乳香、没药挥发油促九分散方中生物碱类成分的HaCaT细胞摄取及其机制研究

目的研究九分散中乳香、没药挥发油促进角质形成细胞HaCaT摄取马钱子碱、士的宁及盐酸麻黄碱的作用及其机制。方法采用CCK-8法检测乳香、没药挥发油单用/药对与九分散方中马钱子碱、士的宁、盐酸麻黄碱配伍对HaCaT细胞存活率的影响;采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)定量分析法结合BCA蛋白试剂盒测定在乳香、没药挥发油作用下HaCaT细胞对3种生物碱(马钱子碱、士的宁及盐酸麻黄碱)细胞摄取的影响;以DiBAC4(3)为荧光探针,利用流式细胞仪测定乳香、没药挥发油对HaCaT细胞膜电位的影响。结果不同乳香、没药挥发油均对3种生物碱有一定促透作用,且对脂溶性成分马钱子碱、士的宁的促透效果较水溶性成分盐酸麻黄碱好。乳香、没药挥发油分别作用于DiBAC4(3)标记的HaCaT细胞后,可降低HaCaT细胞膜电位,随着乳香、没药挥发油浓度增加,细胞膜电位荧光强度逐渐增强,具有浓度相关性,表现出类似氮酮的作用方式。结论九分散中乳香、没药挥发油均可促进HaCaT细胞摄取3种生物碱,促进机制可能通过影响皮肤表面负电荷而改变皮肤活性表皮屏障作用,从而有利于药物透过皮肤活性表皮层,其具体机制有待进一步探明。     

冰片对HaCaT细胞膜流动性及膜电位的影响

目的研究冰片对皮肤活性表皮作用方式,探究冰片作为经皮促透剂的促透作用机制。方法选择常用经典化学经皮促透剂氮酮作为阳性对照促透剂,采用CCK-8试剂盒测定并计算冰片对HaCaT细胞的半数抑制率(IC50),利用荧光漂白恢复技术测定不同浓度冰片对HaCaT细胞膜流动性的影响,采用流式细胞仪测定冰片对HaCaT细胞膜电位及细胞膜内Ca2+浓度的影响。结果冰片和氮酮的药物IC50分别为2.826、0.172 mmol/L;冰片可增加HaCaT细胞膜流动性,且随着药物浓度的增大而增加,呈剂量依赖性关系;冰片可降低HaCaT细胞膜电位和HaCaT细胞内Ca2+浓度,表现出类似氮酮作用特点。结论冰片的经皮促透作用机制可能与其影响角质细胞内Ca2+浓度进而改变活性表皮角质形成细胞膜电位和膜流动性有关。     

花椒油对HaCaT细胞膜流动性及膜电位的影响及其机制研究

目的：本文选择HaCaT角质形成细胞测定花椒挥发油对其细胞膜流动性和膜电位的影响及其机制,研究花椒挥发油对皮肤活性表皮的影响,探讨其促进药物透皮吸收的作用机制。方法：采用CCK-8试验测定花椒挥发油的细胞毒性,利用荧光漂白恢复技术（FRAP）考察不同浓度花椒挥发油对细胞膜流动性的影响,采用流式细胞仪测定不同浓度花椒挥发油对细胞膜电位的改变,同时考察了花椒挥发油对HaCaT细胞内Ca²⁺浓度的影响,采用超微量Ca²⁺-ATP酶试剂盒测定花椒挥发油对HaCaT细胞内Ca²⁺-ATP酶活性的影响。结果：相对于常用化学促透剂氮酮,花椒挥发油具有较低细胞毒性,花椒挥发油可增加HaCaT细胞膜流动性、降低细胞膜电位,同时可降低Ca²⁺-ATP酶活性、增加HaCaT细胞内Ca²⁺浓度而影响细胞Ca²⁺平衡。结论：花椒挥发油可能通过改变细胞内Ca²⁺平衡而影响细胞膜流动性及膜电位,增加活性表皮流动性以降低皮肤表皮屏障作用,从而利于药物的透皮吸收。     

脑力智宝及其含药血清对硝普钠诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的探讨中药脑力智宝对PC12细胞凋亡的抑制作用及机制。方法以硝普钠(sodium nitro- prusside,SNP)诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用血清药理学方法,用荧光显微镜观察细胞形态学的改变,流式细胞仪检测DNA含量及凋亡细胞百分率,免疫组织化学检测Bcl-2蛋白的表达,以DPH为荧光探针检测细胞膜的流动性。结果脑力智宝提取物及含药血清能减轻SNP引起的细胞核形态学的改变,减少凋亡细胞数,使SNP诱导的PC12细胞凋亡百分率明显下降,凋亡峰显著降低,并能提高Bcl-2蛋白的表达,增加细胞存活率,增加膜流动性。结论脑力智宝对SNP诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用。并可能是通过促进Bcl-2蛋白表达,增加细胞膜流动性等途径而抑制细胞凋亡的。     

芍药苷、薄荷脑对葛根素在Calu-3细胞模型转运过程中膜流动性、钠-钾离子ATP酶和钙离子ATP酶的影响

研究芍药苷、薄荷脑对葛根素在细胞模型转运过程中对Calu-3细胞膜生理功能的影响。以Calu-3细胞作为模拟鼻黏膜组织的体外细胞模型,采用荧光漂白恢复技术及超微量酶活性检测方法,考察细胞膜流动性、Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活性,探索配伍药物促进葛根素转运的作用机制。结果表明,配伍低、中、高浓度薄荷脑或同时配伍低、中、高浓度芍药苷和薄荷脑时,与单独使用葛根素相比,Calu-3细胞膜荧光漂白恢复率显著升高,Na~+-K~+-ATP酶活性未发生明显改变,Ca~(2+)-ATP酶活性显著增强,由此证实薄荷脑起到主要渗透促进作用,并且其作用机制可能与增加流动性、激活Ca~(2+)-ATP酶活性密切相关。     

脾肾方对L1210腹水癌小鼠的免疫调节作用

本文选用 ~aH-TdR 掺入法测定脾淋巴细胞的增殖,DPH 标记淋巴细胞膜,荧光偏振法测定脾淋巴细胞和骨髓细胞的荧光偏振度。结果:DBA 纯系健康对照小鼠脾淋巴细胞增殖高,萤光偏振度较大,脂质流动性小;L_(1210)腹水癌小鼠脾淋巴细胞增殖大大减少,荧光偏振度减小,膜脂质流动性增大。0.4g/kg 脾肾方分别给健康和 L_(1210)小鼠灌胃9天后,脾肾方可使脾淋巴细胞增殖升高,并能调节膜脂质流动性接近于健康小鼠。对骨髓细胞膜脂质流动性也有相同作用。初步揭示了脾肾方对免疫不平衡动物 T 细胞功能的调节作用和骨髓细胞脾淋巴细胞膜脂质流动性相关的机制。     

紫草多糖对S_(180)荷瘤小鼠红细胞膜流动性与带3蛋白的影响

目的:观察紫草多糖对S180荷瘤小鼠瘤重、红细胞膜流动性和带3蛋白含量的影响。方法:采用荧光探针DPH标记法测定红细胞膜的荧光偏振度P,计算微黏度(η)与膜脂流动性(LFU);电泳法测定红细胞膜带3蛋白含量。结果:紫草多糖中剂量组抑瘤率达43.05%;且各剂量组对红细胞膜膜脂流动性、带3蛋白均有影响,以中剂量组效果最佳,与对照组相比P<0.01,P<0.05。结论:紫草多糖通过影响荷瘤小鼠红细胞膜流动性和带3蛋白恢复红细胞的正常功能发挥其抗肿瘤作用。     

微乳对葛根素在MDCK-MDR1细胞的转运影响及机制研究

目的探讨微乳制剂对葛根素在血脑屏障(BBB)细胞模型MDCK-MDR1的转运影响以及机制。方法采用MTT法评价葛根素微乳与溶液的细胞毒性浓度范围,确定适宜给药质量浓度,考察葛根素溶液及微乳在MDCK-MDR1单层的双侧转运特性,通过免疫组化染色研究细胞紧密连接蛋白的表达,荧光光漂白恢复法测定细胞膜流动性的变化以及阴离子探针结合流式细胞技术研究细胞膜电位的改变,进而阐明微乳对葛根素转运影响的作用机制。结果葛根素溶液质量浓度50~300μg/m L,微乳稀释500倍以上对MDCK-MDR1无显著毒性。溶液中葛根素在MDCK-MDR1单层的吸收方向转运表观渗透系数(Papp)为1.04×10-6 cm/s,外排方向转运Papp值为1.05×10-6 cm/s,微乳中葛根素双侧转运Papp值均较溶液中葛根素显著增加(P0.05)。微乳作用可以减少MDCK-MDR1紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1、F-actin的表达,促进细胞膜流动,降低细胞膜电位。结论微乳制剂可以促进葛根素在BBB细胞模型MDCK-MDR1的双侧转运,其作用机制与打开细胞间紧密连接,增加细胞膜流动性,使细胞去极化,降低膜电位进而增大葛根素细胞旁路渗透有关。     

紫苏叶油对结肠平滑肌细胞钙离子和膜电位的作用

目的 观察紫苏叶油对肢体缺血再灌注模型大鼠结肠平滑肌细胞游离钙离子浓度([Ca~(2+)]_i)和细胞膜电位的影响,并探讨其作用机制。方法 建立肢体缺血再灌注大鼠模型,酶解法分离结肠平滑肌细胞,分别用荧光探针Fluo-3AM和DiBAC4(3)负载细胞,应用激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内钙离子荧光强度(FI)和膜电位变化;定磷法检测结肠平滑肌细胞Ca~(2+)-ATPase变化;荧光偏振法检测细胞膜流动性。结果 模型组大鼠结肠平滑肌细胞[Ca~(2+)]_i显著下降,Ca~(2+)-ATPase活性升高,细胞膜流动性下降。紫苏叶油可动态调节模型大鼠结肠平滑肌细胞[Ca~(2+)]_i和膜电位;紫苏叶油可使结肠平滑肌细胞Ca~(2+)-ATPase活性明显下降,细胞膜流动性显著增加。结论 紫苏叶油通过调节细胞[Ca~(2+)]_i及膜电位,参与结肠平滑肌细胞收缩活动。其作用机制可能与抑制细胞内钙泵活性和增加细胞膜流动性相关。     

疗癣卡西甫散提取物对肿瘤坏死因子-α诱导角质形成细胞增殖的影响

目的观察疗癣卡西甫散提取物(LE)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导角质形成细胞株HaCaT细胞增殖及白细胞介素-8(IL-8)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)m RNA表达的影响,探讨其作用机制。方法将培养的HaCaT细胞分为正常组、TNF-α组和LE低、中、高剂量组。除正常组外,其余各组细胞均给予40 ng/m L TNF-α诱导,各给药组再分别给予8、40、200μg/m L LE作用48 h。MTT法检测HaCaT细胞增殖;ELISA检测HaCaT细胞IL-8和ICAM-1含量;PI和Hoechst33342荧光染色观察HaCaT细胞凋亡;半定量RT-PCR检测HaCaT细胞IL-8和ICAM-1的m RNA表达。结果与正常组比较,TNF-α组HaCaT细胞吸光度、IL-8和ICAM-1含量及其m RNA表达明显升高(P0.05,P0.01);与TNF-α组比较,LE各剂量组HaCaT细胞吸光度、IL-8和ICAM-1含量及其m RNA表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论 LE通过促进HaCaT细胞凋亡及抑制HaCaT细胞IL-8和ICAM-1基因表达,从而维持皮损处HaCaT细胞的正常水平。     

萜烯类经皮促透剂对皮肤活性表皮层的影响及其机制研究

该文选择Ha Ca T皮肤角质形成细胞测定萜烯类经皮促透剂对皮肤活性表皮层的影响,探讨其促进药物透皮吸收的作用机制。选择具良好经皮促透效果的萜烯类化合物,即薄荷醇、柠檬烯、1,8-桉树脑、薄荷酮、4-萜品醇和长叶薄荷酮;采用MTT试验测定萜烯类经皮促透剂的细胞毒性,利用荧光漂白恢复技术(FRAP)考察不同萜烯类促透剂对细胞膜流动性的影响,采用流式细胞仪测定不同萜烯类促透剂对细胞膜电位的改变,同时考察了萜烯类促透剂对Ha Ca T细胞内Ca2+浓度的影响,采用超微量Ca2+-ATP酶试剂盒测定萜烯促透剂对Ha Ca T细胞内Ca2+-ATP酶活性的影响。实验结果表明,相对于常用化学促透剂氮酮,6种萜烯类促透剂均显示较低细胞毒性;所选择的萜烯类促透剂可显著增加Ha Ca T细胞膜流动性、降低细胞膜电位,同时可降低Ha Ca T细胞Ca2+-ATP酶活性和细胞内Ca2+浓度而影响细胞Ca2+平衡。因此,萜烯类促透剂可能通过改变细胞内Ca2+平衡而影响细胞膜流动性及膜电位,增加皮肤活性表皮流动性而降低皮肤屏障作用,从而利于药物的透皮吸收。     

脂质组分对阳离子脂质体介导的基因转染的影响

 目的研究阳离子脂质体膜的组分对细胞摄取和基因转染的影响。方法以十八酰胺(SA)、3β[N-(N′,N′-二甲基氨基乙基)氨甲酰基-胆固醇(DC-Chol)、卵磷脂(SPC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)等为膜材,制备阳离子脂质体。用流式细胞仪测定不同阳离子脂质体对细胞摄取荧光标记寡核苷酸(FAM-ODN)的效率,结合荧光显微镜观察报告基因(pEGFP-N1)编码的绿荧光蛋白(GFP)表达的情况。结果不同阳离子脂质对细胞摄取产生截然不同的效果,DC-Chol/SPC脂质体对细胞摄取ODN的促进作用显著高于SA/SPC脂质体;而中性脂质对基因表达有重要影响,DC-Chol/DOPE脂质体的转染效率优于DC-Chol/SPC脂质体。结论通过药剂学的处方筛选,可以提高阳离子脂质体作为非病毒载体的性能。     

电针“内关”和“足三里”对家兔红细胞膜流动性的影响

<正> 针刺治疗冠心病和急性中风病人,“内关”和“足三里”为常用穴位,经针刺治疗后心功能与微循环均得到改善,全血粘度与血浆粘度明显降低。针刺“足三里”穴治疗高脂血症有明显疗效,使胆固醇、甘油三     

抗癌铂（IV）配合物的结构及细胞摄入的动力学和机制的研究

目的 分析抗癌铂(Ⅳ)配合物的结构，研究人红细胞摄入这些配合物的动力学和机制.方法 利用分子图形模拟方法计算5种口服抗癌铂(Ⅳ)配合物的结构；利用动力学方法测定细胞摄入配合物的速率常数；根据细胞膜蛋白巯基含量和内源性荧光的改变，探讨这些铂(Ⅳ)配合物与人红细胞的作用。结果 计算出了5种口服抗癌铂(Ⅳ)配合物的结构；得到了细胞摄入配合物的一级动力学常数；配合物与细胞膜作用过程中，膜蛋白巯基含量变化很小，但膜蛋白的内源性荧光发生了改变.结论 人红细胞摄入4个铂(Ⅳ)配合物服从简单扩散的一级动力学过程，速率常数不同，细胞摄入配合物(JM221)不符合一级动力学过程。配合物与细胞膜作用使膜蛋白的构象发生了变化，与膜蛋白和膜脂发生了较弱的作用.     

肝脂消煎剂对脂肪肝大鼠肝脏脂质过氧化及膜流动性损伤的作用研究

目的：探讨肝脂消煎剂治疗脂肪肝药效学机制。方法：采用高脂饮食加白酒灌胃建立大鼠脂肪肝模型，以东宝肝泰作对照，观察肝脂消煎剂对脂肪肝大鼠肝微粒体、线粒体膜流动性及微粒体后上清SOD、MDA的影响。结果：模型对照组MDA、膜荧光偏振度较正常组明显增大，且二者呈正相关(r=O．9651、r=0．9746)，表示肝脏因脂质过氧化引起膜流动性降低；肝脂消组能提高肝脏SOD活牲，降低MDA含量及荧光偏振度，拮抗膜流动性下降，均明显优于东宝肝泰。结论：中药可抑制肝脏脂质过氧化，拮抗其膜流动性降低，具有良好的防治脂肪性肝炎作用。     

壳聚糖及其衍生物对HaCaT细胞膜电位的影响

 目的用流式细胞仪检测壳聚糖及其衍生物对HaCaT细胞膜电位的影响。方法合成不同取代度的N-三甲基壳聚糖(TMC)和N-羧甲基壳聚糖(MCC);用纯水作对照,运用荧光分子探针DiBAC₄(3)标记HaCaT细胞膜电位,流式细胞仪检测壳聚糖及其衍生物处理之后细胞膜电位的变化情况。结果与纯水组比较,壳聚糖及其衍生物都能显著降低细胞膜电位,其中,TMC20组作用最明显,TMC40组作用最微弱。结论壳聚糖及其衍生物降低细胞膜电位,可能是其具备透皮吸收促进作用的原因之一。     

黄芪甲苷对人参皂苷CK肿瘤细胞摄取及抗肿瘤作用的影响

目的考察黄芪甲苷(AS-IV)对人参皂苷CK(GCK)肿瘤细胞摄取和抗肿瘤药效的影响。方法采用人非小细胞肺癌细胞A549作为肿瘤细胞模型,通过MTT法比较两者配伍与单用GCK的细胞毒性;用荧光法和HPLC法考察了AS-IV与配伍GCK后细胞对GCK的摄取率变化,建立裸鼠荷瘤模型考察AS-IV对GCK的体内增效作用。结果配伍AS-IV后,GCK对A549细胞的生长抑制作用增强,肿瘤细胞对GCK的摄取增加,且随着AS-IV比例的升高,效果更加显著。荷瘤小鼠实验表明,AS-IV增加了GCK的体内抗肿瘤作用。结论 AS-IV配伍GCK具有增强GCK抗肿瘤药效的作用。     

海嘧啶对FC,H22荷瘤小鼠红细胞膜功能的影响

 目的研究海嘧啶对荷瘤小鼠红细胞膜功能的影响。方法采用DPH荧光探针标记的方法测定红细胞膜的流动性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定红细胞膜蛋白的含量,用比色法测定红细胞膜表面唾液酸含量和膜封闭度。结果海嘧啶能够降低荷瘤小鼠红细胞膜的流动性,降低荷瘤小鼠膜蛋白的含量,升高荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量,提高红细胞膜重新封闭的能力。结论海嘧啶通过改善和恢复荷瘤小鼠红细胞膜功能,改善机体的免疫功能而达到抗肿瘤的作用。