金属硫蛋白在肺癌细胞系中的表达及其临床意义

目的探讨肺鳞癌、腺癌中金属硫蛋白在肺癌细胞系中的表达。方法运用SP免疫组化方法检测检测肺癌细胞系的表达定位。结果 MT在肺癌细胞系A549、BE1表达,均为胞浆表达。在HBE为胞核表达。结论 MT在非小细胞肺癌转移起促进作用。     

肝细胞癌及癌旁组织中骨形态发生蛋白的免疫组织化学研究

目的：研究HCC及其癌旁组织是否存在BMPs，方法：利用S－P免疫组织化学技术检测15例肝细胞癌及其癌旁组织中BMPs的表达，结果：BMPs不均一的存在于HCC及其癌旁组织中，肝癌细胞胞浆和／或胞核呈阳性，而癌旁组织胞浆阳性，仅一例胞浆胞核阳性。结论：首次报道肝细胞癌及其癌组织存在骨形态发生蛋白BMPs，并提示BMPs可能与HCC分化和生长有关。     

SYBR Green染色法检测肺癌及癌旁组织端粒酶活性

目的 研究TRAP－SYBR Green染色法定性检测端粒酶活性的方法及端粒酶活性在肺癌及癌旁组织中的表达，并探讨端粒酶的表达与P53之间可能的关系。方法 采用TRAP－SYBR Green染色法检测36例肺癌、36例癌旁组织、8例肺部良性病变组织和A549肺腺癌细胞株端粒酶活性的表达，并利用免疫组化技术检测肺癌组织P53蛋白表达水平。结果 TRAP－SYBR Green染色法可检测出5个A549肺腺癌细胞所表达端粒酶活性。83．3％（30／36）的肺癌组织，3／8肺部良性病变组织，19．4％（7／36）的癌旁组织表达端粒酶活性。端粒酶活性的表达与肺癌组织的病理类型、肿瘤大小、临床分期无相关性。在30例表达端粒酶活性的肺癌组织中P53呈现过度表达的占80％（24／30），端粒酶活性与P53蛋白表达水平之间具有相关关系。结论 TRAP－SYBR Green染色法是一种较为灵敏、快速、简便的定性检测端粒酶活性的方法；端粒酶活性的定性检测可作为肺部恶性肿瘤诊断的辅助指标之一；端粒酶P53之间的关系有待进一步阐明。     

基于AKT/mT0RC1和HIF1/VEGF通路研究eIF4E基因调控肺腺癌血管新生中的作用机制

目的基于AKT/m T0RC1和HIF1/VEGF通路,研究e IF4E基因在肺腺癌血管新生中的作用及相关机制。方法本文选用RNAi技术沉默e IF4E基因,通过转染A549人肺癌细胞株,建立e IF4E基因低表达的肺腺癌细胞模型。免疫印迹检测e IF4E基因低表达后介导血管新生的AKT/m TORC1通路和HIF1/VEGF通路主要成员蛋白水平的变化。结果 e IF4E在A549细胞中高表达,A549对照组与si-e IF4E组蛋白表达分别为(0. 77±0. 06)与(0. 18±0. 04),差异有统计学意义(P 0. 05); si-e IF4E后,2组AKT蛋白表达差异无统计学意义(P0. 05),si-e IF4E组p-AKT蛋白表达明显低于A549对照组,差异有统计学意义(P 0. 05); 2组m TOR表达差异无统计学意义(P 0. 05),si-e IF4E组m TORC1蛋白表达低于A549对照组,差异有统计学意义(P 0. 05); si-e IF4E后,si-e IF4E组HIF1蛋白与VEGF蛋白表达明显低于A549对照组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论抑制e IF4E基因可抑制肺腺癌细胞血管新生过程中AKT过度磷酸化,降低m TORC1表达,减少HIF1与VEGF生成。e IF4E基因可能是通过AKT/m TORC1通路和HIF1/VEGF通路参与肺腺癌血管新生过程。     

COX-2、NF-κB和survivin在肺腺癌组织中表达及意义

目的 探讨环氧合酶2(COX-2)、NF-κB和survivin在肺腺癌组织中表达及比较与癌旁组织不同的凋亡情况.方法 应用逆转录聚合酶链反应(KT-PCR)检测NF-κB、COX-2和survivin在肺腺癌组织mRNA的表达,western blot技术检测其蛋白的表达,流式细胞仪检测凋亡情况.结果 肺腺癌组织中COX-2、NF-κB和survivin mRNA表达水平显著高于癌旁组织,(P＜0.05),肺腺癌组织中COX-2、NF-κB和survivin蛋白表达显著高于癌旁组织(P＜0.05).癌旁组织的凋亡率为7.84±1.02%,显著高于对照组2.51±0.35(P＜0.05).结论 肺腺癌中NF-κB的高表达与COX-2的高表达有关,COX-2和survivin的高表达抑制组织凋亡,其可能在肺腺癌的发生发展中起重要作用.     

端粒酶与p53、C—myc,K—ras在肺癌组织中的表达

目的研究端粒酶活性在肺癌及癌旁组织中的表达,并探讨端粒酶的表达与p53、C-myc、K-ras之间可能存在的关系.方法采用TRAP-SYBRGreen染色法检测36例肺癌和36例癌旁组织,20例肺部良性病变组织和20例正常肺组织及A549肺腺癌细胞株端粒酶活性的表达,并利用免疫组化技术检测肺癌组织p53、C-myc、K-ras表达水平.结果83.3%的肺癌组织25.0%的癌旁组织、15.0%肺部良性病变级织表达端粒酶活性,正常肺组织未检测到端粒酶活性.端粒酶活性的表达与肺癌组织的病理类型、肿瘤大小、临床分期无相关.在30例端粒酶活性阳性的肺癌组织中有24例(80%)表达p53蛋白,18例(60%)表达C-myc蛋白,22例(73%)表达K-ras蛋白.利用Spearman分析方法分析端粒酶活性与p53、C-myc、K-ras蛋白表达水平之间的相关关系,相关系数分别为r=0.60,P＜0.01r=0.335,P＜0.01;r=0.427,P＜0.01.结论端粒酶活性的定性检测可作为肺部恶性肿瘤诊断的辅助指标之一;肺癌组织的端粒酶活性与p53、C-myc、K-ras蛋白表达水平之间存在正相关关系.     

长链非编码RNA SFTA1P在非小细胞肺癌组织中的表达和细胞功能研究

  目的   研究长链非编码RNA SFTA1P在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中的表达情况, 以及对NSCLC细胞系生物学功能的影响。   方法   运用定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测SFTA1P在18对非小细胞肺癌组织及癌旁组织中的表达情况; 用qRT-PCR检测5株NSCLC细胞系(A549、SPCA1、H1975、H460和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(human bronchial epithelial, HBE)中SFTA1P的表达情况; 构建SFTA1P的过表达载体, 通过转染构建过表达细胞模型; 运用CCK-8、Transwell等实验方法检测SFTA1P过表达对NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移的影响。   结果   SFTA1P在非小细胞肺癌组织中的表达低于癌旁组织(t=2.158, P=0.043);与HBE细胞相比较, SFTA1P在A549和H460细胞系中相对低表达(t=5.769, P=0.004; t=5.772, P=0.004), 在H1299和H1975细胞系中相对高表达(t=22.248, P < 0.001; t=11.814, P < 0.001);SFTA1P过表达质粒转染A549和H460细胞系后, 与空质粒的对照组比较, SFTA1P的表达均升高, 且有统计学差异(均有P < 0.05);过表达SFTA1P可以抑制非小细胞肺癌细胞H460、A549的增殖、侵袭、迁移, 差异有统计学意义(均有P < 0.05)。   结论   SFTA1P基因能够抑制NSCLC细胞的增殖、迁移、侵袭等生物学功能, SFTA1P在肿瘤发生和发展中可能起着抑癌基因的作用。     

女性肺腺癌中细胞周期素D1表达及意义

目的 探讨细胞周期素D1(cyclin D1)在女性肺腺癌中的表达及意义.方法 应用免疫印迹(western blot)法检测135例女性肺腺癌组织和癌旁正常组织中cyclin D1的阳性表达率.结果 女性肺腺癌组织中cyclin D1的阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P＜0.05).肿瘤直径＞3 cm组cyclin D1表达率高于直径≤3 cm组(P＜0.05).cyclin D1的阳性表达与年龄、肿瘤分化、肿瘤生长部位无显著性关联.结论 女性肺腺癌组织中存在cyclin D1的过表达,提示cyclin D1有可能是肺腺癌的潜在预报因子.     

COX-2、NF-κB和survivin在肺腺癌组织中表达及意义

目的探讨环氧合酶2(COX-2)、NF-κB和survivin在肺腺癌组织中表达及比较与癌旁组织不同的凋亡情况。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB、COX-2和survivin在肺腺癌组织mRNA的表达,westernblot技术检测其蛋白的表达,流式细胞仪检测凋亡情况。结果肺腺癌组织中COX-2、NF-κB和survivinmRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),肺腺癌组织中COX-2、NF-κB和survivin蛋白表达显著高于癌旁组织(P<0.05)。癌旁组织的凋亡率为7.84±1.02%,显著高于对照组2.51±0.35(P<0.05)。结论肺腺癌中NF-κB的高表达与COX-2的高表达有关,COX-2和survivin的高表达抑制组织凋亡,其可能在肺腺癌的发生发展中起重要作用。     

肺癌和癌旁正常组织中Gab2蛋白及其mRNA的表达

目的检测肺癌和癌旁正常组织中Gab2蛋白及其mRNA的表达情况,探讨Gab2与肺癌发生发展的关系。方法采用PV-9003免疫组织化学法检测75例肺癌组织和25例癌旁正常组织中Gab2蛋白表达水平,实时荧光定量RT-PCR方法检测15对肺癌组织和相对应的癌旁正常肺组织中Gab2基因mRNA表达状况。结果 Gab2蛋白在30例鳞癌、30例腺癌和15例其他类型癌中的阳性表达率分别为66.67%,46.67%和80%,高于癌旁正常肺组织(P0.01);15例肺癌组织中Gab2 mRNA表达高于相对应的癌旁正常肺组织(P0.05)。结论 Gab2在肺癌的发生发展中可能起重要作用,其表达增强可能诱导了肺癌的发生。     

白藜芦醇抑制IGF-I促人肺腺癌A549细胞增殖作用及其机制的研究

目的观察白藜芦醇对IGF-I介导人肺腺癌细胞增殖的影响及其IGF-I受体、AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2的表达变化。方法应用MTT方法测定细胞增殖,采用RT-PCR检测IGF-I受体mRNA表达,并应用免疫印迹方法检测AKT、p-AKT及ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果不同浓度IGF-I(2.5～15nM)可显著促进A549细胞增殖(F=22.321,P=0.011),白藜芦醇(6.25～50μM)与10nMIGF-I共作用于A549细胞,均可抑制IGF-I的促A549细胞增殖作用(F=11.211,P=0.032),其中尤以25μM、50μM白藜芦醇的抑制增殖作用显著(P=0.034;P=0.012),并且,白藜芦醇可有效降低IGF-I受体mRNA表达以及降低IGF-I增强的AKT及ERK1/2磷酸化。结论白藜芦醇能够抑制IGF-I介导的A549肺癌细胞增殖,其作用机制可能与白藜芦醇降低A549肺癌细胞IGF-I受体mRNA表达及AKT、ERK1/2磷酸化相关。     

E-cadherin、Cyclin D1和Cyclin E在叶绿酸抗细胞恶变中表达研究

目的研究叶绿酸干预反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(反式-BPDE)恶性转化人支气管上皮细胞系16HBE中的细胞周期相关基因及蛋白的影响。方法应用半定量RT-PCR技术检测叶绿酸干预反式-BPDE恶性转化细胞中各组细胞E-cadherin基因mRNA表达差异;荧光细胞免疫化学技术检测E-cadherin、Cyclin D1及Cyclin E蛋白水平。结果反式-BPDE诱导恶变细胞组出现E-cadherin基因在mRNA和蛋白水平表达缺失,而经叶绿酸抗转化组该基因表达正常。Cyclin D1、Cyclin E蛋白在正常对照组中表达阴性,而在反式-BPDE恶性转化组中上述两种蛋白呈现高表达,通过叶绿酸干预抗转化组中其表达明显下调。结论叶绿酸抗反式-BPDE致细胞恶变作用与其避免抑癌基因E-cadherin的表达缺失有关。叶绿酸在拮抗反式-BPDE致癌中具有影响细胞周期素CyclinD1和CyclinE表达作用。     

Low-dose radiation induces adaptive response in normal cells, but not in tumor cells: in vitro and in vivo studies

Biological effects of low-dose radiation (LDR) are distinguishable from those of high-dose radiation. Hormetic and adaptive responses are such two examples. However, whether adaptive response could be induced in tumor cells by LDR, especially under in vivo condition, remains elusive, and was systemically investigated in the present study. Four tumor cell lines: two human leukemia cell lines (erythroleukemia cell line K562, and acute promyelocytic leukemia cell line HL60), and two human solid tumor cell lines (lung carcinoma cell line NCI-H446 and glioma cell line U251), along with one normal cell line (human fibroblast cells, MRC-5), were irradiated with LDR at 75 mGy of X-rays as D1 and then 4 Gy of X-rays as D2 (i.e.: D1 + D2) or only 4 Gy of X-rays (D2 alone). Three tumor-bearing animal models were also used to further define whether LDR induces adaptive response in tumor cells in vivo. Adaptive response was observed only in normal cell line, but not in four tumor cell lines, in response to LDR, showing a resistance to subsequent D2-induced cell growth inhibition. Three tumor-bearing mouse models with U251, NCI-H446 or S180 tumor cells were used to confirm that pre-exposure of tumor-bearing mice to D1 did not induce the resistance of tumor cells in vivo to D2-induced tumor growth inhibition. Furthermore, a higher apoptotic effect, along with higher expression of apoptosis-related genes P53 and Bax and lower expression of anti-apoptosis gene Bcl-2, was found in tumor cells of the tumor-bearing mice exposed to D1 + D2 than those in the tumor cells of the tumor-bearing mice exposed to D2 alone. These results suggest that LDR does not induce adaptive response in the tumor cells under both in vitro and in vivo conditions, which is a very important, clinic-relevant phenomenon.     

沙利度胺联合顺铂对A549肺腺癌细胞株的体外实验

目的观察沙利度胺与顺铂（DDP）联合应用对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响,观察沙利度胺对肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的影响。方法采用PI单染法流式细胞检测细胞凋亡率;采用免疫细胞化学方法检测沙利度胺处理后肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的变化。结果在一定浓度范围内,沙利度胺联合DDP处理组细胞凋亡率明显高于单药组;沙利度胺（7.5mg/L）作用于人肺腺癌A549细胞后,处理组的VEGF、BFGF蛋白表达与未加药组比较差异显著。结论沙利度胺DDP联合,可增加A549人肺腺癌细胞的凋亡率;沙利度胺可抑制A549人肺腺癌细胞VEGF、BFGF的蛋白表达。     

N6-甲基腺苷通过miR-155参与肺腺癌细胞对三氧化二砷的耐受性

目的 探讨N6-甲基腺苷是否通过影响miR-155的水平参与肺腺癌细胞对三氧化二砷的耐受性。方法 以肺腺癌亲本细胞系（A549）和课题组前期研究中构建的耐三氧化二砷的肺腺癌细胞株（A549R）为研究对象,以m6A RNA 甲基化定量检测试剂盒检测亲本细胞和耐砷细胞中总RNA上的m6A水平;免疫印迹法检测甲基转移酶METTL3的蛋白水平;以METTL3 siRNA敲低METTL3的水平后,检测耐砷细胞总RNA上的m6A水平,并采用荧光定量PCR法检测miR-155基因表达量。结果 与亲本肺腺癌细胞（A549）相比,耐砷细胞（A549R）总RNA上的m6A修饰水平增加,甲基转移酶METTL3的蛋白水平升高;与相应的阴性对照细胞相比,耐砷细胞中的METTL3蛋白表达水平降低后,总RNA上的m6A修饰水平下降,同时miR-155表达量也随之降低。结论 高水平的METTL3可催化m6A修饰的形成,进而通过影响miR-155的表达参与肺腺癌细胞对三氧化二砷的耐受性。     

α-Viniferin and ε-Viniferin Inhibited TGF-β1-Induced Epithelial-Mesenchymal Transition,Migration and Invasion in Lung Cancer Cells through Downregulation of Vimentin Expression

Resveratrol has well-known anticancer properties; however, its oligomers, including α-viniferin, ε-viniferin, and kobophenol A, have not yet been well investigated. This is the first study examining the anti-epithelial-mesenchymal transition (EMT) effects of α-viniferin and ε-viniferin on A549, NCI-H460, NCI-H520, MCF-7, HOS, and U2OS cells. The results showed that α-viniferin and ε-viniferin significantly inhibited EMT, invasion and migration in TGF-β1- or IL-1β-induced non-small cell lung cancer. α-Viniferin and ε-viniferin also reversed TGF-β1-induced reactive oxygen species (ROS), MMP2, vimentin, Zeb1, Snail, p-SMAD2, p-SMAD3, and ABCG2 expression in A549 cells. Furthermore, ε-viniferin was found to significantly inhibit lung metastasis in A549 cell xenograft metastatic mouse models. In view of these findings, α-viniferin and ε-viniferin may play an important role in the prevention of EMT and cancer metastasis in lung cancer.     

莱菔硫烷对人小细胞肺癌NCI—H446细胞增殖、侵袭以及MMP-9活性的影响

目的探讨莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对人小细胞肺癌NCI—H446细胞增殖、侵袭以及基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）活性的影响。方法体外培养NCI—H446细胞,用0、25、50、100txmol／LSFN处理24～72h后,MTT法检测细胞的增殖情况;小室侵袭实验分析细胞的侵袭力改变,明胶酶谱实验检测MMP-9的酶活性变化。结果经25、50、100Ixmol／LSFN处理24～72h后,NCI．H446生长均能受到不同程度抑制。其中72h后,25、50、100μmol／LSFN组NCI．H446细胞的抑制率分别为（11．1±2．26）％,（25．2±3．24）％和（44．6±4．2）％,与溶剂对照组相比差异具有统计学意义（t=10．685,8．417,5．264,P〈0．05）。25、50、100μmol／LSFN作用NCI—H446细胞24h后,NCI—H446细胞穿膜数分别为（48．6±1．84）％,（35．4±2．22）％和（27．8±1．36）％,与溶剂对照组[（68．4±2．21）％]相比差异具有统计学意义（t=6．341,5．562,4．925,P〈0．05）。明胶酶谱实验显示,25、50、100ixmol／LSFN处理后,MMP-9活性的灰度值分别为764±18．4,685±14．74和638±21．54,与对照组相比（822±12．53）,差异有统计学意义（t=4．971,7．582,11．235,P〈0．05）。结论SFN对肺癌NCI—H446细胞生长、侵袭力及MMP-9的活性具有抑制作用。     

玉米紫色植株色素体外诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的初步研究

[目的]研究玉米紫色植株色素(PMPP)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。[方法]MTT法比较不同浓度的PMPP对体外培养的肺癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,同时应用倒置显微镜观察凋亡细胞的形态学特征。[结果]不同浓度PMPP溶液对A549细胞的增殖均有抑制作用,浓度为50mg/ml时的抑制率最大,约为85.35%。形态学表现为单位视野内细胞数量明显减少,细胞间隙增大,细胞体积明显缩小,细胞失去原有的形态,胞体皱缩变圆,出现膜发泡现象。流式细胞术结果表明,当PMPP浓度为40mg/ml时,处于S期的肿瘤细胞增多,凋亡率为41.52%。[结论]玉米紫色植株色素可通过诱导部分细胞凋亡抑制人肺腺癌A549细胞增殖。