ROCK1,TRAF3 mRNA在耐药性癫痫患者海马组织中的表达及意义

目的:观察耐药性癫痫患者脑组织中与锌离子相关的RhoA蛋白1(Rho-associatedc,oiled-coil containing protein ki-nase 1,ROCK1)和肿瘤坏死因子受体相关因子3(TNF receptor-associated factor 3,TRAF3)mRNA的表达,探讨其在耐药性癫痫发病中的作用。方法:收集耐药性癫痫患者术后的海马脑组织,首先用基因芯片进行差异基因表达的筛选,然后用RT-PCR从基因水平上进行验证,并与正常对照组进行比较。结果:基因芯片检测中发现与锌离子连接相关的基因ROCK1和TRAF3在耐药性癫痫患者中表达上调。目的基因ROCK1和TRAF3 mRNA在耐药性患者脑组织中的表达明显增加(P<0.05),变化趋势与芯片扫描结果一致。结论:与锌离子相关的基因ROCK1和TRAF3可能参与了耐药性癫痫的形成,并在耐药性癫痫的发病机制中起着一定的作用。     

浅析血管重塑机制及中医药防治高血压病

目的研究耐药性癫痫患者颞叶和海马组织中Nurr1基因及其蛋白产物的表达,探讨其在耐药性癫痫形成中的作用。方法用RT-PCR和免疫组化联合检测40例耐药性癫痫患者(实验组)脑组织中Nurr1基因及蛋白产物的表达,并与11例对照组比较。结果 RT-PCR结果显示Nurr1mRNA水平在耐药性癫痫患者脑组织中表达较对照组增高,Nurr1/GAPDH(内参基因)灰度值在耐药性癫痫患者脑组织中为6.18,对照组为2.39(P<0.05)。免疫组化与RT-PCR结果一致,显示耐药性癫痫颞叶和海马Nurr1蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。结论 Nurr1基因及其蛋白产物在耐药性癫痫患者脑内表达明显增加,提示其可能参与了耐药性癫痫的发生与发展。     

耐药性癫痫患者脑组织中腺苷酸激酶2蛋白的表达及临床意义

目的 研究耐药性癫痫患者脑组织中腺苷酸激酶2(AK2)蛋白的表达,探讨其在耐药性癫痫发生及发展中的作用.方法 用基因芯片、免疫组织化学、免疫荧光检测AK2在40例耐药性癫痫患者术后脑组织标本中的表达,按照配对设计原则与性别相同、年龄近似的20例对照组进行比较.结果 免疫组化结果 显示在对照组AK2蛋白未见表达,而在耐药性癫痫患者脑组织中AK2有明显的棕黄色阳性表达.免疫荧光结果 显示对照组AK2蛋白未见表达,在耐药性癫痫组表达明显,主要分布于细胞胞体.结论 耐药性癫痫患者脑组织中,异常表达的AK2可能参与了耐药性癫痫的形成并有可能成为是耐药性癫痫存在的一个重要标志.     

Zn2+结合相关基因在耐药性癫痫患者颞叶组织中的表达

目的探讨耐药性癫痫患者颞叶组织内锌离子(Zn2+)结合相关基因的表达情况。方法将48例耐药性癫痫患者作为耐药性癫痫组,另外,2例意外死亡及6例接受颅内减压术者作为对照组。取颞叶组织,在基因芯片扫描预期结果的基础上,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Zn2+结合相关基因TNF受体相关因子3(TRAF3)、Ring和YY1结合蛋白(RYBP)、CCR4-NOT转录复合体亚基4(CNOT4)和核受体4A2(NR4A2)在耐药性癫痫患者颞叶中的表达。结果与对照组比较,基因芯片扫描显示Zn2+结合相关的4个基因TRAF3、RYBP、CNOT4和NR4A2在耐药性癫痫组患者颞叶组织中的表达明显增加,RT-PCR检测获得相同的结果。结论 Zn2+结合相关基因TRAF3、RYBP、CNOT4和NR4A2可能参与了耐药性癫痫的发生。     

CDK4 mRNA在鼻咽癌的表达及临床意义

目的 探讨CDK4 mRNA在鼻咽癌中的表达以及临床意义.方法 cDNA微阵列被使用检测鼻咽癌与鼻咽组织中的差异表达基因.实时荧光定量PCR确证CDK4在鼻咽癌与鼻咽组织中的表达差异.统计分析CDK4 mRNA表达与鼻咽癌患者临床参数之间的意义.结果 基因芯片显示,CDK4在鼻咽癌中的表达上调.实时荧光定量PCR显示,与鼻咽组织相比,CDK4在鼻咽癌中表达上调.此外,CDK4mRNA表达上调与鼻咽肿瘤大小、淋巴结转移以及临床分期呈正向相关趋势.结论 CDK4过表达促进了鼻咽癌的发生及进展.     

氯通道在难治性颞叶癫痫病灶内的表达变化

目的 研究ClC-2、ClC-3氯通道在难治性癫痫病灶中表达的变化,并探讨这种分布和表达变化的意义.方法 取20例难治性癫痫患者手术切除的病灶及20例脑血管畸形患者手术切除的正常脑组织,分别采用SABC法对ClC-2、ClC_3氯通道免疫组化染色,采用RT-PCR方法检测ClC-2、ClC-3氯通道mRNA.RT-PCR凝胶电泳图像应用1D Image Analysis Software分析.结果 ClC-2、ClC-3氯通道在癫痫灶和正常脑组织中皆有表达,但RT-PCR半定量分析显示:在癫痫灶中ClC-2氯通道表达的相对密度(0.34±0.16)低于正常脑组织(0.81±0.11),差异具有显著性(P<0.05);而ClC-3氯通道在癫痫灶中的表达的相对密度(0.83±0.09)高于正常脑组织(0.53±0.14),差异具有显著性(P<0.05).结论 难治性癫痫病灶中ClC-2通道表达减少,ClC-3通道表达增加,可能是难治性癫痫发作频发且难以控制的原因之一,也可能为癫痫发作的继发性改变.     

人类癫痫脑组织的蛋白质组学研究

目的   建立癫痫患者脑组织差异表达的蛋白质谱,进一步阐明癫痫的发病机制、寻找新的治疗靶点。方法   采用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对癫痫患者致痫灶脑组织差异表达的蛋白质进行分析鉴定。结果   在患者致痫灶脑组织中共鉴定出15个蛋白质点出现1.5倍以上表达差异,其中13个下调,2个上调。结论   癫痫患者脑组织中存在多个差异表达的蛋白质,可能与癫痫的发病机制相关。     

SOX12、CDK4在肝细胞中的表达及意义

目的观察SOX12、CDK4在肝癌细胞(HepG2)与正常肝细胞(HB611)中的表达情况,分析SOX12与肝细胞癌的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HepG2、HB611细胞中SOX12 mRNA、CDK4 mRNA的表达水平,采用Western blot法检测HepG2、HB611细胞中SOX12蛋白、CDK4蛋白的表达水平,采用基因抑制剂shRNA抑制两种细胞中的SOX12基因,采用RT-PCR法检测两种细胞中SOX12 mRNA与CDK4 mRNA的表达情况,分析SOX12与肝细胞癌的关系。结果 SOX12 mRNA在HepG2细胞中表达水平高于HB611细胞,CDK4 mRNA在HepG2细胞中表达水平低于HB611细胞,差异有统计学意义(均P<0.05)。两种细胞中SOX12蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),CDK4蛋白在HB611细胞中的表达水平高于HepG2细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制SOX12基因后,两种细胞SOX12 mRNA的表达水平较抑制前降低,CDK4 mRNA表达水平也较抑制前降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 SOX12与CDK4在HepG2、HB611细胞中均有表达,在两种细胞中SOX12 mRNA、CDK4 mRNA的表达水平存在差异,SOX12蛋白表达水平相近,CDK4蛋白表达水平存在差异。SOX12可能通过影响CDK4的表达参与肝细胞癌的发展进程,可能成为治疗与预测肝细胞癌预后新的标志物。     

二肽基肽酶6在难治性颞叶癫痫患者中的表达

目的 探讨难治性癫痫患者颞叶皮质中二肽基肽酶6(DPP6)的表达情况。方法 在重庆医科大学建立的脑组织库中,按照随机化原则抽取27例癫痫患者的脑组织(癫痫组)和15例脑外伤患者的脑组织(对照组),应用免疫组织化学染色、蛋白质印迹杂交、RT-PCR法检测DPP6的表达水平。结果 DPP6表达于两组大脑神经元的细胞膜,蛋白质印迹杂交结果显示,癫痫组和对照组DPP6的平均光密度(OD)值分别为0.86±0.04和0.37±0.02,差异有统计学意义(P<0.001)。癫痫组和对照组脑组织DPP6 mRNA的相对表达量分别为0.74±0.03和0.35±0.03,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 异常表达的DPP6可能参与了难治性癫痫的形成。     

应用cDNA微阵列技术研究胶质母细胞瘤凋亡相关基因的表达

目的研究胶质母细胞瘤凋亡相关基因的表达。以探讨凋亡相关基因的异常表达在肿瘤的发生、发展过程中的作用。方法采用cDNA微阵列技术,研究胶质母细胞瘤与正常脑组织之间凋亡相关基因表达的差异。采用看家基因对杂交信号进行校正。差异大于1.5倍的基因视为差异有显著性意义,并从中选择6个基因采用RT-PCR进行验证。结果共有28个基因的表达存在差异,其中有17个基因在胶质母细胞瘤表达升高,11个表达下降。RT-PCR结果与基因芯片结果一致。结论众多凋亡相关基因参与了胶质母细胞瘤的发生和发展,其中部分基因如CRAF1、hHR23B等是新发现的与胶质母细胞瘤有关的基因。     

MicroRNA-134/CREB/pCREB通路在癫痫中的表达及意义

目的 探讨miR-134、CREB、pCREB在癫痫大鼠海马及难治性癫痫患者颞叶脑组织中的表达及意义.方法 难治性癫痫患者及非癫痫对照组颞叶组织、氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠及空白对照组海马组织中,应用实时荧光定量PCR技术检测microRNA-134(miR-134)的表达,用Western blot方法检测CREB及pCREB的表达,用免疫组织化学方法检测人脑颞叶皮质及大鼠海马区CREB、pCREB的表达.结果 与对照组相比miR-134表达在难治性癫痫患者中明显降低(P<0.05),在癫痫模型组中点燃后3、7、14、60 d明显降低(P<0.05),1 d与30 d表达降低较对照组差异无显著性(P>0.05);癫痫模型组CREB在3、7、14、60 d时间点明显升高(P<0.05)、pCREB各时间点表达均高于空白对照组(P<0.05).结论 难治性癫痫患者颞叶皮质及癫痫动物海马中miR-134表达下降,CREB、pCREB表达升高,提示其可能在癫痫发生发展机制中起重要作用.     

难治性癫痫动物模型研究的新进展

难治性癫痫是最棘手的临床问题之一,其病因至今未明。由于人体脑组织难以获取等限制,难治性癫痫发生机制的研究需依赖动物模型。本文对不同难治性癫痫动物模型的制作方法、表现和机制等方面作综述。     

大肠癌组织中CDK6、Ki67表达及其与临床病理因素的关系

目的:探讨大肠癌组织中CDK6、Ki67蛋白的表达及与其大肠癌病理因素的关系及二者之间的相关性。方法:应用免疫组织化学方法研究84例大肠癌组织及其配对的48例切缘正常大肠组织中CDK6、Ki67蛋白的表达情况,比较CDK6、Ki67表达的差异及其与大肠癌病理因素之间的关系及二者之间的相关性。结果:大肠癌组织中CDK6蛋白表达阳性率(88.1%)明显高于切缘正常大肠组织(10.4%)(P<0.05),CDK6蛋白表达阳性率与Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分化程度有关(P<0.05);与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、肿瘤大体类型无关(P>0.05);大肠癌组织中Ki67蛋白表达阳性率(92.9%)明显高于切缘正常大肠组织(20.8%)(P<0.05),Ki67蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、肿瘤大体类型、Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分化程度无关(P>0.05),CDK6与Ki67蛋白表达具有正相关关系(r=0.581,P=0.000)。结论:CDK6与Ki67过量表达可能在大肠癌的发生、发展过程中起重要作用,可能用于大肠癌辅助诊断。CDK6可作为判断大肠癌预后的因子之一。     

42例难治性癫痫的脑立体定向手术治疗与分析

目的:探讨与分析难治性癫痫的脑立体定向手术原理、手术方法、手术并发症及疗效。方法:利用计算机辅助的立体定向手术计划系统和CT/MR图像融合技术,应用脑内射频热凝毁损术对42例入选的难治性癫痫患者进行治疗,术后1 a进行疗效评定。结果:42例术后出现肢体轻瘫7例,近期记忆障碍3例,均在4周内恢复。手术1 a后,其中25例癫痫发作基本控制,13例未再发作,4例发作次数减少50%以上。结论:脑立体定向射频毁损手术通过阻断癫痫放电扩散途径,对任何类型的癫痫病人都可能是有益的,对难治性癫痫患者多了一种安全有效的治疗方法。     

小鼠脑发育中CDK5 mRNA表达变化的研究

目的观察周期素依赖性蛋白激酶5 (CDK5)mRNA在脑发育中的表达与分布.方法采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色.结果①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5 mRNA从胚胎10.5 d(E10.5)开始表达,主要分布于神经上皮的套层细胞内; ②脑切片的原位杂交染色观察到从E14到成年期脑内均见CDK5 mRNA阳性信号,主要定位于神经元的胞浆与核周,于新生期前后表达达高峰;分布于包括大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及许多神经核团.在老年期上述区域CDK5表达均有减弱,部分区域呈阴性.结论表明脑内CDK5作用贯穿了整个脑的发育阶段,且主要参与了神经系统的早期发育;成年后CDK5可能继续保持对某些区域中神经元的功能调节.     

基因芯片检测耐PHT点燃鼠脑突触可塑性基因的表达

目的:探索与鼠同源的人类已知基因在苯妥英钠耐药和非耐药癫痫鼠脑中的差异表达,了解难治性癫痫形成(PHT)机制。方法:建立耐药和非耐药组癫痫大鼠模型,成功后,处死动物,取出脑组织,常规抽提,逆转录生成PHTmRNAcDNA后,应用含有条人类基因的表达谱芯片,检测两者间基因表达谱的差异。4096cDNA结果:发现耐和治疗有效癫痫PHTPHT鼠与神经元突触可塑性有关的基因有条存在差异表达。18结论:突触可塑性增强可能是难治性癫痫形成的重要原因。     

杏仁核点燃癫(癎)大鼠脑内P-糖蛋白的表达

目的研究杏仁核电刺激点燃的难治性癫癎大鼠脑内P-糖蛋白（P-glycoprotein,PGP）表达的情况。方法建立杏仁核电刺激点燃的难治性癫癎大鼠模型,用RT-PCR、免疫组织化学及免疫蛋白印记（Western blot）的方法,分析比较PGP蛋白在癫癎模型组与正常对照组的表达。结果在基因和蛋白水平药物难治性癫癎大鼠组皮层和海马PGP的表达都显著高于正常对照组（P〈0.05）,癫癎模型组内皮层和海马间的多药耐基因1（multidrug resistance gene1,MDR1）的表达无明显统计学差异（P〉0.05）;癫癎组大鼠脑内皮层和海马的PGP免疫阳性细胞数较对照组明显增多,统计学比较有差异（P〈0.05）。结论癫癎大鼠脑内高表达的PGP参与了难治性癫癎的耐药机制。