17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对鼻咽癌细胞VEGF和Survivin表达的影响

目的探讨17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对人鼻咽癌细胞（HNE1）的影响。方法采用流式细胞技术检测不同浓度（17-AAG）、不同时间处理后HNE1细胞凋亡情况,组织免疫细胞技术检测药物处理后对VEGF、Survivin蛋白表达的影响。结果 17-AAG可以诱导人鼻咽癌细胞的凋亡,且这种作用具有时间和计量依赖性,且可抑制细胞中VEGF、Survivin蛋白的表达。结论热休克蛋白抑制剂17-AAG具有诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用,对鼻咽癌的临床治疗具有一定的指导意义。     

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对乳腺癌细胞的杀伤作用

目的:对一种热休克蛋白90抑制剂即17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人乳腺癌细胞生长的影响及相关机制进行初步探讨。方法:MTT法检测药物对人乳腺癌细胞SKB r3的生长抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期变化;免疫组化法检测药物处理前后SKB r3细胞中HER2的表达变化情况。结果:17-AAG对人乳腺癌细胞株SKB r3生长有抑制作用,随着用药浓度的增加,抑制作用明显增强,呈明显的剂量依赖性,其IC50浓度为3.09μg/m l。SKB r3细胞经17-AAG处理48 h后,流式细胞仪分析可见在0、0.625、1.250、2.500、5.000和10.000μg/m l浓度下,SKB r3细胞的凋亡率分别为(1.03±0.08)%、(3.68±0.67)%、(7.06±1.12)%、(11.23±1.36)%、(20.32±1.98)%和(31.65±2.96)%;G0/Gl期细胞分别为58.61%、54.34%、49.55%、43.73%、35.52%和27.46%;S期细胞分别为:29.57%、25.21%、19.65%、22.98%、19.71%和15.46%;G2/M期细胞分别为11.82%、20.45%、30.18%、33.29%、44.77%和57.08%;同时17-AAG处理后的SKB r3细胞人类表皮生长因子受体2(HER2)表达明显减少。结论:17-AAG能够抑制人乳腺癌细胞SKB r3的生长并促进其凋亡,提示17-AAG是一种很有前景的抗肿瘤药物。     

3-溴丙酮酸对耐顺铂鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响.方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达.结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L.低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成.3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)％、(25.5±2.4)％、(45.5±3.5)％,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)％.Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达.结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关.     

HSP90抑制剂17-AAG对胃癌SGC-7901细胞生长周期和凋亡的影响

目的研究一种特异性的热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对人胃癌细胞SGC-7901
细胞增殖和凋亡的影响,分析其可能的作用机制。方法应用MTT比色法检测不同浓度的17-AAG对胃癌SGC-7901细胞的生
长抑制率;荧光显微镜下观察PI染色的SGC-7901细胞凋亡形态学变化;采用流式细胞术检测SGC-7901细胞的细胞周期变化
及凋亡率变化;通过免疫组化检测胃癌SGC-7901 细胞中Fas 蛋白的表达。结果MTT 法显示17-AAG 能明显抑制胃癌
SGC-7901 细胞的生长增殖,呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG处理48 h后使SGC-7901 细胞发生
G2/M期阻滞,并有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用;细胞免疫组化结果显示,SGC-7901细胞胞浆内有Fas表达,随着药物浓度的
加大,阳性表达率也逐渐增加。结论17-AAG 通过改变细胞周期、诱导其凋亡来抑制胃癌SGC-7901 细胞的增殖,上调
SGC-7901细胞中Fas蛋白的表达是诱导凋亡的作用机制之一。
     

17-丙烯胺-17去甲氧格尔德霉素对大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨热休克蛋白90（HSP90）抑制剂17-丙烯胺-17去甲氧格尔德霉素（17-AAG）对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将实验组PC12细胞分成两组：实验一组分别加入不同终浓度（0.005、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0μmol/L）17-AAG培养液;实验二组分别加入150μg/L VEGF（VEGF组）、0.1μmol/L17-AAG（17-AAG组）、0.1μmol/L17-AAG＋150μg/L VEGF（17-AAG＋VEGF组）培养液。另设DMSO组（阴性对照组）和空白对照组。采用MTT法检测细胞存活率;Wrights-Giemsa染色观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞中VEGF-165蛋白的表达。结果 17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制PC12细胞增殖（P〈0.05）;24 h半数抑制浓度（IC50）为0.1μmol/L。0.1μmol/L 17-AAG作用于PC12细胞6、12、24、48 h的细胞凋亡率均明显高于空白对照组（P〈0.01）。0.1μmol/L 17-AAG作用于PC12细胞6、12、24、48 h,VEGF-165蛋白表达逐渐降低;各时点VEGF-165蛋白表达量与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 HSP90抑制剂17-AAG能抑制PC12细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制VEGF蛋白表达。     

17-AAG对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的观察17-AAG对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的17-AAG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;荧光显微镜观察碘化丙啶（PI）染色的细胞凋亡形态;流式细胞仪检测分析细胞周期分布和凋亡率的变化;免疫组化法检测肝癌HepG2细胞中重组人血管内皮生长因子相关蛋白（VEGF-C蛋白）表达水平变化。结果不同浓度的17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖（P〈0.05）;流式细胞仪分析显示,17-AAG作用HepG2细胞48 h后G2/M期细胞比例上升,G1/G0期细胞比例下降;0.63、1.25、2.5、5.0μmol/L 17-AAG作用HepG2细胞48 h后的凋亡率分别为（3.23±1.43）%、（9.71±2.20）%、（14.15±2.34）%、（23.65±2.58）%;随着药物浓度的加大,VEGF-C蛋白表达逐渐减少。结论 17-AAG对肝癌HepG2细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并能抑制VEGF-C蛋白的表达。     

17-AAG联合顺铂对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG联合顺铂对人胃癌细胞SGC-7901的抑制效应.方法体外培养SGC-7901,采用四氮唑盐比色法测定不同浓度、不同时间17-AAG、顺铂单药和联合处理后SGC-7901的生长抑制情况;采用流式细胞术检测不同浓度17-AAG和顺铂单药、联合处理后对SGC-7901细胞的细胞周期变化及凋亡率变化.结果 2种药物单用均对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用,2种药物联合后呈协同作用,呈时间、剂量依赖性.流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG和顺铂单药处理24 h后,17-AAG阻滞SGC-7901细胞于G2/M期,顺铂阻滞SGC-7901细胞于S期.并都具有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用,其联合用药可显著增加SGC-7901的凋亡率.结论 17-AAG和顺铂均可明显抑制SGC-7901的增值、诱导细胞凋亡,联合用药有一定的协同效应,呈剂量依赖关系.     

格尔德霉素衍生物17-AAG对缺氧宫颈癌细胞凋亡的影响

目的：观察格尔德霉素衍生物17-AAG对氯化钴化学缺氧诱导的宫颈癌细胞凋亡的影响,并简单探讨可能的机制。方法：用含200μmol/LCoCl2的无血清RPMI 1640培养基模拟宫颈癌细胞缺氧微环境,West-ern Blot法检测缺氧诱导因子HIF-1α及其下游靶分子VEGF蛋白的表达,DAPI染色检测细胞的凋亡情况。结果：缺氧可诱导HIF-1α、VEGF蛋白的表达上调;但这种上调可被17-AAG所逆转,从而使宫颈癌细胞对缺氧的耐受能力明显降低,凋亡增加。结论：17-AAG通过对HIF-1α信号的干扰而具有一定的抗瘤活性。     

17-AAG联合紫杉醇对Eca-109食管癌细胞增殖的抑制作用

目的研究17-AAG联合紫杉醇（PTX）对食管癌细胞Eca-109增殖和凋亡的影响。方法予以PTX和17-AAG单独或联合
使用作用于Eca-109细胞株,采用MTT法检测其细胞增殖的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡的变化。结果与对照组
相比,单独使用17-AAG、PTX均能够抑制Eca-109细胞的增殖;0.5 μmol/L PTX联合0.625 μmol/L 17-AAG可抑制Eca-109的生
长,且联合效应明显强于各自单药组（P<0.01）;流式细胞仪检测结果显示：17-AAG将Eca-109 细胞阻滞于G2/M 期,PTX将
Eca-109 细胞阻滞于S 期。17-AAG与PTX 联合用药使Eca-109 细胞阻滞于G2/M 期和S。17-AAG组、PTX组及联合组作用
Eca-109细胞株24 h后其凋亡率分别为4.52%、10.91%、29.88%,显著高于对照组（1.32%）;联合用药后,可形成明显凋亡峰,明显高
于单药组。结论PTX和17-AAG均可抑制食管癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,两者联合可增强上述作用。
     

抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制.方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药.此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05).同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论 抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关.     

自杀基因单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶对鼻咽癌细胞株杀伤作用机制的研究

目的探讨自杀基因单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶（HSV-tk）对鼻咽癌（NPC）细胞株的杀伤作用机制.方法将HSV-tk基因通过脂质体法转染NPC细胞株,经G418筛查挑选阳性细胞克隆并经逆转录聚合酶链反应（R-PCR）鉴定,加入前体药物戊环鸟苷（GCV）后,观察其对NPC细胞的杀亡状况.结果MTT法显示转染的NPC细胞株在加入GCV后,成活率明显降低,与未转染基因的NPC细胞株相比,差异有显著性（P＜0.01）.流式细胞仪显示与未加GCV的细胞相比,转染基因的细胞加入GCV后生长受到明显抑制,S期细胞数从占总细胞数的35.71%降至17.41%,凋亡率从1.33%增长至8.15%,并出现明显的凋亡峰.电镜下,转染细胞经GCV作用后大量细胞发生凋亡,可观察到凋亡细胞内特征性的凋亡小体.结论自杀基因HSV-tk对NPC有明显的杀伤作用,其可能性机制是HSV-tk基因联合GCV,对NPC细胞产生选择性细胞毒性作用,抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡.     

BHRF1反义寡核苷酸对BHRF1-CNE2细胞生存能力的影响

探讨ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸对表达ＢＨＲＦ１的鼻咽癌细胞株ＣＮＦＥ２生存能力的影响。方法检测反义阻断ＢＨＲＦ１表达后ＢＨＲＦ１－ＣＮＥ２细胞在喜树碱作用下增殖能力和凋亡指数的变化。结果在喜树碱作用下，应用ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸组的癌细胞较对照组的增殖率下降，凋亡率增高，结论反义阻断ＢＨＲＦ１的表达可降低ＣＮＥ２细胞的生存能力，这种在鼻咽癌的治疗中可能具有一定的价值。     

复方苦参注射液对鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用

目的：观察复方苦参注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法：常规体外培养人鼻咽癌CNE-2细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度复方苦参注射液分别处理CNE-2细胞24、48和72 h后时细胞增殖抑制率,计算复方苦参注射液对CNE-2细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）。CNE-2细胞分为对照组（不照射、不给药）、放射组（给予剂量为2和4 GyX射线照射）和联合组（给予不同浓度复方苦参注射液处理后再接受X射线照射）。MTT法检测各组CNE-2细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组CNE-2细胞凋亡率,克隆形成试验检测各组CNE-2细胞存活率。结果：不同浓度复方苦参注射液处理CNE-2细胞24、48和72 h后,细胞增殖抑制率较未经复方苦参注射液处理的CNE-2细胞升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性;复方苦参注射液处理48 h时细胞增殖抑制率高于24 h时（P<0.05）。放射组CNE-2细胞凋亡率高于对照组（P<0.05）,联合组CNE-2细胞凋亡率较放射组升高（P<0.05）;联合组CNE-2细胞存活率低于放射组（P<0.05）。结论：复方苦参注射液能促进放射线诱导的鼻咽癌CNE-2细胞凋亡,从而对CNE-2细胞具有放射增敏作用。     

复发性鼻咽癌的自发及放疗后凋亡观察

目的：观察24例复发性鼻咽癌的自发与放疗后凋亡及分裂指数。方法：第一病例均观察放疗前和复发后的病理切片,光镜下计数凋亡指数和分裂指数。结果：结果表明,鼻咽癌的自发凋亡指数为0．55％,分裂指数为0．36％。放疗后复发时凋亡指数为0．63％,分裂指数为0．40％。结论：与其它肿瘤相比,．鼻咽癌属于低凋亡指数肿瘤,复发时凋亡指数和分裂指数与治疗前相比无明显差别。凋亡指数在鼻咽癌预后因素中的作用尚需进一步研究。     

鼻咽癌组织中细胞凋亡的检测

采用ＤＮＡ原位末端标记法检测９７例不同生存期鼻咽癌患者的细胞凋亡情况并探讨其与鼻咽癌患者预后的关系。结果提示：凋亡细胞在鼻咽癌组织中数目甚少，与预后未见明显关系，不能作为估计鼻咽癌患者预后的指标。     

鼻咽癌超微结构特征与淋巴细胞溶癌现象的电镜观察

目的：探讨鼻咽癌细胞与淋巴细胞溶癌现象的超微结构特征，为临床诊断鼻咽癌患者提供临床病理学诊断依据。方法：采用透射电镜技术对10例血清中EB-VCA-IgA抗体测定结果阳性的鼻咽部恶性肿瘤组织进行超微结构观察。结果：鼻咽癌细胞的形态特征为：细胞分化，癌组织中淋巴细胞与癌细胞常有接触，且溶癌现象均表现各异，在泡状核细胞癌，低分化鳞癌中淋巴细胞溶癌现象最为明显。结论：鼻咽癌细胞的超微结构特征，细胞分化与淋巴细胞的溶癌现象有不同表形，为鼻咽癌及鉴别诊断其肿瘤类型提供了形态学方面的实验依据。     

鼻咽癌组织中微血管的分布

目的：观察鼻咽癌组织中微血管的分布及存在状况,探讨其与鼻咽癌的临床病理联系。方法：采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法,检测血栓调节蛋白在鼻咽癌血管内皮细胞的表达,进行微血管的定性半定量研究。结果：鼻咽癌组织中微血管的分布不均匀。极性消失。血管呈分支芽状弥漫分布于癌组织中,或呈条索状围绕癌细胞团。微血管的数目与癌细胞的增殖指数屯预后正相关。结论：鼻咽癌组织中微血管数与患者的生存期有关。     

长链非编码RNA MIAT通过miR-124促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探究长链非编码RNA MIAT是否通过miR-124调节鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭。方法：采用荧光定量PCR检测鼻咽癌细胞中MIAT水平,通过检测荧光素酶活性评估MIAT和miR-124之间的相互作用。随后将si-MIAT与miR-124 inhibitor分别或同时转染鼻咽癌细胞,检测其对鼻咽癌细胞生长、迁移与侵袭的影响。采用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达情况。结果：与正常鼻咽上皮细胞NP-69相比,鼻咽癌细胞HONE-1中MIAT的表达水平显著提高。在线软件与双荧光素酶活性实验分析证实MIAT与miR-124之间存在相互作用。进一步实验表明,si-MIAT可上调miR-124水平,从而抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭。Western blot分析显示si-MIAT通过miR-124抑制Wnt/β-catenin信号通路在鼻咽癌细胞中发挥促癌作用。结论：MIAT通过miR-124调节Wnt/β-catenin信号通路进而影响鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭。MIAT靶向调控miR-124,可作为鼻咽癌诊断与治疗的一个潜在靶点。     

鼻咽癌Survivin基因表达与预后关系的研究

目的探讨鼻咽癌组织中凋亡抑制基因Survivin蛋白和mRNA表达与鼻咽癌患者预后之间的关系。方法应用免疫组织化学和原位杂交技术检测44例鼻咽癌患者活检组织标本Survivin蛋白和mRNA表达量,以30例同期鼻咽慢性炎症患者作为对照。结果鼻咽癌患者两者阳性率分别为79.5%、75.0%,明显高于对照组（P〈0.01）,且Survivin蛋白与mRNA水平具有很好的一致性;两者任何一项高表达的鼻咽癌患者平均生存时间均低于低表达者（P〈0.01）。结论 Survivin基因的过度表达在鼻咽癌的发生、发展中起重要作用,而且对其预后有重要的临床价值。     

表皮生长因子受体对鼻咽癌放疗后细胞增殖的影响

目的:观察表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)对射线照射后的鼻咽癌细胞的增殖的影响。方法:用shRNA-EGFR转染人鼻咽癌细胞系CNE1,应用X射线照射转染EGFRSiRNA前后的细胞,MTT实验比较转染干扰质粒前后照射后细胞增殖变化。结果:shRNA-EGFR成功转染CNE1细胞。CNE1细胞干扰后照射较干扰前照射增殖减低。结论:通过抑制鼻咽癌细胞EGFR的表达,可以抑制鼻咽癌放疗后的增殖。