MRSA-PBP2a单克隆抗体乳胶凝集检测法的建立

【目的】应用抗PBP2a单克隆抗体,以化学交联法致敏羧化聚苯乙烯乳胶,建立快速检测MRSA-PBP2a的乳胶凝集法。【方法】以辛酸-硫酸铵法纯化PBP2a单克隆抗体,将纯化后单克隆抗体和羧化乳胶经碳化二亚胺（EDC）共价偶联,并对偶联条件（偶联抗体浓度、乳胶浓度、偶联时间和偶联缓冲液）进行探索和优化,建立检测PBP2a的乳胶凝集法。【结果】140mg/L的抗体浓度与15g/L的羧化聚苯乙烯乳胶,在pH 5.8缓冲液中偶联8h后有较好的凝集效果和偶联效率,所建立的乳胶凝集法敏感性和特异性良好。【结论】初步建立了检测PBP2a的胶乳凝集法,为研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础。     

单克隆抗体标志乳胶凝集试验快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的探讨快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的实验方法。方法目标菌株采用SlidexMRSA Detection乳胶快速检测金黄色葡萄球菌(SA)菌株青霉素结合蛋白2 a(PBP2 a),确认MR-SA;设立SA耐苯唑西林筛选试验对照,两组不符合菌株经PCR方法检测M ecA基因确认。结果Sli-dexMRSA Detection乳胶快速检测247株SA的PBP2 a,阳性93株(37.65%);247株SA经苯唑西林筛选试验及PCR测定M ecA基因确定MRSA102株(41.30%),93株PBP2 a阳性菌株都为MRSA;PBP2 a阴性耐苯唑西林22株中,经PCR法检测M ceA基因,9株确认为MRSA,13株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)。乳胶凝集法快速检测SA的PBP2 a确定MRSA,敏感性91.2%,特异性100%,阳性预测值为1,阴性预测值0.94。结论单克隆抗体乳胶凝集法快速检测鉴定MRSA具有较高敏感性和特异性。     

抗组氨酰-tRNA合成酶单克隆抗体的制备及初步鉴定

  【目的】 制备均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA 合成酶抗体,为研究皮肌炎和多肌炎的检测提供方法,为制备检测试剂盒提供原料?【方法】 采用常规融合和间接ELISA检测法,获取杂交瘤细胞株;Protein G Sepharose 4FF和Sephadex G50结合对含有单克隆抗体的腹水进行纯化;SDS-PAGA电泳技术进行单克隆抗体的鉴定?【结果】 筛选获得了2株稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为W001和W002;杂交瘤细胞克隆后,100%的检测孔保持了分泌抗组氨酰-tRNA合成酶抗体的能力;腹水纯化达到了较理想的效果;该2株单克隆抗体能特异性针对组氨酰-tRNA合成酶,并能跟天然的蛋白结合?【结论】 所制备的均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA 合成酶抗体,可直接用于在ELISA?免疫印迹?免疫组化学等研究方面,达到了试验的目的?     

多重PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立多重PCR方法,快速鉴定金黄色葡萄球菌并同时检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的mecA基因。与PBP2a乳胶凝集法及头孢西丁纸片扩散法进行比较。方法以nuc基因以及mecA基因合成2对引物,采用多重PCR扩增法,在279bp和310bp处出现扩增条带,表示检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。结果 171株临床分离菌的mecA基因检出率为52.63%;nuc基因扩增结果与常规检测结果的符合率为100%;以PBP2a乳胶凝集法为＂金标准＂,PCR法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性均为100%,特异性分别为98.78%和92.68%。3种方法结果差异无统计学意义（P〉0.05）。Kappa值均大于0.90。结论此多重PCR法能准确鉴定金葡菌,并可同步检测MRS,可作为临床实验室检测MRS的可靠方法。     

阴道毛滴虫单克隆抗体乳胶快速诊断方法的研究

目的　建立阴道毛滴虫单克隆抗体乳胶快速诊断方法。方法　从阴道中收集分泌物 ,分别用乳胶凝集法和培养方法 ,对 1 97份妇科门诊患者的阴道分泌物标本检测。结果　与培养方法比较 ,乳胶凝集法的敏感性为89.9%,特异性为 95 .5 %,阳性预期值为 6 8.0 %和阴性预期值为 98.8%。结论　该单克隆抗体研制成的乳胶凝集法具有快速、简便及高度的特异性和较好的敏感性 ,能提高临床滴虫性阴道炎的诊断率。     

青霉素结合蛋白2 a乳胶凝集法快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 评价青霉素结合蛋白2a(PBP-2a)乳胶凝集法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的实验方法.方法 用苯唑西林盐琼脂筛选平皿法和PBP-2a乳胶凝集法对68株金黄色葡萄球菌临床分离株进行MRSA检测.结果 用苯唑西林盐琼脂筛选平皿法检出MRSA 50株、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)18株,用PBP-2a乳胶凝集法检测的结果与前法完全相同.2种方法的符合率为100%.结论 PBP-2a乳胶凝集法是一种快速、简便、准确检测MRSA的方法.     

免疫载体-重氮化聚苯乙烯乳胶的制备

本文介绍了重氮化聚苯乙烯乳胶的制备及乳胶凝集反应的流程。其中在制备聚苯乙烯乳胶时,增加乳化剂的用量可获得稳定的乳胶,用它进行硝化不但不会发生凝集,而且省时;同时,发现硝化温度适当升高,反应时间延长可提高硝化率,因而制得的重氮乳胶也具有较多的活性基因,与抗体蛋白偶联反应及乳凝反应时具有较强的特异性,它能结合20～40％的抗体蛋白。实验表明,免疫重氮乳胶只对同型钩体抗原反应;用于检测钩体病人血清阳性率     

青霉素结合蛋白2a乳胶凝集法快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的评价青霉素结合蛋白2a（PBP-2a）乳胶凝集法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRsA）的实验方法。方法用苯唑西林盐琼脂筛选平皿法和PBP-2a乳胶凝集法对68株金黄色葡萄球菌临床分离株进行MRsA检测。结果用苯唑西林盐琼脂筛选平皿法检出MRsA50株、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）18株，用PBP-2a乳胶凝集法检测的结果与前法完全相同。2种方法的符合率为100％。结论PBP-2a乳胶凝集法是一种快速、简便、准确检测MRSA的方法。     

胶乳凝集法检测抗卵巢抗体

通过碳化二亚胺（ＥＤＣ）反应使纯化人卵巢抗原（Ｏ－Ａｇ）中的氨基与羧化聚苯乙烯胶乳的末端羧基共价结合，制备成Ｏ－Ａｇ胶乳，建立了检测抗卵巢抗体（ＡＯＡｂ）的胶乳凝集法。本法与常规ＥＬＩＳＡ对照，检测１２０例不明原因不孕妇女血清ＡＯＡｂ阳性率分别为３１．７％和３７．５％，两法之间有极显著的统计学意义（ｕ＝５．１６８，Ｐ＜０．０１）。提示，胶乳凝集法简便、快速，重复性好，毋需特殊设备，整个检测过程仅需３～５ｍｉｎ，易于推广。     

单克隆抗体标志乳胶凝集试验快速检测脑膜炎奈瑟菌polyosidic抗原

目的探讨流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)的病原学快速检测鉴定及其分型的实验方法。方法24例流脑病例为实验组,63例其他脑膜炎病例为对照组,抽取患者脑脊液(CSF)进行常规及生化检测同时,直接涂片革兰染色镜检细菌,单克隆抗体标志乳胶凝集试验快速检测脑膜炎奈瑟菌polyosid ic抗原;细菌培养及API-NH系列鉴定脑膜炎奈瑟菌,并作单克隆抗体分型。结果实验组24份CSF中,乳胶凝集法阳性22份,对照组63份CSF,阴性61份,阳性2份,乳胶凝集法检测脑膜炎奈瑟菌poly-osid ic抗原诊断流脑,敏感性91.7%,特异性96.8%,阳性预测值0.92,阴性预测值0.97。鉴定分型均为A群。结论A群脑膜炎奈瑟菌是引起该地区流脑的主要菌种,单克隆抗体标志乳胶凝集法快速检测脑膜炎奈瑟菌polyosid ic抗原,具有较高敏感性和特异性。     

PbI2—PbBr2—AgI系统玻璃的化学稳定性研究

在２５℃恒温下，研究了摩尔分数组成为０．５０ＰｂＩ２·０．３０ＰｂＢｒ２·０．２０ＡｇＩ的玻璃在静态去离子水中的侵蚀过程，由于玻璃中溶出的ＰｂＸ２（Ｘ＝Ｉ，Ｂｒ）发生水解，侵蚀液的ｐＨ值经历一个由快速下降到逐渐稳定的变化过程。诱导期过后，玻璃中的各组分以分子化学比形式溶解，这是一个选择性溶解过程，溶解度较高的组分将优先溶解。溶液分析结果表明，玻璃的侵蚀是一个扩散控制的过程。引入难溶组分是提高非氟卤     

PHARMACOLOGIC STUDIES OF 15-METHYL PRO''STAGLANDIN F2a(PGF2a)

Some of the important pharmacologic ac- tions of 15-methyl PGF 2cc are reported in this paper. The potency of subcutaneous 15-methyl PGF 2a in terminating early pregnancy in mice is about 10 times greater than that of PGF 2a This action can be suppressed by simultaneous administration of either megestrol acetate or HCG. 15-methyl PGF2a can also shorten the pseudopregnancy period and inhibit the forma- tion of deciduoma. Experiments on isolated smooth muscles show that the contra.ctile ac- tivity of 15-methyl PGF2a on the uterine muscle is similar to that of PGF2a: . However, contrac- tile activity of 15 methyl-PGF 2a on isolated rat stomach fundus and rabbit jejunum are only 300/o that of PGF2a. Acute toxicity tests on monkeys show no observable toxic reactions after administration of 15-methyl PGF2a at the doses used in this experiment.     

重组人干扰素α2a凝胶剂的制备

[目的]制备重组人干扰素α2 a凝胶剂,并研究部分药效和毒理学.[方法]以羧甲基纤维素钠为基质制备重组人干扰素凝胶剂,利用FL传代细胞检测凝胶在体外培养单纯疱疹病毒(HSV)的抑制作用,并进行家兔体内局部用药毒性试验及稳定性试验.[结果]重组人干扰素α2 a凝胶剂的稳定性良好,局部用药未见皮肤刺激反应及急性毒性反应,对HSV-Ⅱ的抑制效果优于对HSV-Ⅰ.[结论]重组人干扰素α2 a凝胶剂具有制备工艺简单、稳定性好及无毒副作用等特点,且对HSV有明显的抑制作用.     

Chemical conjugation of a novel antibody-interleukin 2 immunoconjugate agains t c-erbB-2 product

Objective To develop a new chemical method to produce a monoclonal antibody (MoAb) 520C9/recombinant human interleukin 2 (rhIL-2) conjugate. Methods MoAb 520C9 reactive with the protooncogene c-erbB-2 product P185 was chemically conjugated with rhIL-2 by using a simple two-step method.First, the rhIL-2 was activated by Sulfosuccinimidyl 4-［N-maleimidomethyl］ cyclohexane-1-carboxylate, a heterobifunctional linker, and N-succinimidyl s-acetylthioacetate was introduced onto 520C9.Then SATA on the 520C9 was reacted with the maleimide group on the activated rhIL-2 to generate 520C9-rhIL-2 immunoconjugate. Results The immunoconjugate retained the antigen binding activity compared to the respective native antibody as determined by an indirect live cell binding assay.The immunoconjugate also possessed IL-2 activity as measured by the standard CTLL-2 cells proliferation assay and the stimulation of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) into lymphokine-activated killer cells. Conclusion Our method of conjugation of rhIL-2 to 520C9 preserves the binding activity of the antibody and the cytokine function of IL-2.This simple and efficient method of conjugation should be applicable to other types of MoAbs and recombinant cytokines.     

2型多发性内分泌瘤2例超声诊断

目的 探讨2型多发性内分泌瘤（MEN-2）的发病特点及超声诊断思路,以期提高MEN-2临床诊断率。方法 回顾性分析于海军军医大学（第二军医大学）长征医院就诊的2例经病理确诊的MEN-2患者的临床资料,总结患者的发病特点,探讨其超声诊断过程,总结超声诊断思路。结果 病例1临床表现为高血压,腹部超声检查示双侧肾上腺多发嗜铬细胞瘤,因双侧受累故引起注意,从而进一步对其他内分泌腺体进行排查发现右侧甲状腺中上交界处占位,胰腺区未见异常,超声最终诊断为甲状腺髓样癌。病例2因反复尿路结石发作多年,考虑其症状可能由甲状旁腺功能亢进引起,随后超声检查发现甲状旁腺增生及甲状腺髓样癌,因此进一步检查了胰腺、肾上腺等多个内分泌器官,最后发现肾上腺嗜铬细胞瘤。从2例患者不同的临床症状入手,配合超声影像检查与之关联的多个病变的内分泌腺体,再经病理证实从而对2例MEN-2做出精准诊断。结论 MEN-2临床表现多样、诊断难度高,掌握其发病特点、临床特征及超声诊断思路有助于早期发现与诊治MEN-2这一多器官受累性疾病。     

丙型肝炎病毒2a型E2区基因cDNA的变异分析

目的 了解丙型肝炎病毒2a型基因组E2区序列的一级结构及变异特征，为进一步研究HCV包膜蛋白的生物学功能打下基础。方法 用逆转录套式多聚酶链反应(RT-nPR)法从1例NANB型肝炎患者血清中扩增出一条约1100bp的片段，以限制性内切酶EcoRI、HindⅢ双酶切后连入pUC19载体中，转化感受态细胞，经限制性内切酶长度多态性分析(RFLP)和PCR法证实为阳性克隆后，用全自动序列分析仪测序。结果 测得约1100bp的核苷酸序列，其核苷酸序列及其编码的氨基酸序列分别与HCV-1、HC-C2、HCV-BK、HC-J6、HC-J8相应序列作比较，显示分离株HCV在核苷酸水平上与以上分离株的同源性分别为63．1％、64．2％、64．1％、86．9％、69．3％，在氨基酸水平上的同源性分别为69．6％、70．7％、69．6％、86．2％、83．1％。结论 分离株(HCV-JF)与HC-J6同属2a型。     

心肌肌浆网Ca~(2+)-ATP酶研究进展

在正常心肌舒张期,心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)将Ca2+从胞质中摄回肌浆网中,在心肌肥厚、心力衰竭等病理生理过程中有多条信号通路对SERCA2a进行调节,使其活性和表达量下调。通过转基因及药物治疗上调SERCA2a的表达,可能会成为心力衰竭等疾病治疗的新手段。     

SD大鼠2型糖尿病模型的建立

目的建立SD大鼠2型糖尿病模型。方法选SD大鼠，先喂以高脂高果糖饲料4周，导致胰岛素抵抗，继以小剂量链脲佐菌素（眈）（30mg/kg）腹腔注射1次，2周后诱导建立2型糖尿病模型。结果高糖高脂饮食后4周，大鼠出现胰岛素抵抗和高脂血症。注射STZ后，大鼠血糖，血胰岛素升高，胰岛素敏感性下降。结论本实验为糖尿病的实验研究提供了一种理想的动物模型。