包涵体蛋白的复性技术

细菌表达系统产生的重组蛋白常为学浴的包函体蛋白,影响产率。随着对蛋白质折叠凝聚机制的认识,在包涵体复性中对一些条件加以控制,如蛋白质浓度,缓冲液的组成等,特别是低分子量添加剂的使用,可使蛋白产率提高。     

包涵体复性的研究进展

大肠杆菌表达的外源基因产物通常是不可溶的包涵体。包涵体需要经过溶解和复性才能得到有活性的蛋白质。复性是蛋白质从未折叠到折叠形式的过程 ,受到许多因素的影响 ,包括变性剂对包涵体的溶解度、变性剂的去除、一些小分子对复性的帮助等等。现就影响蛋白复性的相关因素进行阐述     

包涵体蛋白的复性技术

细菌表达系统产生的重组蛋白常为不溶的包涵体蛋白,影响产率.随着对蛋白质折叠中凝聚机制的认识,在包涵体复性中对一些条件加以控制,如蛋白质浓度、缓冲液的组成等,特别是低分子量添加剂的使用,可使蛋白产率提高.     

大肠杆菌中外源蛋白高效表达的影响因素及策略研究的新进展

大肠杆菌表达系统因为其遗传背景清楚，低成本，高生产率，特征明确，兼容多种抗体使之成为目前最常用的外源蛋白原核表达系统。近年来，重组大肠杆菌的高密度发酵是现代基因工程产品大规模生产的重要技术。采用高密度发酵技术，提高菌体的发酵技术，提高菌体的发酵密度，最终提高产物的比生产率，不仅可以减少培养体积、优化下游分离提取，还可以缩短生产周期、降低生产成本，从而极大地提高在市场上的竞争力。然而在研究高效发酵过程中，人们往往会遇到表达效率难以得到最大限度的提高与产率较低等问题。因此本文将就外源基因本身特性对于高效表达的影响，表达系统的特性对于高效表达的影响，外源基因与系统间的相互作用及其他因素等方面阐明外源基因高效表达的影响因素。最终总结出一套高效表达的策略。     

重组人干细胞因子/血小板生成素融合蛋白的纯化及复性研究

目的　探讨重组人干细胞因子/血小板生成素(SCF TPO)融合蛋白纯化及复性的最佳方法。方法　裂解 法提取包涵体,在变性条件下利用金属螯和层析获得融合蛋白,经透析及谷胱甘肽氧化还原法对纯化的融合蛋白进 行复性。结果　获得具有初步生物学活性的SCF TPO融合蛋白,其纯度高达90%。结论　该纯化方法操作简捷, 特异性高,纯化效果好,获得率高。     

血红蛋白 Ｈ 包涵体检测对提高 α－地中海贫血检出率 的意义

目的 探讨血红蛋白H包涵体检测对提高α-地中海贫血（以下简称“地贫”）检出率的作用。方法 收集平均红细胞体积（MCV）和/或平均红细胞血红蛋白含量（MCH）低于参考区间且葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）筛查阴性的标本，分别进行血红蛋白电泳、血红蛋白H包涵体检测及地贫基因测定，以地贫基因结果为参比标准，按血红蛋白A₂（HbA₂）结果分组，分别统计各组血红蛋白H包涵体检出率与α-地贫基因型别的关系，并计算血红蛋白H包涵体对不同临床类型α-地贫的检测效能。结果 1 444例MCV和/或MCH降低且G6PD筛查阴性的标本，检出血红蛋白H包涵体342例，血红蛋白H包涵体阳性标本经地贫基因检测确认为α-地贫的为336例，符合率98.2%,HbA₂正常组血红蛋白H包涵体对α-地贫检测的敏感性为90.6%,特异性为99.3%,血红蛋白H包涵体检测对中间型α-地贫检测的敏感性和特异性均为100%,对标准型α-地贫检测的敏感性为90.1%,特异性为99.8%;根据血红蛋白H包涵体检测结果，检出2例罕见型α-地贫。结论 血红蛋白H包涵体的检...     

狗钠-钙交换体基因在大肠杆菌中的克隆和表达

[目的]在大肠杆菌中表达NCX cDNA从418到996位核苷酸之间的片段。[方法]用RT-PCR方法从狗脑组织中扩增得到NCX cDNA片段,将其用载体pGEM-T Easy克隆和亚克隆,DNA序列分析正确后再插入融合表达载体pET-28b( )中,构建原核表达菌株并诱导表达。[结果]含重组表达载体的E．coli BL21(DE3)经IPTG诱导,15％SDS-PAGE呈现一约26kD的特异表达带。[结论]表达了含目的片段的融合蛋白,为抗NCX抗体制备及其对于NCX功能影响的研究提供了条件。     

孕妇体像困扰的状况研究

本文对孕妇体像困扰的研究状况进行综述,从体像困扰的概念、评估工具、发生现状、影响因素、干预措施等方面总结孕妇体像困扰的研究进展,以期为评估孕妇体像及体像困扰的管理措施的制订和相关研究提供参考。     

影响老年人生活质量相关因素的研究进展

随着我国老年人数量的激剧增加，人口老龄化的挑战已直接地成为影响社会发展的问题。如何提高老年人的生活质量既成为社会稳定和经济持续发展的重要因素，同时也是社会文明程度提高的表现，特别在具有优良的敬老文化传统的我国。如何提高老年人的生活质量，从而充分体现社会主义精神文明的先进性更是愈来愈成为许多相关人士的热门研究课题，而对影响老年人生活质量的相关因素的研究则是基础性前提工作。     

老年人功能性体适能的影响因素研究进展

目的 了解功能性体适能的定义、测试方法及老年人功能性体适能的影响因素,为进一步研究老年人功能性体适能特征、制定我国老年人功能性体适能常模及个性化干预措施提供参考。方法 检索中国知网、万方数据库、维普网、PubMed及Web of Science,对近年来国内外关于老年人（≥60岁）功能性体适能研究的文献进行筛选和内容提取,分析并综述其影响因素。结果 文章阐述了功能性体适能的定义及测试方法,从个体因素（包括年龄、性别、认知功能、体质指数）、疾病因素、城乡差异、运动因素及有无跌倒风险方面对老年人功能性体适能的影响因素进行了总结。结论 目前关于老年人功能性体适能的研究以干预性研究居多,而关于特征的研究较少。我国尚缺乏老年人功能性体适能常模以及针对性干预措施。今后可借鉴国外经验,针对研究中的可控因素,建立符合我国老年人特征的功能性体适能常模,以指导制定个性化干预措施,促进老年人健康老龄化。     

核糖体蛋白-鼠双微体2-p53信号通路的研究进展

p53基因是细胞生长周期中的负调节因子,与细胞周期的调控、DNA修复、细胞分化和细胞凋亡等重要的生物学功能有关.p53基因受多种信号因子的调控,其中较为重要的负反馈调控因子是鼠双微体(murine double mimute,MDM)2.在正常细胞增殖和分化过程中,MDM2-p53反馈回路对控制p53蛋白水平及其活化至关重要;并且经过该反馈回路的调节,实现在细胞受到各种打击后对p53的动态调节.笔者就RPs-MDM2-p53信号调控通路的研究进展进行综述.     

MicroRNA与食管肿瘤的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类在动植物中广泛存在的非编码的小分子RNA,约20 ～ 24个核苷酸长度,在细胞核和细胞质中由RNA聚合酶通过序列加工而成.目前人体已发现533个miRNA基因,占人体基因总数的2％ ～ 3％,调控人体近1/3基因的功能,表明miRNA分子是基因调控网络中的核心成分.本文将就miRNA的生物学特性、功能、作用机制及与食管肿瘤的相关性研究等作如下综述.     

产妇产后体质量滞留影响因素的研究进展

产后体质量滞留(PPWR)是产后女性常见的问题之一,不仅给产妇带来形体的改变,还增加其远期发生肥胖、心血管疾病和糖尿病等疾病的风险,甚至影响下次妊娠。关注产妇PPWR的影响因素并采取针对性措施,对促进产妇产后身心具有重要意义。本文对产妇PPWR现状及危害与影响因素进行综述,以期为医护人员更好的开展产后康复指导提供依据。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1(peroxisome proliferator-activated recep-tor γ coactivator-1，PGC-1)是过氧化物酶体增殖物激活受体PPAR γ(peroxisome proliferator-activatedreceptor γ，PPAR γ)的转录共激活因子。PGC-1在能量代谢和适应生热作用中有重要的调节作用。PGC-1的过度表达能明显地促进线粒体的生物合成。PGC-1调节几种核受体和其他转录因子的活性。在应答传递能量需求的信号中，PGC-1能使转录和剪接协调调节。有关PGC-1作用的分子机制及其生理作用的研究，也取得了较大进展。     

重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒在软骨细胞的表达

背景：白细胞介素1受体拮抗蛋白能延缓骨性关节炎进程,通过转基因方法可以使白细胞介素1受体拮抗蛋白表达的增加。目的：观察重组人重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒的构建及经脂质体转染软骨细胞的表达情况。方法：双酶切法切取重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白的c-DNA片段,通过T4DNA连接酶连接到pEGFP-C1载体上。体外分离培养兔关节软骨细胞,然后用构建的重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白质粒经脂质体转染软骨细胞,通过荧光显微镜观察转基因的表达和荧光定量PCR检测其表达。结果与结论：获得重组人pEGFP-C1-IL-1Ra真核表达载体质粒,酶切及测序结果证明表达质粒的DNA序列完全正确。荧光显微镜观察有绿色荧光蛋白表达,荧光定量PCR鉴定证实转染的软骨细胞基因得到表达。     

重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒在软骨细胞的表达

背景:白细胞介素1受体拮抗蛋白能延缓骨性关节炎进程,通过转基因方法可以使白细胞介素1受体拮抗蛋白表达的增加。目的:观察重组人重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒的构建及经脂质体转染软骨细胞的表达情况。方法:双酶切法切取重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白的c-DNA片段,通过T4DNA连接酶连接到pEGFP-C1载体上。体外分离培养兔关节软骨细胞,然后用构建的重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白质粒经脂质体转染软骨细胞,通过荧光显微镜观察转基因的表达和荧光定量PCR检测其表达。结果与结论:获得重组人pEGFP-C1-IL-1Ra真核表达载体质粒,酶切及测序结果证明表达质粒的DNA序列完全正确。荧光显微镜观察有绿色荧光蛋白表达,荧光定量PCR鉴定证实转染的软骨细胞基因得到表达。     

特异性小分子干扰RNA抑制K562细胞肺耐药相关蛋白表达及其功能的研究

肺耐药相关蛋白（LRP）是与多药耐药（MDR）相关的糖蛋白。在儿童白血病及成人急性髓系白血病（AML）中，LRP表达是独立的预后决定因素之一，其过度表达造成患者对化疗不敏感，提示预后不良.近年来，小分子干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰（RNAi）既可以特异地降解同源mRNA序列，从而有效阻止相应蛋白质的表达，并且与相应的单链反义核酸相比，siRNA造成的基因抑制效率更高、特异性更好，所需有效浓度却大大减低。国内外学者将siRNA技术应用于消减慢性粒细胞白血病bcr／abl基因以及逆转p蛋白引起的MDR等的研究，取得了良好的效果。我们设计合成了LRP特异性siRNA-LRP，并转染丁酸钠（NaB）诱导的高表达LRP的K562细胞模型（K562／N），观察siRNA-LRP抑制LRP基因和蛋白表达、消除LRP改变细胞内药物蓄积和分布作用的效果，以期为逆转LRP介导的肿瘤细胞MDR、提高难治性和复发性白血病患者疗效探索新的方法，并探讨以siRNA介导的RNAi用于肿瘤细胞MDR治疗的可行性。     

缺氧对神经母细胞瘤分化影响的研究进展

神经母细胞瘤是儿童和婴幼儿最常见的实体肿瘤之一,生长迅速,恶性程度高。半数以上患儿就诊时已是晚期(Ⅲ、Ⅳ期),使得治疗效果不明显。但是,少数恶性神经母细胞瘤可以向良性转归;同时,肿瘤生长过程中普遍存在缺氧的现象,在缺     

多发性硬化的蛋白质组学研究进展

对多发性硬化患者蛋白质组学分析有助于对进一步认识多发性硬化的分子病理特征，选择适宜的样本制备与蛋白质分离、鉴定方法，有望发现与多发性硬化相关的特异性蛋白质，为多发性硬化的诊断、治疗、预防提供新的线索，提高疑似病例的确诊率；针对特异性蛋白质进行干预有可能减轻症状、预防复发；探索药物或基因治疗方法。