高压氧对缺血再灌注条件下鼠视网膜细胞膜功能的影响(论著)

目的：观察高压氧（ＨＢＯ）对缺血再灌注视网膜细胞膜功能的影响。方法：选择３５只ＳＤ大鼠，随机分为４组：正常组、再灌注组、空气加压组和ＨＢＯ组。采用升高眼内压（ＩＯＰ）致视网膜血管断流造成视网膜缺血模型，然后给予再灌注３小时。其中空气加压组和ＨＢＯ组于再灌注开始后将动物置于ＨＢＯ舱内，在２５２．３８ｋＰａ（≈２．５ＡＴＡ）压力下分别吸空气和纯氧，加压时间为８０分钟。再灌注结束后取眼球制备视网膜细胞膜匀浆液。用定磷法测定视网膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性，用荧光探针ＤＰＨ标记细胞膜并测定其膜流动性。结果：ＨＢＯ组视网膜细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性与正常组比较无显著性差异，而与再灌注组比较有非常显著性差异；ＨＢＯ组膜流动性与再灌注组比较有非常显著性差异。结论：ＨＢＯ对缺血及再灌注所造成的视网膜细胞功能的损伤具有明显的治疗作用。     

高压氧对急性局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠一氧化氮合酶阳性细胞分布的影响

目的　探讨一氧化氮合酶 (NOS)阳性细胞在大鼠急性局灶性脑缺血 /再灌注损伤和高压氧治疗后表达的变化。　方法　应用血管内细丝栓堵大脑中动脉 (MCA)的局灶性脑缺血大鼠模型 ,利用黄递酶 - NADPH组织化学方法 ,观察MCA缺血 1h,再灌注 4、11、2 3、71h NOS阳性细胞在视交叉平面梗塞区皮层、视前区、纹状体外侧区和纹状体内侧区域分布的变化 ,在以上期间同时应用常压纯氧和 0 .2 5 MPa高压氧 (HBO)于开始缺血后 2、9、2 1、45和 6 9h分别治疗 1次 (1h)。　结果　脑缺血后 ,在上述区域形态改变的 NOS阳性细胞数随着再灌注时间的延长…     

高压氧对脑缺血后再灌流大鼠海马组织三磷酸肌醇的作用

目的：研究高压氧（ＨＢＯ）对脑缺血及缺血后再灌流大鼠海马组织三磷酸肌醇（ＩＰ＿３）的作用。方法：实验用ＳＤ大鼠，制作四动脉闭塞脑缺血模型，应用Ａｍｅｒｓｈａｍ公司的ＩＰ＿３测定系统，观察脑缺血１０分钟和３０分钟时与缺血１０分钟后再灌流（不吸氧、吸氧及ＨＢＯ作用）后ＩＰ＿３的改变，并以０．２５ＭＰａ空气作为高压对照。结果：脑缺血后，海马组织中ＩＰ３明显升高，其中缺血１０分钟较３０分钟改变更明显；缺血１０分钟后经不同处理，ＩＰ＿３浓度均明显恢复，其中经常压纯氧和０．２５ＭＰａＨＢＯ处理动物的ＩＰ＿３浓度的恢复不及单纯再灌流８０分钟和０．２５ＭＰａ高压空气作用者明显。结论：ＩＰ＿３在脑缺血早期改变明显，它参与细胞内游离Ｃａ￣（２＋）浓度的调控，但它在ＨＢＯ恢复胞浆内游离Ｃａ￣（２＋）的浓度过程中，未显示有重要作用，且发现氧可能有促进ＩＰ＿３产生的作用。     

罗布麻提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察罗布麻提取物（Aplocyilum venetum L Extract,AVE）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、AVE（高、低剂量）组和阳性对照组（银杏叶胶囊）,口服给药5d后,采用改良的Ionga法,建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。再灌注2,4h后对大鼠神经功能障碍进行评分,测量其脑梗死面积、脑含水量。结果 与模型组相比,AVE两个剂量组可以减轻神经症状,缩小缺血面积,并且可以减轻脑水肿。与阳性对照组对比,各指标无显著性差异。结论 AVE对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠具有保护作用。     

高压氧对大鼠心脑肺超微结构的影响

目的　探讨高压氧（ＨＢＯ）对心、脑、肺超微结构的影响。方法　１６只大鼠随机分为ＨＢＯ组及对照组,将ＨＢＯ组鼠一次暴露于纯氧舱内,于０．２５ ＭＰａ（２．５ ＡＴＡ）压力下停留２ 小时,总暴露时间为３ 小时,对照组鼠则暴露于常压空气中３ 小时。然后分别观察两组动物心、脑、肺超微结构的变化。结果　ＨＢＯ组动物心肌细胞线粒体肿胀、细胞核固缩、核周膜性空泡;大脑皮质神经元细胞核固缩和核周间隙增宽;肺上皮细胞内质网扩张。对照组动物未见明显变化。结论　ＨＢＯ可引起大鼠心、脑、肺超微结构轻度变性     

缺氧预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响

脑组织对缺血缺氧的耐受性差,如何提高脑组织对缺血缺氧的耐受性,是当前正在研究的一个热门课题。现已证实,短暂的低氧或（和）缺血预适应可减轻随后发生的低氧或（和）缺血性损伤。我们观察了短暂的脑缺氧对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响,现报道如下。一、材料和方法１．实验动物分组：健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠,体重２５０～３５０ｇ,随机分为３组,即缺血再灌注组、缺氧预处理组和假手术组,每组８只。缺血再灌注组为脑缺血２小时,再灌注９小时。缺氧预处理组为短暂重复缺氧处理后２４小时,脑缺血２小时,再灌注９小时。…     

大鼠脑缺血后高血糖对血脑屏障通透性的影响

采用＾３Ｈ标记的α－氨基异丁酸（＾３Ｈ－ＡＩＢ）做为血脑屏障（ＢＢＢ）通透性指示剂，定量观察了高血糖大鼠脑缺血后ＢＢＢ的变化。结果发现，在大鼠４血管阻断脑缺血２０ｍｉｎ，高血糖组ＢＢＢ通透性明显高于正常血糖组及非脑缺血对照组；正常血糖组与对照组间无明显差异。提示高血糖能够加重ＢＢＢ损害，ＢＢＢ的损害可能是高血糖加重脑缺血性损害及脑水肿的重要病理生理机制之一。     

单肺缺血再灌注对对侧肺的影响

目的探讨单肺缺血再灌注对对侧肺的影响。方法４８只大鼠随机分成缺血再灌注组（ＩＲ，鼠数＝２４）和手术对照组（ＯＣ，鼠数＝２４）。采用左肺在体４５分钟热缺血再灌注模型，动态测定双侧肺组织丙二醛（ＭＤＡ）、血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和干／湿重（Ｄ／Ｗ）比值变化。结果左肺热缺血再灌注后右肺ＭＤＡ和ＴＸＢ２含量均呈递增趋势（Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１），但升幅明显低于相应时相左肺（Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１），右肺ＴＮＦα升幅没有左肺大，与ＯＣ组相比无显著性差异，Ｄ／Ｗ比值没有明显变化。结论左肺热缺血后再灌注不仅造成左肺损伤而且可影响未缺血右肺功能     

高压氧对小鼠耳廓微循环作用的观察

探讨高压氧（ＨＢＯ）对小鼠耳廓微循环作用的影响。方法ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠３０只，随机分成三组：一组为常压对照组（ＮＰ组），另一组为高压空气对照组（ＨＢＡ组），第三组为高压氧实验组（ＨＢＯ组）。ＨＢＡ组和ＨＢＯ组动物分别给予压缩空气和１００％纯氧。从常压至０．２５ＭＰａ（２．５ＡＴＡ）的升压过程为１０ｍｉｎ，在０．２５ＭＰａ维持恒压６０ｍｉｎ，经２０ｍｉｎ降至常压。动物出舱后用微循环图象分析仪对小鼠耳廓微循环进行观察和定量测量。结果ＨＢＡ组小鼠耳廓徽循环的形态与结构无明显改变。ＨＢＯ组小鼠耳廓毛细血管分布密度明显增高（Ｐ＜０．０１），微循环单位面积中毛细血管开放数明显增加，细动脉和细静脉的血流速度加快。结论ＨＢＯ处理能改善微循环的功能，并增强毛细血管内皮细胞和毛细血管周围组织的营养和有氧代谢。     

高压氧对兔急性脑缺血重灌注后脑组织及血浆β－内啡肽含量变化的影响

目的：研究高压氧（ＨＢＯ）对家兔急性脑缺血重灌注后脑组织及血浆β－内啡肽（β－ＥＰ）含量变化的影响。方法：制备兔不完全性脑缺血重灌注损伤动物模型。重灌注后用放抡法测量皮层、下丘脑及血浆的β－ＥＰ含量。结果：ＨＢＯ组与对照组比较皮层β－ＥＰ含量差别不显著（Ｐ＞０．０５），下丘脑β－ＥＰ含量都明显减少（Ｐ＜０．０１）。不同压力与时间的ＨＢＯ治疗组间皮层与下丘脑的β－ＥＰ含量变化均个显著（Ｐ＞０．０５），ＨＢＯ组与对照组比较，血浆含量明显减少（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。结论：ＨＢＯ是通过减少卜丘脑及血浆β－内啡肽含量来减轻脑水肿改善脑缺血的，这可能是ＨＢＯ治疗脑缺血的机理之一。     

原癌基因c-fos在大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤和高压氧治疗后表达的变化

目的　探讨原癌基因 c- fos在大鼠急性局灶性脑缺血 /再灌注损伤和高压氧 (HBO)治疗后表达的变化。方法　用血管内细丝栓堵大鼠的大脑中动脉 (MCA ) ,制作成局灶性脑缺血动物模型 ,利用免疫组织化学方法 ,观察了 MCA缺血 1 h,再灌注 4、1 1、2 3、71 h c- fos癌基因表达的变化 ,在以上期间同时应用常压 0 .1 MPa纯氧或 0 .2 5 MPa HBO于开始缺血后 2、9、2 1、45和 6 9h分别治疗 1次 (1 h)。结果　缺血后 5 h,c- fos原癌基因在梗塞区皮层、纹状体、视前区均有明显表达 ,持续 1 2～ 2 4h后开始减弱 ,72 h基本消失。 HBO治疗后 ,各时间点 c- fos癌基因在上述区域的表达均明显减弱。结论　 HBO可明显抑制大鼠急性局灶性脑缺血 /再灌注损伤区 c- fos癌基因的表达     

高压氧对大鼠持续性局灶脑缺血后脑中Bcl-2蛋白表达的影响

目的：探讨高压氧（HBO）治疗对大鼠局灶性脑缺血的作用及其机制。方法 应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型。70只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组,缺血对照组,缺血 HBO组,缺血 高压空气组,每大组再各分5小组（n=4）,分别对应6,24,48,72h及7d时间点断头取脑。观察各组大鼠梗塞灶体积及Bcl-2蛋白合成,并进行组间比较。结果 早期应用HBO能减少梗塞灶体积,提高半暗带内Bcl-2蛋白的合成。结论 早期应用HBO可能对治疗急性脑缺血有效。     

高压氧对大鼠局灶性脑缺血再灌注时神经元特异性烯醇化酶的影响

目的研究高压氧(HBO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注(IR)时．大鼠脑梗塞体积．脑组织病理改变及神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量的影响。方法用线栓法制备阻断大脑中动脉(MCA)的局灶性脑IR模型。Wistar大鼠30只，随机分为5组：正常对照组(N组n=-6)，缺血再灌注2h 常压空气组(Rt组,n=-6)，缺血再灌注24h 常压空气组(R2组，n=-6)，缺血再灌注2h HBO组(H1组，n=-6)，缺血再灌注24h HBO组(H2组，n=-6)。R1、R2、H1、H2组缺血时间均为2h。R1、R2组暴露于常压空气，H1、H2组暴露于2．5MPa氧气。病理切片用HE染色，用Swanson方法测定脑梗塞体积，用酶联免疫法测定NSE含量。结果H1、H2组与R1、R2组相比，神经元缺血性损害较轻，脑梗塞体积缩小，NSE含量明显下降，差异有统计学意义。结论HBO能减轻缺血性脑损害，保护脑组织。     

金丝桃苷对大鼠脑缺血再灌注氧化应激损伤的影响

目的 探讨金丝桃苷（Hyperin,Hyp）对大鼠局灶性脑缺血再灌注氧化应激损伤的影响。方法 （1）模型制备：采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,缺血2h再灌注。（2）抗氧化实验：40只大鼠随机分成假手术组、模型组、Hyp低剂量组和高剂量组,每组10只。给药组术前连续ig5d,于末次给药30min后行手术。造模24h后检测大鼠脑组织的超氧化物岐化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。（3）病理组织学实验：另取40只大鼠分组和治疗同上,造模24h后,进行神经行为学评分,光镜下观察脑梗死部位病理学改变。结果与模型组比较,神经行为学评分明显降低（P〈0．01）;Hyp—L、Hyp—S剂量组SOD活性均明显提高（P〈0．01）,且两组的MDA含量也显著降低（P〈0．05）;镜下观察给药组多数神经元结构较完整,形态相对正常,细胞及间质水肿减轻。结论 Hyp对大鼠局灶性脑缺血再灌注氧化应激损伤有明显保护作用。     

高压氧对大鼠脑缺血再灌注后碱性成纤维细胞生长因子及其受体表达的影响

目的 探讨高压氧对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体(FGFR)表达的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠80只,随机分为模型对照组和高压氧暴露组.2组再各分5组,分别为腩缺血1 h再灌注后1、3、5、7、14 d组,每组8只.应用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌流模型(MCAO),进行高压氧暴露,免疫组化检测bFGF和FGFR的表达.结果 脑缺血再灌注后1 d,神经细胞即出现bFGF和FGFR的表达,3 d达高峰,后逐渐减弱,至14 d时仍有表达;高压氧暴露组神经细胞bFGF和FGFR表达的变化趋势与对照组相似,但是同一时间点均明显高于对照组.结论 高压氧通过促进bFGF和FGFR表达,可能激活内源性神经保护机制.     

高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠紧密连接蛋白及血脑屏障通透性的影响

目的 探讨高压氧(HBO)对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中紧密连接蛋白occludin、ZO-1蛋白表达及血脑屏障通透性的影响.方法 雄性Wistar大鼠,随机分成假手术组、脑缺血再灌注组、HBO+脑缺血再灌注组、HBO组.复制局灶性脑缺血再灌注模型,并于再灌注期间行0.25 MPa HBO治疗5次,在处死动物前1 h经尾静脉注射2%伊文思蓝(Evans blue,EB),采用EB法检测缺血再灌注后血脑屏障通透性的变化.应用免疫组织化学的方法观察缺血再灌注后脑组织中occludin蛋白的分布,再采用Western Blot法检测再灌注72 h后脑组织中occludin、ZO-1蛋白表达水平的变化.结果 脑缺血再灌注组较假手术组脑组织EB含量显著增高(P＜0.01),其中EB的渗出以4 h最为明显(1.14±0.07)U/mg.HBO+脑缺血再灌注组较脑缺血再灌注组脑组织中EB含量显著降低(P＜0.01),HBO组与假手术组相比脑组织中EB含量变化不明显(P＞0.05).Occludin蛋白的表达Oh时相比于再灌注后4、12、24、48、72 h时显著降低(P＜0.01).现灌注72 h时,HBO+脑缺血再灌注组较脑缺血再灌注组脑组织中occludin、ZO-1蛋白表达水平于再灌注72 h明显增加(P＜0.01);HBO组与假手术组相比脑组织中occludin、ZO-1蛋白表达变化不显著(P＞0.05).结论 HBO可明显增加脑缺血再灌注脑组织中紧密连接相关蛋白occludin、ZO-1的表达,从而降低血脑屏障通透性.

Abstract：

Objective To investigate effects of hyperbaric oxygen (HBO) on the occludin and ZO-1 in the brain tissues and permeability of blood brain barrier (BBB) after cerebral ischemia-reperfusion in mice. Methods Male Wistar mice were randomly divided into 4 groups; the sham group, the ischemia-reperfusion group (IR) , the HBO group and the IR + HBO group. Following development of the cerebral ischemia reperfusion model, 5 sessions of HBO at 0.25 Mpa were applied during the reperfusion period, and 2% Evens blue (EB) was injected into the tail veins an hour before the animals were executed. Following ischemia reperfusion, changes in the permeability of BBB were monitored with the EB method. Following ischemia reperfusion, the distributions of occludin and ZO-1 in the brain tissue were observed with immunohistochemical method, and the expressions of occludin, ZO-1, and the contents of EB were determined by Western Blot and spectrophotometer. Results When compared with that of the sham group, the levels of EB in the brain tissue for the IR group increased significantly, reaching peak at 4 h following IR injury (P＜0. 01). In the IR + HBO group, EB contents in the brain tissue decreased significantly, when compared with those of the IR group ( P＜ 0.01). However, no significant changes in the expression of occludin, ZO-1 and the content of EB in the brain tissue could be noted in the HBO, when compared with those of the sham group (P＞0.05). In the IR group, the expressions of occludin and ZO-1 at 4, 12, 24, 48, 72 h after reperfusion decreased significantly, when compared with those at 0 h( P＜0. 01). However, for the IR + HBO group, the expressions of occludin and ZO-1 at 72 h after reperfusion increased markedly (P＜0. 01). No obvious changes in the expression of occludin and ZO-1 could be noted in the brain tissue in the animals in the HBO group, when compared with those in the sham group (P＞0. 05). Conclusions HBO intervention could increase markedly the expressions of occludin and ZO-1 in the ischemia-reperfusion brain tissue, thus decreasing permeability of BBB.     

高压氧对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的 探讨高压氧对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠32只,分为模型对照组、高压氧暴露组,2组再各分4小组,分别为脑缺血1 h冉灌注后12、24 h,3、5 d组,每组4只.应用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO),并进行高压氧暴露,应用HE染色和细胞凋亡检测,观察神经细胞病理变化和细胞凋亡分布.结果 脑缺血再灌注后12 h即出现神经细胞凋亡表达,随着时间的延长凋亡细胞的数量逐渐增加,至24 h达高峰,以后逐渐减弱,至5 d仍有表达;高压氧暴露组凋亡细胞的数量相对较少,其变化规律与对照组相似,但是同一时间点比较均明显低于对照组.结论 高压氧可以抑制脑神经元细胞凋亡,保护脑神经细胞,有利于促进神经功能恢复.     

MR影像学评价VEGF对兔局灶性脑缺血再灌注损伤的有效治疗时间窗

目的:探讨MR影像学评价血管内皮细胞生长因子对家兔局灶性脑缺血再灌注损伤的有效治疗时间窗。材料和方法:采用兔大脑中动脉阻断局灶性脑缺血再灌注模型,分别在缺血2h再灌注损伤后0h、1h、3h、6h和12h应用微量进样器将VEGF立体定向导入梗死灶周,于再灌注72h,应用MR影像学、TTC染色和流式细胞术评价梗死体积、灶周缺血半暗带凋亡率、ADC值比率(ADCR),评价神经功能缺损。结果:缺血再灌注0h和1h灶周给予VEGF,MRI测得的梗死体积分别为(367.0±15.7)mm3和(393.0±19.6)mm3与对照组(468.6±29.7)mm3相比差异有显著性(P均<0.01);3h、6h和12h组梗死体积为(437.0±24.6)mm3、(444.0±29.5)mm3、(449.0±30.5)mm3与对照组相比差异没有显著性(P>0.05)。TTC染色测得的梗死体积与MRI上相一致。同时1h内用药神经功能缺损评分明显减少,凋亡率明显下降,再灌注3h后给药,则无明显作用。结论:VEGF对兔局灶性脑缺血再灌注损伤的有效时间窗在再灌注损伤1h内,MR影像学检查可作为定量评价基因疗效的可靠指标。     

线栓法所致大鼠局灶性脑缺血/再灌注后脑水肿的时程变化

目的：研究线栓法所致大鼠局灶性脑缺血／再灌注后脑水肿的时程变化。方法：用线栓法，制造大鼠大脑中动脉阻塞的脑缺血／再灌注动物模型，采用干湿称重法测定脑缺血／再灌注后，不同时刻大鼠损伤侧脑组织的含水量。结果：脑缺血3h，大鼠损伤侧脑组织含水量开始增高，随着再灌注的进行，脑组织含水量继续缓慢增高，至再灌注4h时显升高，直至再灌注16h时达到最高。结论：线栓法所致大鼠局灶性脑缺血／再灌注后，脑水肿的程度在16h内呈进行性加重。     

缺血后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠SOD、MDA的影响

目的：观察缺血后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠SOD、MDA的影响。方法：线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,将成年雄性Wistar大鼠144只,随机分成三组：假手术组、对照组（脑缺血再灌注组）、缺血后处理组？假手术组只进行假手术;对照组（脑缺血再灌注组）给予90min大脑中动脉缺血（MCAO）;缺血后处理组在大脑中动脉缺血90rain后,给予灌注30s缺血30s,反复3次。各组分别再灌注1211、24h、48h、72h后测定脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平的改变：结果：局灶性脑缺血后再灌注前给予后处理,缺血后处理组与缺血再灌注组相比,SOD的表达明显增加,而MDA的表达明显减少。结论：脑缺血后处理增加脑缺血再灌注后SOD的表达、减少MDA的表达,进而提高脑组织的抗氧化能力。