凋亡抑制蛋白XIAP和促凋亡因子Smac在胰腺癌化疗抵抗中的作用

目的探讨x-相关凋亡抑制蛋白（XIAP）和促凋亡因子Smac在胰腺癌细胞化疗抵抗中的作用，以及转染胞浆表达型Smac基因靶向下凋XIAP对化疗药物诱导的胰腺癌细胞凋亡的影响。方法应用流式细胞术检测顺铂、5-FU介导的Panc-1、BXPC-3的凋亡率及胞浆染色分析细胞XIAP表达变化，Western blot分析XIAP、Smac、Caspase-3表达水平；构建pEGFP-NI／Smac真核表达载体并转染胰腺癌Panc-1细胞，流式细胞术检测转染Smac基因前后Panc-1细胞的凋亡敏感性。结果与BXPC-3细胞相比，Panc-1对顺铂或5-FU介导的凋亡具有较强抵抗性，Western blot分析显示Panc-1细胞高表达XIAP，在化疗药物作用下化疗敏感细胞BXPC-3胞浆内XIAP水平下降明显多于Panc-1细胞，而且凋亡的BXPC-3细胞释放入胞浆内的成熟Smac蛋白水平明显高于Panc-1细胞。转染胞浆表达型Smac基因至化疗抵抗Panc-1细胞，可明显下调其XIAP表达水平，促进效应Caspase-3分子活化，显著提高顺铂、5-FU诱导的细胞凋亡率。结论胰腺癌细胞XIAP的表达水平下调与其化疗敏感性有关，XIAP是克服化疗抵抗的重要靶分子，而上调Smac活性蛋白的胞浆表达作为一种有效调节信号，通过拮抗XIAP的凋亡抑制作用协同化疗药物促进胰腺癌细胞凋亡。     

hTERT干扰对HepG2肝癌细胞Smac表达的影响

目的检测RNAi靶向抑制hTERT基因表达促HepG2肝癌细胞凋亡与Smac的关系,探讨hTERT干扰促进细胞凋亡的可能机制。方法收集hTERT基因RNAi真核表达载体稳定转染第20代的HepG2肝癌转染细胞、对照细胞（转染空载体质粒）及未转染细胞,通过Westernblot检测胞内XIAP和caspase-3,以及线粒体和胞浆Smac的表达;采用共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化。结果与未转染细胞和对照细胞相比,转染细胞内XIAP表达明显减少（P〈0．05）,caspase-3表达明显增加（P〈0．05）,线粒体Smac表达明显减少（P〈0．05）,而胞浆Smac表达明显增加（P〈0．05）;转染细胞线粒体膜电位明显降低。结论RNAi靶向抑制hTERT基因表达可能通过降低HepG2肝癌细胞线粒体膜电位,引起Smac从线粒体释放入胞浆,进而抑制XIAP表达,促进caspase-3表达增加诱导细胞凋亡。     

X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用

目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关。结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。     

Caspase-9与Apaf-1在锰中毒大鼠生精细胞表达及XIAP与Smac的调控作用

目的研究氯化锰导致的大鼠生精细胞caspase-9及Apaf-1表达中XIAP和Smac的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组,低剂量(15 mg/kg Mn Cl2)和高剂量(30 mg/kg Mn Cl2)组,腹腔注射MnCl24周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低;同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低;各组caspase-9与Apaf-1表达正相关,XIAP与Smac表达成负相关。结论锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。     

稳定过表达Smac基因对胃癌细胞株凋亡活性的调控作用

目的　探讨稳定过表达Smac基因对胃癌细胞凋亡的影响。方法　脂质体介导Smac基因转染MKN- 45细胞,G418筛选阳性克隆。逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)和Western印迹鉴定Smac表达,同时以丝裂霉素作为凋亡诱导因子,采用锥虫蓝活细胞拒染法检测癌细胞体外生长活性,透射电镜、吖啶橙溴化乙啶荧光染色法、末端TdT酶标记技术(TUNEL)观察癌细胞凋亡及比率;Western印迹、比色法检测细胞内caspase- 3表达。结果　所获胃癌亚克隆细胞MKN -45 /Smac的SmacmRNA、蛋白表达水平均显著高于MKN -45(P<0 01)。10μg/ml丝裂霉素作用6 ~24h后,与MKN -45细胞比较,MKN 45 /Smac细胞生长活性减弱10 .0% ~30 8% (P<0 .01),部分MKN- 45 /Smac细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率增高21 .2% (P<0. 01 )。丝裂霉素作用后,MKN -45 /Smac细胞内caspase- 3的表达和活性均较MKN- 45细胞显著增强(P<0 .01)。结论　胃癌细胞中Smac基因的过表达,能提高丝裂霉素作用后细胞中caspase 3的表达和活性,显著诱导癌细胞凋亡,为调控胃癌细胞凋亡活性提供了新的途径。     

P21蛋白和XIAP在美伐他汀诱导A549细胞凋亡中的作用

目的 研究P21蛋白和凋亡相关基因XIAP在美伐他汀诱导A549细胞凋亡中的作用及其分子机制.方法 应用MTT法检测细胞系的增殖作用,流式细胞仪、透射电镜检测细胞周期和凋亡;用流式细胞术、Western blot和RT-PCR检测P21蛋白、XIAP蛋白及P21和XIAP mRNA的表达.结果 美伐他汀呈剂量和时间依赖性对A549增殖产生抑制;并诱导A549细胞G0/G1期阻滞和凋亡.美伐他汀对P21 mRNA及P21总蛋白的表达无影响,但可使P21胞膜蛋白的表达下降.美伐他汀作用后XIAP mRNA及XIAP蛋白的表达均下降.加入甲羟戊酸可完全逆转美伐他汀的上述作用.结论 美伐他汀通过甲羟戊酸途径抑制A549细胞增殖并诱导凋亡,使细胞周期进程阻滞于G0/G1期,XIAP参与美伐他汀诱导A549细胞凋亡的基因调控.美伐他汀靶向HMG-CoA还原酶,抑制P21蛋白异戊二烯化、阻止P21蛋白与细胞膜的结合,不影响P21总蛋白的表达.     

Bcl-2与脑缺血再灌注损伤关系的研究进展

脑缺血再灌注损伤与细胞凋亡密切相关,细胞凋亡是由基因调控的.研究表明,脑缺血后细胞凋亡的发生是一个主动过程,它依赖于大分子物质合成,说明细胞凋亡是由基因调控的.目前与凋亡相关的基因分为两大类,抗凋亡基因和促凋亡基因.Bcl-2 是目前发现的最重要的抗凋亡基因,本文就Bcl-2 在脑缺血再灌注损伤中的表达及与缺血性凋亡的关系作一综述.     

染锰大鼠睾丸Caspase-9,Smac,Apaf-1和XIAP的表达

目的研究氯化锰导致的大鼠生精细胞caspase-9及Apaf-1表达中XIAP和Smac的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组,氯化锰低剂量(15mg/kg MnCl_2)和氯化锰高剂量(30mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_24周和6周,免疫组织化学SABC法和Western blot检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果氯化锰组生精细胞caspase-9和Smac蛋白表达水平显著高于对照组,随时间和剂量增加而升高;而Apaf-1和XIAP蛋白表达水平则降低,并有时间和剂量依赖性。结论 caspase-9,Apaf-1,XIAP和Smac可能参与锰引起雄性生殖毒性的发病机制。     

BCL-2家族与线粒体对细胞凋亡的调控

线粒体是细胞凋亡调控的中心环节, 它通过释放膜间隙中的促凋亡蛋白(细胞色素C、Smac/DIABLO、AIF和en donucleaseG等)来起作用。线粒体膜间隙 (IMS)蛋白的释放是由BCL-2家族蛋白调控的。BCL-2家族蛋白能够诱导线粒体通透性转变孔道 (PT孔道 )的开放, 导致细胞凋亡。关于PT孔道开启的机制是近年来研究的一个热点。本文综述了近年来有关线粒体与BCL-2家族对细胞凋亡调控的研究进展。     

Bcl-2和caspase-3在创伤性脑损伤后细胞凋亡中的作用

bcl-2和caspase-3分别是bcl-2基因族和caspase基因族中具有代表性的基因,它们参与对细胞凋亡的调控.研究表明创伤性脑损伤后存在细胞凋亡及凋亡相关基因的表达.从基因水平探讨创伤性脑损伤后细胞调亡调控机制是近年研究的一个热点.本文仅综述bcl-2和caspase-3基因在创伤性脑损伤研究中的最新进展.     

Smac基因过表达增强顺铂对食管癌Eca109细胞化疗的敏感性

目的:探讨Smac基因过表达对食管癌细胞株Eca109顺铂化疗敏感性的影响。方法:脂质体介导将带有GFP的pcDNA3.1-Smac重组体及带有GFP的pcDNA3.1空白载体转染入食管癌细胞株Eca-109,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot检测转染前后细胞内Smac蛋白表达水平的变化。顺铂处理组(1、5、10 mg/L)和顺铂未处理组分别处理转染前后的食管癌细胞株Eca109,Annexin V/PI双染法经流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:分别建立稳定表达Smac基因+GFP基因,新霉素抗性基因(neo)+GFP基因的食管癌亚克隆细胞株Eca109/Smac,Eca109/neo。Eca109/Smac的Smac蛋白表达水平明显高于Eca109/neo和Eca109(P<0.05)。在顺铂未处理组,Eca109/Smac、Eca109/neo和Eca109的细胞凋亡率组间无明显统计学差异。在顺铂处理组,顺铂浓度分别为1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L,Eca109/Smac的细胞凋亡率明显高于Eca109/neo和Eca109,组间具有统计学差异(P<0.05),且随着顺铂浓度的升高,Eca109/Smac细胞凋亡率随之升高(P<0.05)。Eca109/neo和Eca109组间无明显统计学差异。结论:Smac基因转染未经顺铂处理的Eca109细胞株中不诱发凋亡,在顺铂处理组其过表达能增强Eca109对顺铂的化疗敏感性。     

主要凋亡基因对细胞凋亡的调控

细胞凋亡是生物体内广泛存在的一种重要的生命过程,是多细胞动物调节机体发育、维护内环境稳定、有基因调控的细胞主动性死亡过程.对细胞凋亡的关注也转移到基因的表达和基因产物的活化方面,它与细胞分裂、细胞分化类似,受细胞内多种基因的控制,是一个级联式（cascade）基因表达的结果.已发现多种基因参与细胞凋亡的基因调控,其中包括Bcl-2和Bax、p53、Fas和FasL、 ced、c-myc、ICE等.本文就主要凋亡基因对细胞凋亡的调控进行了综述.     

抑制PI3K/AKT信号通路对卵巢癌细胞XIAP和cIAP2表达水平的影响

卵巢恶性肿瘤的化疗主要依赖肿瘤细胞的凋亡而达到治疗目的,耐药则是导致治疗失败的重要因素[1].有研究显示,凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)中的X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、细胞凋亡抑制蛋白2(cellular inhibitor of apoptosis protein 2,cIAP2)及PI3 K/A KT在卵巢癌中高表达,除与卵巢癌的发生有关外,还与卵巢癌化疗耐药有一定的关系.PI3K/AKT信号通路过度激活是肿瘤发生的早期事件,正常细胞暴露于致癌物质中可激活该通路,导致肿瘤的发生.PI3K/AKT可抑制细胞凋亡,使恶变细胞得以存活,肿瘤细胞持续增殖.XIAP基因是IAP家族的主要成员,XIAP基因在大多数肿瘤细胞中过表达,在正常组织中表达量极低,提示它可能在细胞的增殖和向恶性转化过程中发挥作用,且其过表达与肿瘤的进展、复发、预后以及耐药均密切相关.cIAP2是另一个IAP家族成员,作为一个潜在的作用靶点,cIAP2越来越受到重视[2].我们应用PI3 K/AKT的特异性阻断剂LY294002,以不同浓度作用于卵巢癌细胞株NIH:OVCAR-3中,以探讨PI3K/AKT和IAP之间的关系,进一步阐明PI3K/AKT和XIAP、cIAP2在凋亡中的作用.     

下调X连锁调亡抑制蛋白基因表达增强多西他赛诱导膀胱癌细胞凋亡的作用

目的: 观察人源性膀胱癌细胞在下调X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达后,多西他赛对其敏感性的影响。方法: 以shRNA和shRNA-XIAP质粒分别稳定转染人源性膀胱癌T24T细胞。以荧光显微镜观察转染细胞。以RT-PCR和Western blotting法分别检测膀胱癌细胞XIAP mRNA和蛋白的表达。与T24T以及转染空载体的T24T细胞相比较,以ATPase法检测多西他赛对转染 XIAP 基因的膀胱癌细胞的细胞毒性。相差显微镜下观察,流式细胞术检测多西他赛预处理转染 XIAP 基因的膀胱癌细胞的凋亡率;以Western blotting法检测细胞内的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和caspase-3蛋白表达和裂解水平。结果: 荧光显微镜下分别观察shRNA和shRNA-XIAP转染的T24T细胞,均见稳定荧光。Western blotting和RT-PCR检测结果显示,人源性膀胱癌T24T细胞在稳定转染反义XIAP基因后,其XIAP蛋白和mRNA水平均显著降低。经多西他赛处理24 h后, 转染反义XIAP基因的T24T细胞IC₅₀为(1.23±0.62)nmol/L,远低于T24T以及转染空白载体的对照组细胞 。流式细胞术检测结果显示, T24T shRNA-XIAP细胞组(2 nmol/L和5 nmol/L)凋亡率 显著高于转染空载体细胞的凋亡率 。与转染空载体的细胞相比较,T24T shRNA-XIAP细胞内的PARP和caspase-3明显降低。结论: 下调膀胱癌细胞的XIAP基因表达后,可显著增强化疗药物多西他赛所诱导的膀胱癌细胞的凋亡,并增强多西化赛的细胞毒性。     

miR-23a和ESRP1在直肠癌中的作用

目的:研究miR-23a和上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)在直肠癌组织及细胞系中的表达,以及对体外直肠癌细胞活力和凋亡的作用。方法:采用RT-q PCR分析miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁组织中的表达,免疫组化检测ESRP1在直肠癌组织中的表达,分析miR-23a和ESRPl在直肠癌组织中的相关性;利用RT-q PCR检测miR-23a在直肠癌Caco-2和SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a inhibitor和inhibitor阴性对照(inhibitor NC),并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞活力的影响,流式细胞术检测转染后细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭;通过Western blot技术检测SW480细胞中ESRPl蛋白的表达;构建野生型pGL3-ESRP1-3’UTR(wt-pGL3-ESRP1-3’UTR)或突变型pGL3-ESRP1-3’UTR(mut-pGL3-ESRP1-3’UTR)质粒,并分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染至HEK293和SW480细胞中,利用双萤光素酶报告基因检测试剂盒说明检测双萤光素酶活性;将ESRP1 mimic或mimic NC瞬时转染SW480细胞后,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡;Western blot法检测瞬转ESRP1 mimic后对ESRP1、caspase-3、Smac和XIAP蛋白表达的影响。结果:miR-23a和ESRP1在直肠癌组织的表达较癌旁正常组织分别上调和下调,两者呈明显负相关(P0.01);miR-23a的表达与直肠癌的淋巴结转移和肿瘤浸润深度相关;与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调(P0.01);转染miR-23a inhibitor后,SW480细胞活力较inhibitor NC组显著下降(P0.01);转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显升高,同时细胞体外侵袭能力受到抑制;萤光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高;ESRP1 mimic转染SW480细胞后可抑制细胞活力并诱导细胞凋亡,同时上调caspase-3和Smac的表达,下调XIAP的表达。结论:miR-23a可通过负向调控下游靶基因ESRP1从而影响直肠癌细胞生长和凋亡。     

The effects of fluorescent protein recombinant plasmid with XIAP and OMI/HTRA2 on HeLa cells

目的 探讨XIAP、Omi/HtrA2、米非司酮对HeLa细胞凋亡的影响以及XIAP、Omi/HtrA2的相互作用.方法 细胞转染、米非司酮诱导HeLa细胞凋亡,利用共聚焦显微镜及流式细胞术观察XIAP、Omi/HtrA2在细胞内的表达和定位,并检测其对HeLa细胞凋亡影响的情况,使用共聚焦显微镜检测XIAP、Omi/HtrA2的相互作用.结果 (1)在转染了重组质粒pDsRed2-XIAP、pDsRed2-Omi/HtrA2的HeLa细胞中,加入米非司酮后其凋亡率分别是:只加米非司酮组为46.16%;米非司酮+转染质粒pDsRed2-XIAP为26.41%;米非司酮+转染质粒pDsRed2-Omi/HtrA2为78.85%.(2)利用共聚焦显微镜检测XIAP、Omi/HtrA2在HeLa细胞中存在能量共振转移现象.结论 米非司酮能促进HeLa细胞凋亡;DsRed2-XIAP融合蛋白能够抑制由米非司酮诱导的HeLa细胞凋亡;DsRed2-Omi/HtrA2融合蛋白能够促进HeLa细胞凋亡,米非司酮能增加Omi/HtrA2促凋亡作用.在活HeLa细胞中,利用荧光共振能量转移技术直接证实XIAP与Omi/HtrA2在部分细胞中存在相互作用.     

Smac模拟物的抗肿瘤作用机制研究进展

肿瘤细胞对治疗因素产生耐受是治疗疗效受限的主因.凋亡抑制蛋白(IAPs)家族的高表达是肿瘤细胞产生治疗抗性的重要因素.Smac作为一种有效的促凋亡蛋白,可明显提高肿瘤细胞对放化疗的敏感性,促进肿瘤细胞凋亡;但是,外源Smac蛋白及其活性基团均不能进入细胞而发挥功能.因此,对于Smac模拟物的研发及其作用机制的探索成为研究人员关注的焦点.针对近年来Smac模拟物及其作用机制的研究进展进行综述.     

Bcl-2在细胞凋亡调控和肿瘤耐药形成中的作用及其分子机制

细胞凋亡是目前细胞生物学研究热点之一。作为一种细胞内源性基因调控下的生理性细胞死亡方式，其过程发生障碍不仅是肿瘤发生的主要机制之一，而且也与肿瘤治疗和耐药性的形成密切相关。研究表明，ｂｃｌ－２基因的表达和调控是影响细胞凋亡的关键环节。本文对Ｂｃｌ－２在细胞凋亡调控和肿瘤耐药形成中的作用及其分子机制作一综述。     

重组XIAP对H2O2诱导小肠上皮细胞凋亡的保护作用

背景：XIAP在细胞抗凋亡中发挥关键作用,能作为与凋亡相关的多种疾病预防治疗的靶点。 目的：构建大鼠重组XIAP表达质粒,观察其对H₂O₂诱导细胞凋亡的保护作用和机制。 方法：采用RT-PCR从大鼠小肠上皮细胞IEC-6扩增出大鼠XIAP基因ORF序列,插入pCMV6-AC-GFP载体,重组成pXIAP-GFP表达质粒,测序鉴定。以重组pXIAP-GFP与对照质粒pCMV6-AC-GFP转染IEC-6细胞,Western blot检测细胞重组XIAP的表达,同时在H2O2诱导细胞凋亡后,MTT法检测细胞存活,Western blot检测细胞Casepase-3表达。 结果与结论：经测序证实pXIAP-GFP重组序列正确,Western blot证实将其转染IEC-6细胞后细胞正确表达XIAP,表明pXIAP-GFP重组质粒构建成功;在转染质粒和H₂O₂诱导凋亡后,与对照质粒pCMV6-AC-GFP组比较,pXIAP-GFP组细胞 A值增高,Caspase- 3表达降低。表明重组XIAP能通过抑制Caspase-3的表达抵抗H₂O₂诱导的细胞凋亡。     

miR-181a过表达加重H2O2诱导的HUVECs损伤

目的研究miR-181a在过氧化氢(H_2O_2)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中的表达,并探讨miR-181a对H_2O_2诱导的HUVECs活性和凋亡的影响及其机制。方法 MTT法和流式细胞计量术测定HUVECs活性和凋亡;RT-qCR和Western blot测定miR-181a和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA及蛋白的表达;Targetscan软件预测miR-181a和XIAP的靶向关系,利用双荧光素酶报告分析和Western blot加以验证。结果 1)H_2O_2呈剂量依赖性抑制HUVECs活性并促进凋亡(P0.05);2)miR-181a在H_2O_2处理的HUVECs中显著升高(P0.05);3)敲低miR-181a可明显促进H_2O_2诱导的HUVECs活性并抑制细胞凋亡(P0.05);4)miR-181a能够与XIAP靶向结合;5)miR-181a过表达可抑制H_2O_2诱导的HUVECs活性并促进细胞凋亡,外源过表达XIAP可减轻miR-181a调控的HUVECs活性和凋亡。结论 miR-181a通过靶向XIAP抑制H_2O_2诱导的HUVECs活性,并促进细胞凋亡,加重HUVECs损伤。