比差异均有显著统计学意义,均为P＜0.01).免疫组织化学方法检查HSK小鼠角膜组织中BTLA和HVEM的蛋白表达结果一致:HSK临床表现最严重时,即病毒接种后第10天时,BTLA蛋白和HVEM蛋白在角膜组织中表达最强,主要表达于角膜基质层内浸润的炎性细胞上,角膜上皮层和内皮层也有表达.结论 在HSK小鼠模型中,BTLA及其配体HVEM蛋白在角膜组织中及外周血CD4+T细胞上表达明显增强,共抑制信号BTLA-HVEM参与了CD4+T细胞介导的HSK的免疫病理过程.     

单纯疱疹病毒性角膜炎复发及治疗的研究进展

单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)是由单纯疱疹病毒(HSV)引起的一种严重的感染性角膜疾病。HSV的感染有两种形式：原发性感染和复发性感染。其中,复发性HSV感染的相关机制和干预方式是近些年来的研究焦点。本文介绍了几种常见的HSK的复发免疫机制及治疗,分析了最新研究发现的各种抗HSV复发的药物,希望能尽早开发出新型的干预方式,开发出具有较强疗效和较小毒性的化合物,使其减少潜在的副作用,提供更好的治疗效果。     

T淋巴细胞因子与单纯疱疹病毒性角膜炎的研究进展

单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)是由病毒抗原引起的T淋巴细胞介导的迟发型变态反应。T淋巴细胞如何介导HSK免疫反应的详细机制目前仍不清楚,但从目前研究可总结:T淋巴细胞的细胞因子如IL-2,IL-10,IL-17,IFN-γ等促炎性因子在HSK的复发过程中起重要作用。本文将对T淋巴细胞及其细胞因子与HSK的研究进展做简要综述。     

非外伤性角膜穿孔的原发病临床分析

目的 分析非外伤性角膜穿孔的原发病,为积极治疗原发病预防角膜穿孔的发生提供帮助.方法 ,对山东省眼科研究所1997年1月至2007年6月间377例非外伤性角膜穿孔住院患者(383只眼)的病历资料进行回顾性分析,观察角膜穿孔的原发病.结果 感染性角膜病是导致角膜穿孔最多见的原发病.其中,单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)最多(145例,37.9%),其次为真菌性角膜炎(95例,24.8%),再次为细菌性角膜炎(52例,13.6%).8只眼发生2次角膜穿孔,原发病分别为HSK(4例)、Mooren溃疡(2例)、坏死性角巩膜炎与细菌性角膜炎各1例.33只眼为角膜移植术后植片穿孔,植片穿孔的原因依次为植片自溶(10例,30.3%)、HSK复发(8例,24.3%)、植片细菌感染(6例,18.2%)、免疫排斥(4例,12.1%)、Mooren溃疡复发(4例,12.1%)与真菌性角膜炎复发(1例,3.0%).结论 感染性角膜病是导致角膜穿孔最多见的原发病.其中HSK与真菌性角膜炎分别居于首位与第2位.1只眼多次发生角膜穿孔的原发病中,HSK与Mooren溃疡常见.植片自溶与HSK复发是角膜移植术后角膜再次穿孔的常见原因.     

单纯疱疹病毒Ⅰ型在三叉神经节潜伏复发机制的研究进展

单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)感染引起的单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)是全球性的致盲性眼病。病毒在眼表发生原发感染后,转运并终生潜伏在三叉神经节内,反复复发引起角膜病变。在对HSV潜伏机制方面的研究过程中,人们逐渐认识到病毒自身和宿主反应两方面共同调控了病毒的潜伏过程。近年来,嗜神经病毒的侵袭、免疫、潜伏复发等各方面的分子机制研究取得大量研究成果,为HSK的防治提供了新思路。本文将主要对HSV-1角膜初发感染后在三叉神经节内潜伏分子机制方面的研究进展进行介绍,并对目前HSK的基础研究和临床治疗存在的问题进行探讨。     

解毒明目方对鼠复发性单纯疱疹病毒性角膜炎的治疗机制

目的:观察解毒明目方药对鼠复发性单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)血清细胞因子(IL-6、IL-8、IFN-α)水平的影响、检测病毒、观察复发情况,来进一步探讨该药物治疗作用机制。方法:用Balb/c小鼠建立潜伏感染模型,随机分为对照组和治疗组,治疗组使用中药灌胃,对照组使用生理盐水灌胃,两组经紫外线B光(UV-B)照射诱导复发后,角膜刮片检测病毒,处死小鼠取血清检测胞因子(IL-6、IL-8、IFN-α)水平。结果:HSK复发,治疗组角膜炎的发生率较对照组比较有显著差异(P<0.05);与对照组比较血清中IL-6(P<0.05)、IL-8(P<0.01)、IFN-α(P<0.05)。结论:中药解毒明目方可以影响血清中细胞因子(IL-6、IL-8、IFN-α)的水平,使其发挥调整机体免疫功能的作用,可以减轻HSK复发后炎症反应程度。     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4融合蛋白对鼠单纯疱疹性角膜基质炎抑制作用的研究

研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4融合蛋白(cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen-4 immunoglobulin,CTIA-4Ig)对鼠单纯疱疹性角膜基质炎(herpetic stromal kerafifis,HSK)的抑制作用。方法用单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)接种于BALB／c鼠角膜上建立HSK动物模型,采用CTIA-4Ig阻断B7：CD28／CTIA-4协同刺激途径,抑制T淋巴细胞增殖、分化为效应细胞;观察HSK的发病率、临床特征、角膜组织学改变、角膜病毒滴度、迟发型超敏反应及抗原刺激脾细胞分泌细胞因子的情况。结果CTIA-4Ig可减少小鼠外周血中CD4^ T淋巴细胞(81．6％)及CD8^ T淋巴细胞(67．9％),阻止鼠发生HSK、减轻角膜混浊程度及角膜内炎性细胞的浸润、损伤鼠的迟发型超敏反应能力,抑制鼠脾细胞分泌辅助性T淋巴细胞1型(T-helper 1,Th1)细胞因子;但不影响角膜病毒滴度及小鼠死亡率。结论用CTIA-4Ig阻断B7：CD28／CTIA-4协同刺激途径,能够抑制T淋巴细胞增殖并抑制CIM^ Th1细胞的功能,阻止HSK发病,减轻HSK的严重程度。