应用PCR—RFLP分析结核分枝杆菌rpsL基因突变

目的 了解结核分枝杆菌链霉素（ＳＭ）耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变析的方法。方法 通过ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析６２株结核分直菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因突变的部位和性质。结果 以Ｈ３７ＲＶ标准株为对照,１３株敏感的ｒｐｓＬ基因有ＭｂｌⅡ酶切位点;３７株耐ＳＭ分离株中,３１株（８３．８％）无ＭｂｌⅡ酶切位点;１２株耐其它抗结核药物株中,也有２株无ＭｂｏⅡ酶切位点。结论 大多数结核发枝杆菌ＳＭ耐药分     

用PCR—RFLP和16SrDNA指纹图法分析幽门螺杆菌基因型

本文建立了PCR－RFLP和16srDNA指纹图法．对19株幽门螺杆菌（HP）进行基因型分析：HP尿素酶C基因的PCR扩增产物．分别用HindⅢ、HaeⅢ、AluⅠ酶切，结果显示：每个酶均将19株HP分为3种RFLP图谱．综合HindⅢ，HaeⅢ和AluⅠ酶切结果，19株HP分为10个酶切带型；PCR扩增HP标准株16SrRNA基因，地高辛标记制备550bp探针，19株HPDNA分别经HaeⅢ和EcoRⅠ酶切、电泳后，通过Southern杂交获16SrDNA指纹图，结果显示：HaeⅢ酶切分为14个杂交带型，EcoRⅠ酶切19株HP杂交带型均不同。本实验表明：上述两种方法重复性好，分群力高，可准确有效地对HP作出鉴定并将其分型。19株HP株间存在基因型差异。     

PCR法检测胃癌组织中幽门螺杆菌

１对象和方法１．１对象本研究选用河北医科大学第二医院１９９５年度经外科手术病理证实为胃癌的１０例患者，年龄４７岁～５６岁，男７例，女３例，其中贲门胃底癌１例、胃窦癌６例、胃体小弯侧癌３例，病理均为腺癌．对此１０例切除具有癌灶标本用石蜡包埋备用．１．２...     

建立PCR—ELISA定量检测HBV DNA的技术

目的 建立一种敏感特异和精确的乙型肝炎病毒基因ＰＣＲ及其产物酶联杂交定量分析技术。方法 制备了一种与野生扩增片段等长的ＰＣＲ内参照;设计了一对ＨＢＶ基因组Ｓ区基因扩增引物,上游引物的５′－端用生物素修饰,可同时扩增长为３１９ｂｐ的野生和内参照片段。两套捕获探针可分别与竞争ＰＣＲ产物中的野生片段和突变片段杂交,在同一反应管内,加入已知量内参照及待测ＨＢＶ ＤＮＡ标本。进行ＰＣＲ扩增,然后用酶联杂交法进行产物分析。根据Ｃｌｅｍｅｎｔｉ等介绍的公式计算待测标本中的ＨＢＶＤＮＡ标本。进行ＰＣＲ扩增,然后用酶联杂交法进行产物分析。根据Ｃｌｅｍｅｎｔｉ等介绍的公式计算待测标本中的ＨＢＶＤＮＡ含量。结果 灵敏度达到１０＾－３ｆｍｏｌ／Ｌ。在该法中,由于有ＰＣＲ过程中的特异引物及酶联杂交过程的特异探针两个环节的限制,因此具有很     

胃癌及肠化生组织微卫星不稳定性研究

目的研究微卫星不稳定性(MSI)在胃癌发生、发展中的作用.方法使用聚合酶链反应-简单序列长度多态性(PCR-SSCP)的方法,检测36例活检和手术切除胃癌标本及30例肠化生标本的MSI.结果36例胃癌中,有15例检出1个以上位点MSI,总阳性率为41.7%;中-高分化腺癌MSI检出率为66.7%(10/15例),显著高于低分化腺癌的26.3%(5/19例,P＜0.05);肠型胃癌MSI阳性率为64.7%(11/17例)显著高于弥漫型胃癌的22.2%(4/18例,P＜0.05);MSI与胃癌大小、发生部位、分期及幽门螺杆菌(Hp)感染无显著相关.3例早期胃癌MSI均阳性,30例肠化生标本中有9例检出MSI,阳性率为30.0%.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠化生MSI阳性率分别为250%(2/8例)、25.0%(3/12例)、40.0%(4/10例).三者间差异无显著性.结论MSI是胃癌多步骤发生过程中的早期分子标志,在胃癌的发生过程中可能起重要作用.     

差别PCR技术检测胃癌C—erbB—2癌基因扩增的临床意义

目的 探讨胃癌Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因扩增的临床意义。方法 应用差别ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ－２在８３例胃癌及１０１个转移淋巴结扩增情况。结果 ２８．９％的胃癌存在该基因扩增，进展期胃癌及伴淋巴结转移才扩增阳性率增高；转移淋巴结扩增阳性率明显高于胃癌原发灶，早期胃癌及高分化胃癌伴Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增５年生存率低于不扩得，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分子杂交及免疫组化ＡＢＣ法检测原胃癌样本基因扩主过度     

血清中新的肿瘤标志物MG—Ags检测对胃癌的诊断价值

作者采用ＣｏＡ－单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ法分别检测１５０例胃癌、２５例良性消化道疾病、８６例正常人血清中肿瘤标志物ＭＧ－Ａｇｓ（ＭＧ７－Ａｇ、ＭＧｄ１－Ａｇ、ＭＧ９－Ａｇ、ＭＧＣ１－Ａｇ）的含量。胃癌阳性检出率为５７．３％（８６／１５０），良性疾病假阳性率为１２％（３／２５），正常人为９．３％（８／８６），诊断符合率为８７％；说明应用该法测定血清中ＭＧ－ＡｇＳ对胃癌具有较高临床诊断价值。     

胃癌组织中GST-π化疗前后变化

为探讨胃癌单纯化疗过程中谷胱甘肽ｓ转移酶π（ＧＳＴπ）的变化,本文用流式细胞技术对２８例胃癌患者化疗前后癌组织中ＧＳＴπ进行了检测。报告如下：１．临床资料：２８例中,男１６例,女１２例,年龄３７～７９岁。入院前均未接受化疗,其中低分化腺癌１０例,管状腺癌６例,粘液癌７例,乳头状癌５例。癌组织由胃镜活检获取。病人均失去手术治疗时机,均接受２次化疗。方案：甲环亚硝脲（２００ｍｇ／ｍ２）第一天,丝裂霉素ｃ（１０ｍｇ／ｍ２）第一天,５Ｆｕ（４５０ｍｇ／ｍ２）第１～５天。７周后再重复一次。第二次…     

胃癌组织DCC基因（VNTR）的杂合性丢失和Bcl—2蛋白的表达

目的：为了研究ＤＣＣ基因的杂合性丢失（ＬＯＨ）和Ｂｃｌ－２蛋白过度表达在胃癌发生中的作用，方法：采用ＰＣＲ方法及免疫组织化学技术检测了胃癌组织ＤＣＣ基因的ＬＯＨ和Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果：结果发现，胃癌（信息个体）ＬＯＨ发生率为５４５％（１８／３３），Ｂｃｌ－２蛋白表达阳性率为６０％（３０／５０）；ⅢⅣ期胃癌ＬＯＨ发生率（８２２％，１５／１８）显著高于ⅠⅡ期胃癌２０％，３／１５）（Ｐ＜００１）；Ｂｃｌ－２蛋白的表达与ＤＣＣ基因的ＬＯＨ及胃癌大小、分化、淋巴结转移、浆膜浸润、临床分期及Ｌａｔｌｒｅｎ’ｓ分型无显著相关。结论：以上结果提示，ＤＣＣ基因的ＬＯＨ和Ｂｃｌ－２蛋白的高表达均参与了胃癌的发生，ＤＣＣ基因的ＬＯＨ是胃癌发生的晚期事件，其致癌机制与Ｂｃｌ－２有所不同     

免疫—PCR新技术在原发性肝癌血清学诊断中的应用

目的 建立免疫－聚合酶链反应（免疫－ＰＣＲ）技术，提高肝癌肝病相关抗原的检测敏感性。方法 ２９例原发性肝癌（１组）３４例肝硬化（ＩＩ组），１２例慢性活动性肝炎（Ⅲ组）患者血清中的肝癌相关抗原ＰＣＲ产物以２％琼脂凝胶电泳，溴化乙锭染色体观察记录，同时测定患者血清中的甲胎蛋白（ＡＦＰ）含量，结果 利用免疫－ＰＣＲ技术Ｉ组中有２３例呈阳性反应（７９．３％）而Ⅱ，Ⅲ组阳性分别为为３例和１例，Ｉ组ＡＦＰ升高     

应用PCR技术检测HLA—B27

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了８１例广东地区汉族健康人群和４８例类风湿关节炎病人的ＨＬＡ－Ｂ２７的频率分布，阳性率分别为４．９３％和６．２５％。同时对血清学方法检测ＨＬＡ－Ｂ２７为阳性的８５例和阴性的１６例强直性脊柱炎病人的标本应用ＰＣＲ技术进行检测，发现血清学方法检测为阳生的标本中８４例为阳性，符合率为９８．７％；阴性标本中６例为阳性，误判率为３７．４％。通过引进一对内对照引物，避免假阴性     

非小细胞肺癌支气管灌洗液细胞中H—ras基因突变的检测

肺癌发病机制中涉及多种癌基因激活及抑癌基因失活 ,其中 H- ras基因主要发生于非小细胞肺癌 (NSCL C)。为进一步探讨 H- ras基因在 NSCL C中的突变情况及对早期诊断 NSCL C的价值 ,本研究用限制性片段长度多态性分析 (PCR- RFL P)检测 40例 NSCL C及 2 0例肺炎患者中 H- ras基因的点突变。1　对象与方法1.1　 对象　所有患者均来自泰山医学院附属医院 1996年 8月～ 1999年 12月门诊住院病人 ,肺癌组 40例 ,男 30例 ,女 10例 ,年龄 45～ 72岁 ,细胞或病理证实为肺癌。根据 TNM分期 , 期 13例 , 期 17例 , A期～ 期 10例。肺…     

RT—PCR检测肝癌组织中AFPmRNA

目的：探讨ＡＦＰｍＲＮＡ在人肝细胞癌中的表现规律。方法 用ＲＴ－ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ技术检测３０例肝癌组织及癌旁组织ＡＦＰｍＲＮＡ；放免法检测其血清ＡＦＰ。结果：２８例癌组织ＡＦＰｍＲＮＡ阳性，２例癌旁组织ＡＦＰｍＲＮＡ阳性；９例血清ＡＦＰ阴性者，有７例组织ＡＦＰｍＲＮＡ阳性；２例癌组织ＡＦＰｍＲＮＡ及血清ＡＦ均阴性；结论：人肝细胞癌ＡＦＰ基因表达调控形式不同，ＡＦＰｍＲＮＡ在早期诊断肝细胞癌中有一     

组织芯片技术在检测胃癌组织中TRAF4表达中的应用

目的探讨组织芯片技术诊断胃癌的价值。方法采用免疫组化法检测胃癌组织芯片（胃正常组织10份、增生组织45份、胃癌组织45份）中肿瘤坏死因子受体相关因子4（TRAF4）的表达。结果 TRAF4胞质阳性率在正常组织、增生组织和胃癌组织中逐渐增高,但差异无统计学意义。胞核阳性率逐渐降低,正常组织显著高于胃癌组织,P〈0.05;胃癌组织中高分化者显著高于低分化者（P〈0.05）,无淋巴转移者显著高于有淋巴转移者,P〈0.05。结论组织芯片可大规模、高效率检测胃癌组织样本,具有快速、方便、经济、准确等特点,可用于胃癌的早期诊断。     

血小板衍生生长因子在胃癌中表达的临床意义

目的：研究血小板衍化生长因子（PDGF－A）在胃癌中表达的临床意义。方法：应用免疫组织化学和分子原位杂交方法检测有随访资料的101例胃癌手术切除标本中的PDGF－A蛋白及mRNA表达。结果：在101例胃癌手术切除标本中PDGF－A阳性表达者43例（42．57％）。有淋巴结转移者（65．12％）明显高于无淋巴结转移者（30．61％）（P＜0．05）；脉管内有癌栓者（64．52％）明显高于无癌栓者（32．86％）（P＜0．01）；癌组织浸及粘及粘膜下，肌层、浆膜下及浆膜者分别为13．04％、37．04％、58．82％，三者间比较，差异有显著性（P＜0．01）。PDGF－A阳性表达者5年及10年生存率分别为60．34％和47．28％，低于阴性表达者5年及10年生存率（73．55％，56．19％）。说明PDGF－A阳性表达者预后较差，阴性表达者预后较好。癌组织PDGF－A阳性表达的病例，间质中浆细胞和树突状细胞阳性表达者5年生存率分别为54．81％和74．40％，明显高于阴性表达者5年生存率（36．30％、29．74％），（说明PDGF－A在浆细胞和树突状细胞阳性表达者预后后经阴性者好。PDGF－AmRNA表达（61．54％）与PDGF－A蛋白表达（42．57％）一致）。结论：PDGF－A阳性的胃癌恶性度高、易转移、预后差，而胃癌间质中浆细胞和树突状细胞PDGF－A阳性表达者的胃癌预后较好。PDGF－A参与肿瘤免疫调节，可作为判断胃癌预后的指标之一。     

Span—1和Ypan—1抗原在胃癌及肠化生组织中的表达

应用免疫组化方法检测了胰腺癌相关抗原Ｓｐａｎ－１和Ｙｐａｎ－１在１１０例胃癌及３４３例肠上皮化生组织中的表达。结果显示，Ｓａｐｎ－１和Ｙｐａｎ－１在胃癌组织的阳性率分别为７２．７％（８０／１１０）和６５．５％（７２／１１０）；将肠化分为Ⅰ、Ⅱ、和Ⅲ型，两种抗原在Ⅱ型肠化阳性率（７９．０％，７５．２％）显著高于Ｉ型（４２．３％，４５．５％）和Ⅱ型（５１．２％和５０．０％）（Ｐ〈０．０１－０．００１）