胸腺近期输出功能测定在评价细胞免疫功能重建中的应用

T细胞受体重排删除环 (TRECs )是T细胞受体基因重排过程中删除的DNA环 ,可作为胸腺近期输出功能的指标 ,本文综述其在造血干细胞移植、HIV - 1感染和AIDS患者抗逆转录病毒治疗、肿瘤化疗以及细胞因子补充治疗后免疫重建评价中的应用     

定量检测T细胞受体重排删除DNA环含量评价急性非淋巴细胞白血病患者胸腺近期输出功能

目的检测急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者T细胞受体重排删除DNA环(signaljoint T-cell receptor exc ision DNA c irc les sjTRECs,TRECs)的含量,从而探讨患者的初始型naive T细胞水平和胸腺近期输出功能特点。方法利用实时定量PCR(TaqM an)方法,检测77例ANLL患者外周血单个核细胞(PBMC)TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平。14例ANLL缓解期患者和14例正常人外周血作为对照。结果ANLL患者外周血中TRECs含量为(0.43±0.92)拷贝/1 000 PBMCs,(2.02±3.25)拷贝/1 000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平[(4.10±3.65)拷贝/1 000 PBMCs和(6.84±4.71)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0001]和缓解期患者[(2.19±2.49)拷贝/1 000 PBMCs和(6.30±7.13)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0005]。各亚型ANLL患者的TREC水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论绝大多数ANLL型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,缓解期患者的胸腺近期输出功能有一定程度恢复。     

定量检测T细胞受体重排删除DNA环含量评价急性非淋巴细胞白血病患者胸腺近期输出功能

目的 检测急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者 T细胞受体重排删除DNA环(signal joint T-cell receptor excision DNA circles sjTRECs,TRECs)的含量,从而探讨患者的初始型naive T细胞水平和胸腺近期输出功能特点.方法利用实时定量PCR(TaqMan)方法,检测77例ANLL患者外周血单个核细胞(PBMC)TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平.14例ANLL缓解期患者和14例正常人外周血作为对照.结果 ANLL患者外周血中TRECs含量为(0.43±0.92)拷贝/1 000 PBMCs, (2.02±3.25)拷贝/1 000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平[(4.10±3.65)拷贝/1 000 PBMCs和(6.84±4.71)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0001]和缓解期患者[(2.19±2.49)拷贝/1 000 PBMCs和(6.30±7.13)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0005].各亚型ANLL患者的TREC水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 绝大多数ANLL型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,缓解期患者的胸腺近期输出功能有一定程度恢复.     

急性髓性白血病患者异基因造血干细胞移植后早期T细胞免疫重建的研究

目的:监测急性髓性白血病(AML)患者接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平, 了解移植后早期的T细胞免疫重建情况.方法:AML患者15例分别在allo-HSCT前以及allo-HSCT后每隔2周收集外周血, 采用实时定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMNCs)中的TRECs水平;7例年龄相近的正常人外周血样本作为对照.流式检测CD45RA+细胞亚群和CD45RO+细胞亚群的阳性率.结果:allo-HSCT组移植前的TRECs平均拷贝数为(1.42±1.51)拷贝/1000 PBMNCs, 明显低于正常组的(3.03±0.45)拷贝/1000 PBMNCs水平;移植后第12周的TRECs平均拷贝数为(1.67±1.93)拷贝/1000 PBMNCs, 与正常相比仍然较低.移植后8周内以CD45RO+/CD4+细胞的扩增为主, 而外周血TRECs水平在allo-HSCT后4周左右出现短暂地升高趋势, 随后又下降, 至allo-HSCT 8周后才开始稳步上升.有急性移植物抗宿主病(aGVHD)病史的移植患者的外周血TRECs水平显著降低, 明显低于无aGVHD病史移植患者的外周血TRECs水平.3例移植后早期复发的患者的外周血TRECs水平降至基线水平或检测不到.结论:不同个体T细胞免疫重建时间存在差异;AML患者在allo-HSCT后早期(90 d内)的胸腺输出功能仍处于恢复阶段, 移植后4周内的免疫重建仍以来源于供者细胞的外周扩增为主;外周血TRECs水平可能与AML患者allo-HSCT后病情的发展、转归有关.     

异基因造血干细胞移植后免疫功能重建

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)，岳患者的免疫功能受到严重损伤，移植后免疫功能低下主要表现在：①免疫个体发生学过程再现的削弱；②缺乏长期稳定的供体免疫功能的转移； ③移植物抗宿主病(GVHD)对免疫功能的影响； ④胸腺功能的降低。临床实践证实，清髓性治疗后患者的免疫功能处于麻痹状态可以持续1年之久。     

实时荧光定量PCR测定胸腺近期输出功能方法的建立和应用

目的建立一种准确、快速的检测胸腺输出功能的方法。方法根据TCRδ基因序列,设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测T细胞受体重排切除环(TRECs)的方法;并用于检测正常人及慢乙肝PBMCs中TRECs的含量。结果建立了测定TRECs含量的实时荧光定量PCR方法,产物与预计长度相符,序列正确;最低可扩增出5copies的模板;重复五次,Ct值的变异系数为1.06%。正常人21~45岁组的TRECs含量为(7767.4±2369.5)copies/106 PBMCs,16~20岁组为(28374.4±7820.4)copies/106 PBMCs,21~45岁慢乙肝组(6480.9±2031.2)copies/106 PBMCs,正常人21~45岁组分别与16~20岁组、同龄慢乙肝组比较差异均有统计学意义,P<0.05。结论实时荧光定量PCR检测TRECs的方法特异性强,灵敏度高,重复性好。正常人21~45岁组的胸腺输出功能低于16~21岁组,慢乙肝组低于同龄正常人。     

白血病患者异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的研究

目的通过分析TCR Vβ基因片段选择性扩增,了解白血病患者异基因外周血干细胞移植后T淋巴细胞的免疫重建及其在移植物抗宿主病(GVHD)患者中的表达特点.方法采用RT-PCR扩增10例移植后患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ 24个基因片段,分析其TCR Vβ基因的表达情况,GVHD患者的PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性.结果经24个Vβ引物所分别进行的RT-PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况,发现 10例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同,病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建,仅表达5～22个亚家族基因;9例GVHD患者外周血仅表达2～8个TCR Vβ亚家族,其中7例均表达Vβ3.对6例GVHD患者的基因扫描显示,均存在克隆性T细胞生长.结论移植后病人外周血淋巴细胞TCR Vβ基因片段部分受抑制,部分基因片段呈选择性扩增.GVHD患者有Vβ3和Vβ8基因的优势表达,并有克隆性T细胞生成.     

人胸腺和脐血造血干/祖细胞联合移植对裸鼠细胞免疫功能的影响

背景：T细胞在抗感染、抗肿瘤和免疫调节等中起重要作用,但T细胞分化发育机制尚未完全阐明。 目的：观察人胸腺、人脐血联合移植后裸鼠体内T细胞分布及免疫功能的重建。 方法：Balb/c nu/nu裸鼠30 只,随机分为2组：实验组肾被膜下移植胸腺组织,2周后将新鲜分离的脐血CD34+细胞悬液经小鼠静脉输入,对照组不经胸腺移植直接给予CD34⁺细胞移植,两组小鼠饲养至60 d时检测免疫功能。 结果与结论：人胸腺在裸鼠肾被膜下存活并且表达CD3、HLA-DR分子,胸腺与CD34⁺细胞联合移植组小鼠脾脏可见点块状分布的CD3⁺细胞。实验组CD3⁺细胞、CD4⁺细胞、CD8⁺细胞及CD4⁺CD25⁺细胞比例均显著高于对照组。实验组裸鼠对移植人胃癌BGC823细胞有排斥作用,而对照组没有。结果显示胸腺和CD34⁺细胞联合移植能使裸鼠获得T细胞介导的细胞免疫功能,具有抗肿瘤能力。     

白血病患者异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的研究

目的 通过分析TCR Vβ基因片段选择性扩增，了解白血病患者异基因外周血干细胞移植后T淋巴细胞的免疫重建及其在移植物抗宿主病(GVHD)患者中的表达特点．方法 采用RT—PCR扩增10例移植后患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ24个基因片段，分析其TCR Vβ基因的表达情况，GVHD患者的PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性．结果 经24个Vβ引物所分别进行的RT—PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况，发现10例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同，病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建，仅表达5-22个亚家族基因；9例GVHD患者外周血仅表达2—8个TCR Vβ亚细胞生长．结论 移植后病人外周血淋巴细胞TCR Vβ基因片段部分受抑制，部分基因片段呈选择性扩增．GVHD患者有Vβ3和Vβ8基因的优势表达，并有克隆性T细胞生成．     

异种胸腺移植:受者细胞免疫力重建

胎猪或新出生猪胸腺移植物可以在T细胞剔除的去胸腺小鼠中长期存活,并支持小鼠T细胞的正常发育分化,可使受者外周重新建立受者T细胞池。在异种猪胸腺成熟的小鼠T细胞具有正常的细胞免疫力,且受小鼠自身MHC的限制性。因此,异种胸腺移植可能为AIDS晚期患者或其他由于胸腺功能障碍引起的免疫缺陷性疾病等提供新的治疗手段或具有一定的辅助治疗作用。     

异基因造血干细胞移植后免疫功能重建

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后患者的免疫功能受到严重损伤,移植后免疫功能低下主要表现在①免疫个体发生学过程再现的削弱;②缺乏长期稳定的供体免疫功能的转移;③移植物抗宿主病(GVHD)对免疫功能的影响;④胸腺功能的降低.临床实践证实,清髓性治疗后患者的免疫功能处于麻痹状态可以持续1年之久.     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR DδX基因重排的特点

目的：分析正常人外周血和胸腺细胞中 ＴＣＲ ＤδＸ基因重排分布特点。方法：利用半巢式 ＰＣＲ扩增 １０例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）、４例分选的外周血 ＣＤ３＋Ｔ细胞和 ７例正常人胸腺细胞 ＤＮＡ的 ＴＣＲ ＤδＸ基因与ＪδＸ、Ｄδ３和　Ｊａ重排的情况，从不同含量 ＤＮＡ的 ＰＣＲ分析，了解其重排分布频率。结果：ＴＣＲ ＤδＸ分别与 ＪδＸ、Ｄδ３和　Ｊａ的重排均可见于多数外周血Ｔ细胞和胸腺细胞中，对不同含量的ＤＮＡ的ＰＣＲ分析显示ＴＣＲ ＤδＸ重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。结论：ＴＣＲ ＤδＸ－　Ｊａ的重排最常见于成熟和未成熟Ｔ细胞中，而ＴＣＲ　ＤδＸ－Ｄδ３则在未成熟Ｔ细胞中多见。     

造血干细胞移植后免疫重建

造血干细胞移植（HSCT）已广泛应用于临床,是治疗血液系统疾患、实体瘤、基因缺陷及自身免疫性疾病的重要手段干细胞移植伴随着严重的免疫缺陷,这一时期,患者有合并严重感染的风险固有免疫恢复迅速．NK细胞、树突状细胞移植后数周内即可恢复。而适应性免疫系统恢复缓慢,T细胞和B细胞移植后数月才可恢复正常,而T细胞功能恢复需要数年的时间：研究造血系统各细胞存移植后数量、功能上的恢复规律,对如何加快免疫重建,降低移植死亡率有重要意义.     

异基因造血干细胞移植后NK细胞免疫重建的研究进展

异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT)是治疗血液系统恶性肿瘤有效且唯一的治愈方法,移植成功与否主要取决于移植后受者造血系统和免疫系统的恢复程度。HSCT后免疫系统的恢复,也被称为免疫重建,其中NK细胞的免疫重建最为重要,它在个体的早期防御和allo-HSCT的成败中发挥重要的作用。文章即对allo-HSCT中NK细胞免疫重建规律、促进NK细胞免疫重建的相关免疫治疗方法及疗效的进展作一综述。     

胸腺功能及其测定方法的研究进展

塑腺是免疫系统的中枢控制器官,由于年龄相关的演化,其功能逐渐降低。本文从胸腺的发生、位置、结构、功能及其检测方法等几方面对其进行综述。     

正常人外周血和脐血中TCR Vβ亚家族sjTRECs的检测情况

目的:检测TCR23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人外周血中的存在特点,从而进一步了解正常人胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法:采用半巢式PCR对4例胸腺、10例脐血和10例正常人外周血分别在2×105、5×104、1×104和1×103个单个核细胞中的23个Vβ亚家族sjTRECs进行扩增。结果:在细胞数相同的情况下,各Vβ-Dβ1sjTRECs的检出率胸腺细胞最高,其次是脐血,正常人最低。当细胞数为2×105、5×104和1×104时,正常人Vβ2、Vβ4、Vβ7、Vβ11和Vβ19亚家族sjTRECs的检出率以及检出sjTRECs的亚家族数量均显著低于脐血。当细胞数为2×105和5×104时,正常人可检测到绝大多数Vβ亚家族的sjTRECs,随着细胞数的降低,部分Vβ亚家族的sjTRECs则检测不到,而少部分Vβ亚家族的sjTRECs则在1000个细胞时仍能检测到。结论:成功建立了半定量检测23个Vβ亚家族sjTRECs的检测方法;在2×105细胞中约可以检测到80%左右的Vβ亚家族初始T细胞,而在5×104细胞中约有半数的Vβ亚家族初始T细胞可检测到,提示不同Vβ亚家族初始T细胞的出现频率有所差异。     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCRδRec151051-Jδ1和δ Rec151298-J δ 1基因重排的分布特点

目的分析正常人外周血和胸腺细胞中TCRδRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排分布特点.方法利用半巢式和巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞(PBMCs)、4例分选的外周血CD3+T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCRδRec基因与Jδ1、Dδ3和ψJα重排的基因片段,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率.结果TCRδRec151051分别与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排和TCRδRec151298-Dδ3重排见于大多数外周血T细胞和胸腺细胞中,而TCRδRec151298与Jδ1和ψJα的重排则多见于胸腺细胞中.对不同含量的DNA的PCR分析显示δRec重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同.结论TCRδRec151051、TCRδRec151298与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排均存在于多数正常人T细胞中,TCRδRec151051-Dδ3最常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCRδRec151298-Jδ1和TCRδRec151298-ψJα则主要见于未成熟T细胞中.     

TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在正常人胸腺、脐血和外周血中的检测情况

目的建立检测TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的方法,分析其在胸腺细胞、脐血和正常人外周血T细胞中的存在情况,从而了解近期胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naive T细胞的情况。方法利用半巢式PCR分别扩增3例正常胸腺细胞、10例脐血和10例正常人外周血单个核细胞DNA中的Vβ2、Vβ5和Vβ17与Dβ1基因片段重排时产生的sjTRECs。结果在正常胸腺细胞、脐血和正常人外周血单个核细胞中均可检测到Vβ2、Vβ5和Vβ17与Dβ1片段形成的sjTRECs,其中胸腺细胞和脐血单个核细胞DNA中3种删除环的检出率均为100％,正常人外周血3种删除环的检出率分别为50％、70％和40％。结论成功地建立检测3种Vβ-Dβ1 sjTRECs的方法,并提供了Vβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs在胸腺、脐血和外周血中的检测情况。     

人源化NOD/SCID小鼠的细胞免疫重建

目的探讨人脐带血CD34+细胞移植于非肥胖性糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠后的免疫重建作用。方法免疫磁珠法分选人脐血CD34+细胞,经外侧尾静脉移植于亚致死量照射的NOD/SCID小鼠。移植后4、6、8、10周流式细胞术动态监测小鼠外周血人源CD45+、CD3+、CD56+细胞的数量;10周后PCR检测小鼠骨髓人ALU基因的表达,免疫组织化学染色检测小鼠脾脏人源CD3+、CD56+细胞的表达。结果 NOD/SCID小鼠经照射后骨髓腔内有核细胞及巨细胞数量均明显减少或消失,达到理想的清髓预处理效果;移植后4、6、8、10周,移植组所有存活小鼠外周血均可检测到人源性CD45+、CD3+、CD56+细胞的表达,人源淋巴细胞的数量随时间的延长而变化,8周时达到高峰,10周仍有较高的比例。10周时移植组所有存活小鼠骨髓细胞均检测到人ALU基因的表达,脾脏均检测到人CD3+、CD56+细胞;未移植组小鼠照射后2周内全部死亡。结论经照射后的NOD/SCID小鼠通过移植人脐血CD34+细胞成功地建立了hu-SRC-NOD/SCID模型,并有效地重建了小鼠细胞免疫系统。     

芳香烃受体在细胞免疫调节中的研究进展

近年来,芳香烃受体在细胞免疫调节中的作用越来越受到重视。芳香烃受体通过配体依赖的方式调节Th17和Treg细胞分化,从而为自身免疫系统疾病和肿瘤提供了新的潜在治疗靶点。