红鱼眼不同提取物含药血清对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的影响

[目的]研究红鱼眼不同极性部位提取物含药血清对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞炎症的影响。[方法]采用噻唑蓝（MTT）法检测红鱼眼不同极性部位提取物含药血清对RAW264.7细胞活力的影响;采用脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,采用MTT法检测红鱼眼不同极性部位提取物含药血清对炎症细胞增殖的影响,并用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞上清液中一氧化氮（NO）、白介素1β(1L-1β)、白介素6(1L-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。[结果]在6～12 h培养时间内,除红鱼眼水提取物含药血清外,其余不同极性部位提取物含药血清对RAW264.7细胞活力均无明显影响;与LPS模型组比较,红鱼眼不同极性部位提取物组各培养时间段吸光度（OD）值和细胞存活率明显提高（P<0.01）;LPS刺激细胞后可引起NO、IL-1β、IL-6、TNF-α的高表达（P<0.05或P<0.01）,经红鱼眼不同极性部位提取物含药血清干预后,乙酸乙酯提取物组、石油醚提取物组、水提取物组的NO、IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著下降（P<0....     

白背叶根含药血清对脂多糖诱导下RAW264.7细胞分泌的影响

目的:观察不同浓度的白背叶根含药血清对脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)诱导下RAW264.7细胞分泌的影响。方法:制作高、中、低浓度白背叶根含药血清,以CCK-8法检测不同浓度白背叶根含药血清对RAW264.7细胞活力的影响。以脂多糖刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型,检测白背叶根含药血清对细胞上清液中炎症介质一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、白三烯B4(LTB4)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。结果:不同浓度的白背叶根含药血清均对RAW264.7细胞活力无影响;与模型组比较,10%、5%的白背叶根含药血清可显著抑制NO的释放(P<0.05或P<0.01),10%白背叶根含药血清可显著抑制LTB4的分泌(P<0.05),2.5%白背叶根含药血清可显著抑制IL-1β的分泌(P<0.05);但不同浓度的白背叶根含药血清对PGE2、TNF-α的分泌无显著影响。结论:白背叶根的抗炎机制可能是通过抑制炎症反应中NO,LTB4,IL-1β的释放而实现。     

桂枝汤含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体3、4型及其下游信号转导通路元件的影响

目的:研究桂枝汤含药血清对LPS和Poly(I:C)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7的Toll样受体(TLR)及其下游主要信号转导通路元件的影响,从mRNA和蛋白水平探讨桂枝汤含药血清防治感染性疾病的免疫学基础。方法:用LPS或Poly(I:C)分别刺激RAW264.7细胞,加桂枝汤含药血清干预24h后,取细胞上清液测定炎症因子TNF-α和IFN-β的含量;荧光定量PCR方法测定TLR3、TLR4和下游信号转导通路元件MyD88、TRAF-6、TRAM和TRIF mRNA的表达;Western blotting法分析TLR3、TLR4蛋白的表达;细胞免疫荧光法分析MyD88、TRAF-6蛋白表达的强弱。结果:桂枝汤含药血清可显著降低LPS刺激诱导的MyD88、TRAM和TRIF的高表达;Poly(I:C)刺激后,桂枝汤含药血清显著降低TLR3、MyD88和TRAM的高表达。结论:桂枝汤能直接作用于TLR3,抑制其高表达,阻断TLR3胞内信号转导的MyD88依赖和非依赖两条途径,抑制相关基因表达产物TNF-α、IFN-β过度分泌,具有TLR3拮抗剂样作用。桂枝汤也可直接作用于接头蛋白MyD88、TRAM和TRIF,影响TLR4信号转导的MyD88依赖和非依赖性途径,抑制TNF-α、IFN-β的过度分泌。     

热毒宁拆方对RAW 264.7细胞炎症相关因子表达的影响

目的：本研究主要观察热毒宁及其拆方对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7炎症模型分泌促炎因子的影响,探讨热毒宁及其拆方的抗炎作用。方法：体外培养RAW 264.7 细胞,热毒宁及其拆方作用于未经刺激的RAW 264.7细胞及LPS（1mg·L^-1）刺激后的RAW 264.7细胞,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、给药组组,采用噻唑蓝（MTT）法检测不同相对RAW 264.7细胞增殖活力,硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、前列腺素E₂（PGE₂）的分泌量。结果：与LPS模型组比较,各提取物组,NO、TNF-α、PGE₂的表达明显降低;3种不同药材提取物之间比较,青蒿对PGE2的抑制作用较为明显,栀子对TNF-α的抑制较为明显,金银花对NO的抑制作用较为明显,且药材提取物之间有协同作用,热毒宁组合对PGE₂、TNF-α、NO的抑制作用最强。结论：青蒿、栀子、金银花提取物均能明显拮抗LPS所致的RAW 264.7细胞炎症反应;不同提取物组合的抗炎作用有差异,热毒宁组合的抗炎作用最强。     

乌蔹莓醇提物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用

目的 探讨乌蔹莓70%醇提物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型的作用及其机制。方法 MTT法观察不同质量浓度乌蔹莓醇提物对RAW264.7细胞活性的影响,筛选合适的实验剂量。以LPS(1μg/mL)诱导建立细胞炎症模型,同时加入30、60、120μg/mL乌蔹莓醇提物进行处理,24 h后Griess法检测细胞上清液NO水平,DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平,ELISA法检测细胞上清液PGE₂、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,RT-qPCR法检测细胞TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达,Western blot法检测细胞iNOS、COX-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、Akt、p-Akt、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果 乌蔹莓醇提取物质量浓度在180μg/mL及以下时对RAW264.7细胞存活率无明显变化(P>0.05)。与模型组比较,乌蔹莓醇提物组细胞内ROS水平及上清液NO、PGE₂、TNF-α、IL-6、IL-1β水平均降低(P<0.01),细胞T...     

凉膈散含药血清对内毒素刺激RAW264.7细胞CD14mRNA表达的影响

目的:研究凉膈散药物血清体外对内毒素刺激小鼠RAW264.7细胞CD14mRNA表达的影响.方法:大鼠以凉膈散灌胃,制备药物血清.以凉膈散药物血清或正常血清的培养液与LPS体外共同培养RAW264.7细胞,原位杂交法检测凉膈散药物血清对内毒素刺激RAW264.7细胞CD14mRNA表达变化.结果:与LPS刺激组比较,不同剂量药物血清组CD14mRNA表达量均比它低,呈剂量依赖性;正常血清组则无显著性差异.结论:凉膈散含药血清体外对LPS刺激小鼠单核细胞CD14mRNA转录具有抑制作用.减少LPS效应细胞的CD14mRNA的表达可能是凉膈散减轻LPS对机体损伤,发挥解毒作用的机制之一.     

芎芍胶囊含药血清对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的观察芎芍胶囊大鼠含药血清中脂质对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞24 h,建立RAW264.7源性泡沫细胞模型,添加大鼠含药血清,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞)、模型组(80 mg/L ox-LDL)、正常血清组(10%正常大鼠血清)及正常血清对照组(80 mg/L ox-LDL+10%正常大鼠血清)、辛伐他汀组(80 mg/L ox-LDL+10%辛伐他汀血清)、芎芍胶囊血清组(80 mg/L ox-LDL+10%芎芍胶囊血清)。通过油红O染色观察细胞内胆固醇分布;以胆固醇检测试剂盒检测正常血清组、辛伐他汀血清组、芎芍胶囊血清组血清总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)含量,检测各组细胞内TC及FC含量。结果模型组细胞形态及染色结果符合泡沫细胞标准;正常血清组、正常血清对照组、辛伐他汀血清组、芎芍胶囊血清组细胞内均含有大量脂滴,且各组细胞内脂质着色无明显差异。与正常血清组比较,辛伐他汀血清、芎芍胶囊血清组TC差异均无统计学意义(P>0.05),辛伐他汀血清组FC含量升高(P<0.0...     

疏肝健脾方药含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞炎症损伤及TLR4/p38MAPK信号通路影响的研究

目的:研究疏肝健脾方药含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下大鼠肝细胞炎症反应及TLR4(Toll样受体-4)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的影响。方法:体外培养并鉴定SD大鼠肝细胞,制备疏肝健脾方药含药血清,对肝细胞进行疏肝健脾方药、p38MAPK抑制剂等药物干预,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的表达,Western blot检测TLR4,p38MAPK,p-p38MAPK蛋白的表达。结果:可提取大鼠疏肝健脾方药含药或空白血清约2~3 m L,大鼠获得纯化后肝细胞1.5×108~2.0×108个,Typan blue染色测定细胞活力均在95%以上,免疫荧光法鉴定确定提取的为肝细胞。肝细胞培养上清的检测:LPS组较空白血清组IL-6,TNF-α水平均有显著升高(P<0.01)。与LPS组比较,药物干预组IL-6,TNF-α表达水平呈显著降低(P<0.01)。肝细胞的蛋白检测:与空白血清组比较,LPS组的p38MAPK,p-p38MAPK,TLR4蛋白表达均有显著升高(P<0.01);与LPS组比较,SB239063能显著下调p38MAPK的蛋白表达水平(P<0.01),疏肝健脾组亦有下调,但无显著差异;疏肝健脾组,SB239063组的p-p38MAPK的蛋白表达水平均下调显著(P<0.01);TLR4蛋白表达水平以疏肝健脾组下调具有显著性差异(P<0.01),SB239063组下调无显著统计学差异。结论:疏肝健脾方药可能通过TLR4/p38MAPK信号通路调控大鼠肝细胞炎症损伤,含药血清可能是其重要的作用途径之一。     

清络通痹颗粒含药血清对破骨细胞骨吸收的影响

目的:确定清络通痹颗粒(QLT)含药血清的制备方法并观察其对体外培养破骨细胞的活性和骨吸收的影响。方法:选用高效液相色谱外标一点法测定,QLT含药血清中青藤碱的含量以确定含药血清的制备条件;乳鼠破骨细胞1×108/mL加入96孔板,将QLT 3.6,7.2,14.4 g.kg-1给药的大鼠含药血清1∶10稀释,分别加入各孔培养48 h,观察其对破骨细胞增殖、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性及破骨细胞形成的骨吸收陷窝的影响。结果:QLT 7.2,14.4 g.kg-1给药的含药血清可明显抑制破骨细胞的增殖能力和吸收陷窝面积(P<0.05,P<0.01),QLT 3.6,7.2,14.4 g.kg-1给药的含药血清可明显抑制破骨细胞的TRAP活性(P<0.05,P<0.01)。结论:QLT含药血清可抑制破骨细胞增殖、TRAP活性和骨吸收能力,对破骨细胞引起的骨质破坏产生抑制作用。     

大黄对脂多糖致RAW264.7细胞炎症模型mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的观察大黄对脂多糖致RAW264.7细胞炎症模型mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响,探讨其作用机制。方法实验细胞分为正常组、模型组、雷帕霉素组和大黄低、中、高剂量组,MTT法检测细胞毒性后,ELISA检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量PCR检测缺氧诱导因子-lα(HIF-1α)、p70S6K1和eIF4E mRNA表达,Western blot检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、eIF4E和p70S6K1 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α和VEGF蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄各剂量组细胞TNF-α、IL-6和IL-1β含量降低,HIF-1α、p70S6K1和eIF4E mRNA表达降低,HIF-1α、VEGF蛋白表达降低。结论大黄可下调炎症因子水平,其机制可能与其下调HIF-1α、VEGF蛋白表达及HIF-1α、eIF4E、p70S6K1 mRNA表达水平有关。     

痛风宁含药血清对尿酸盐诱导THP-1中NALP3炎性体相关蛋白及炎症因子表达的影响

目的通过检测痛风宁含药血清对尿酸盐(monosodium urate,MSU)诱导人单核细胞株THP-1(human monocytic cell line,THP-1)中NALP3炎性体相关蛋白与mRNA及上清液中IL-1β、PGE_2表达的影响,探讨痛风宁对痛风性关节炎的抗炎机制。方法制备低、中、高剂量痛风宁含药血清。将THP-1随机分为空白组和MSU干预组,MSU干预组予200 mg/L MSU混悬液诱导12 h建立炎症细胞模型,模型鉴定成功后采用随机数字表法分为模型组及低、中、高剂量痛风宁含药血清组(以下简称低、中、高剂量痛风宁组)、阳性对照组,分别予10%空白血清,10%低、中、高剂量痛风宁含药血清,10%空白血清+Caspase-1抑制剂干预,无MSU干预的空白组予10%空白血清干预。24 h后,离心收集各组THP-1及细胞上清液。采用ELISA检测各组细胞上清液中IL-1β、PGE_2含量,Western Blot、RT-qPCR分别检测各组THP-1中NALP3、Caspase-1、ASC蛋白及mRNA表达。结果与空白组比较,模型组NALP3、Caspase-1、ASC蛋白与mRNA表达及IL-1β、PGE_2含量均升高(P0.01);各剂量痛风宁组所有指标均低于模型组及阳性对照组(P0.01),同时低、高剂量痛风宁组所有指标水平均高于中剂量痛风宁组(P0.05,P0.01);阳性对照组Caspase-1蛋白表达及IL-1β、PGE_2含量低于模型组(P0.01),Caspase-1 mRNA、NALP3、ASC蛋白及mRNA表达与模型组差异无统计学意义(P0.05)。结论痛风宁对AGA的抗炎机制可能与抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达,减少炎症因子IL-1β、PGE_2的产生有关。     

温胆汤含药血清对CREB mRNA沉默海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

目的:探讨温胆汤对环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)mRNA沉默海马细胞活性、凋亡及海马脑源性神经营养因子/原肌球蛋白相关受体激酶/CREB(BDNF/TrkB/CREB)信号通路作用的影响。方法:制备温胆汤含药血清,将SD雄性大鼠随机分为温胆汤高、中、低剂量组、氯氮平组、正常生理盐水组,每组10只,其中每组15只。正常组予20 mL·kg~(-1)生理盐水灌胃,氯氮平组给予0.02 g·kg~(-1)氯氮平原药灌胃,温胆汤高、中、低剂量组分别予质量浓度为2,1,0.5 g·mL~(-1)的等量温胆汤浓缩生药灌胃,1次/d,连续灌胃8 d后,股动脉取血,5 000 r·min~(-1)离心15 min,倾取上清液,灭活,-80℃保存,备用。通过脂质体转染至海马细胞中,构建CREB mRNA沉默海马神经元细胞系,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证小分子干扰核糖核酸(siRNA)转录后效果。检测海马细胞周期和凋亡,正常海马细胞和CREB基因沉默海马细胞内BDNF,TrkB,CREB,钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA表达水平。结果:对于细胞凋亡,与正常大鼠血清组比较,各组别在24,48 h时,细胞凋亡显著降低(P0.01);与正常大鼠血清-siRNA组比较,各给药组细胞凋亡显著降低(P0.01)。对于BDNF,TrkB,CREB,CaMKⅡmRNA表达,与正常大鼠血清组比较,基因沉默正常组CREB,BDNF mRNA表达均显著下降(P0.01);与正常大鼠血清-siRNA组比较,各给药组可显著提高BDNF mRNA表达(P0.01),其中TrkB,CaMKⅡ各组间差异无明显统计学意义。结论:温胆汤含药血清可提高BDNF mRNA表达,通过调控BDNF/TrkB/CREB信号通路,以保护海马神经元,达到防治精神分裂症认知障碍的目的。     

益气固表丸含药血清对炎症肺上皮细胞TGF-β2-Smad信号通路的影响

目的：通过采用益气固表含药血清对慢性阻塞性肺疾病(COPD)炎症细胞模型进行干预,以转化生长因子-β2（TGF-β2）-Sma和Mad相关（Smad）信号通路及相关炎症介质为切入点,揭示益气固表丸调节体内炎症水平的可能作用机制。方法：以卷烟烟雾提取物（CSE）和脂多糖（LPS）为刺激因子,以肺上皮细胞A549为载体,建立COPD炎症细胞模型。用益气固表丸对大鼠进行灌胃,2次/d,间隔12 h,给药7 d后采血,制备含药血清。用益气固表丸高、中、低剂量含药血清进行培养干预,运用实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）和酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光单标等检测干预前后CD4、CD8、白细胞介素-6（IL-6）、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α）等炎症介质和TGF-β2-Smad信号通路重要分子变化。结果：各给药组CD4显著高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;各给药组CD8、IL-6、IL-17、TNF-α、TGF-β2、Smad2、Smad3表达水平低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：益气固表丸含药血清对炎症肺上皮细胞的抑制作用可能与调控TGF-β2-Smad信号通路有关。     

基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞的影响

目的:探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为血竭高、中、低剂量含药血清组和正常对照组,每组6只。用药组分别以0.2、0.1、0.05 g·kg-1·d-1的血竭灌胃,正常对照组给予生理盐水,7 d后取血制备含药血清。组织块法培养大鼠成纤维细胞,检测血竭含药血清对成纤维细胞增殖活性、TGF-β1分泌水平以及TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3和p-Smad3蛋白表达的影响。结果:与正常对照组比较,血竭各剂量含药血清能显著提高成纤维细胞的增殖活性和TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ及p-Smad3蛋白的表达(P<0.05或P<0.01);中、高剂量含药血清组TGF-β1水平、Smad3、和Smad3蛋白磷酸化水平明显上升(P<0.05或P<0.01)。结论:血竭对创伤的修复作用可能与其调节TGF-β1/Smad3信号转导通路有关。     

补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1/Smad/ERK信号通路的影响

目的:观察补阳还五汤大鼠含药血清对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺成纤维细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK表达的影响。方法:含药血清的制备:24只SPF级SD大鼠,雄性,随机分为3组,即补阳还五汤水煎液组(简称补阳还五汤组,1 g生药/m L),强的松水溶液组(简称阳性组,5 mg/m L)和生理盐水组(简称模型组),每组8只,补阳还五汤组以9.24 g/(kg·d)(临床等效剂量)进行灌胃,阳性组及模型组以1 m L/100 g灌服相应溶液,1次/d,连续灌服7 d,采血前禁食12 h,于末次灌胃1 h后,腹主动脉取血,离心后分离血清,将收集到的补阳还五汤含药血清配制成含药血清浓度分别为5%、10%、20%的培养液备用;体外培养的肺成纤维细胞,分别加入含5%、10%、20%浓度的补阳还五汤药物血清干预,72 h后收集细胞及上清,采用Western blot检测细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK蛋白的表达。结果:与模型组比较,20%含药血清组肺成纤维细胞中Smad3蛋白的表达显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%含药血清组Smad3蛋白表达有减少趋势;阳性组和不同浓度含药血清组肺成纤维细胞中Smad4蛋白表达有减少趋势;20%含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有减少趋势;阳性组和不同浓度补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中p-ERK蛋白均有减少趋势。结论:20%补阳还五汤含药血清能够有效抑制TGF-β1/Smad/ERK信号通路中关键细胞因子Smad3、ERK1/2蛋白的表达,从而发挥较好的抗肺纤维化作用。     

补骨颗粒含药血清对软骨细胞凋亡及缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子-A信号通路的影响

目的:观察补骨颗粒含药血清对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及HIF-1α/VEGF-A信号通路的影响,探讨补骨颗粒对软骨细胞凋亡的影响机制。方法:通过体外培养大鼠膝关节软骨细胞,应用Cell Counting Kit-8方法检测不同浓度补骨颗粒含药血清对软骨细胞活性的影响。将实验分为正常培养基组及不同浓度补骨颗粒含药血清(浓度为0%,5%,10%,15%,20%,25%,30%)联合10 ng/mL IL-1β培养组。应用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶染色后经流式细胞仪检测软骨细胞凋亡影响情况,用探针(2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯)测量软骨细胞内活性氧的相对量,应用酶联免疫吸附试验检测软骨细胞HIF-1α及VEGF-A含量,应用逆转录酶定量聚合酶链式反应检测HIF-1α及VEGF-A基因表达情况。结果:浓度为5%,10%,15%补骨颗粒含药血清间的光密度(OD)值差异无统计学意义(P>0.05),而15%含药血清干预后软骨细胞的OD值比20%含药血清干预组(P=0.007)、25%含药血清干预组(P=0.003)及30%含药血清干预组(P<0.001)高,差异有统计学...     

基于TLR4/NLRP3通路探讨葛黄颗粒含药血清对乙醇诱导的L-02肝细胞损伤的保护作用及机制研究＊

目的 探讨葛黄颗粒含药血清对乙醇诱导的L-02肝细胞损伤的影响及其可能机制。方法 SD雄性大鼠45只，随机分为三组（15只/组）：空白对照组、葛黄颗粒组及美他多辛组。空白对照组予以蒸馏水灌胃、葛黄颗粒组（3.1 g·100 g^-1·d^-1）、美他多辛组（0.1 g·100 g^-1·d^-1）灌胃，连续干预5天，腹主动脉取血制备含药血清。将L-02肝细胞分为六组并按以下方式干预：正常组（加入10%正常大鼠血清）、模型组（在正常组基础上加入3%乙醇）、葛黄颗粒高、中、低剂量组（分别加入不同浓度葛黄颗粒含药血清及正常大鼠血清及3%乙醇）、美他多辛组（加入3%乙醇、美他多辛及正常大鼠血清各5%），将L-02肝细胞培养24 h后进行之后实验部分。ELISA法检测NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-18水平；RT-PCR法检测NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA的表达；Western blot法检测TLR4、NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达。结果 与正常组比较：模型组NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-18明显升高，NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达明显升高，TLR4、NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达均亦明显升高（P<0.05）；与模型组相比较：以上指标在葛黄颗粒高、中剂量组及美他多辛组表达水平均有所降低（P<0.05）；与美他多辛组比较：葛黄颗粒高剂量组中TNF-α、IL-18有统计学意义（P<0.05），而IL-1β、NF-KB差异则不显著（P>0.05）；葛黄颗粒低剂量组中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA差异显著（P<0.05），而在高、中剂量组差异则均无统计学意义（P>0.05）；TLR4、NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达水平在葛黄颗粒各剂量组均有统计学意义（P<0.05）。结论 葛黄颗粒含药血清可能通过TLR4/NLRP3信号通路改善乙醇诱导的肝细胞炎症损伤。     

降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞磷酸肌醇-3激酶/AKT/FOXO1通路的影响

目的:通过研究降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞PI3K/AKT/FOXO1通路中相关蛋白与基因表达的影响,探讨降糖消渴颗粒含药血清保护胰岛B细胞的分子机制。方法:选取FOXO1高表达INS-1稳定细胞株,分别以1%、5%、10%、15%、20%不同浓度降糖消渴颗粒含药血清干预,用MTT法计算细胞成活率以观察药物毒性,分别检测各组细胞中总FOXO1蛋白水平以确定最佳药物浓度开展后续实验。细胞用或不用PI3K抑制剂LY294002干预后,以Western blotting检测细胞中总FOXO1、p-FOXO1、Akt、p-Akt和细胞核内外的FOXO1、p-FOXO1的蛋白表达,qRT-PCR检测FOXO1mRNA和AktmRNA含量。结果:不同浓度含药血清对细胞均无毒性,其中10%为最佳药物干预浓度。10%含药血清使磷酸化FOXO1和Akt的表达升高;在胞质和胞核中,10%含药血清使FOXO1的表达降低,磷酸化表达升高,抑制剂LY294002使FOXO1和p-FOXO1表达均降低。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,Akt mRNA表达升高,FOXO1mRNA表达降低,抑制剂使FOXO1mRNA表达降低,结果与Western blotting结果一致。结论:降糖消渴颗粒含药血清可通过PI3K/AKT/FOXO1通路促进FOXO1磷酸化出核以抑制FOXO核转录实现保护胰岛B细胞的作用。